Ⅰ型胶原酶消化组织块法体外培养人牙髓细胞

目的 建立利用Ⅰ型胶原酶消化组织块体外培养人牙髓细胞方法。方法 通过组织块Ⅰ型胶原酶消化法进行人牙髓细胞体外培养，免疫细胞化学法鉴定细胞组织来源，进行细胞传代，酶组织化学法对体外复层生长的人牙髓细胞爬片进行碱性磷酸酶组织化学染色，并检测其矿化能力。结果 采用Ⅰ型胶原酶消化组织块法体外培养的原代牙髓细胞，在第15～20d出现汇合，第4～6代牙髓细胞在连续培养后具有复层生长特性，并具有显著的碱性磷酸酶活性．阳性染色强弱部位呈区域性分布，连续培养的牙髓细胞可形成矿化结节。结论 Ⅰ型胶原酶消化组织块法可以很好地进行人牙髓细胞体外培养，可以用酶组织化学法研究牙髓细胞的生物学特性。     

人牙髓细胞的体外培养及生物学特性研究

目的:从年轻恒牙的牙髓组织中分离培养牙髓细胞,研究其表型及生物学特性.方法:选取因正畸或阻生拔除的年轻健康双尖牙或第三磨牙,取出牙髓,组织块酶消化法分离培养人牙髓细胞,免疫细胞化学检测第3代人牙髓细胞表面标志,并对体外培养的人牙髓细胞的矿化能力进行研究.结果:体外培养的人牙髓细胞表达Ⅰ型胶原及波形丝蛋白,少数细胞增殖可...     

人皮肤成纤维细胞的体外分离、培养及鉴定

目的：探索和建立一种新的、适宜于人皮肤成纤维细胞（Fbs）的体外分离、培养及鉴定方法。方法：采用冷胰蛋白酶和胶原酶联合消化法对人皮肤Fbs的进行体外培养，通过生物化学、免疫细胞化学及ELISA实验技术，对人皮肤Fbs的活力检测、生长曲线、羟脯氨酸（HYP）含量及Ⅰ型胶原含量指标进行研究。结果：人皮肤Fbs原代培养时间较大鼠长。人皮肤Fbs冻存复苏后所得生长曲线与冻存前所得曲线基本相似；人皮肤Fbs培养液中，3～5 d的HYP含量与1 d相比有显著增加（P<0.01）；2～6 d Ⅰ型胶原含量与1 d相比有显著增加（P<0.01）。结论：培养的人皮肤Fbs增殖能力强、适应性强、易培养且性状稳定，可为人类凹陷性瘢痕修复和美容除皱提供可靠的细胞来源。     

体外人牙髓细胞的连续培养

目的 探讨体外连续培养过程中人恒牙牙髓细胞向成牙本质样细胞分化的可行性。方法 采用细胞连续培养、酶动力学法、透射电镜观察、免疫组化等方法，对体外人牙髓细胞在连续培养过程中的生物学特性进行研究。结果 部分人牙髓细胞在体外可以出现复层生长，形成细胞结节，并可进一步钙化；与成牙本质细胞相似，它们具有高碱性磷酸酶活性，可合成Ⅰ型胶原，其超微结构有许多与成牙本质细胞相似的特征，胞间基质中可见膜被基质小泡，某些基质小泡内含针状晶体。结论 体外连续培养的人牙髓细胞可向成牙本质细胞分化，此过程可作为研究体内牙髓损伤修复细胞增殖、分化的体外模型。     

rhBMP2对牙髓成纤维细胞增殖及碱性磷酸酶活性的影响

目的了解重组人骨形成蛋白(rhBMP2)对牙髓成纤维细胞增殖活性及碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。方法用MMT比色法检测不同浓度rhBMP2作用下,牙髓成纤维细胞增殖活性的变化;用酶动力学方法检测不同浓度rhBMP2作用下ALP活性的变化。结果低浓度的rhBMP2可提高体外培养人牙髓细胞的增殖活性,浓度为200ng/mL时,增殖活性达到最大值,与对照组间差异有统计学意义(P<0.05)。并可促进人牙髓细胞ALP活性,呈浓度依赖性,与对照组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论rhBMP2能够促进牙髓细胞增殖和ALP活性,是牙髓细胞增殖和分化的重要因子之一。     

DEX和rhBMP2对体外培养人牙髓细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的 探讨不同浓度地塞米松(Dexamethasone,DEX)、重组人骨形态发生蛋白2(recombinant human bone morphogenetic protein 2,rhBMP2)及两者联合应用对体外培养的人牙髓细胞(human dental pulp cells,HDPCs)碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,ALP)活性的影响.方法 组织块法培养HDPCs并进行鉴定;采用酶动力学的方法,观察 DEX、rhBMP2及二者联合应用对HDPCs的ALP活性的影响.结果 单独应用DEX时ALP活性明显增高,且在生理浓度范围内当浓度为0.01 nmol/ml时,对HDPCs的ALP活性达到最大的刺激作用,rhBMP2对HDPCs的ALP活性呈浓度依赖性增强;当联合应用DEX和rhBMP2,ALP活性比单独应用相应浓度的rhBMP2明显增高.结论 DEX、rhBMP2对HDPCs的ALP活性均有增强作用,同时二者对HDPCs的ALP活性有显著的功能放大性协同增强作用.     

成骨生长肽羧基端片段及其衍生物对成骨细胞作用的体外研究

目的：探讨成骨生长肽羧基端片段OGP（10-14）及其衍生物G38I、G38K在体外对大鼠成骨细胞增殖和分化的影响。方法：用细胞记数和MTT法评价OGP（10-14）及其衍生物G38I、G38K对成骨细胞增殖的作用。测定细胞培养上清液碱性磷酸酶含量，细胞中Ⅰ型胶原蛋白和mRNA表达水平，了解药物对细胞分化的影响。结果：药物在10^-11mmol／L浓度时促进细胞增殖的作用增强。OGP（10-14）和G38I处理组与空白对照组比较，显著提高上清液中碱性磷酸酶含量、上调Ⅰ型胶原蛋白和mRNA表达水平（P〈0．01，P〈0．05）。结论：OGP（10-14）及其衍生物可促进成骨细胞增殖、提高细胞活性，OGP（10-14）和G38I可增加细胞中Ⅰ型胶原的合成，促进细胞分化和成骨作用。     

含bFGF的壳聚糖-胶原复合支架对牙周膜细胞生长和增殖的影响

【目的】探讨含碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的壳聚糖-Ⅰ型胶原复合支架对人牙周膜细胞（HPDLC）生长和增殖的影响。【方法】MTT法观察含bFGF因子壳聚糖-Ⅰ型胶原复合支架浸出液、不含bFGF因子壳聚糖-Ⅰ型胶原复合支架浸出液以及正常细胞培养液对HPDLC生长和增殖的影响，利用流式细胞仪（FCM）检测上述3种液体对HPDLC细胞周期的影响，并将HPDLC接种于含bFGF因子壳聚糖-Ⅰ型胶原复合支架和不含bFGF因子壳聚糖-Ⅰ型胶原复合支架内，通过免疫细胞组织化学和激光共聚焦显微镜来检测HPDLC在复合支架内的存活和增殖情况。【结果】含bFGF因子壳聚糖-Ⅰ型胶原复合支架浸出液对HPDLC生长和增殖的促进作用明显强于不含bFGF因子壳聚糖-Ⅰ型胶原复合支架浸出液和正常细胞培养液．而后两组间无统计学意义；含bFGF因子壳聚糖-Ⅰ型胶原复合支架浸出液促进HPDLC从G1期进入S期；HPDLC在含bFGF因子壳聚糖-Ⅰ型胶原复合支架内的生长和增殖也明显优于不含bFGF因子壳聚糖-Ⅰ型胶原复合支架。【结论】含bFGF因子壳聚糖-Ⅰ型胶原复合支架可以促进体外培养的HPDLC生长和增殖。     

姜黄素对体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞的生物学作用

目的：观察姜黄素体外抗增生性瘢痕的作用．方法：以增生性瘢痕成纤维细胞为靶细胞,分别用不同浓度的姜黄素培养液培养,MTT法测定细胞的增殖情况,透射电镜进行形态学检测,流式细胞仪技术结合PI及Annexin V双标记染色检测姜黄素的促凋亡作用,实时荧光定量聚合酶链反应检测Ⅰ,Ⅲ型前胶原及Bcl-2 mRNA的表达情况．结果：姜黄素对增生性瘢痕成纤维细胞的增殖有抑制作用;透射电镜观察发现,处理组凋亡细胞增多,凋亡细胞表现出典型的超微结构特征;流式细胞仪检测发现,随着药物浓度的增加,增生性瘢痕成纤维细胞的凋亡率也在逐渐升高;实时荧光定量聚合酶链反应检测结果显示,姜黄素处理后Ⅰ、Ⅲ型前胶原及Bcl-2 mRNA的表达水平均下调．结论：姜黄素具有一定的体外抗增生性瘢痕的作用．     

体外培养人牙髓干细胞的生物学特性

目的研究体外培养的人牙髓干细胞的生物学特性。方法收集因正畸拔除的第一前磨牙,用酶消化法分离能够形成克隆且具有高增殖力的细胞,细胞以低密度接种传代培养;免疫荧光法检测第3代细胞表面标志的表达;取第4代细胞,用含有20%胎牛血清、地塞米松、β甘油磷酸钠和维生素C的培养液诱导3周,茜素红染色观察诱导后细胞矿化情况,免疫荧光法检测牙本质涎蛋白(DSP)表达,改良Kap low氏法检测诱导前后碱性磷酸酶的表达。结果诱导前细胞表达Stro-1、Cbfa-1、和Ⅰ型胶原,碱性磷酸酶呈弱表达,不表达DSP;诱导后细胞表达DSP,碱性磷酸酶呈强表达,并可见钙结节形成。结论分离所得细胞具有较高的增殖和分化能力,与间充质干细胞具有相似的表面标志,并在诱导后表达DSP而具备牙髓干细胞的特征。     

鼠牙髓组织细胞培养的生长特性及形态特征研究

应用组织块培养法，对大白鼠牙髓组织细胞进行了原代和传代培养，同时对培养细胞来源、生长特性进行了初步观察和鉴定。结果证实，培养的鼠牙髓细胞为来自中胚层的成纤维细胞，该细胞的细胞器发达，４～５代后的细胞生长稳定，增殖速度快，提示培养的鼠牙髓细胞适合体外实验并以选择４～５代后的细胞进行实验为宜。     

牙髓干细胞研究现状

牙髓干细胞是一种具有高度增生、自我更新能力和多相分化潜能的成体干细胞,在牙髓修复和牙齿再生中发挥重要作用。近年来对牙髓干细胞的培养、细胞表型和功能等方面已进行了大量研究,本文就牙髓干细胞的研究现状作一综述。     

血小板浓缩生长因子对人牙髓细胞存活及其增殖分化的影响

目的 探讨血小板浓缩生长因子(Concentrate Growth factors,CGF) 对人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)增殖分化的影响,为其今后在牙髓及根尖周疾病治疗应用进行前期研究。方法 从因正畸治疗拔除的健康恒牙分离培养出人牙髓细胞,在体外采用CGF或矿物三氧化物聚合体(mineral trioxide aggregate, MTA)处理人牙髓细胞,分别在第1、3、7天,CCK-8法测定各组细胞增殖水平、碱性磷酸酶活性、流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况。结果 与MTA组相比,CGF组的细胞增殖能力增强,S期细胞的比例增加,且第3、7天ALP活性增高（P<0.05）, 而第1、7天牙髓细胞凋亡率降低。结论 CGF在体外具有良好的促进牙髓细胞增殖,抗凋亡以及诱导成骨/成牙分化的能力。     

牙髓干细胞治疗脊髓损伤的研究进展

脊髓损伤给患者及社会带来严重的影响,并且传统的各种治疗方法收效甚微。干细胞移植治疗脊髓损伤是近年来研究的热点,并且取得了一定成效。牙髓干细胞具有强大的自我更新能力和多向分化能力,目前已经被科学家应用于治疗多种疾病的研究,牙髓干细胞在治疗脊髓损伤上比其他干细胞具有一定优势,给脊髓损伤患者带来了新希望。该文就牙髓干细胞的特性及其在治疗脊髓损伤中的研究进展进行综述。     

体外培养人牙髓干细胞的生物学特性

目的 研究体外培养的人牙髓干细胞的生物学特性.方法 收集因正畸拔除的第一前磨牙,用酶消化法分离能够形成克隆且具有高增殖力的细胞,细胞以低密度接种传代培养;免疫荧光法检测第3代细胞表面标志的表达;取第4代细胞,用含有20%胎牛血清、地塞米松、β甘油磷酸钠和维生素C的培养液诱导3周,茜素红染色观察诱导后细胞矿化情况,免疫荧光法检测牙本质涎蛋白(DSP)表达,改良Kaplow氏法检测诱导前后碱性磷酸酶的表达.结果 诱导前细胞表达Stro-1、Cbfa-1、和Ⅰ型胶原,碱性磷酸酶呈弱表达,不表达DSP;诱导后细胞表达DSP,碱性磷酸酶呈强表达,并可见钙结节形成.结论 分离所得细胞具有较高的增殖和分化能力,与间充质干细胞具有相似的表面标志,并在诱导后表达DSP而具备牙髓干细胞的特征.     

人牙髓细胞向成牙本质细胞诱导分化中细胞周期变化

目的 建立成牙本质细胞样细胞体外培养体系,观察体外培养的牙髓细胞向成牙本质细胞分化过程中细胞周期的变化.方法 利用组织块酶解法培养人牙髓细胞并进行鉴定,使用矿化诱导液诱导其向成牙本质细胞样细胞分化.对细胞增殖情况使用流式细胞仪进行细胞周期测定.结果 ①获得的牙髓细胞均为波形丝蛋白阳性,角蛋白阴性,证明为中胚层来源的细胞.②诱导分化的牙髓细胞在2周左右进入复层生长期;3周左右开始有细胞结节形成,周围细胞呈放射状排列,部分细胞出现细长突起并呈极性排列;4周左右细胞团中央Von Kossa染色为阳性.③在诱导开始后1周,细胞处于活跃的增殖期,以后细胞增殖变慢,3周后多数细胞处于G0G1期.结论 实验成功建立了成牙本质细胞样细胞体外培养体系,所获得的成牙本质细胞样细胞具有成牙本质细胞的部分形态和生物学功能,诱导分化后细胞增殖变慢,是研究成牙本质细胞的较好模型.     

牙髓淋巴管网的酶组织化学研究

目的 :观察实验动物和人的牙髓淋巴管网的结构与分布特点。方法 :将非脱钙组织和用EDTA溶液脱钙的组织冰冻切片 ,分别应用光镜和电镜HE、5′ Nase单染和 5′ Nase ALPase双重染色作比较观察。结果 :HE染色切片光镜观察仅见管腔样结构 ;5′ Nase单染可见呈深棕色、形状不规则的淋巴管 ;而在同一切片上 5′ Nase ALPase双重染色观察到呈深棕色的淋巴管和呈蓝色的血管。扫描电镜和透射电镜观察牙髓的组织切片 ,见到丰富的呈 5′ Nase染色强阳性的淋巴管 ,5′ Nase反应产物存在于淋巴上皮细胞表面 ,牙髓中央部淋巴管较外围的成牙本质细胞层丰富。结论 :5′ Nase ALPase双重染色对研究牙髓毛细淋巴管网分布具有特异性且能定位     

人牙髓干细胞的体外分离、培养及鉴定

目的 体外分离、培养及鉴定人牙髓干细胞,构建人牙髓干细胞系.方法 采用组织块酶消化法获取原代细胞,通过有限稀释克隆法纯化细胞;流式细胞仪检测细胞表面标记物;分别进行矿化诱导和成脂诱导,观察诱导后细胞矿化结节和脂滴形成情况.结果 原代培养后5～7d有细胞从组织边缘爬出,有限稀释法获得相对纯化均一的牙髓干细胞;流式细胞仪分析细胞表面抗原,CD29、CD90、CD105、CD146、STRO-1表达阳性,CD34及CD45表达阴性;矿化诱导的细胞茜素红染色镜下见矿化结节形成,成脂诱导的细胞油红O染色镜下见脂滴形成.结论 分离所得的细胞具有人牙髓干细胞的生物学特性,成功构建人牙髓干细胞系.     

综合疗法治疗牙周牙髓联合病变96例临床报告

目的探讨综合疗法治疗牙周牙髓联合病变的时机选择及其疗效．方法总结2a来收治的牙周牙髓联合病变96例,117个患牙．综合疗法：（1）牙周基础治疗：控制菌斑,龈上洁治,龈下刮治,调牙合;（2）根管治疗：进行常规根管预备、消毒,用氢氧化钙碘仿糊剂加牙胶尖充填根管;（3）全身治疗：口服广谱抗生素及甲硝唑,3次／d,疗程1周．结果经6—36个月随访,有效率为90．6％．结论采用综合疗法治疗牙周牙髓联合病变,临床疗效满意,是一种系统、有效的治疗方法．