miR-496过表达抑制结肠癌细胞生长和转移

目的:研究miR-496过表达对结肠癌细胞生长和转移的影响及其分子机制。方法:运用生物信息学软件筛选miR-496靶向相互作用蛋白;real-time PCR和Western blot法测定结肠癌细胞系HT29、HCT116、SW480以及正常结肠上皮细胞NCM460中miR-496、CTNNB1 mRNA和β-catenin蛋白的表达;运用Lipofectamine 2000将miR-496 mimics转染HT29、HCT116和SW480细胞,分别命名为HT29-miR-496 mimics、HCT116-miR-496 mimics和SW480-miR-496 mimics细胞,转染scramble为阴性对照;运用MTT法、乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒法、克隆形成实验和Transwell分别测定细胞活力、LDH漏出率、克隆形成能力和转移能力;萤光素酶报告基因实验测定miR-496启动子活性;Western blot法测定β-catenin、真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白1(4E-BP1)、p-4E-BP1、低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP6)、p-LRP6、MMP-7、MMP-9、MMP-13以及TIMP-2的蛋白水平。结果:miR-496与β-catenin内源性相互作用;miR-496在HT29、HCT116和SW480细胞中低表达,而在NCM460高表达;β-catenin在HT29、HCT116和SW480细胞中高表达,而在NCM460低表达;培养24 h、48 h、72 h、96 h的HT29-miR-496 mimics、HCT116-miR-496 mimics和SW480-miR-496 mimics细胞活力、LDH漏出率、克隆形成率和转移的细胞数均显著低于对照组(P0.05);萤光素酶报告基因实验结果显示转染miR-496 mimics细胞中的miR-496启动子活性明显增加(P0.05),分别是对照组的1.75倍、2.04倍和1.61倍。Western blot实验结果显示miR-496过表达抑制β-catenin蛋白表达,p-4E-BP1和p-LRP6的蛋白水平降低;siRNA或miR-496过表达介导的β-catenin表达下调能显著抑制MMP-7和MMP-9的表达,促进TIMP-2的表达。结论:miR-496在结肠癌细胞中低表达,在正常结肠上皮细胞中高表达;miR-496过表达抑制结肠癌细胞的生长和转移,其机制是通过抑制Wnt/β-catenin通路进一步抑制MMP-7和MMP-9表达,促进TIMP-2表达,从而抑制结肠癌细胞的恶性表型。     

miR-340靶向Lgr5基因抑制结肠癌细胞增殖及β-catenin通路的研究

目的 研究miR-340靶向富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5(Lgr5)基因抑制结肠癌细胞增殖及β-连环蛋白(β-catenin)通路的作用.方法 培养人结肠癌细胞株HT29、SW480、LoVo及正常肠上皮细胞HIEC,检测miR-340的表达水平;将SW480细胞分为miR-NC 组(转染miR-NC mimic)、miR-340组(转染miR-340 mimic)、pcDNA3.1 组(转染pcDNA3.1 质粒),pcDNA3.1+miR-340组(转染pcDNA3.1 质粒及miR-340 mimic)、pcDNA3.1-Lgr5+miR-340组(转染pcDNA3.1-Lgr5质粒及miR-340 mimic),MTS法检测增殖活力A490,荧光定量PCR检测miR-340的表达水平,Western blot检测Lgr5、β-catenin、cyclinD1的表达水平,双荧光素酶报告基因验证miR-340靶向Lgr5.结果 HT29、SW480、LoVo细胞中miR-340的表达水平均低于HIEC细胞,且SW480细胞中miR-340的表达水平最低;miR-340组的A490水平、Lgr5、β-catenin、cyclinD1的表达水平、Lgr5野生型双荧光素酶报告基因的荧光活力均低于miR-NC组;pcDNA3.1+miR-340组的A490水平、Lgr5、β-catenin、cyclinD1 的表达水平均低于pcDNA3.1 组,pcDNA3.1-Lgr5+miR-340组的A490水平、Lgr5、β-catenin、cyclinD1的表达水平均高于pcDNA3.1+miR-340组.结论 miR-340能够抑制结肠癌细胞的增殖,靶向Lgr5基因并抑制β-catenin通路是可能的分子机制.     

过表达Twist1 促进结直肠癌SW620 细胞获得多药耐药性及机制研究

目的:探讨过表达Twist1对结直肠癌SW620细胞多药耐药性(MDR)的影响及其可能的机制。方法:利用过表达Twist1的慢病毒和阴性对照病毒转染结直肠癌SW620细胞,分别为实验组(SW620-Twist1)和对照组(SW620-NC),采用RT-qPCR和Western blot技术检测两组细胞Twist1基因及耐药基因ABCB1、ABCG2 mRNA和蛋白表达; CCK8法测定5-氟尿嘧啶(5-FU)和奥沙利铂(OXA)对两组细胞在24、48及72 h生长抑制率的影响;流式细胞仪检测两组细胞的肿瘤干细胞标记物CD133、CD44表达差异。结果:SW620-Twist1组与SW620-NC组相比,Twsit1基因mRNA和蛋白显著升高,差异具有统计学意义(P0. 01),提示过表达Twist1基因的SW620细胞系构建成功; 5-FU和OXA两种药物在48、72 h时对细胞的抑制率均明显降低(48 h,P0. 05; 72 h,P0. 01); ABCB1、ABCG2基因mRNA及蛋白的表达量均明显升高(P0. 01); CD133及CD44表达量均显著增高(P0. 01)。结论:过表达Twist1可促进直肠癌SW620细胞耐药指标ABCB1、ABCG2表达,使肿瘤细胞获得MDR,该现象可能与促进干性获得有关。     

circPSMC3在结直肠癌组织中的表达及对CRC细胞增殖和转移的影响

目的 研究环状RNAPSMC3(circPSMC3)在结直肠癌(CRC)组织中的表达水平及临床意义,探讨circPSMC3对CRC细胞增殖和转移的作用及作用机制.方法 采用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测circPSMC3在CRC和癌旁组织中的表达水平,分析circPSMC3的表达与CRC患者临床病理参数的关系.采用qRT-PCR检测circPSMC3在CRC细胞SW480、SW620和HT29及正常结肠细胞系NCM460的表达水平.选择circPSMC3低表达的CRC细胞系转染对照mimic和circPSMC3 mimic,CCK8实验检测circPSMC3对CRC细胞增殖能力的影响,Transwell实验检测circPSMC3对CRC细胞转移能力的影响.Western blot检测各组细胞中PI3K/AKT信号通路相关蛋白pPI3K和pAKT的表达及其下游蛋白β-catenin、cMYC和MMP2的表达.结果 circPSMC3在CRC组织中的表达显著低于其在癌旁组织中的表达(P<0.05),circPSMC3在CRC中的低表达与临床分期晚期和淋巴结转移相关(P<0.05).circPSMC3在CRC细胞系中的表达显著低于正常结肠细胞系NCM460的表达,在SW480细胞中的表达最低(P<0.05).转染circPSMC3 mimic后SW480细胞的增殖和转移能力均降低(P<0.05).circPSMC3抑制CRC细胞中PI3K/AKT的信号相关蛋白pPI3K和pAKT的表达及其下游蛋白β-catenin、cMYC和MMP2的表达.结论 circPSMC3在CRC组织中低表达,且其表达水平与临床分期和淋巴结转移有关.circPSMC3可能通过调控PI3K/AKT信号通路抑制CRC细胞增殖和转移能力.     

1α,25-二羟基维生素D3抑制人结肠癌细胞系SW480中β-catenin转录活性

目的探讨1α,25-二羟基维生素D_3[1,25(OH)_2D_3]对人结肠癌细胞系SW480中β-catenin转录活性的影响及作用机制。方法 1,25(OH)_2D_3(100 nmol/L)干预和溶剂对照处理SW480细胞48 h;用双荧光素酶报告系统检测β-catenin的转录活性;Western blot检测1,25(OH)_2D_3干预后β-catenin在细胞核/质内的定位变化;用RT-qPCR和Western blot检测β-catenin和FOXM1 mRNA及蛋白水平。采用siRNA敲降SW480细胞中FOXM1后,检测1,25(OH)_2D_3干预后β-catenin转录活性的变化。结果 1)在SW480细胞中,1,25(OH)_2D_3能显著降低β-catenin的转录活性(P0.05),但不影响β-catenin mRNA和蛋白表达水平; 2)1,25(OH)_2D_3上调SW480细胞中FOXM1蛋白水平的表达(P0.05); 3)敲降SW480细胞中FOXM1降低1,25(OH)_2D_3对β-catenin转录活性的抑制作用(P0.05)。结论 1,25(OH)_2D_3通过上调FOXM1的表达,发挥抑制β-catenin转录活性的作用。     

miR-152 在IL-6 诱导宫颈癌Hela 细胞增殖和侵袭中的作用及其机制

目的:探讨miR-152在IL-6诱导宫颈癌Hela细胞增殖和侵袭中的作用及其机制。方法:以0、0.5、5和50 ng/ml IL-6处理Hela细胞后,分别采用CCK-8法、Transwell法检测细胞的增殖和侵袭能力,RT-PCR检测细胞中miR-152的表达,Western blot检测WNT/β-catenin信号通路相关蛋白WNT1、β-catenin、CyclinD1和MMP-9的表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-152和WNT1的靶向关系。脂质体介导转染miR-152模拟物后,RT-PCR检测miR-152的表达,CCK-8、Transwell和Western blot检测miR-152对IL-6处理的Hela细胞增殖、侵袭和WNT/β-catenin信号通路的影响。结果:与对照(0 ng/ml)相比,0.5、5和50 ng/ml IL-6处理Hela细胞后增殖和侵袭能力增强以及WNT/β-catenin信号通路相关蛋白WNT1、β-catenin、CyclinD1和MMP-9蛋白的表达水平均明显升高,而miR-152表达明显降低(P0.05),且呈IL-6浓度依赖性。双荧光素酶报告基因实验证实WNT1是miR-152的靶基因。成功上调miR-152表达可逆转IL-6对Hela细胞增殖和侵袭的促进及对WNT/β-catenin信号通路的调控作用。结论:miR-152参与IL-6诱导的宫颈癌Hela细胞增殖和侵袭,其作用机制可能与靶向调控WNT/β-catenin信号通路有关。     

过表达Oct4B1 诱导结直肠癌SW480 细胞发生上皮间质转化

目的:探讨Oct4B1 基因过表达是否诱导人结直肠癌SW480 细胞发生上皮间质转化(EMT)及其可能的机制。方法:用带G418 抗性的Oct4B1 基因过表达质粒及阴性对照质粒转染人结直肠癌SW480 细胞株,分别称为实验组(SW480-Oct4B1)及对照组(SW480-NC),转染成功后用G418 筛选建立稳定转染的细胞株,对两种稳定转染细胞进行如下检测: RT-qPCR 检测Oct4B1 的mRNA 水平;于划痕实验和Transwell 小室实验检测迁移和侵袭能力;盂Western blot 检测EMT 相关标记物E-cadherin、N-cadherin 及Vimentin 蛋白表达; RT-qPCR 和Western blot 检测EMT 转录因子Twist 的mRNA 及蛋白表达。结果:稳定转染细胞株建立后,实验组与对照组比较:Oct4B1 基因表达水平明显升高(P<0.01);细胞迁移明显增强(P<0.01);细胞侵袭能力明显提高(P<0.01);上皮标记物E-cadherin 蛋白表达量明显下降(P<0.01);而间质标记物N-cadherin 及Vimentin蛋白表达量明显上调(P<0.01);Twist 的mRNA 及蛋白表达量均明显升高(P<0.01)。结论:过表达Oct4B1 基因可诱导人结直肠癌SW480 细胞发生EMT,增强细胞迁移及侵袭能力,其分子机制可能与提高Twist 表达有关。     

miR-489通过调控TWIST1的表达抑制结肠癌干细胞表型和上皮间质转换

目的探讨miR-489在结肠癌干细胞表型和上皮间质转换中的作用和调控机制。方法 RT-q PCR检测多个人结肠癌细胞系(HT29、SW480、SW620和HCT116)和正常肠道上皮细胞HIEC中miR-489表达;采用基因转染技术提高结肠癌细胞中miR-489表达,Western blot检测过表达miR-489对结肠癌干细胞标志物CD133、CD44、Ep CAM、ALDH1和上皮细胞标志物E-cadherin、间质细胞标志物vimentin和N-cadherin的表达;RT-q PCR和Western blot检测TWIST1 mRNA和蛋白表达水平。结果 4个结肠癌细胞系中的miR-489相对表达量显著低于正常肠道上皮细胞HIEC中的表达(P<0.05)。在HT29和HCT116细胞中过表达miR-489,4个结肠癌干细胞标志物表达降低(P<0.05);上皮细胞标志物表达增加(P<0.05);间质细胞标志物表达减少(P<0.05)。TWIST1是miR-489潜在靶基因,在2个细胞系中过表达miR-489,TWIST1 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论 miR-489在结肠癌细胞中低表达,过表达miR-489可能通过调控TWIST1抑制结肠癌干细胞表型和上皮间质转换。     

MiR-145-5p在大肠癌中的表达及与多药耐药的关系

目的 探讨大肠癌中miR-145-5p和多药耐药基因(MDR1)蛋白P-糖蛋白（P-gp）的表达及两者的关系。方法 分别在组织、细胞水平采用SP法、Real-time PCR法、Western blotting法检测50例大肠癌 (CRC)患者组织及30例癌旁正常组织患者中P-gp的表达,miR-145-5p的表达变化对MDR1 mRNA及P-gp的影响及两者与临床病理特征之间的相关性。结果 大肠癌组织中miR-145-5p表达量明显低于癌旁正常组织,MDR1 mRNA及P-gp的表达量明显高于癌旁正常组织(r=-0.403,P<0.01)。大肠癌细胞(HCT-15)中miR-145-5p 能够抑制MDR1 mRNA及P-gp的表达(P<0.05)。结论 MiR-145-5p对大肠癌多药耐药基因及蛋白的表达具有调控作用,参与了大肠癌的发生、发展及多药耐药。     

ADD3可变剪接在结肠癌与正常组织间的差异表达

 目的: 探讨内收蛋白3(ADD3)及其剪接体与结直肠癌(CRC)的关系。方法: Real-time PCR方法检测50对CRC组织、20对结直肠息肉组织、经5-氟尿嘧啶(5-FU)或奥沙利铂干预前后的SW480(低转移性)和SW620(高转移性)结肠癌细胞中ADD3-、ADD3-Ia和ADD3-Ib的表达量。用MTT检测细胞的活力,用划痕实验检测细胞的转移能力,用Transwell实验检测细胞的侵袭性。结果: CRC组织中ADD3与ADD3-Ib的表达量低于正常组织(P<0.01),ADD3-Ia/Ib比值高于正常组织(P<0.01);病理分组发现ADD3-Ia在T3-4组的表达量较T1-2组高(P<0.05)。结直肠息肉组织中ADD3、ADD3-Ia和ADD3-Ib的表达量低于正常组织(P<0.01)。SW620细胞中ADD3-Ia和ADD3-Ib的表达量低于SW480细胞(P<0.05),ADD3-Ia/Ib比值高于SW480(P<0.01);在经奥沙利铂和5-FU分别处理后,在SW620和SW480细胞活力、迁移和侵袭能力减弱,而ADD3、ADD3-Ia和ADD3-Ib的表达量均有不同程度增高。结论: CRC中ADD3-Ib和ADD3减少,并伴随ADD3-Ia/Ib比值升高。ADD3及其剪接体的改变可能跟CRC的侵袭能力有关。     

沉默XIST对结直肠癌细胞阿霉素耐药性的抑制作用及其机制

目的:探讨X染色体失活特异转录物(XIST)在结直肠癌(CRC)细胞对阿霉素(又称多柔比星,DOX)耐药中的作用及其可能的分子机制。方法:通过DOX浓度递增处理CRC细胞LoVo和HCT116,获得DOX耐药细胞LoVo/DOX和HCT116/DOX。采用RT-qPCR检测XIST和微小RNA-124(miR-124)在DOX耐药CRC细胞中的表达;转染XIST小干扰RNA(si-XIST)后,通过Western blot检测LoVo/DOX细胞和HCT116/DOX细胞中P-糖蛋白(P-gp)和谷胱甘肽S-转移酶π(GST-π)的蛋白水平。通过萤光素酶报告基因实验来证明XIST与miR-124的相互作用。转染miR-124、si-XIST或si-XIST+anti-miR-124后,通过Western blot检测LoVo/DOX细胞和HCT116/DOX细胞中P-gp和GST-π的蛋白水平。结果:在DOX耐药CRC细胞中,XIST表达上调(P0.05),miR-124表达下调(P0.05)。XIST沉默显著降低DOX耐药CRC细胞中的P-gp和GST-π蛋白水平(P0.05)。萤光素酶报告基因实验结果显示,XIST存在miR-124结合区域。转染miR-124显著降低DOX耐药CRC细胞中P-gp及GST-π蛋白水平(P0.05);而转染anti-miR-124则可逆转由XIST沉默导致的DOX耐药CRC细胞的P-gp及GST-π的降低(P0.05)。结论:在DOX耐药CRC细胞中,沉默XIST可能通过调节miR-124来抑制DOX的耐药性。     

miR-451a调控BAP31诱导结直肠癌细胞凋亡

目的:探讨miR-451a及靶蛋白BAP31在结直肠癌中的作用。方法:体外培养HCT116、SW620、SW480、DLD细胞,以Real-time PCR法检测结直肠癌细胞系中miR-451a和BAP31的相对表达量;通过建立miR-451a不同表达情况的结直肠癌细胞HCT116模型,应用抑制消减杂交方法建立抑制消减文库,从中筛选miR-451a的调控蛋白,并通过萤光素酶报告基因检测miR-451a的直接调控靶基因;采用MTT法、流式细胞术以及Hoechst染色法评价miR-451a调控的靶蛋白BAP31对结直肠细胞凋亡的调节作用。结果:在抑制杂交消减文库中得到了miR-451a可能调控的相关基因,其中在正向文库中得到BAP31、EEF1A1和CDC20等7个基因,在反向文库中得到DKK1和PSME1等4个基因。在HCT116、HT29、SW480、SW620和DLD结直肠癌细胞中miR-451a的相对表达量是正常结肠上皮细胞NCM460中的0.32、0.44、0.53、0.43和0.73倍,BAP31在DLD、HT29、SW620和HCT116结直肠癌细胞中的表达量是正常结肠上皮细胞NCM460中的1.85、2.84、2.37和3.71倍。双萤光素酶报告基因实验证明,miR-451a可作用于与BAP31开放阅读框上游177的位点,通过miR-451a作用使海肾荧光素酶的活性降低80.3%。在HCT116细胞和SW620细胞中过表达miR-451a后72h抑制率分别为39.50%和39.50%;沉默BAP31后72h抑制率分别为45.32%和53.56%。过表达miR-451a48h后HCT116凋亡增加13.57%,SW620细胞凋亡率增加13.2%;沉默BAP31 48h后HCT116细胞凋亡增加5.62%,SW620细胞凋亡率增加8.68%。结论:miR-451a在结直肠癌细胞中能够直接通过调控BAP31诱导细胞的凋亡从而抑制细胞的增殖。     

外泌体circRPPH1促进结直肠癌增殖和转移北大核心CSCD

目的:探讨外泌体circRPPH1在结直肠癌(CRC)细胞中的生物学功能及潜在作用机制。方法:对GEO数据库GSE126094进行分析,筛选并验证CRC组织差异表达circRNA。SW620和SW480细胞转染circRPPH1 shRNA(sh-circRPPH1)后,MTT、流式细胞术和Transwell实验观察细胞增殖活性、细胞周期、迁移和侵袭能力变化。将转染Oe-circRPPH1质粒和sh-circRPPH1的SW620和SW480细胞(供体细胞)分别与未经处理的SW620和SW480细胞(受体细胞)共培养,qRT-PCR检测供体细胞、细胞外泌体及受体细胞circRPPH1表达。在线生物信息学数据和双荧光素酶报告基因实验预测并验证circRPPH1的靶miRNA及其下游靶基因。结果:circRPPH1在CRC肿瘤组织和癌细胞中高表达;敲除circRPPH1可抑制SW620和SW480细胞增殖、阻滞细胞周期、抑制细胞迁移和侵袭。SW620和SW480细胞可通过外泌体将circRPPH1传递给周围癌细胞。生物信息学和荧光素酶报告基因实验显示,circRPPH1在CRC细胞中起miR-330-5p海绵作用,miR-330-5p在CRC肿瘤组织和癌细胞中均呈低表达;NRAS是miR-330-5p的下游靶基因,在CRC肿瘤组织和癌细胞中均呈高表达。结论:circRPPH1在CRC细胞增殖和转移过程中发挥重要作用,并可能通过海绵miRNA发挥调控作用,提示外泌体circRPPH1在CRC中起致癌作用,可能是CRC的潜在生物标志物。     

miR-129靶向RUNX1对结肠腺癌SW480细胞增殖的影响

目的探讨miR-129对结肠腺癌SW480细胞增殖的影响及可能的机制。方法采用miR-129模拟物转染结肠腺癌SW480细胞,分为空白对照组(未进行转染)、miR-129阴性对照组(转染无关序列)、miR-129模拟物转染组(转染miR-129模拟物),通过实时定量PCR进行验证,Western blot检测miR-129过表达后SW480细胞RUNX1蛋白的表达。采用CCK-8法检测miR-129对SW480细胞增殖的影响,采用生物信息学网站预测RUNX1是否为miR-129潜在的靶基因,应用双荧光素酶报告基因实验进行验证。结果 miR-129过表达,SW480细胞中RUNX1mRNA和蛋白表达下调,抑制SW480细胞体外增殖,生物信息学分析结果显示RUNX1是miR-129的靶基因之一,双荧光素酶实验证实RUNX1为miR-129的下游靶基因。结论 miR-129通过靶向调控RUNX1抑制结肠腺癌SW480细胞增殖。     

过表达miR-107促进HT29细胞增殖和成瘤能力

目的探讨微小RNA107(miR-107)对结肠癌细胞增殖的影响。方法实时定量PCR检测miR-107在结肠癌组织及NCM460、HT29、HCT116、SW480、Colo205和Lo Vo结肠癌细胞系的水平;培养HT29结肠癌细胞,分别转染miR-107模拟物(miR-107 mimic)、miR-107抑制物(miR-107 inhibitor),过表达或抑制miR-107后,通过噻唑蓝(MTT)实验、平板克隆实验检测细胞的增殖能力,软琼脂克隆形成实验及裸鼠成瘤实验检测HT29细胞的成瘤能力,Wetern blot法检测miR-107对HT29细胞中细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的蛋白水平。结果 miR-107在结肠癌组织及多种结肠癌细胞中高表达。过表达miR-107增加HT29细胞的增殖能力及成瘤能力并上调细胞cyclin D1蛋白水平,抑制miR-107表达则可降低HT29细胞的增殖能力及成瘤能力。结论 miR-107在结肠癌组织及细胞中高表达,过表达的miR-107通过上调cyclin D1水平促进结肠癌细胞增殖及成瘤的作用。     

miR-203靶向PIK3CA对结肠癌SW480细胞增殖的影响

目的探讨miR-203对结肠癌SW480细胞增殖的影响及可能机制。方法采用脂质体介导的miR-203模拟物转染结肠癌SW480细胞,通过实时定量PCR进行验证,Western blot检测miR-203过表达后SW480细胞中p110α蛋白的表达。采用CCK-8法检测miR-203过表达后,SW480细胞增殖能力的变化,采用生物信息学网站预测PIK3CA是否为miR-203的靶基因,进一步应用双荧光素酶报告基因实验进行验证。结果 miR-203模拟物转染SW480细胞组,miR-203的表达水平显著升高,p110α蛋白表达下调,miR-203过表达能抑制SW480细胞体外增殖,生物信息学分析结果显示PIK3CA是miR-203的靶基因之一,双荧光素酶实验证实PIK3CA为miR-203的下游靶基因。结论 miR-203通过靶向调控PIK3CA抑制结肠癌SW480细胞增殖。     

乳腺癌化疗耐药与MTDH过表达的关系及机制分析

目的探讨MTDH基因过表达对乳腺癌化疗耐药的影响及其机制。方法采用免疫组化SP法检测89例乳腺癌及癌旁组织中MTDH的表达及P-gp在乳腺癌组织中的表达。通过慢病毒感染使MCF-7乳腺癌细胞系过表达MTDH,采用CCK-8法检测MTDH过表达对乳腺癌细胞化疗耐药的影响。采用Western blot法检测MTDH过表达对乳腺癌细胞P-gp、β-catenin表达及AKT和GSK-3β磷酸化的影响。结果 MTDH在癌旁组织和乳腺癌组织中的高表达率分别为25.8%(23/89)和97.8%(87/89),MTDH在乳腺癌中的表达明显高于癌旁组织(P0.01);P-gp在乳腺癌组织中的高表达率为68.5%(61/89),乳腺癌中MTDH与P-gp表达呈显著正相关(r_s=0.568,P0.01)。在MCF-7乳腺癌细胞系中过表达MTDH,明显提高了MCF-7细胞对紫杉醇和阿霉素的耐受性,增加了P-gp和β-catenin蛋白表达水平,并且升高了p-AKT(Ser473)和p-GSK-3β(Ser9)的磷酸化水平(P0.05)。结论 MTDH过表达与乳腺癌的化疗耐药密切相关,MTDH过表达引起的P-gp过表达和Wnt/β-catenin信号通路活化,可能与乳腺癌化疗耐药有关。     

miR-212通过靶向NRP1调节结肠癌SW480肿瘤干细胞样特性和免疫应答北大核心CSCD

目的:探讨miR-212在SW480肿瘤干细胞样特性和免疫应答中的调控作用,并初步分析其调控机制。方法:结肠癌SW480细胞分别转染mimic、miR-NC或miR-212-5p,RT-PCR检测神经纤毛蛋白1(NRP1)和miR-212-5p表达水平并进行相关性分析;TargetScan预测miR-212-5p潜在靶向基因NRP1,荧光素酶实验验证靶向关系;SW480细胞单独或联合转染miR-212-5p和pcDNA-NRP1,RT-PCR检测miR-212-5p和NRP1 mRNA表达水平,Western blot检测NRP1蛋白表达水平;流式细胞术分选干细胞阳性标记(CD44+)比例,Western blot检测性别决定区Y框蛋白2(SOX2)和富含亮氨酸重复单位的G蛋白偶联受体5(LGR5)蛋白表达;ELISA测定SW480细胞上清液中IL-6、TNF-α和IL-4蛋白含量,RT-PCR检测IL-6和IL-4 mRNA表达水平。结果:与Control组相比,miR-212-5p显著上调SW480肿瘤干细胞miR-212-5p表达(P<0.05),下调NRP1表达(P<0.05),抑制CD44+、SOX2、LFR5表达(P<0.05),促进炎症反应和免疫应答(P<0.05);与NRP1组相比,miR-212-5p明显抑制因NRP1上调的CD44+、SOX2和LGR5表达(P<0.05),促进因NRP1下调的炎症因子表达(P<0.05)。结论:miR-212-5p靶向抑制NRP1表达,调节结肠癌SW480肿瘤干细胞样特性和免疫应答。     

miR-377靶向ZEB2调节结肠癌细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化北大核心CSCD

目的:探讨miR-377对结肠癌细胞迁移、侵袭的影响及潜在作用机制。方法:RT-qPCR检测结肠癌细胞系HT29、SW480、SW620和HCT116和人小肠上皮细胞HIEC miR-377表达。将miR-377 mimic、阴性对照物、pmirGLO-wt-ZEB2、pmirGLO-mut-ZEB2转染至HCT116细胞,双荧光素酶报告实验检测miR-377与ZEB2的靶向作用,伤口愈合实验、Transwell、Western blot检测miR-377和ZEB2对细胞迁移、侵袭、上皮-间质转化相关蛋白表达的影响。结果:与HIEC细胞相比,结肠癌细胞系miR-377表达降低(P<0.05)。与对照组相比,miR-377 mimic和pmirGLO-WT-ZEB2共转染的HCT116细胞荧光素酶活性显著降低(P<0.05),但ZEB2结合位点突变逆转了miR-377 mimic对荧光素酶活性的抑制作用(P>0.05);miR-377 mimic显著降低了HCT116细胞ZEB2蛋白表达(P<0.05)。与NC+Vector组相比,miR-377+Vector组细胞划痕愈合率、侵袭细胞数显著降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著升高(P>0.05),N-cadherin、Vimentin蛋白表达显著降低(P<0.05)。与miR-377+Vector组相比,miR-377+ZEB2组细胞划痕愈合率、侵袭细胞数显著高于miR-377+Vector组(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著降低(P<0.05),N-cadherin、Vimentin蛋白表达显著升高(P<0.05),miR-377+ZEB2组与NC+Vector组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:miR-377通过靶向作用于ZEB2调节结肠癌细胞上皮-间质转化相关蛋白表达,进而影响结肠癌细胞迁移、侵袭,为结肠癌临床治疗提供了新的策略。     

miR-320e促进胰腺癌细胞系耐药

目的研究miR-320e在胰腺癌耐药中的作用及其机制。方法用定量PCR的方法确定miR-320e在胰腺癌耐药细胞系中的表达,进而通过在胰腺癌细胞中过表达miR-320e,检测细胞对5-FU化疗药物敏感性、细胞增殖的影响。同时通过报告基因实验及Western blot法确定miR-320e的靶基因。结果在胰腺癌耐药细胞系(PATU8988/5-FU)中miR-320e表达显著上升(P0.01)。在胰腺癌细胞PATU8988和PANC-1中过表达miR-320e后,细胞对5-FU化疗药物出现耐受,IC_(50)显著上升(P0.01),细胞增殖速度加快(P0.01)。PDCD4是miR-320e的直接靶基因,miR-320e的过表达显著降低了PDCD4蛋白水平。结论 miR-320e的高表达可显著促发胰腺癌细胞化疗耐药,可作为胰腺癌耐药检测的分子标志及新的治疗靶点。