小鼠釉原蛋白成熟肽编码区cDNA的克隆和部分序列分析

目的：克隆小鼠釉原蛋白（ＡＭＧ）成熟肽编码区基因。方法：用异硫氰酸胍一步法从昆明新生小鼠磨牙牙胚组织中抽提总ＲＮＡ，用Ｏｌｉｇｏ（ｄｔ）作引物逆转录合成牙胚ｃＤＮＡ，然后利用ＰＣＲ方法，从ｃＤＮＡ中扩增出小鼠釉原蛋白成熟区的基因片段（约６７０ｂｐ），将所得基因片段插入ｐＢＳ质粒载体，转化到大肠杆菌ＤＨ５α后挑选阳性克隆，提取重组质粒ＤＮＡ，通过限制性酶切和部分核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。结果：重组质粒ｐＢＳ－ＡＭＧ的酶切图谱和序列分析结果与国外文献报道一致。结论：克隆到小鼠釉原蛋白成熟肽编码区基因。     

小鼠釉丛蛋白成熟肽编码区cDNA克隆

克隆小鼠釉丛蛋白成熟肽编码区基因。方法：设计引物，以小鼠牙胚ｃＤＮＡ文库为模板，利用ＰＣＲ方法，扩增出小鼠釉丛蛋白成熟区的基因片段，将所得基因片段插入ｐＢＳ质粒载体，转化到大肠杆菌ＸＬ－１－Ｂｌｕｅ后挑选阳性克隆，提取重组质粒ＤＮＡ，通过限制性酶切和部分核苷酸序列分析鉴定性克隆。结果：重组质粒ｐＢＳ－ｔｕｆｔｅｌｉｎ的酶切图谱和序列分析结果与国外文献报道一致。结论：克隆到小鼠釉丛蛋白成熟编码区基因     

小鼠牙本质涎蛋白成熟肽编码区cDNA 隆和部分序列分析

目的：克隆小鼠牙本质涎蛋白（ＤＳＰ）成熟肽编码区基因。方法：用异硫氰酸胍一步法从昆明新生小鼠磨睡胚组织中抽提总ＲＮＡ，用Ｏｌｉｇｏ（ｄｔ）作引物逆转录合成牙胚ｃＤＮＡ，然后利用ＰＣＲ方法，从ｃＤＮＡ中扩增出小鼠ＤＳＰ成熟区的基因片段（约１．４ｋｂｐ），将所得基因片段插入ｐＢＳ质粒载体，转化到大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ后挑选阳性克隆，提取重组质粒ＤＮＡ，通过限制性酶切和核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。结果     

小鼠成釉蛋白成熟肽编码区cDNA序列的克隆

目的：克隆小鼠成釉蛋白（ＡＭＢＮ）成熟肽编码区基因。方法：用异硫氰酸胍一步法从昆明新生小鼠磨牙牙胚组织中抽提总ＲＮＡ,用Ｏｌｉｇｏ（ｄｔ）作引物逆转录合成牙胚ｃＤＮＡ,然后利用ＰＣＲ方法,从ｃＤＮＡ中扩增出小鼠成釉蛋白成熟区的基因片段（约１．１ｋｂｐ）,将所得基因片段插入ｐＴＺ１８质粒载体,转化到大肠杆菌ＤＨ５α后挑选阳性克隆,提取重组质粒ＤＮＡ,通过限制性酶切和核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。结果：重组质粒ｐＴＺ－ＡＭＢＮ的酶切图谱和部分序列分析结果与国外文献报道一致。结论：克隆到小鼠成釉蛋白成熟肽编码区基因     

人牙本质基质蛋白1 cDNA序列的克隆

目的：克隆人牙本质基质蛋白１（ＤＭＰ１）成熟肽编码区基因片段。方法：用异硫氰酸胍一步法从引产胎儿牙乳头组织中抽提总ＲＮＡ，用Ｏｌｉｇｏ（ｄｔ）作引物逆转录合成牙乳头ｃＤＮＡ，然后利用ＰＣＲ方法，从ｃＤＮＡ中扩增出人ＤＭＰ１成熟区的基因片段（约１．８ｋｂｐ），将所得基因片段插入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ质粒载体，转化到大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ后挑选阳性克隆，提取重组质粒ＤＮＡ，通过酶切分析和核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。结果：酶切图谱和部分序列分析结果与国外文献报道一致。结论：克隆到人ＤＭＰ１成熟肽编码区基因片段。     

小鼠牙本质磷蛋白cDNA的克隆和部分序列分析

目的：克隆小鼠牙本质磷蛋白（ＤＰＰ）ｃＤＮＡ。方法：用异硫氰酸胍一步法从小鼠牙胚组织中抽提总ＲＮＡ，用ｏｌｉｇｏ（ｄｔ） 作引物逆转录合成牙胚ｃＤＮＡ，然后利用ＰＣＲ 方法，从ｃＤＮＡ 中扩增出小鼠ＤＰＰｃＤＮＡ基因片段（ 约１ ．６ｋｂ），将所得基因片段插入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ 质粒载体，转化到大肠杆菌ＸＬ１ － Ｂｌｕｅ 后挑选阳性克隆，提取重组质粒ＤＮＡ，通过酶切分析和核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。结果：酶切图谱和部分序列分析结果与国外文献报道一致。结论：克隆到小鼠ＤＰＰｃＤＮＡ 基因片段。     

小鼠釉基质丝氨酸蛋白酶成熟肽编码区cDNA的克隆和序列分析

目的：克隆小鼠釉基质丝氨酸蛋白酶（EMSP）成熟肽编码区的基因。方法：设计引物，以小鼠牙胚总RNA为模板，利用RT-PCR方法，扩增出小鼠EMSP的基因片段，将所得基因片段插入pBS质粒载体。转化到大肠杆菌XL-1-Blue后挑选阳性克隆，提取重组质粒DNA，通过限制性酶切和核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。结果：重组质粒pBS-EMSP的酶切图谱和序列分析结果与国外文献报道一致。结论：克隆到小鼠EMSP成熟肽编码区基因。     

小鼠釉基质丝氨酸蛋白酶成熟肽编码区

目的克隆小鼠釉基质丝氨酸蛋白酶(EMSP)成熟肽编码区的基因。方法设计引物，以小鼠牙胚总RNA为模板，利用RT-PCR方法，扩增出小鼠EMSP的基因片段，将所得基因片段插入pBS质粒载体，转化到大肠杆菌XL-1-Blue后挑选阳性克隆，提取重组质粒DNA，通过限制性酶切和核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。结果重组质粒pBS-EMSP的酶切图谱和序列分析结果与国外文献报道一致。结论克隆到小鼠EMSP成熟肽编码区基因。     

小鼠牙本质涎磷蛋白成熟蛋白编码区cDNA克隆与部分序列分析

目的 克隆小鼠牙本质涎磷蛋白（ｄｅｎｔｉｎ ｓｉａｌｏｐｈｏｓｐｈｏｐｒｏｔｅｉｎ,ＤＳＰＰ）成熟蛋白编码区基因。方法 用异硫氰酸胍一步法从昆明新生小鼠磨牙牙胚组织中抽提总ＲＮＡ,用Ｏｌｉｇｏ（ｄｔ）作引物逆转录合成牙胚ｃＤＮＡ,然后利用ＰＣＲ方法,从ｃＤＮＡ中扩增出小鼠ＤＳＰＰ成熟区的基因片段（约３ｋｂｐ）,将所５得基因片段插入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＫＳ质粒载体,转化到大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ     

变形链球菌表面蛋白pcDNA3/pacA与pcDNA3/pacP真核表达质粒的构建

目的：构建变形链球菌表面蛋白真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３／ｐａｃＡ与ｐｃＤＮＡ３／ｐａｃＰ,即表面蛋白氨基端与中央区Ｔ、Ｂ细胞表位的两个基因疫苗。方法：通过ＰＣＲ扩增,获得分别编码变形链球菌表面蛋白ＰＡｃ氨基端和中央区Ｔ、Ｂ细胞表位的两个目的基因ｐａｃ－Ａ和ｐａｃ－Ｐ。将它们与真核穿梭表达载体ｐｃＤＮＡ３进行体外重组,并转化大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ,采用菌落原位杂交筛选出阳性克隆子后,抽提重组质粒,进行酶切鉴定、Ｓｏｕｔｈｅｍ杂交分析和ＤＮＡ序列测定。结果：真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３／ｐａｃＡ与ｐｃＤＮＡ３／ｐａｃＰ构建正确,目的基因ｐａｃ－Ａ和ｐａｃ－Ｐ定向插入至真核表达载体中,插入的相位正确,未改变目的基因的阅读框架。结论：真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３／ｐａｃＡ与ｐｃＤＮＡ３／ｐａｃＰ分别包含了变形链球菌表面蛋白ＰＡ     

小鼠PeriostinC端编码区cDNA克隆及其序列分析

目的：从小鼠牙周膜组织中克隆PerostinC末端编码区基因。方法：用异硫氰酸胍一步法从昆明成年小鼠牙周膜组织中抽提总RNA,用Oligo(dt)作引物逆转录合成cDNA,然后利用PCR技术,从cDNA中扩增出小鼠PeriostinC末端编码区的基因自然（约940bp）,将所得基因片段插入p RSET-B载体,转化大肠杆菌DH5α后随机挑选数个克隆,提取质粒DNA,通过限制性酶切和核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。结果：重组质粒pRSET-B-Periostin的酶切图谱和序列分析结果与国外文献报道一致。结论：克隆到小鼠该蛋白C端编码区基因。     

成骨蛋白—1成熟蛋白编码区cDNA克隆与序列分析

目的：克隆成骨蛋白－１（ＯＰ－１）成熟蛋白编码区基因。方法：用一步酸酚法从中国健康人胎盘组织中提取总ＲＮＡ，用Ｏｌｉｇｏ（ｄｔ）作引物逆转录合成胎盘ｃＤＮＡ文库，然后利用ＰＣＲ的方法，从ｃＤＮＡ文库中扩增出编码人ＯＰ－１成熟区的基因片段，将所得基因片段插入ｐＧＥＭ－３ｚｆ（＋）载体，转化大肠杆菌后挑选阳性克隆，提取双链ＤＮＡ模板，用ＡＢＩＤＮＡ自动测序仪进行序列测定分析。结果：克隆和测序结果与国外文献报道一致。结论：在国内第一次克隆到ＯＰ－１的成熟蛋白编码区基因。     

人牙胚釉原蛋白成熟肽基因的克隆

目的:克隆人釉原蛋白成熟肽编码区基因片断,并构建含有该基因的重组表达质粒。方法:从引产胎儿牙胚组织中抽提总RNA,以Oligo(dt)为引物,逆转录合成牙胚cDNA利用PCR,从cDNA中扩增出人釉原蛋白成熟肽编码序列(约540bp),所得目的基因片断插入表达载体质粒PQE30,转化到大肠杆菌DH5α后挑选阳性克隆,抽提重组质粒DNA,通过PCR、酶切和核苷酸序列分析,鉴定阳性克隆。结果:样品质粒测序证实,质粒PQE30中插入的基因片段与人釉原蛋白成熟肽基因序列完全相同。结论:从人胚胎的牙胚组织中克隆到釉原蛋白成熟肽编码序列,成功构建含有人釉原蛋白成熟肽基因的重组表达质粒。     

小鼠釉丛蛋白基因不同mRNA剪接体的克隆

目的：克隆小鼠釉丛蛋白基因不同mRNA剪接体，分析小鼠釉丛蛋白的多态性。方法：采用异硫酸氰胍一步法从新生小鼠磨牙牙胚组织中提取总RNA，反转录成cDNA第一链，经PCR扩增出小鼠釉丛蛋白基因特异片段，播入pBS质粒，筛选阳性克隆，并经酶切和核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。结果：克隆T1序列与已发表的完整釉从蛋白mRNA序列一致。克隆T2序列与完整釉丛蛋白mRNA序列比较，缺失序列的84-158的75个碱基片段。结论：小鼠釉从蛋白基因在转录mRNA时，可产生不同的剪接体。     

小鼠牙本质涎磷蛋白基因启动子的克隆与序列分析

目的 克隆小鼠牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein，DSPP)基因启动子片段。方法 培养MDPC一23细胞，从培养的细胞中提取基因组DNA，利用设计的上下游引物，进行PCR反应。将扩增得到的DSPP基因启动子片段克隆到pMD18-T栽体，酶切鉴定后，进一步进行DNA序列测定。结果 酶切结果表明成功构建重组质粒，序列分析结果与国外报道一致。结论 成功克隆获得小鼠DSPP基因的启动子片段。