长链非编码RNA AWPPH通过调控Notch信号通路对人牙周膜细胞增殖和成骨向分化的影响

目的：探讨长链非编码RNA(lncRNA)AWPPH通过调控Notch信号通路对人牙周膜细胞增殖和成骨向分化的影响及分子机制。方法：体外培养人牙周膜细胞,并进行成骨分化诱导,使用定量即时聚合酶链锁反应（qRT-PCR）实验检测第0、3、7、14天细胞AWPPH表达水平。将人牙周膜细胞分为空白对照组（NC）、空载体组（vector）、AWPPH过表达组（AWPPH）和过表达AWPPH+通路抑制剂组（AWPPH+DAPT）。qRT-PCR实验检测AWPPH表达水平;噻唑蓝（MTT）、克隆实验检测细胞增殖情况。蛋白质免疫印迹（Western blot）实验检测碱性磷酸酶（ALP）、骨桥蛋白（OPN）、骨钙素（OCN）、Notch1和Hes1蛋白表达。采用SPSS 21.0软件包对数据进行统计学分析。结果：牙周膜细胞成骨分化第0、3、7、14天,AWPPH表达水平逐渐降低。过表达AWPPH可增加牙周膜细胞吸光度（A）值、克隆细胞数目,上调ALP、OPN、OCN、Notch1和Hes1蛋白表达。加入通路抑制剂DAPT后,细胞A值、克隆细胞数目降低,Notch1、Hes1、ALP、OPN和OCN蛋...     

IL - 1β对人牙周膜成纤维细胞的增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的以体外培养的人牙周膜成纤维细胞(HPLFs)为研究对象,观察IL-1β对HPLFs的增殖和碱性磷酸酶(ALP)表达的影响,旨在从细胞学水平探索IL-1β在牙周炎的发生、发展、及转归中的作用.方法取酶消化法培养的第6代细胞,随机分5个实验组及1个对照组,实验组分别加入含系列浓度IL-1β (0.1ng/ml、0.5ng/ml、1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml) 的α- MEM培养液,对照组加入含1% FBS的α- MEM培养液,分别测定MTT和ALP活性;加入浓度为10ng/ml的 IL-1β的α- MEM培养液,观察IL - 1β对HPLFs的ALP活性影响的时间效应.结果MTT实验结果表明,不同浓度的IL-1β对HPLFs的增殖与对照组相比无显著差异(P>0.05); IL-1β对HPLFs的HPLFs活性有抑制作用,显著低于空白对照组(P<0.05);浓度为10ng/ml 的IL-1β作用于HPLFs,其 ALP活性显著低于空白对照组(P<0.05).结论IL-1β在牙周炎的早期阶段可能对HPLFs的增殖无显著影响; 但在牙周炎的修复过程中IL-1β可能通过抑制 HPLFs的 ALP活性,阻止HPLFs分化为成骨细胞,从而抑制牙周炎病灶区的骨性修复.     

羧甲基壳聚糖对LPS干预人牙周膜成纤维细胞表达IL-6的影响

目的：脂多糖（LPS）干预下,不同浓度羧甲基壳聚糖（CMC）对人牙周膜成纤维细胞（HPDLFs）表达白细胞介素-6（IL-6）的影响。方法：取冻存的HPDLFs进行复苏培养,以浓度为10mg／L的LPS进行诱导,用不同浓度的羧甲基壳聚糖进行干预,采用免疫组织化学方法检测IL-6在HPDLFs中的表达变化。结果：不同浓度羧甲基壳聚糖能够下调同一浓度LPS诱导的HPDLFs表达的IL-6,随羧甲基壳聚糖浓度的增加,IL-6的表达量呈逐渐减弱趋势（P〈0．05）。结论：羧甲基壳聚糖可能对LPS诱导的HPDLFs炎症损伤过程中表达IL一6有重要的抑制作用,为牙周病治疗提供新的实验资料。     

过表达ADAM10通过调控Notch信号通路对牙周膜干细胞成骨分化的影响

目的:探讨解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)调控Notch信号通路对人牙周膜干细胞(hPDLSCs)成骨分化的影响.方法:体外培养hPDLSCs并对其进行成骨分化诱导,RT-PCR检测成骨诱导第0、7、14天细胞中ADAM10 mRNA表达水平.采用ADAM10过表达慢病毒感染hPDLSCs,并将细胞分为空白对照组、空载组和ADAM10过表达组,分别采用RT-PCR和Western blot检测感染后hPDLSCs中ADAM10 mRNA和蛋白表达水平,CCK-8检测各组细胞增值情况.感染的hPDLSCs经成骨诱导分化后,茜素红染色观察各组细胞矿化结节生成情况,RT-PCR检测各组细胞中成骨相关基因ALP、Runx2、OCN以及Notch信号通路相关基因Notch1、NICD、Hes1的mRNA表达水平,Western blot检测Notch信号通路相关蛋白Notch1、NICD和Hes1的蛋白表达水平.结果:hPDLSCs成骨诱导分化的第0、7、14天过程中,ADAM10 mRNA表达水平逐渐降低(P<0.05).感染ADAM10过表达慢病毒后,hPDLSCs中ADAM10 mRNA和蛋白表达水平显著增加(P<0.05),同时细胞增殖能力明显增强(P<0.05).成骨诱导分化后,与对照组和空载组比较,ADAM10过表达组矿化结节形成量、成骨相关基因ALP、Runx2、OCN的mRNA表达水平以及Notch信号通路相关基因Notch1、NICD、Hes1的mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05).结论:过表达ADAM10可促进hPDLSCs增殖并抑制其成骨分化,其机制可能与Notch信号通路的激活有关.     

过表达ADAM10通过调控Notch信号通路对牙周膜干细胞成骨分化的影响

目的:探讨解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)调控Notch信号通路对人牙周膜干细胞(hPDLSCs)成骨分化的影响.方法:体外培养hPDLSCs并对其进行成骨分化诱导,RT-PCR检测成骨诱导第0、7、14天细胞中ADAM10 mRNA表达水平.采用ADAM10过表达慢病毒感染hPDLSCs,并将细胞分为空白对照组、空载组和ADAM10过表达组,分别采用RT-PCR和Western blot检测感染后hPDLSCs中ADAM10 mRNA和蛋白表达水平,CCK-8检测各组细胞增值情况.感染的hPDLSCs经成骨诱导分化后,茜素红染色观察各组细胞矿化结节生成情况,RT-PCR检测各组细胞中成骨相关基因ALP、Runx2、OCN以及Notch信号通路相关基因Notch1、NICD、Hes1的mRNA表达水平,Western blot检测Notch信号通路相关蛋白Notch1、NICD和Hes1的蛋白表达水平.结果:hPDLSCs成骨诱导分化的第0、7、14天过程中,ADAM10 mRNA表达水平逐渐降低(P<0.05).感染ADAM10过表达慢病毒后,hPDLSCs中ADAM10 mRNA和蛋白表达水平显著增加(P<0.05),同时细胞增殖能力明显增强(P<0.05).成骨诱导分化后,与对照组和空载组比较,ADAM10过表达组矿化结节形成量、成骨相关基因ALP、Runx2、OCN的mRNA表达水平以及Notch信号通路相关基因Notch1、NICD、Hes1的mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05).结论:过表达ADAM10可促进hPDLSCs增殖并抑制其成骨分化,其机制可能与Notch信号通路的激活有关.     

IL-17对人牙周膜成纤维细胞RANKL表达的影响

目的 观察IL-17对人牙周膜成纤维细胞RANKL表达的影响,探讨IL-17调控牙周炎骨改建的可能致病机制。方法 用不同浓度（0、10、25、50 ng/mL）的IL-17处理人牙周膜成纤维细胞。选择最佳刺激浓度,用该浓度的IL-17处理细胞不同时间（0、12、24 h）。通过实时定量RT-PCR和Western-blot的方法检测细胞中骨吸收相关因子RANKL的表达水平。结果 IL-17可显著提高人牙周膜成纤维细胞RANKL的表达水平,并随着浓度的提高和刺激时间的延长而增加。结论 IL-17可上调人牙周膜成纤维细胞的RANKL表达,提示IL-17可通过调控人牙周膜成纤维细胞骨吸收相关因子的表达参与牙槽骨的改建。     

A20对IL-17介导人牙周膜细胞RANKL表达影响

目的探究A20对IL-17调控人牙周膜细胞表面RANKL表达的影响。方法转染人牙周膜细胞(h PDLCs)A20siRNA、慢病毒,获得A20沉默/过表达h PDLCs,分为沉默组、正常组、过表达组,IL-17(50 ng/ml)刺激一定时间,ELISA,PCR,Western-blot检测RANKL表达。结果 A20沉默组的h PDLCs RANKL蛋白表达水平较正常对照组高,A20过表达组较正常对照组低,IL-17(50ng/ml)刺激下,A20沉默组较正常对照组RANKL表达水平高,过表达组较正常对照组低。结论本研究首次发现A20可能参与调控IL-17引起的h PDLCs RANKL表达。     

缺氧对人牙周膜成纤维细胞增殖和超微结构影响的实验研究

目的:体外培养人牙周膜成纤维细胞(HPLFS),观察缺氧对其生长增殖能力的影响.方法: 分离培养 HPLFS,随机分为 21% O2对照组和10%、5%、2% O2缺氧组,采用四唑盐(MTT)比色法检测 HPLFS增殖情况,透射电镜下观察细胞超微结构改变.结果:MTT 法检测,与对照组比,12 h、24 h,缺氧对细胞增殖随缺氧程度呈依赖性增强,但重度缺氧(2% O2)24 h组具有统计学差异;48 h、72 h,重度缺氧组细胞增殖与对照组相比明显降低,差别具有统计学意义.透射电镜下,重度缺氧24 h细胞胞质内粗面内质网和线粒体明显增多,细胞突起增多;72 h细胞发生退变,溶酶体增多.结论:长期重度缺氧条件下,牙周膜的改建和修复功能降低,可能是高原牙周疾病多发、牙周组织破坏较重的重要原因.     

加载牵张应力对人牙周膜成纤维细胞生长和增殖的影响

目的：探讨不同力值和不同频率的牵张应力对HPDLF增殖的影响。方法：通过细胞牵张应力加载系统,施加频率为0.1Hz,大小为6%、12%、18%形变率的牵张应力;大小为12%形变率的频率为0.1Hz、0.2Hz及持续性的牵张应力,利用四唑盐（MTT）比色试验观察牵张应力对HPDLF增殖的影响。结果：频率为0.1Hz时,6%、12%的牵张应力对HPDLF有促增殖作用,12%的牵张力作用最强,18%的牵张应力对HPDLF的增殖有抑制作用;大小为12%时,0.2Hz的牵张应力对HPDLF的促增殖作用最强,持续性牵张应力促增殖作用最小。结论：不同力值和频率的牵张应力对HPDLF的促增殖作用影响不同,12%形变率、频率为0.2Hz的牵张应力有最佳的促增殖效果。     

雌激素受体β对牙周膜成纤维细胞RANKL表达的影响

目的：研究雌激素受体β（estrogen receptorβ,ERβ）对人牙周膜成纤维细胞（human periodontal ligament,HPLF）核因子-κB受体活化因子配体（receptor activator of NF-κB ligand,RANKL）表达的影响。方法：采用基因干涉方法抑制了HPLF细胞中ERβ基因的表达,用雌激素干预ERβ抑制的和未抑制的HPLF细胞,研究细胞RANKL表达的情况。结果：雌激素明显降低了ERβ抑制的HPLF细胞RANKL的表达,但对ERβ未抑制的HPLF细胞RANKL的表达没有显著影响。结论：雌激素可能通过ERβ抑制牙周膜成纤维细胞RANKL的表达。     

正畸静压力通过p38MAPK调控牙周膜细胞MMP-2和MMP-9的表达

目的:研究持续性正畸静压力对牙周膜细胞(PDLCs)表达MMP-2和MMP-9的调控及其有关的调控通路.方法:体外培养PDLCs,取4～7代的PDLCs,随机分成5组,分别施加0、2 g/cm2(24 h)、2 g/cm2(48 h)、4 g/cm2(24 h)、4 g/cm2(48 h)的持续静压力,对细胞形态及骨架...     

Endothelin‐1 Stimulates Proinflammatory Cytokine Expression in Human Periodontal Ligament Cells via Mitogen‐Activated Protein Kinase Pathway

Background: Endothelin‐1 (ET‐1) is a 21–amino acid peptide with multifunctional regulation. Initial research indicated that ET‐1 is related to the inflammatory pathogenesis of periodontitis and involved in the regulation of cytokines, but the mechanisms involved remain unclear. The primary aim of this study is to investigate how ET‐1 affects proinflammatory cytokine expression in human periodontal ligament (hPDL) cells. Methods: hPDL cells were obtained from both healthy (H)‐ and periodontitis (P)‐affected periodontal tissues. H‐hPDL and P‐hPDL cells were treated with ET‐1 (1, 10, and 100 nM) for 12, 24, and 48 hours. The untreated cells served as a control. To confirm the specificity of the ET‐1 effects, 100 nM of the specific endothelin A (ET_A) receptor antagonist BQ123 and 100 nM of the specific ET_B receptor antagonist BQ788, as negative control, were used. To examine the signaling pathways and molecular mechanisms involved in ET‐1–mediated cytokine expression, H‐hPDL and P‐hPDL cells were pretreated with specific inhibitors for extracellular signal–regulated kinase (ERK1/2) (PD98059), c‐Jun N‐terminal kinase (SP600125), and p38 kinase (SB203580) for 1 hour before 100 nM ET‐1 stimulation. Tumor necrosis factor (TNF)‐α, interleukin (IL)‐1β, and IL‐6 messenger RNA (mRNA) and protein levels were evaluated by quantitative real‐time polymerase chain reaction and enzyme‐linked immunosorbent assay, respectively. Results: ET‐1 dose‐ and time‐dependently induced the production of proinflammatory cytokines TNF‐α, IL‐1β, and IL‐6 by H‐hPDL and P‐hPDL cells at both mRNA and protein levels. However, ET_A and ET_B receptor antagonists inhibited the stimulatory effects of ET‐1 on inflammatory cytokine expression in H‐hPDL and P‐hPDL cells. Furthermore, inhibitors of the mitogen‐activated protein kinases (MAPKs) significantly reduced ET‐1–stimulated TNF‐α, IL‐1β, and IL‐6 expression in H‐hPDL and P‐hPDL cells. Conclusion: ET‐1 may be involved in the inflammatory process of periodontitis, at least in part, by stimulating proinflammatory cytokine production via the MAPK pathway in hPDL cells.     

壳聚糖膜对人牙周膜细胞体外增殖的影响

目的　研究壳聚糖膜在体外培养条件下对人牙周膜细胞增殖的影响。方法　制备用于引导性组织再生的壳聚糖膜。体外培养人牙周膜细胞 ,用酶动力学观察在壳聚糖膜、聚四氟乙烯膜、壳聚糖膜浸出液及空白对照 4种条件下 ,人牙周膜细胞增殖的情况。结果　壳聚糖膜组的人牙周膜细胞增殖高于其他组 (P <0 .0 1) ,壳聚糖膜浸出液组人牙周膜细胞增殖高于聚四氟乙烯膜组和空白对照组 (P <0 .0 5 ) ,聚四氟乙烯组与空白对照组差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　体外培养时 ,壳聚糖膜可以促进人牙周膜细胞增殖。     

淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及骨向分化的影响

目的：探讨淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及骨向分化的影响,为淫羊藿苷在治疗牙周病方面的应用提供一定依据。方法：体外培养人牙周膜细胞,矿化诱导条件下将第3代细胞与10～0.001mg/L,6个浓度的淫羊藿苷作用,通过噻唑蓝（MTT）比色法、ALP活性测定及BSP表达水平,反应其对人牙周膜细胞增殖及分化的影响。结果：作用24h,各药物浓度均能促进人牙周膜细胞增殖（P〈0.05）。作用48h,1～0.001mg/L组可促进人牙周膜细胞增殖（P〈0.05）。作用72h,0.1～0.001mg/L组可促进人牙周膜细胞增殖（P〈0.05）,10mg/L组抑制人牙周膜增殖（P〈0.05）;作用72h,1～0.001mg/L组可促进人牙周膜碱性磷酸酶（ALP）活性（P〈0.05）;作用72h,0.1～0.001mg/L组的BSP表达水平较对照组显著增加（P〈0.05）。结论：淫羊藿苷在一定浓度范围内可促进人牙周膜细胞增殖及骨向分化。     

牙周韧带细胞与骨髓基质细胞表面抗原表达的比较

目的：比较骨髓基质细胞与正常人牙周韧带细胞表面抗原的表达情况,探讨牙周韧带细胞与骨髓基质细胞的关系。方法：体外培养人牙周韧带细胞及骨髓基质细胞,采用免疫组化SP法检测细胞中CD14、CD44、CD105、CD34的表达,并进行图像分析。结果：与骨髓基质细胞相似,人的牙周韧带细胞上表达CD44、CD105,不表达CD34、CD14结论：人的牙周韧带细胞与骨髓基质细胞在表面抗原特性上有相似性。     

复方黄芩片对人牙周膜细胞及牙周炎牙槽骨OPG/RANKL表达的影响

目的:探讨复方黄芩片对人牙周膜细胞表面以及对实验性牙周炎大鼠牙槽骨OPG/RANKL表达的影响。方法:采用酶消化组织块法培养hPDLCs,通过ELISA法测定复方黄芩片对LPS诱导下hPDLCs表面OPG/RANKL表达的影响;LPS局部注射法建立大鼠牙周炎模型,免疫组化法测定复方黄芩片对牙周炎大鼠牙槽骨OPG/RANKL表达的影响。结果:0.2 mg/L复方黄芩片溶液对10 mg/L LPS诱导下的hPDLCs表面OPG表达无明显影响,而hPDLCs表面RANKL的表达显著降低(P<0.05),且实验组 hPDLCs表面OPG/RANKL的比值较空白对照组显著降低(P<0.05);复方黄芩片治疗3周后各组大鼠OPG/RANKL免疫组化染色阳性细胞计数结果显示牙周炎组大鼠牙周组织中RANKL的表达水平明显高于其他各组,治疗组OPG表达水平明显高于其他各组。结论:复方黄芩片可以上调牙周膜细胞表面OPG/RANKL的比值;按黄芩苷2.85 g/kg·d^-1的剂量给予牙周炎大鼠复方黄芩片灌胃治疗,复方黄芩片可以抑制牙周炎牙槽骨中RANKL的表达,促进OPG的表达。提示复方黄芩片有望用于牙周炎的临床治疗。     

Emdogain和辛伐他汀联合应用对人牙周膜细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的观察Emdogain、辛伐他汀联合应用对人牙周膜细胞碱性磷酸酶活性的影响。方法取培养至第五代的人牙周膜细胞,分别用含50μg/mL Emdogain、含0.125μmol/L辛伐他汀、同时含50μg/mL Emdogain和0.125μmol/L辛伐他汀以及不含上述药物的4组无血清DMEM培养液培养,3 d后酶标仪检测各组细胞的碱性磷酸酶活性。结果仅含Emdogain、仅含辛伐他汀以及不含上述药物的培养液培养的人牙周膜细胞碱性磷酸酶光密度值分别为0.193±0.002、0.197±0.003及0.166±0.002。同时含Emdogain和辛伐他汀的培养液培养的细胞碱性磷酸酶光密度值为0.325±0.002,与其他3组比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论 Emdogain和辛伐他汀联合应用对牙周膜细胞碱性磷酸酶活性有促进作用,提示可能有利于牙周组织的再生。