角膜新生血管对角膜损伤神经再生影响的研究

目的 探讨角膜新生血管对大鼠角膜损伤神经再生的影响。设计 实验研究。研究对象 SD大鼠。方法 采用随机数字表法将18只SD大鼠分为3组,每组6只。A组行缝线铲针角膜基质层间切开及缝线诱导新生血管术,术后0、3、7天给予结膜下注射贝伐单抗;B组行缝线铲针角膜基质层间切开及缝线诱导新生血管术;C组0、3、7天行结膜下注射贝伐单抗操作。分别在术后1天、1周、2周、4周,采用裂隙灯照相法观察记录角膜新生血管面积;角膜共聚焦显微镜记录神经长度。采用Cochet-Bonnet知觉仪测量缝线区的角膜知觉,采用Schirmer试验泪液线测量右眼的泪液分泌量。术后4周角膜全层铺片免疫荧光染色,记录上皮下神经密度。主要指标 角膜新生血管面积比、神经长度、上皮下神经密度、角膜知觉、泪液分泌量。结果 A、B组术后1、2周有角膜新生血管生长,术后4周消退闭锁,C组无角膜新生血管生长。A组术后1、2周新生血管面积比为（10.86±1.57）%和（1.87±0.69）%,分别小于B组的（25.42±2.65）%和（6.48±1.10）%（P均=0.000）。术后1天A、B组神经长度分别为（151.02±4.74）μm、（149.69±4.32）μm（P=0.306）;术后1、2、4周,A组神经长度均长于B组,分别为（193.84±2.25）μm与（155.73±2.98）μm、（217.15±2.08）μm与（166.21±2.41）μm、（220.70±1.41）μm与（203.76±1.74）μm（P均=0.000）。术后A、B组神经长度均有减少并有恢复趋势,C组无明显变化。术后4周A组损伤区上皮下神经密度（22.60%±2.02%）明显高于B组（9.41%±2.01%）（P=0.000）。A、B组上皮下神经短小稀疏、密度低,C组形态正常。A、B组术后1、2、4周时角膜知觉及泪液分泌量均无统计学差异（P均＞0.05）。A、B组均有下降并恢复趋势,C组无明显变化。结论 角膜新生血管可能抑制角膜损伤神经再生,抑制角膜新生血管有利于神经再生。（眼科, 2017, 26： 106-111）     

压力仿生培养对兔角膜内皮细胞调控的研究

目的 探讨体外压力仿生培养系统下不同梯度压力对角膜内皮细胞形态和功能的调控作用。设计 实验性研究。研究对象 兔角膜内皮细胞。 方法 将体外培养的第一代兔角膜内皮细胞分为五组：A组为无压力常规培养（空白对照）,B组为正常压力仿生培养（15 mmHg）,C组为压力波动组,将压力设为15mmHg、25 mmHg、20 mmHg、10 mmHg,D组30 mmHg压力培养,E组50 mmHg压力培养。细胞均培养24h,免疫法鉴定原代角膜内皮细胞,HE染色和电镜观察细胞形态的改变,流式细胞术检测细胞活性。主要指标 角膜内皮细胞的形态、存活率。 结果 获取的所有细胞证实为角膜内皮细胞表型,无角膜上皮细胞及基质细胞污染。五组细胞分别培养24h后,经HE染色和电镜检测发现正常压力微环境培养的角膜内皮细胞排列紧密,六边形细胞居多,细胞表面微绒毛丰富,细胞核染色质丰富,而高压力培养的角膜内皮细胞活性差,细胞间隙加大。经流式细胞术分析显示,正常压力组、30 mmHg组、压力波动组、50 mmHg组的角膜内皮细胞培养24 h后细胞存活率分别为（98.16±0.45）%、（78.83±1.65）%、（70.2±3.54）%、（41.33±0.25）%（P=0.016）。高压力培养组中随着压力的升高和持续时间延长,细胞活性显著下降。结论 正常压力微环境培养对角膜内皮细胞形态和功能具有正向调节作用,而高压力对角膜内皮细胞具有损伤性,并随时间延长而加重。（眼科,2017,26： 56-60）     

microRNA-182抑制人角膜上皮细胞增殖和迁移

目的：通过体内动物实验与体外细胞实验来阐明microRNA-182（miR-182）在角膜上皮损伤修复中的功能。方法：实验研究。体内实验选取5 只C57BL/6J野生型小鼠,通过机械刮伤法构建小鼠角膜上皮损伤修复模型作为实验组,对侧眼作为对照组,通过实时定量RT-PCR法检测miR-182 在损伤修复过程（ 损伤后48 h）的表达。体外实验采用脂质体介导的方法将miR-182和随机序列寡核苷酸链转染入人角膜上皮细胞（HCECs）,通过细胞增殖实验（MTS法）和细胞克隆形成实验检测细胞增殖和生长能力,流式细胞术检测细胞周期,细胞划痕实验检测细胞迁移能力。MiR-182 表达量及细胞实验各参数2 组间比较采用独立样本t检验。结果：体内实验中,与对照组相比,实验组中5 个样本量的miR-182 在角膜上皮损伤修复过程中表达水平显著下调（t=147.6、79.2、136.8、41.3、89.8,均P<0.001）。体外实验中,miR-182组相对细胞数目为（81±5）%,与阴性对照组（100%）相比显著减少（t=6.6,P=0.003）,同时miR-182组细胞克隆数明显少于阴性对照组。细胞周期检测结果显示实验组处于G1期细胞数量比例为（49±7）%,明显高于阴性对照组的（35±4）%（t=-3.0,P=0.041）。此外,细胞迁移实验结果显示miR-182组HCECs细胞迁移的距离为（99±12）μm,而阴性对照组的迁移距离为（213±14）μm（t=10.8,P=0.001）,迁移速度明显变慢。结论：miR-182通过抑制角膜上皮细胞的增殖与迁移,从而对角膜上皮损伤修复起到负调控的作用。     

脱细胞猪角膜基质作为植片的深板层角膜移植治疗感染性角膜溃疡的临床观察

目的 比较脱细胞猪角膜基质与新鲜角膜组织作为植片的深板层角膜移植手术治疗感染性角膜溃疡的临床疗效。设计 回顾性病例系列。研究对象 2015年11月~2016年9月在北京佑安医院就诊的10例病变深度未累及后弹力层的感染性角膜溃疡患者。方法 回顾性分析气泡辅助下的深板层角膜移植手术资料,其中使用脱细胞猪角膜基质材料和新鲜角膜组织材料治疗的患者各5例。比较两组患者术后1年最佳矫正视力（LogMAR）、眼压、球镜度、角膜平均曲率、散光度、角膜内皮细胞数、角膜厚度、眼轴长度、角膜共聚焦显微镜表现、角膜透明度以及植片的生存情况。主要指标 术后1年患者的最佳矫正视力（LogMAR）、眼压、球镜度、角膜平均曲率、散光度、角膜内皮细胞数、角膜厚度、眼轴长度、角膜共聚焦显微镜表现、角膜透明度以及植片的生存情况。结果 在随访期间,两组所有植片均保持透明,植片生存率为100%。术后1年,脱细胞角膜基质组和新鲜角膜组的视力分别为0.53±0.21和0.33±0.06（P=0.184）,眼压分别为（8.00±2.00）mmHg和（10.33±0.58）mmHg（P=0.124）,球镜度分别为（-4.50±4.21）D和（-1.25±0.75）D（P=0.258）,角膜平均曲率分别为（47.59±5.40）D和（44.51±1.87）D（P=0.403）,散光度分别为（-5.52±1.97）D和（-5.14±1.66）D（P=0.812）,内皮细胞数分别为（1272.67±387.63）个/mm2和（1550.33±232.69）个/mm2（P=0.347）,角膜厚度分别为（439.33±67.86）μm和（534.00±14.42）μm（P=0.077）,眼轴长度分别为（23.53±0.91）mm和（23.55±1.56）mm（P=0.981）。角膜共聚焦显微镜显示,脱细胞猪角膜基质组的角膜上皮细胞可以完全覆盖植片,基底细胞和翼状细胞形态和密度与新鲜角膜组织接近,但在基底细胞下方可见高反光的沉着物,基质层细胞的密度明显低于新鲜角膜组织,并且在内皮细胞与深基质层之间仍可见脱细胞纤维排列。结论 脱细胞猪角膜基质具有良好的生物相容性,当缺乏新鲜角膜材料时,用于替代治疗感染性角膜溃疡可以取得满意的效果。     

配戴夜戴型角膜塑形镜两年后角膜激光共聚焦显微镜观察

目的利用激光共聚焦显微镜观察配戴夜戴型角膜塑形镜2年以上患者的角膜组织有无变化。方法回顾性病例研究。选择2009年1月至2012年12月于南京军区总院眼科就诊且配戴夜戴型角膜塑形镜2年的患者30例（60眼）作为戴镜组,未配戴任何形式角膜接触镜的角膜正常患者30例（60眼）作为对照组。对2组对象进行角膜中央部激光共聚焦显微镜观察（观察组摘镜2～3 h后）。数据采用独立样本t检验进行分析。结果配戴角膜塑形镜后角膜形态可发生明显变化,上皮至前基质层可见皱褶,上皮下神经丛疏密不均、扭曲,基质神经及内皮细胞形态正常。上皮下神经丛的分布比对照组稀疏,戴镜组的上皮细胞计数为（4818±148）cells/mm2,前基质细胞计数为（1345±154）cells/mm2,后基质细胞计数为（799±76）cells/mm2,内皮细胞计数为（3025±193）cells/mm2,与对照组相比2组差异无统计学意义。结论长期配戴夜戴型角膜塑形镜对上皮下神经丛数量及眼表形态有影响,对内皮细胞及基质细胞无明显影响。     

以纤维蛋白凝胶为载体培养兔角膜缘上皮细胞

目的 研究兔角膜缘上皮细胞(corneal limbus epithelial cell,CLEC)在纤维蛋白凝胶上的最佳接种方式及其生长情况.方法 取角膜缘上皮组织块进行细胞培养.用针对鼠抗兔角蛋白3(CK3)的单克隆抗体AE5和抗增殖细胞核抗原(PCNA)抗体行间接免疫荧光鉴定.MTT法测定CLEC增殖活性.将传第二代的细胞分A、B两组分别接种到纤维蛋白凝胶表面和凝胶体内进行培养,在接种后5d、10 d、15 d时将凝胶溶解离心后计数细胞数,比较两种接种方式下细胞的增殖力.结果 传第一、二代细胞培养3～5d后胞浆AE5染色阳性,胞核PCNA染色阳性,传第一代阳性细胞比例分别为31％、65％,传第二代阳性细胞比例分别为45％、79％.传第一代细胞在接种后6h内贴壁,1～2d时处于潜伏期,2～3 d时处于快速生长期,3d时达85％以上汇合,细胞增殖活性最高,4d时细胞汇合达95％以上,增殖活性逐渐降低.接种后5d时A组细胞数低于B组,差异有统计学意义(P＜0.05);10d和15 d时A组细胞数均高于B组,差异均有统计学意义(均为P ＜0.05).结论 以纤维蛋白凝胶为载体培养CLEC时将细胞接种在凝胶表面比包埋在凝胶体内更有利于细胞增殖,适合用于CLEC移植培养的研究.     

LASIK非球面切削治疗近视眼术后3年角膜 Q 值及曲率变化

目的 比较准分子激光原位角膜磨镶术（LASIK）非球面切削及普通切削术后3年的角膜 Q 值及曲率变化。设计 回顾性比较性病例系列。研究对象 哈尔滨242医院行准分子激光近视治疗的患者155例（295眼）。方法 患者分非球面切削和普通切削两组,每组预留基质分为＞350 μm（A组）、300~350 μm（B组）及280~299 μm（C组）三组。不同术式两组患者术前年龄、等效球镜度数、中央角膜厚度无统计学差异。利用Orbscan II 检测术后1周,1、6个月,1、 3年角膜Q值及前表面曲率。主要指标 角膜Q值及前表面曲率。结果 手术后3年时,非球面切削者三组角膜Q值分别是A组0.27±0.21、B组0.33±0.31、C组0.93±0.19;角膜前表面曲率分别是（39.6±1.17）D、（39.9±0.83）D、（37.9±1.51）D。普通切削者三组的角膜Q值分别是A组0.35±0.24、B组0.71±0.35、C组1.03±0.36;角膜前表面曲率分别是（40.2±0.98）D、（39.6±0.33）D、（37.3±1.83）D,差异无统计学意义。结论 经过3年的观察显示,与LASIK普通切削模式相比,非球面切削在预留基质300~350 μm范围内能保持更好的角膜非球面形态。两组术式在预留基质280 μm以上时均是安全的。（眼科, 2014, 23： 301-304）     

培养的兔羊膜上皮细胞构建角膜表层移植片的研究

目的应用培养的兔羊膜上皮细胞（AECs）体外构建复层上皮细胞-角膜基质移植材料,探讨利用AECs重建角膜表层的可行性。方法取妊娠晚期新西兰大白兔（27～28孕周）的羊膜,制成AECs单细胞悬液,用含血清和表皮生长因子（EGF）的DMEM／F12培养液培养、传代,利用免疫组织化学单克隆抗体AE1／AE3、AE5检测培养的AECs中细胞角蛋白ck3／12的表达;将体外培养的2～3代兔AECs种植在新鲜兔角膜基质上,利用气-液界面培养法使之复层化,体外构建复层上皮细胞-角膜基质移植材料,进行光学显微镜和扫描电镜观察,并进行免疫组织化学测定。结果体外培养的兔AECs呈现单克隆抗体AE1／AE3、AE5表达阳性,AECs在新鲜兔角膜基质上能形成形态类似于正常角膜上皮细胞的3～5层复层结构,且复层化后的上皮细胞单克隆抗体AE5表达阳性。结论应用培养的AECs能成功构建类似角膜表层的复层上皮细胞-角膜基质移植材料,AECs可能成为重建角膜表层的一种新的细胞来源。     

高糖抑制角膜缘干细胞间质性及其迁移能力的研究

目的　探讨高糖环境对角膜缘干细胞增殖、迁移能力及表面分子标志的影响。方法　通过细胞免疫荧光、细胞增殖检测（CCK-8）、划痕和Transwell实验观察角膜缘干细胞在高糖环境下的迁移及增殖能力的改变。选取16只SPF级大鼠用链脲霉素进行糖尿病造模，14只正常SPF级大鼠作为对照组，刮除两组大鼠角膜上皮观察上皮创伤愈合情况，采用HE染色和免疫组织化学染色探讨糖尿病对角膜缘干细胞表面分子标志及细胞状态的影响。结果　高糖可导致体外培养的角膜缘干细胞增殖减慢，24 h、48 h及72 h增殖率为0.728、0.345及0.395，较对照组明显降低（P<0.05），迁移功能障碍（48 h时正常对照组迁移率为100%，高糖组为17.6%）；高糖组细胞表面分子β-catenin和vimentin的mRNA和蛋白表达水平降低、细胞内定位异常。糖尿病大鼠角膜上皮创伤后愈合延迟，角膜组织HE染色发现糖尿病大鼠角膜上皮层变薄，基底细胞结构紊乱、形态异常。角膜免疫组织化学染色发现与对照组相比，角膜基底细胞的vimentin和β-catenin蛋白表达明显降低。结论　高糖可导致角膜缘干细胞迁移障碍和增殖抑制，其损伤机制与高糖导致角膜缘干细胞表面分子标志的丢失有关。     

羊膜培养液体外抑制兔角膜上皮细胞血管内皮生长因子的表达

目的:探讨羊膜培养液对角膜上皮细胞中血管内皮细胞生长因子(vascula rendothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法:刮除并收集新鲜兔角膜上皮细胞,传代培养接种于35mm培养皿及自制的羊膜培养皿上。实验分为4组,Ⅰ组(对照组):无血清的DMEM培养液,Ⅱ组:去上皮的羊膜培养液,Ⅲ组:未去上皮的羊膜培养液,Ⅳ组:将细胞直接接种于无上皮羊膜。作用48h后用Trizol法提取各组样本的总RNA,进行RT-PCR一步法反应检测各组VEGF mRNA表达并与β-actin比较。结果:正常角膜上皮细胞中有VEGF基因表达,在Ⅲ,Ⅳ组中表达受到明显抑制(P<0.01,n=5)。结论:羊膜培养液明显抑制VEGF mRNA在角膜上皮细胞中的表达。     

培养的兔角膜缘上皮细胞深低温保存后的生物学活性研究

目的探讨深低温保存角膜缘上皮细胞的可行性和效果。方法将兔角膜缘组织培养出的细胞,分别用两组冷冻保护液冻存,0.5、1、2个月后分批取出。将未冷冻的细胞和不同冻存时间、不同冻存保护液的冷冻复苏后细胞传代培养,采用免疫组化、电镜鉴定培养后细胞的性质。通过倒置显微镜、电镜、MTT比色法来比较传代培养的角膜缘上皮细胞深低温保存前后的形态结构和生物学活性。结果AE1和传代细胞鼠抗兔增殖细胞核抗原(PCNA)单克隆抗体染色呈阳性反应,AE5单克隆抗体染色偶见阳性反应;冻存后的传代细胞贴壁、生长均滞后,而且电镜检查均有不同程度细胞水肿,再培养7d后形态结构均恢复正常;MTT法检测复苏当天冻存后的细胞比未冻存的细胞增殖活性低,差异显著(P<0.05,但培养5d后无显著差异(P>0.05),甘油组和DMSO组间有显著性差异(P<0.05),不同冻存时间的各冻存组测得值无显著差异(P>0.05)。结论冻存的角膜缘上皮细胞传代培养仍保持上皮细胞特性并含有干细胞;DMSO保护液比甘油液低温保存效果好;角膜缘上皮细胞经阶段降温后深低温保存简单可行,选择适当的冷冻保护剂冻存后的细胞再培养,其细胞活性和结构与原代相似。     

Comparison of limbal and peripheral human corneal epithelium in tissue culture

Peripheral human corneal epithelium grows better in tissue culture than central epithelium, but it is not known whether ocular limbal epithelium grows even better than does the peripheral corneal epithelium. In this work we compared the growth kinetics of limbal and peripheral human corneal epithelial cells in tissue culture. Four 1-2 mm2 explants, removed from the limbus or from peripheral cornea (1-2 mm inside the limbus) of eye bank eyes, were grown to confluence in primary culture. Cells were then passaged at 2 X 10(5) cells per dish. At intervals thereafter, the cells were counted in a hemocytometer to determine plating efficiency and growth curves. Mitotic activity was determined 4 days after passaging by labeling cultures with 3H-thymidine and counting aliquots using the hemocytometer and scintillation counter. In the primary cultures, limbal epithelium grew as small, uniformly polygonal cells. Peripheral corneal cells grew to a variety sizes. The 24 hr plating efficiency and doubling time of limbal epithelial cells were 47 +/- 8% and 80 +/- 14 hr, respectively, while those of peripheral corneal cells were 41 +/- 10% (P less than 0.1) and 131 +/- 25 hr (P less than 0.001). The mitotic activity of limbal cells was significantly higher than that of peripheral (2.9 +/- 1.2 vs. 0.8 +/- 0.6) (P less than 0.01). These results indicate that human ocular limbal epithelium grows better in culture than does peripheral human corneal epithelium.     

自体角膜缘与结膜移植治疗复发性翼状胬肉

目的比较自体角膜缘与结膜移植治疗复发性翼状胬肉的疗效。方法复发性翼状胬肉病人９４例（１１５眼）随机分为Ａ,Ｂ两组,Ａ组４７例（５６眼）,Ｂ组４７例（５９眼）。手术显微镜下切除胬肉后Ａ组行自体角膜缘移植术,Ｂ组行自体球结膜移植术。观察术后植片生长、角膜创面修复、角膜新生血管及胬肉复发率。结果术后植片成活时间３～５天（平均３．７５天）;术后角膜创面修复时间Ａ组较Ｂ组快（Ｐ＜０．０５）。角膜新生血管Ａ组较Ｂ组少。术后１２个月胬肉复发率Ａ组（３．８％）较Ｂ组（２５．９％）低（Ｐ＜０．０１）。结论治疗复发性翼状胬肉自体角膜缘移植较结膜移植疗效好。     

Differentiation in cultured limbal epithelium as defined by keratin expression.

The authors investigated differentiation of cultured corneal and limbal epithelial cells by immunochemically evaluating the changes in the profiles of keratins recognized by two monoclonal antibodies: AE5, which recognizes K3, and AE1, which recognizes a group of acidic keratins including K16, which is present in the hyperproliferative cells. After 1 and 2 weeks in culture, the human epithelial cells did not react with AE5 but did react strongly with AE1. At 3 weeks, only suprabasal cells exhibited a moderate reactivity with AE5, whereas AE1 binding was seen in all of the cells. After 5 to 6 weeks in culture, all of the cells reacted moderately with AE5 and AE1. Treatment of 2-week-old limbally derived cultures with mitomycin C (mitosis inhibitor) did not inhibit subsequent K3 expression. Thus, K3 expression was associated with maturation or a later stage of differentiation that did not require an additional cell division. Unlike human epithelial cells, rabbit suprabasal epithelial cells expressed K3 (reactivity to AE5) after only ten days in culture. The epithelium derived from central human cornea lost K3 by 1 week in tissue culture but expressed keratin(s) recognized by AE1. Even after 4-6 weeks, cells derived from the central cornea did not become confluent and did not react with AE5. Thus, limbally derived human and rabbit epithelial cells undergo chronological changes in K3 expression similar to that seen in rabbit epithelial cells derived from central cornea. However, cultured human limbal epithelial cells take a significantly longer time to express K3 (a phenotypic characteristic of differentiated corneal epithelium) than do rabbit epithelial cells.     

角膜缘上皮细胞体外培养、冻存和复苏的实验研究

目的 建立兔角膜缘上皮细胞体外培养、冻存和复苏的方法。方法 兔角膜缘上皮细胞组织块接种培养。取第三代细胞进行冻存。于冻存后第2周，3、6个月复苏细胞。用MTT法测细胞生长曲线。结果 兔角膜缘上皮细胞体外生长良好。培养细胞AE1单克隆抗体染色阳性，PAS染色阴性。冻存细胞复苏成功。冻存细胞复苏后生长曲线良好。结论 兔角膜缘上皮细胞可以在体外培养、冻存和复苏。     

Growth factor changes in ex vivo expansion of human limbal epithelial cells on human amniotic membrane.

PURPOSE: Human limbal epithelial cells cultured on human amniotic membrane have been used for transplantation to treat corneal surface injuries. We determined whether the amniotic basement membrane affects the growth of human limbal epithelial cells through the production of growth factors. METHODS: The epithelial cells grown out from limbal basal epithelium were placed on conventional culture plastic or on the epithelial side of denuded amniotic membrane under serum-free conditions. Culture supernatant was assayed for growth factor release at 24, 48, and 96 hours. RESULTS: The cells grown on both substrata produced similar levels of epidermal growth factor (EGF). Cells grown on amniotic membrane showed enhanced secretion of tissue inhibitor of metalloproteinase type 1 (TIMP1) and reduced production of transforming growth factor beta1 and beta2. Depletion of EGF and TIMPI in cell culture slowed down cell growth and reduced EGF receptor expression, respectively. CONCLUSION: Increased TIMPI influences the proteolytic system in the cell and extracellular matrix interaction, and decreased transforming growth factor beta1 and beta2 may stimulate corneal cell proliferation. We show that the amniotic membrane leads to differential expression of cytokines of limbal epithelial cells cultured on its surface. Such effects may be favorable to the growth and differentiation of the cells when used for ocular surface reconstruction.     

复发性翼状胬肉切除联合角膜缘干细胞移植术或羊膜移植术的疗效比较

目的:观察显微镜下复发性翼状胬肉患者自体角膜缘干细胞移植术与羊膜移植术后疗效比较。方法:将复发性翼状胬肉患者90例96眼随机分为A,B两组,A组40例42眼行胬肉切除联合自体角膜缘干细胞移植;B组50例54眼行胬肉切除联合羊膜移植,观察术后患者自觉症状,角膜愈合情况,角膜缘处结膜组织愈合情况,新生血管及2a内胬肉组织增生情况。结果:角膜缘干细胞移植组治愈39眼(93%),复发3眼(7%);羊膜移植组治愈48眼(89%),复发6眼(11%),两组比较差异无统计学意义(χ2=0.0456,P>0.05)。角膜创面平均愈合时间角膜缘干细胞移植组为(4.12±1.08)d,羊膜移植组(7.38±1.12)d,两组比较有显著性差异(t=4.307,P<0.05)。结论:角膜缘干细胞移植与羊膜移植均效果良好,复发率低,但角膜缘干细胞移植术具有角膜创面上皮愈合快,患者不适感随之消失较快的优点,值得临床推广。     

壳聚糖复合共混膜培养兔角膜缘上皮及其移植

目的 探讨壳聚糖、胶原、透明质酸钠复合共混膜作为兔角膜缘上皮细胞体外培养载体及其自体移植的可行性。方法 活体取兔左眼角膜缘浅层小块，置此共混膜上，常规培养8天。将兔右眼角膜浅层基质分离成囊袋，用3mm环钻去除角膜中央浅表层，将含培养角膜缘上皮细胞的共混膜植入自体角膜囊袋内(6只兔)，对照组则植入不含细胞的共混膜(6只兔)。术后观察1月。结果 角膜缘小块在共混膜上培养生长良好，移植手术后40h，实验组5／6角膜植片荧光素染色阴性；对照组术后4天角膜植片荧光素染色仍为部分阳性。实验组组织学检查显示材料表层上皮完整，AE1／AE3免疫组化染色阳性，材料部分降解。结论 壳聚糖胶原透明质酸钠共混膜可作为培养角膜缘上皮细胞及其移植的载体。     

胎儿角膜缘干细胞的培养和生物学特性观察

角膜缘干细胞(limbalstemcells,LSC)及利用角膜缘干细胞移植(limbalstemcellstransplantation,LSCT)重建眼表的研究正在国内外广泛展开。而实行LSCT其前提是必须有LSC供体,尽管当前LSC的来源有自体、同种异体和体外培养的自体及同种异体等几种,但均有其局限性。人胎儿细胞的增殖和分化潜能较成人同类细胞大,此外,胎儿的免疫系统没有发育完善,胎儿组织存在免疫宽容现象[1]。贾卉等[2]研究还发现,胎儿角膜中与免疫反应有关的细胞和细胞间黏附分子较成人少,故胎儿器官、组织或细胞移植较少甚至无免疫排斥反应发生。因此,为探寻一种新的…