胰岛素样生长因子1对结肠癌细胞凋亡的影响及其机制研究

目的研究胰岛素样生长因子1(IGF-I)通过磷酯酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI-3K/Akt)信号通路对结肠癌细胞株SW480凋亡率的影响及凋亡抑制蛋白survivin表达水平的变化。方法在培养结肠癌SW480细胞株时,采用不同浓度的IGF-I不同时间作用于SW480细胞,然后采用Western blot检测凋亡抑制蛋白survivin表达变化。100 ng/mL IGF-I作用于SW480细胞2 h内,Westernblot检测Akt的磷酸化表达变化;Akt特异性抑制剂LY294002处理前后,利用Western blot检测Akt磷酸化表达的变化,Western blot及细胞免疫荧光检测survivin表达的变化,流式细胞术检测细胞凋亡率的改变。结果IGF-I能上调SW480细胞的survivin表达,且其表达水平与IGF-I的作用时间、浓度呈依赖性(IGF-I作用SW480细胞不同时间后,survivin蛋白表达显著升高,并在12 h时达到峰值,所有实验组survivin蛋白的表达均显著高于对照组;IGF-I浓度为100 ng/mL时,survivin蛋白的表达达到顶峰);IGF-I快速激活SW480细胞中PI-3K/Akt信号通路(IGF-I作用SW480细胞15,30 min后,p-Akt蛋白的表达达到高峰);IGF-I能通过PI-3K/Akt信号通路上调SW480细胞survivin的表达;IGF-I能通过PI-3K/Akt信号通路抑制SW480细胞凋亡[利用流式细胞术检测空白组、刺激组、阻断组各组SW480细胞的凋亡率,分别为(5.18±0.415)%,(0.85±0.052)%,(3.15±0.411)%,各组之间差异有统计学意义(P0.05)]。结论IGF-I可通过PI-3K/Akt通路诱导survivin表达,从而抑制结肠癌细胞SW480的凋亡。     

萝卜硫素对结肠癌SW480细胞增殖、侵袭及Notch通路的影响

目的研究萝卜硫素（SFN）对人结肠癌SW480细胞增殖、侵袭及Notch通路的影响。 方法MTT法测定不同浓度SFN对SW480细胞生长抑制作用,Transwell侵袭实验测定1、2、5 μmol/L SFN对SW480细胞体外侵袭能力的影响,划痕实验测定1、2、5 μmol/L SFN对SW480细胞体外迁移能力的影响,Western blotting法测定1、2、5 μmol/L SFN处理后SW480细胞Notch、Hes1、Ki-67、增殖细胞核抗原（PCNA）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、E-cadherin蛋白表达水平。 结果与对照组比较,1、2、5、10、20、40 μmol/L SFN处理后均能显著抑制SW480细胞增殖（P<0.05）。5 μmol/L SFN作用48 h后对SW480细胞抑制率为（26.38±3.24）%,细胞活力大于70%,为防止SW480细胞活力过低导致侵袭实验和划痕实验出现假阳性结果,因此后续实验选取SFN浓度1、2、5 μmol/L进行。侵袭和迁移实验发现,与对照组比较,人结肠癌SW480细胞经1、2、5 μmol/L SFN处理48 h后侵袭能力、迁移能力、Ki-67、PCNA、MMP-9蛋白表达水平显著降低（P<0.05）,E-cadherin蛋白表达水平显著升高（P<0.05）,呈浓度依赖性;与对照组比较,人结肠癌SW480细胞经1、2、5 μmol/L SFN处理48 h后,Notch、Hes1蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。 结论SFN可能通过阻断Notch通路活化,下调Hes1表达水平,达到抑制结肠癌SW480细胞增殖、迁移、侵袭的目的。     

巨噬细胞抑制SW480结肠癌细胞侵袭和迁移的实验研究

目的探讨巨噬细胞对SW480结肠癌细胞侵袭和迁移的影响及可能机制。方法流式细胞仪检测共培养体系中不同激活状态的巨噬细胞对SW480细胞凋亡和细胞周期的影响,侵袭实验、划痕实验检测巨噬细胞对SW480结肠癌细胞侵袭和迁移的影响,酶联免疫吸附（ELISA）方法检测Transwell共培养体系上清中血管内皮生长因子（VEGF）的变化。结果空白对照组、非激活组、ILl4激活组SW480细胞凋亡及S期细胞百分数差异无统计学意义,IL-4激活的巨噬细胞明显抑制SW480细胞的侵袭和迁移（P〈0．05）。激活组的VEGF浓度显著降低（P〈0．05）。结论IL-4激活的巨噬细胞能够抑制SW480结肠癌细胞的侵袭和迁移,其机制可能与下调VEGF的分泌有关。     

SH2B1沉默对乳腺癌细胞增殖和凋亡及PI3K/Akt通路的影响

目的:探讨RNA干扰技术(RNAi)沉默Src同源性2B衔接蛋白1(SH2B1)对乳腺癌细胞增殖、凋亡及磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)信号通路的影响。方法:体外培养人正常乳腺上皮细胞MCF-10a与乳腺癌细胞MCF-7,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)与蛋白免疫印迹(WB)法检测细胞中SH2B1 mRNA及蛋白表达水平。采用RNAi技术将SH2B1阴性对照质粒、si-SH2B1分别转染至MCF-7细胞,分别命名为si-NC组、si-SH2B1组,未经处理的MCF-7细胞命名为空白对照组。采用RT-PCR法检测各组MCF-7细胞中SH2B1、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白X(Bax)、天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)mRNA表达水平;CCK8法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期情况;Western blot法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、PI3K及其磷酸化蛋白(p-PI3K)、Akt及其磷酸化蛋白(p-Akt)等蛋白表达情况。结果:与MCF-10a细胞相比,MCF-7细胞中SH2B1 mRNA及蛋白表达均显著升高(P0.05);与空白对照组、si-NC组相比,si-SH2B1组SH2B1 mRNA及蛋白表达、S期与G_2/M期DNA量、Bcl-2 mRNA及蛋白表达均显著降低(P0.05);MCF-7细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、G_0/G_1期DNA量、Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白表达均显著升高(P0.05);WB法显示,si-SH2B1组MCF-7细胞中p-PI3K、p-Akt蛋白表达均显著低于空白对照组、si-NC组(P0.05)。结论:SH2B1沉默可抑制乳腺癌细胞增殖,诱导细胞周期阻滞及细胞凋亡,其作用机制可能与下调PI3K/Akt信号通路有关。     

亚精胺对结肠癌的抗肿瘤效应及增强5-Fu敏感性的研究

目的 探讨亚精胺(SPD)对结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响和对5?Fu敏感性的影响。方法 采用CCK?8实验、克隆形成实验、Transwell迁移侵袭、流式细胞技术检测细胞凋亡实验、裸鼠皮下移植瘤实验研究SPD对HCT15和SW620(KRAS突变型)细胞增殖能力、迁移和侵袭能力、细胞凋亡的影响和HCT15和SW620对5?Fu敏感性的变化。结果 体外实验证明SPD处理HCT15和SW620的IC₅₀分别为15.75±1.55μM和7.11±0.37μM，处理HT29和SW48(KRAS野生型)的IC₅₀分别为76.17±10.02μM和64.40±5.61μM;5μM的SPD处理的HCT15和SW620形成的细胞克隆数量较对照组减少，尚未发现SPD处理HT29和SW48形成的细胞克隆数量较对照组减少；1μM的SPD处理后的HCT15和SW620细胞穿过Transwell小室的数量较对照组显著减少；20μM的SPD处理HCT15和SW620的凋亡率均高于对照组。联合使用SPD和5?Fu处理HCT15和SW620比单独使用5?Fu处理H...     

CXCR3在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨CXCR3在结直肠癌组织中的表达及其临床意义.方法 应用SP免疫组织化学方法检测52例结直肠癌组织CXCR3的表达,Western印迹和体外迁移实验检测趋化因子受体CXCR3在大肠癌细胞株SW480、SW620、HT29细胞的表达及迁移能力.结果 CXCR3的阳性表达率为88%(46/52),CXCR3的高表达与结直肠癌患者的年龄、性别、结直肠癌组织类型、分化程度无关,而与临床转移(肝脏、淋巴结转移)有关(x2=12.1、21.5,P＜0.01).SW480、SW620及HT29的CXCR3表达均呈阳性,其中大肠癌细胞HT29和SW620 CXCR3高表达,大肠癌细胞SW480 CXCR3低表达.在体外迁移实验中,大肠癌细胞HT29和SW620发生体外迁移细胞明显增多(75±6比147±8、63±5比9l±6,P＜0.01),而大肠癌细胞SW480体外迁移无明显变化(47±4比45±3,P>0.05).结论 CXCR3上调表达与结直肠癌转移有关.     

TrkB影响结肠癌细胞SW620侵袭能力及与ERK信号通路活化关系的研究

目的:探讨干扰结肠癌细胞TrkB蛋白表达及抑制ERK活化对细胞增殖、凋亡和侵袭以及细胞内ERK磷酸化水平的影响。方法:应用特异性TrkB-siRNA瞬时转染及ERK特异性抑制剂处理SW620结肠癌细胞,观察SW620细胞增殖、凋亡和侵袭情况以及细胞内ERK磷酸化水平的变化。结果:特异性siRNA转染高表达TrkB的SW620细胞,TrkB蛋白表达减少,ERK的磷酸化水平降低,且转染组细胞数显著低于对照组(P=0.001),转染组的细胞凋亡率显著高于对照组(P=0.000 1),24 h后侵袭至下层小室的细胞数转染组显著低于对照组(P=0.001);ERK抑制剂明显降低SW620细胞ERK磷酸化水平(P=0.001),而对ERK蛋白表达没有影响,且应用ERK抑制剂作用SW620细胞,对照组和处理组中细胞数没有显著差异(P=0.544),对照组和处理组中SW620细胞的凋亡率差异无统计学意义(P=0.103),但对照组24 h后侵袭至下层小室的细胞数显著高于处理组(P=0.0001)。结论:干扰TrkB蛋白表达能够降低高转移结肠腺癌SW620细胞内ERK磷酸化水平,促进细胞凋亡并抑制细胞增殖和侵袭。同时应用ERK特异性抑制剂也显著抑制细胞侵袭。因此ERK信号转导通路可能与TrkB介导的结肠腺癌细胞抗凋亡和侵袭能力的增加相关,沉默TrkB表达可能成为阻断结肠癌转移的新靶点。     

Aurora A激酶抑制剂Alisertib诱导结直肠癌细胞自噬的作用及与p53表达间的关系

目的 探讨Alisertib（ALS）对人结直肠癌Caco-2和HT29细胞的诱导自噬的作用及与p53 表达状态间的关系。方法 本研究采用人结直肠癌Caco-2和HT29细胞进行实验。实验组用0.1、1、5 μmol/L ALS而对照组用同浓度的DMSO处理细胞。流式细胞术检测细胞的自噬率,Wester Blotting法检测细胞自噬过程中关键调节分子的蛋白表达。结果与对照组比较,0.1、1 μmol/L Alisertib组Caco-2细胞自噬率增加,分别为26.4%和26.8%（P<0.01）。1、5 μmol/L ALS组HT29细胞自噬率增加,分别为36.8%和42.6%（P<0.01）。Caco-2细胞不表达p53蛋白,而HT29细胞表达p53蛋白。与对照组比较,1、5μmol/L Alisertib引起Caco-2细胞的p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt和p-p38/p38的比值分别降低为对照组的62.6%、45.2%,30.1%、38.2%和49.0%、30.4%（P<0.01）,LC3-Ⅱ/LC3-I的比值升高32.6%、46.8%（P<0.01）。与对照组比较,1、5 μmol/L Alisertib引起HT29细胞的p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt的比值分别降低为对照组的70.9%、66.3%和85.2%、27.2%（P<0.01）,p-p38/p38和LC3-II/LC3-I的比值升高2.1倍、2.0倍和78.5%、84.8%（P<0.05）。与5 μmol/L Alisertib组比较,10 μmol/L SB202190+5 μmol/L Alisertib引起HT29细胞凋亡率升高64.7%（P<0.001）,而Caco-2细胞凋亡率无明显变化。结论 Alisertib抑制了PI3K/Akt信号通路,诱导了Caco-2和HT29细胞发生细胞自噬。Alisertib对p38 MAPK信号通路的影响不同,激活了HT29而抑制了Caco-2细胞的p38 MAPK信号通路,可能与p53蛋白是否表达有关。     

姜黄素对结肠癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移的影响及作用机制

目的:探讨姜黄素对结肠癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移的影响及其作用机制。方法:体外培养人结肠癌SW480细胞株、人结肠癌SW620细胞株至对数生长期，选用不同浓度的姜黄素分别处理两种结肠癌细胞，采用MTT、克隆、流式细胞术、Transwell、Western blot等实验观察姜黄素对结肠癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移等生物学作用的影响。结果:MTT实验和克隆实验结果表明姜黄素能够抑制结肠癌细胞的增殖，流式细胞术实验结果表明姜黄素可诱导结肠癌细胞的凋亡，Transwell实验结果表明姜黄素能够抑制结肠癌细胞的迁移和侵袭，Western blot实验结果表明姜黄素可抑制P13K/AKT信号通路。结论:姜黄素可显著抑制结肠癌细胞增殖、侵袭、迁移，诱导结肠癌细胞凋亡，其机制可能与抑制P13K/AKT信号通路有关。     

釉丛蛋白1表达对结直肠腺癌细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响

目的:探究釉丛蛋白1(TUFT1)表达对结直肠腺癌细胞(HCT-15)增殖、凋亡及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的影响。方法:2019年3月至2021年5月,20例结直肠癌(CRA)患者癌组织及相应癌旁组织。将HCT-15细胞分为对照组、siRNA-NC组、siRNA-TUFT1组、siRNA-TUFT1+IGF-1(PI3K/Akt通路激活剂25 ng/mL)组;实时荧光定量PCR检测组织及细胞中TUFT1表达;CCK-8法、克隆形成实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况;Western blot检测组织及细胞中增殖、凋亡及PI3K/Akt通路相关蛋白表达情况。结果:与癌组织相比,癌旁组织中TUFT1 mRNA及蛋白表达显著增加(P<0.05);与对照组相比,siRNA-TUFT1组细胞增殖抑制率、G0/G1期细胞、细胞凋亡率、Caspase-3、Bax表达水平显著增加,而c-Myc、Cyclin D1表达水平、克隆细胞数、S期和G2/M期细胞、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt水平显著降低(P<0.05);IGF-1可逆转TUFT1沉默对上述指标的影响。结论:TUFT1表达沉默可能通过抑制PI3K/Akt通路激活来抑制HCT-15细胞增殖、促进凋亡。     

自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤对结直肠腺癌细胞生长与Notch1蛋白表的影响

目的：探讨自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）对人大肠癌SW480细胞生长与Notch1蛋白表达的影响。方法：将3-MA（5 mmol/L）作用于SW480细胞24 h后（以培养相同时间无处理的SW480细胞为对照）,分别免疫组化和Western blot法检测细胞Notch1蛋白的表达,用CCK-8法和Annexin/PI双染法检测细胞增殖与凋亡。结果：免疫组化与Western blot结果均显示,3-MA作用后,SW480细胞Notch1蛋白的表达明显下调（均P<0.05）;增殖与凋亡检测结果显示,3-MA作用后,SW480细胞增殖率明显降低,而凋亡率明显增加（均P<0.05）。结论： 3-MA能抑制结直肠癌细胞的增殖并促进其凋亡,该作用可能与3-MA抑制Notch1蛋白表达从而改变细胞自噬水平有关。

     

多嘧啶序列结合蛋白1对前列腺癌细胞增殖、迁移和上皮-间充质转化的影响

目的检测多嘧啶序列结合蛋白1(PTBP1)在前列腺癌中的表达水平, 并探究PTBP1对前列腺癌细胞增殖、迁移和上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法运用UALCAN数据库分析PTBP1基因在前列腺癌组织中的表达水平、PTBP1基因与前列腺癌患者总生存期(OS)的关系, 收集前列腺癌及癌旁组织, 采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)技术检测前列腺癌及癌旁组织、正常前列腺上皮细胞及前列腺癌细胞中PTBP1 mRNA和蛋白质的相对表达水平。在前列腺癌PC3细胞中转染siRNA-PTBP1, 将细胞分为转染组(si-PTBP1)和对照组(NC), 采用RT-qPCR和Western blot验证转染效率。利用细胞克隆形成实验和细胞计数盒(CCK-8)实验检测细胞增殖能力;利用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;利用Western blot检测β-连环蛋白(β-catenin)及EMT标志蛋白的表达水平;所有结果应用SPSS 26.0统计软件分析。结果 UALCAN数据库显示PTBP1基因在前列腺癌组织中表达水平升高(P<0....     

miR-155靶向调节PIK3R1对类风湿关节炎大鼠模型PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的 探讨miR-155靶向调节PIK3R1对类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）大鼠PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响。方法 SD大鼠随机分为对照组、模型组、miR-155 agomir组、miR-155 antagomir组、miR-155阴性对照组,诱导RA模型,分组处理后,观察关节症状,检测关节炎指数及后足趾容积;HE染色观察大鼠关节组织病理形态;使用试剂盒检测大鼠关节组织炎性因子IL-6、IL-17及IL-18水平;免疫印迹检测大鼠关节组织PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白表达;qRT-PCR实验检测大鼠关节组织miR-155及PIK3R1 mRNA水平;双荧光素酶报告基因实验检测miR-155对PIK3R1的靶向调控作用。结果 与对照组比较,模型组大鼠关节炎症状明显,关节炎指数、后足趾容积、关节组织炎性因子IL-6、IL-17及IL-18水平、关节组织p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt及p-mTOR/mTOR水平、关节组织miR-155水平明显升高（P＜0.05）,PIK3R1 mRNA水平明显降低（P＜0.05）。与模型组、miR-155阴性对照组比较,miR-155 antagomir组大鼠上述指标得到明显改善（P＜0.05）;miR-155 agomir组与miR-155 antagomir组趋势相反（P＜0.05）。结论 miR-155可靶向下调PIK3R1的表达,激活PI3K/Akt/mTOR信号,加重RA大鼠关节炎症损伤,下调miR-155表达,可抑制PI3K/Akt/mTOR信号激活及炎症反应发生发展,改善关节炎症状。     

薯蓣皂甙元通过miR-145-5p/KLF5/HIF-1α轴抑制结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探究薯蓣皂甙元对结直肠癌细胞的影响及其可能的作用机制。方法体外培养人结直肠癌细胞SW480和人正常结肠上皮细胞CCD-841CoN,对数期生长的SW480细胞分组进行转染和慢病毒感染;RT-PCR检测SW480细胞中miR-145-5p表达、KLF5和HIF-1α mRNA表达;Western blotting检测细胞中KLF5和HIF-1α蛋白表达;CCK-8检测细胞活力;细胞克隆形成实验检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;荧光素酶报告实验检测miR-145-5p对KLF5表达的调控作用。结果与正常组相比,癌细胞组中KLF5和HIF-1α的mRNA和蛋白表达均显著上调(P0.05),miR-145-5p 表达显著下调(P0.05);与常氧组相比,缺氧组细胞中KLF5、HIF-1α的mRNA和蛋白表达均显著上调(P0.05);薯蓣皂甙元(10、20、40、80、160 μmol/L)可抑制SW480细胞活力(P0.05);与对照组相比,薯蓣皂甙元组SW480细胞中KLF5和HIF-1α的mRNA和蛋白表达、细胞克隆数、迁移和侵袭细胞数均显著下调(P0.05),上调KLF5可逆转薯蓣皂甙元对SW480细胞的作用,上调HIF-1α的表达(P0.05);miR-145-5p靶向调控KLF5;与对照组相比,薯蓣皂甙元组miR-145-5p 表达显著上调(P0.05),KLF5蛋白表达下调(P0.05);与薯蓣皂甙元组相比,薯蓣皂甙元组+miR-145-5p抑制物组miR-145-5p 表达显著下调(P0.05),KLF5蛋白表达上调(P0.05)。结论薯蓣皂甙元通过miR-145-5p/KLF5/HIF-1α轴抑制结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

微小RNA-486-5p通过调控缺氧诱导因子-1α/人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因/磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶A信号通路影响结肠癌的发生发展

目的探讨微小RNA-486-5p(miR-486-5p)通过调控缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶A(Akt)信号通路影响结肠癌的发生发展。方法脂质体Lipofectamine? 3000将miR-486-5p模拟物NC(对照), miR-486-5p模拟物转入SW480结肠癌细胞中, 细胞购自上海细胞库。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-486-5p表达, 噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力, 流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期, Transwell实验检测细胞侵袭, 蛋白质印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2基因(bcl-2)、bcl-2相关蛋白X(bax)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、p27、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、HIF-1α、PTEN、PI3K及磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达。组间比较采用t检验进行分析。结果 miR-486-5p模拟物组细胞miR-486-5p表达量(1.87±0.09比1.00±0.10, t=5.589...     

丹参酮ⅡA调控凋亡及信号转导与转录激活因子3信号通路抑制人结肠癌细胞增殖及迁移

目的观察丹参酮ⅡA(Tan ⅡA)对人结肠癌细胞(SW480、HCT116细胞)增殖、凋亡与迁移的影响, 探究其分子机制。方法采用人结肠癌SW480及HCT116细胞, 随机分为对照组, 丹参酮ⅡA(25、50、100 μmol/L)处理组, 噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞增殖, 流式细胞术检测细胞凋亡, 划痕试验分析细胞迁移。采用蛋白质印迹法(Western blot)检测SW480细胞中凋亡通路血管内皮生长因子(VEGF)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)蛋白及信号转导与转录激活因子3(STAT3)信号通路STAT3、c-Myc蛋白表达水平。结果丹参酮ⅡA呈剂量及时间依赖性的方式抑制SW480及HCT116细胞增殖;与对照组比较, 丹参酮ⅡA(50、100 μmol/L)处理组细胞凋亡率分别增加了23.1%、35.3%及26.8%、34.6%;丹参酮ⅡA(50、100 μmol/L)干预后, 两组细胞的迁移抑制率分别增加了26.6%、36.5%及39.8%、42.0%;丹参酮ⅡA干预后SW480细胞中细胞凋亡通路中VEGF、bcl-2蛋白表达下...     

紫草素调控PI3K/Akt/mTOR通路对人胃癌MGC803细胞自噬和凋亡的影响

目的：研究紫草素对人胃癌MGC803细胞自噬和凋亡的影响及作用机制。方法 ：取对数生长期MGC803细胞,设空白对照组、紫草素组、紫草素+IGF-1(PI3K激活剂)组、紫草素+LY294002(PI3K抑制剂)组。药物干预24 h后,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡,GFP-LC3质粒转染法观察细胞自噬小体,Western blot法检测磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、p-PI3K、蛋白激酶B(Akt)、p-Akt、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、p-mTOR、Caspase-3、cleaved Caspase-3、LC3、Beclin-1的表达。结果：与空白对照组比较,紫草素组细胞增殖抑制率、凋亡率升高（P<0.05）,自噬小体数量明显增多,PI3K、Akt、mTOR磷酸化水平降低（P<0.05）,cleaved Caspase-3/Caspase-3、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ及Beclin-1表达量升高（P<0.05）。IGF-1可明显逆转紫草素对MGC803细胞增殖抑制、凋亡、自噬,PI3K、Akt、mTOR磷酸化和cleaved Cas...     

柚皮素对人与小鼠乳腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响

背景与目的：柚皮素（NAR）是天然黄酮类单体,已被发现对卵巢癌、直肠癌、肺癌具有抗癌效果,但对乳腺癌的作用尚不清楚,故本实验探讨NAR对不同种属乳腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响,并初步分析机制,为乳腺癌的药物研发提供理论和实验依据。 方法：选用体外培养人乳腺癌MCF7细胞和小鼠乳腺癌4T1细胞为研究对象,分别将两种细胞分为2个浓度的NAR（100、200 μg/mL）处理组和对照组,对照组用溶剂DMSO处理。用CCK-8法检测以上处理不同时间后（24、48、72 h）细胞活力的变化;用细胞克隆实验、细胞划痕实验、Transwell小室实验和Hoechst凋亡染色实验检测以上处理24 h后细胞的克隆形成、迁移、侵袭能力与凋亡情况,用Western blot检测Akt、凋亡和周期相关蛋白以及上皮间质转化（EMT）相关分子的表达。 结果：与各自对照组比较,NAR处理后的两种乳腺癌细胞的细胞活力明显降低,且呈一定的时间与浓度依赖趋势（均P<0.01）。与各自对照组比较,NAR处理后的两种乳腺癌细胞的克隆形成率、划痕愈合率、侵袭细胞数均明显降低,而细胞凋亡率均明显增加（均P<0.01）;NAR处理后的两种乳腺癌细胞中Akt、Bcl-2、CDK4、cyclin D1、MMP-9蛋白表达量明显降低,而Bax蛋白表达量显著升高（均P<0.01）。 结论：NAR可以有效抑制人乳腺癌细胞和小鼠乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,并促进凋亡。其作用机制可能与抑制Akt通路、细胞周期和EMT过程相关。     

RNA干扰转录因子激活蛋白4基因表达对结肠癌细胞株SW480的影响

目的观察转录因子激活蛋白4（AP-4）基因对结肠癌细胞株SW480生物学行为的影响。方法设计合成针对AP-4基因外显子7的小分子干扰RNA（siRNA）表达质粒,用脂质体转染SW480细胞,通过RT-PCR技术、Western印迹、四甲基偶氮唑盐实验（MTT法）、流式细胞仪和Transwell体外侵袭实验等检测该siRNA对SW480细胞基因表达、细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡能力和浸润转移能力等生物学行为的影响。结果AP-4siRNA转染SW480细胞96h后,其AP-4mRNA水平下降了58%,培养液上清AP-4蛋白浓度下降了75%（P〈0.01）。细胞增殖受到明显抑制,抑制率达61%～78%;流式细胞仪检测结果显示,AP-4siRNA组SW480细胞凋亡率为（21.70±2.51）%,显著高于阴性对照组的（2.31±0.14）%（P〈0.01）,G0-G1期细胞比例增加（P〈0.01）,G2-M期细胞减少（P〈0.05）;Transwell体外侵袭实验显示,AP-4siRNA能明显抑制SW480细胞的体外侵袭力（P〈0.01）。结论应用siRNA技术沉默AP-4基因能有效抑制SW-480细胞AP-4的表达,进而抑制细胞的生长、增殖及诱导细胞的凋亡,为以AP-4为靶向的结肠癌基因治疗提供了新的思路和手段。     

CXCR2对胃癌细胞侵袭、迁移及凋亡的影响

目的 :探究CXC类趋化因子受体2(C-X-C motif chemokine receptor, CXCR2)对胃癌细胞侵袭、迁移及凋亡等生物学特性的影响。方法:取人胃癌MGC80-3细胞和SGC-7901细胞。转染建立CXCR2过表达细胞,质粒瞬时转染和RNA干扰建立敲减细胞。蛋白质印迹实验研究蛋白质相关细胞表型变化。通过transwell侵袭及迁移实验、增殖实验(cell counting kit-8, CCK8)、流式细胞实验AnnexinⅤ-PI双染法以及实时定量PCR等进行细胞功能、增殖、凋亡以及CXCR2 mRNA表达的检测。结果:胃癌细胞过表达CXCR2后其侵袭、迁移能力显著增强(P0.05),凋亡率显著降低(P0.01)。CXCR2下调后抑制胃癌细胞的侵袭、迁移能力(P0.05),凋亡率显著升高(P=0.02)。CXCR2过表达的胃癌细胞中Akt的磷酸化水平显著上调。Akt磷酸化水平与凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达水平相一致。结论:CXCR2上调后增强胃癌细胞的侵袭、迁移及抗凋亡能力。胃癌细胞中CXCR2的抗凋亡能力与CXCR2/Akt/Bcl-2通路相关。