临床实验中高效液相色谱法的样品制备技术

在临床实验室中,样品的制备技术,是成功的应用高效液相色谱法(HPLC)的一项具有决定性意义的组成部分。临床样品的直接注射,在限定的病例中虽是允许的,但通常情况下都需先进行样品的制备。理想的样品制备方法,是在除去干扰物的同时,能使待分析物得到选择性的分离。这样,既可提高分析的速度、灵敏度与准确度,也能延长分析柱的使用寿命。样品制备的方法临床样品通常为血液(全血、红细胞、白细胞、淋巴细胞、血清或血浆)和尿液。不过脑脊髓液(CSF)、羊水、胆汁、粪便与组织的活检,也都可用来进行分析。至于选择何种样品制备方法,须视样品的来源、     

高效液相色谱法测定HbF的临床实验评价

目的对高效液相色谱法(HPLC)测定HbF进行临床实验评价。方法用日本TOSOH公司生产的HLC723G7(简称G7)全自动糖化血红蛋白分析仪(分析原理为HPLC)的β模式测HbF,与抗碱变试验法测得HbF含量进行比较;并对该方法精密度、线性、抗干扰性等指标进行实验。结果共测定标本77份,其中成人及儿童标本42份,检出HbF高于正常值(含量>3.1%)的标本17例。该方法精密度测定CV在1.9-3.2%之间;线性良好,回归方程y=0.9915x-0.03704,与碱变性试验的相关性良好γ=0.9900;HbF的线性范围可达35.8%;胆红素浓度在250μmol/L,甘油三脂浓度在22.0mmol/L以下时对测定结果无影响。但是对35例新生儿标本的检测表明,HbF与碱变性试验结果不符,仪器测定结果均为0,碱变性试验结果为65.02±11.69%。结论高效液相层析法测定HbF,对成人及儿童β地中海贫血检查有良好的效果,能很好地分辨出增高的HbF,重复性好,不受脂浊、黄胆标本的干扰,且检测速度快。但G7对新生儿HbF的测定尚存在不足之处,如果对仪器分析软件进行调整,则对新生儿的HbF含量也可以定量。     

高效液相色谱法紫外检测血清色氨酸

测定血清游离色氨酸、血清总色氨酸及其比值对肿瘤的诊断及肝脏病变程度和预后的判断有重要的临床意义。目前多用荧光法检测,本文报道高效液相色谱法紫外检测血清色氨酸。     

高效液相色谱法检测假尿苷

应用高效液相色谱法检测尿中假尿嘧啶核苷（ψ）含量。固定相ＳｐｈｅｒｉｓｏｒｂＣ１８柱，流动相１０ｍｍｏｌ／ＬＮＨ＿４Ｈ＿２ＰＯ＿４，流速１ｍｌ／ｍｉｎ，紫外吸收波长２６３ｎｍ。正常健康成人尿中ψ含量为２６．０±４．５ｎｍｏｌ／μｍｏｌ肌酐。本法测定的回收率９８．５±４．５％，ＣＶ４．６％。其浓度在１．０～８０ｎｍｏｌ／ｍｌ范围内与峰面积呈直线正相关（ｒ＝０．９９９１８）。结果表明，应用高效液相色谱法检测尿ψ含量具有迅速、精确、结果可靠等优点。     

反相高效液相色谱法测定雌三醇栓中雌三醇含量

本文报道用反相高效液相色谱法测定雌三醇栓中雌三醇的含量。采用ＹＷＧ－Ｃ１８不锈钢分析柱（１０μｍ，２５０×４．６ｍｍ），以甲醇∶水（６０∶４０）为流动相，样品用甲醇溶解后取０．５ｍｌ置５０℃水浴中通空气流挥干，残渣溶于１００μｌ流动相，进样２０μｌ。在２８１ｎｍ处检测药物峰高，按外标法定量。本法具有操作简便、灵敏准确等特点，适合于任何含量的雌三醇制剂中雌三醇含量测定。     

高效液相色谱法测定血清总胆固醇

目的　建立用高效液相色谱仪测定血清总胆固醇的具体方法。方法　应用高效液相色谱仪采用柱前衍生,紫外检测仪测定峰面积,用标准曲线定量。结果　该法线性范围为1 .30～13. 0mmol/L ,r =0 . 999(Y =2 5 5 4 . 96X - 6 19 .2 9) ,平均回收率为99 .83% ,批内CV值为2 . 4 % ,批间CV值为4 . 1%。结论　该法有效的色谱分离和消除了其它甾醇的干扰这两点优于其它参考方法。可用于血清胆固醇常规测定方法的评价及胆固醇标准参考物的定值,是一种理想的测定方法。     

高效液相色谱法测定消毒剂中的呋喃西林

用高效液相色谱法,于呋喃西林有特征吸收峰且干扰较小的260nm波长下测定消毒剂中呋喃西林含量。结果,在0～0.80μg/ml含量范围内呈线性关系。检出限0.002μg/ml,回收率范围为86.87％～103.14％,相对标准偏差为0.88％～7.12％。     

高效液相色谱法测定Hb F的临床实验评价

目的就高效液相色谱法(HPLC)测定HbF进行临床实验评价。方法用全自动糖化血红蛋白分析仪G7(分析原理为HPLC)的β-模式测定HbF,与抗碱变试验法测得HbF含量进行比较;并对该方法精密度、线性、抗干扰等指标进行实验。结果共测定标本77份,其中成人及儿童(除新生儿外)42份,用本法检出HbF高于正常值(含量>3.1%)共17例。该方法精密度CV1.9%~3.2%之间;与碱变性试验的相关性良好γ=0.9900;回归方程为y=0.9915x-0.03704,HbF的线性范围可达35.8%;胆红素在250μmol/L,三酰甘油22.0mmol/L以下时对测定结果无影响。但是对35例新生儿标本的检测表明,HbF在HPLC法与碱变性试验结果不符,HPLC法测定结果均为0,碱变性试验结果为65.02±11.69%。结论全自动糖化血红蛋白分析仪G7测定HbF,对成人及一般儿童能很好检测,且检测速度快。但G7对新生儿HbF的测定需对仪器分析软件进行调整,才可以正确定量。     

柱前衍生高效液相色谱法分析脑脊液氨基酸

本文采用邻苯二醛作为柱前省生试剂，利用反相高效液相色谱二元梯度体系对脑脊液中氨基酸进行分离，并对五种与中枢生理功能紧密相关的递质氨基酸Ａｓｐ，Ｇｌｕ，Ｇｌｙ，Ｔａｕ和ＧＡＢＡ进行了定时测定，结果表明，该体系可在６０ｍｉｎ以内对脑脊液中的１８种氨基酸实现良好的分离，五种神经递质氨基酸在０．０５－１０μｍｏｌ／Ｌ浓度范围内与色谱峰面积线关系的相关系数平均为０．９８７，平均回收率为８６．４％，对ＧＡＢＡ     

高效液相色谱法测定人血浆中加替沙星浓度

目的:建立HPLC法测定人血浆中加替沙星浓度的方法。方法:采用噻克硝唑为内标,色谱柱为Polaris C18-A柱(150*4.6mm),流动相为乙腈:0.05M的枸缘酸溶液(22:78),流速1.0ml/min,检测波长为295nm。结果:加替沙星血清浓度在0.015～6.48μg·ml-1范内具有良好线性关系,最低定量限为0.015μg·ml-1,方法回收率为99.1%～101.0%,日内、日间RSD均<7%。结论:本法简便、准确、灵敏,适用于加替沙星血药浓度监测及人体药代动力学研究。     

高效液相色谱法测定前列腺素E2

本文采用4-溴-6.7-二甲氧基香豆素作为高效荧光试剂,与PGE_2进行衍生化反应,生成的PGE_2双香豆素酯进行高效液相色谱法测定。测定条件为:荧光激发波长为350nm、发射波长为435nm,流动相为甲醇-水(83:17)。以16、16-双甲基PGE_2作为内标物,以内标法定量。在所研究的2.5pg～200pg范围内,线性关系良好。最低检出限可达2.5pg。为体内微量PGE_2的检测提供了一种有效的方法。     

高效液相色谱法测定复方消毒剂中三氯生含量观察

采用高效液相色谱法测定复方消毒剂中三氯羟基二苯醚(三氯生)含量,对该方法进行了观察。结果,在C18色谱柱和甲醇-水流动相条件下,用高效液相色谱法测定复方消毒剂中三氯生,定量范围为3.0～250.3μg/ml,回收率为99.85～100.43%,最低检测量为0.3μg/ml。结论,高效液相色谱法测定复方消毒剂中三氯生含量,定量范围宽,回收率高,专一性好。     

反相高效液相色谱法测定人血浆中无环鸟苷

目的对流动相的配方进行改良,建立反相HPLC法测定人血浆中阿昔洛韦浓度。方法采用SphericorbC18色谱柱,以2．5％的乙腈水溶液（内含10mmol/L高氯酸,5mmol/L乙酸钠,3．5mmol/L庚烷磺酸钠）为流动相,紫外检测波长254nm。血浆以高氯酸沉淀后高速离心取上清液分析。结果阿昔洛韦峰和其它杂峰得到很好的分离,最低检测限为30ng/ml（进样50μl,信噪比为3：1）。结论本法快速、简便、灵敏度高,且可检测到阿普洛韦代谢物。     

高效液相色谱法测定血清丙戊酸钠

用高效液相色谱法测定人血清中丙戊酸钠浓度。血清样本中加入正庚酸作为内标物,用正庚烷提取,经对溴溴代苯乙酮衍生化后,注入色谱柱分离,用波长254nm 紫外检测器检测。丙戊酸与内标的峰面积比值在20～125μg/ml 浓度范围内线性良好(γ=0,9993),平均回收率为99.25±9.47%,重复实验变异系数分虽为6.30%及 8.37%。     

高效液相色谱法快速测定氨基酸类神经递质

目的建立一种同时快速测定大鼠纹状体中谷氨酸(G lu)、天冬氨酸(Asp)、γ-氨基丁酸(GABA)、甘氨酸(G ly)、牛磺酸(Tau)5种氨基酸类神经递质的高效液相色谱法。方法采用Krom asil C18(4.6×250 mm,5μm)为色谱柱,丹酰氯为柱前衍生试剂,以曲唑酮为内标,以0.1 mol/L醋酸钠缓冲液∶甲醇=58∶42、14 mmol/L庚烷磺酸钠为流动相等度洗脱。结果在1~200 mg/L范围内,各组分线性关系良好(r=0.999)。各氨基酸的平均回收率为79.1%~92.9%。结论本方法简便、快速、准确,可用于临床大样本测定和研究神经及精神疾病氨基酸类神经递质的改变。     

高效液相色谱法分析人血清游离脂肪酸谱

建立了一种用高效液相色谱（ＨＰＬＣ）法分析人血清游离脂肪酸（ＦＦＡ）谱的方法。结果选定用２－硝基苯肼盐酸盐作衍生剂。在Ｃ１８反相柱上分离，乙腈－水作为流动相，正十七酸作内标，紫外－可见光吸收波长４０６ｎｍ。其回收率为８９．８％－１０４．４％，组内和组间变异系数分别小于７．０２％５和９．１７％，血样直接一次衍生，色谱分离４０分钟内完成。同时分析了正常青年组和中老年组血清ＦＦＡ谱，两组之间差异无显著意     

高效液相色谱法快速测定氨基酸类神经递质

目的建立一种同时快速测定大鼠纹状体中谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、γ-氨基丁酸(GABA)、甘氨酸(Gly)、牛磺酸(Tau)5种氨基酸类神经递质的高效液相色谱法.方法采用Kromasil C18(4.6×250 mm,5 μm)为色谱柱,丹酰氯为柱前衍生试剂,以曲唑酮为内标,以0.1 mol/L醋酸钠缓冲液∶甲醇＝58∶ 42、14 mmol/L庚烷磺酸钠为流动相等度洗脱.结果在1～200 mg/L范围内,各组分线性关系良好(r=0.999).各氨基酸的平均回收率为79.1%～92.9%.结论本方法简便、快速、准确, 可用于临床大样本测定和研究神经及精神疾病氨基酸类神经递质的改变.