苦参碱与粉防己碱逆转人MCF-7细胞耐药性的作用与机制

目的:探讨中药有效成分苦参碱与粉防己碱合用能否逆转人乳腺癌MCF-7细胞的多药耐药性.方法:使用人乳腺癌MCF-7和耐多柔比星的MCF-7/DOX细胞进行研究.采用MTT法检测药物对细胞增殖的影响;流式细胞术检测罗丹明123荧光强度的变化;Western blot方法检测P-糖蛋白的表达变化.结果:苦参碱作用耐药和敏感细胞的IC50相近,耐药细胞对苦参碱没有明显的交叉耐药性;流式细胞术分析发现苦参碱单独处理MCF-7/DOX耐药细胞,可以微弱地降低其耐药性,并且与粉防己碱有协同作用;苦参碱与多柔比星合用,可以增加多柔比星对MCF-7/DOX耐药细胞的生长抑制作用,且与粉防己碱有协同作用;苦参碱和粉防己碱、多柔比星合用处理细胞,MCF-7/DOX耐药细胞株P-糖蛋白表达水平下降.结论:苦参碱与粉防己碱合用具有协同作用,能逆转人乳腺癌MCF-7细胞的多药耐药性,降低P-糖蛋白的表达.     

岩舒注射液克服人乳腺癌MCF-7细胞多药耐药性的实验研究

目的观察岩舒注射液能否克服人乳腺癌MCF-7细胞的多药耐药性。方法使用人乳腺癌MCF-7和耐多柔比星的MCF-7／DOX细胞进行实验。采用MTT法检测岩舒注射液对细胞增殖的影响,流式细胞术检测岩舒注射液处理后细胞内多柔比星的荧光强度变化,免疫印迹方法检测岩舒注射液处理后凋亡相关蛋白和P-糖蛋白的表达变化。结果岩舒注射液处理耐药和敏感细胞的抑制率相近,没有明显的交叉耐药性（P〉0．05）。原药1／16浓度的岩舒注射液能明显地引起两种细胞凋亡。5nmol／L多柔比星和1／256、1／128浓度的岩舒注射液合用处理MCF-7／DOX耐药细胞,细胞的存活率分别从86．8％降低至74．6％（P〈0．05）和71．6％（P〈0．01）,具有明显的增效作用。此外,岩舒注射液还能增加多柔比星在耐药细胞内的积聚。免疫印迹检测显示：岩舒注射液处理使耐药细胞P-糖蛋白表达水平下降。结论岩舒注射液能够克服人乳腺癌MCF-7细胞的多药耐药性,其机制是降低P-糖蛋白的表达。     

高良姜素诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡的研究

目的研究高良姜素促进人乳腺癌细胞株MCF-7的凋亡作用。方法采用CCK-8法检测高良姜素对MCF-7细胞的增殖抑制作用;以流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测Bax、Bcl-2、cleavedcaspase-3和cleaved-PARP等相关蛋白的表达水平。结果高良姜素对MCF-7细胞增殖有明显的抑制作用,24 h和48 h的IC50分别为43.71μmol·L~(-1)和20.68μmol·L~(-1);高良姜素能够诱导MCF-7细胞凋亡,呈浓度依赖关系;高良姜素能上调Bax、cleaved-caspase-3和cleaved-PARP蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达。结论高良姜素对MCF-7细胞增殖有明显的抑制作用,通过线粒体途径调节凋亡相关蛋白的表达水平诱导MCF-7细胞凋亡。     

异乌药内酯对人乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制作用及其机制研究

目的研究异乌药内酯对人乳腺癌MCF-7细胞生长的抑制作用及其作用机制。方法体外培养MCF-7细胞,分为对照组及不同浓度异乌药内酯处理组。采用MTT实验检测异乌药内酯对MCF-7细胞增殖的影响;采用流式细胞术和TUNEL染色法检测异乌药内酯对MCF-7细胞周期、线粒体膜电位及细胞凋亡的影响;采用Western blotting法检测与细胞凋亡密切相关的蛋白表达情况。结果异乌药内酯以时间和剂量依赖性抑制MCF-7细胞增殖、促进细胞凋亡;能够将MCF-7细胞周期阻滞在G2/M期,诱导线粒体膜电位去极化;上调cleaved Caspase-3和促凋亡蛋白Bax表达,抑制抗凋亡蛋白Bcl-2表达,诱导MCF-7细胞的凋亡。结论异乌药内酯对MCF-7细胞的增殖抑制作用呈剂量和时间依赖性,其作用机制可能是通过线粒体途径诱导细胞凋亡。     

瑞香狼毒提取物抗乳腺癌MCF-7细胞多药耐药的研究

该研究将探索瑞香狼毒提取物(SCE)抗乳腺癌多药耐药的作用及相关机制。以乳腺癌化疗敏感细胞株MCF-7及阿霉素耐药细胞株MCF-7/ADR作为实验对象,通过噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活力,采用Pi单染法测定细胞周期,4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色、流式细胞术检测细胞凋亡情况,单丹磺酰尸胺(MDC)染色以及GFP-LC3B-mcherry腺病毒转染检测自噬流情况,Western blot检测凋亡蛋白Bcl-2、Bax、caspase-9、caspase-3以及自噬蛋白LC3B、p62、Beclin-1的表达水平。实验结果显示,SCE能够显著抑制乳腺癌细胞敏感/耐药株的增殖,耐药因子为0.53,远低于阿霉素的耐药因子59,同时SCE处理后敏感/耐药细胞株的G₀/G₁期细胞比例均显著增加。另外,SCE给药后的DAPI染色表明,敏感/耐药细胞株均出现核浓缩、染色加深、核碎裂等一系列凋亡现象;流式双染结果表明SCE给药后敏感/耐药细胞株凋亡细胞比例均显著上升;Western blot结果显示SCE给药后敏感/耐药细胞株caspase...     

氯化两面针碱体外逆转KBV200多药耐药性的机制初步探讨

目的初步探讨氯化两面针碱(nitidine chloride,NC)逆转KBV200细胞株的体外机制。方法用MTT法测定NC对KBV200细胞的逆转作用及量效关系。免疫细胞化学(ICC)法检测单用NC及NC联合长春新碱(VCR)处理KBV200后,细胞中的耐药相关蛋白P-gp和LRP的量、GST-π和TOPO-Ⅱ的活性,以及肿瘤细胞调亡蛋白P53及Bcl-2/Bax比值的变化。结果 0.3,0.6和1.2μg.ml-1的NC分别联合VCR对KBV200的逆转倍数分别为2.44,5.54和1.14倍。与单用VCR组相比,NC联合VCR组上调P53的表达(P<0.01),增强TOPO-Ⅱ活性(P<0.01),下调P-gp和LRP的表达(P<0.01),下调Bcl-2/Bax的比值。结论 NC具有逆转人口腔鳞癌细胞KBV200多药耐药性的作用,其机制可能与提高肿瘤细胞内药物的累积量和促进肿瘤细胞的凋亡有关。     

白藜芦醇四甲氧基衍生物提高耐药人乳腺癌细胞MCF-7/DOX对阿霉素的敏感性

目的:研究白藜芦醇四甲氧基衍生物(TMS)对人乳腺癌细胞MCF-7和耐阿霉素(doxorubicin,DOX)的人乳腺癌细胞MCF-7/DOX这两株细胞增殖的影响,探讨白藜芦醇四甲氧基衍生物能否提高耐药细胞MCF-7/DOX对阿霉素的敏感性。方法:用SRB法检测白藜芦醇四甲氧基衍生物的细胞毒性,同时检测白藜芦醇四甲氧基衍生物和DOX联用后对细胞株MCF-7/DOX药物敏感性的影响,用Western-blot方法检测不同浓度的白藜芦醇四甲氧基衍生物对P-gp蛋白表达的影响,罗丹明转运实验考察白藜芦醇四甲氧基衍生物对P-gp转运活性的影响。结果:白藜芦醇四甲氧基衍生物(7.5、15、30μg/ml)能够有效抑制耐药细胞MCF-7/DOX的增殖,然而与此相应的浓度范围内白藜芦醇的细胞增殖抑制作用较差,使用非细胞毒性剂量(3、6μg/ml)的白藜芦醇四甲氧基衍生物能有效提高MCF-7/DOX对阿霉素的敏感性,Western-blot结果显示6μg/ml的白藜芦醇四甲氧基衍生物能够明显下调P-gp的表达,此外,罗丹明转运实验显示白藜芦醇四甲氧基衍生物组(3、6μg/ml)细胞内罗丹明123积累量均有上升,表明白藜芦醇四甲氧基衍生物可以抑制P-gp的转运活性。结论:白藜芦醇四甲氧基衍生物可通过抑制P-gp表达和活性的方式增加MCF-7/DOX对阿霉素的敏感性,从而逆转耐药。     

康莱特注射液对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的观察康莱特注射液对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法取对数生长期人乳腺癌MCF-7细胞,分为对照组和康莱特不同浓度组(10、20、40μL/mL)。RPMI-1640培养基培养24 h后药物处理,采用MTT法检测康莱特注射液对MCF-7细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,Hochest荧光染色法检测细胞核变化,ELISA及Western blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达。结果康莱特注射液作用12、24、48 h对MCF-7细胞增殖均有显著的抑制作用(P0.05,P0.01);与对照组比较,康莱特注射液作用48 h后G1/G0、G2/M期细胞比例增加(P0.001,P0.01),S期细胞比例下降(P0.01),细胞凋亡率升高(P0.05,P0.001),Bcl-2蛋白表达明显降低、Bax蛋白表达明显升高(P0.01,P0.001)。结论康莱特注射液能抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,其机制与降低Bcl-2蛋白表达和增加Bax蛋白活性有关。     

温下方逆转MCF-7/ADM细胞耐药及诱导凋亡作用

目的:研究自拟温下方逆转MCF-7/ADM细胞耐药、诱导凋亡作用.方法:MTT法研究温下方含药血清对MCF-7/ADM耐药逆转作用,流式细胞术测定细胞内药物浓度及耐药相关蛋白P-gp、凋亡调控蛋白p53、bcl-2的表达,激光共聚焦显微镜技术检测细胞内钙浓度及线粒体膜电位.结果:温下方含药血清可提高MCF-7/ADM对化疗药的敏感性,增加胞内化疗药物浓度,使P-gp表达下降,p53表达增高,胞内钙浓度及线粒体膜电位均降低.结论:温下方可部分逆转MCF-7/ADM耐药,其逆转机制可能与诱导耐药细胞凋亡密切相关.     

柴胡皂苷D对紫杉醇耐药乳腺癌细胞耐药性的逆转作用研究

目的：研究柴胡皂苷D对紫杉醇(paclitaxel, PTX)耐药的乳腺癌细胞(MCF-7/PTX)耐药性的逆转作用及其机制。方法：采用噻唑蓝溴化四唑法(MTT法)测定不同质量分数(0、12.5、25、50、100、200 mg/L)PTX处理MCF-7/PTX细胞和MCF-7细胞48 h的细胞存活率,确定MCF-7/PTX细胞对PTX的耐药程度。采用MTT法测定不同质量分数(0.125、0.25、0.50、1.00 mg/L)柴胡皂苷D处理MCF-7/PTX细胞48 h的细胞增殖抑制率,确定柴胡皂苷D对MCF-7/PTX细胞的安全性。采用MTT法测定确定0.125、0.25和0.5 mg/L柴胡皂苷D能否调节MCF-7/PTX细胞对PTX的敏感性。采用蛋白免疫印迹法(Western Blot)和流式细胞术分别检测不同质量分数的柴胡皂苷D对Yes相关蛋白(YAP)和P糖蛋白(P-gp)表达的影响。进行罗丹明123(Rh123)积累和外流测定。结果：与0 mg/L PTX对比,MCF-7和MCF-7/PTX细胞存活率随PTX质量分数增加而降低,且呈现依赖性(P<0.05);确立10...     

紫龙金抑制人乳腺癌细胞系MCF-7生长的体内外实验研究

目的探讨复方中药紫龙金在体内和体外对MCF-7人乳腺癌细胞生长的抑制作用及其作用机制。方法 (1)台盼蓝拒染法和双层软琼脂克隆形成法检测紫龙金对MCF-7细胞增殖活性和克隆形成的影响;(2)Westernblot法检测紫龙金对p-ERK1/2蛋白表达的影响;(3)17-β-雌二醇缓释药片包埋法构建MCF-7细胞的BALB/c裸鼠皮下移植瘤模型,并检测紫龙金(实验组灌胃生药20g紫龙金/kg体重)对肿瘤生长的抑制效应。结果 (1)紫龙金降低MCF-7细胞的存活率,并呈剂量和时间依赖性;(2)紫龙金组MCF-7细胞克隆形成率显著低于对照组,且随着浓度的增加,克隆形成能力明显降低[0.75、1.5、3.0、6.0mg/mL紫龙金组细胞克隆形成抑制率分别为(12.66±1.54)%、(88.83±2.13)%、100%、100%],克隆直径也明显减小或无克隆形成;(3)紫龙金下调p-ERK1/2蛋白的表达;(4)实验组裸鼠与对照组裸鼠4周后移植瘤的平均体积分别为(0.73±0.58)cm3、(1.36±0.64)cm3,平均瘤重分别为(1.02±0.25)g、(1.66±0.09)g,两组比较,差异均有统计学意义(P0.05),实验组抑瘤率为38.55%。结论紫龙金可显著抑制MCF-7细胞的体内和体外增殖、转化和致瘤性,这可能与p-ERK1/2蛋白的表达下调有关。     

紫龙金对人乳腺癌细胞系MCF-7增殖及凋亡的影响

目的观察复方中药紫龙金对人乳腺癌细胞系MCF-7增殖的抑制作用及对其凋亡的诱导作用,探讨紫龙金治疗乳腺癌的作用机制。方法依据培养液紫龙金浓度的差异,实验共设4组:(1)对照组:不加紫龙金干预的1640培养液;(2)紫龙金低浓度组:1.5 mg生药/mL紫龙金培养液;(3)紫龙金中浓度组:3 mg生药/mL紫龙金培养液;(4)紫龙金高浓度组:6 mg生药/mL紫龙金培养液。采用细胞计数法绘制生长曲线及四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度紫龙金对MCF-7细胞增殖能力的影响,并应用流式细胞术、Hoechst 33342核染色法及DNA梯度形成法测定紫龙金诱导凋亡的作用。结果(1)与对照组比较,紫龙金各剂量组的细胞计数在各时间点(24、48、72、96、120、144 h)明显减少,其差异均有统计学意义(P0.05);紫龙金各剂量组间的生长抑制率差异除低、中浓度组间在24、72 h无统计学意义外(P0.05),各剂量组间两两比较在不同时间点(24、48、72、96、120、144 h),其差异均有统计学意义(P0.05)。紫龙金对MCF-7细胞的增殖抑制作用呈时间依赖性和剂量依赖性;(2)紫龙金使细胞阻滞在G_0/G_1期;(3)中、高浓度紫龙金诱导MCF-7细胞凋亡,并形成DNA ladder。结论紫龙金能抑制人乳腺癌细胞MCF-7细胞增殖,并诱导细胞凋亡,从而起到抗肿瘤的作用。     

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??OBJECTIVE To investigate the mechanism of nucleophosmin (NPM) in the formation of breast cancer drug resistance. METHODS The methotrexate- resistant breast cancer cells (MCF-7/MTX) was established by escalating the concentrations of methotrexate to drug-sensitive MCF-7 cells (MCF-7/S). The cells viability of MCF-7/MTX was detected by MTT test, cell growth curve was drawn and doubling time was calculated. The cell morphology and ultrastructure were observed using optical and transmission electron microscopy. The expression of NPM and factors related to drug resistance were tested by Real-time PCR and Western blot assay. Then the NPM level was attenuated by RNA interfering technology, and the resistance mechanism was explored in MCF-7/MTX cells. RESULTS The MCF-7/MTX cell line was successfully established and resistance factor was 64. The resistant cells has spindle shaped morphology and tended to grow slowly, and the variations appeared in the internal structure of cells. MCF-7/MTX cells possessed cross-resistance to various chemotherapeutic drugs. The expressions of NPM and multidrug-resistant factors P-gp, MRP1, BCRP were up-regulated in the resistant cells. Further, the overexpression of NPM activated PI3K/Akt signaling pathway and inhibited downstream apoptotic factors. Then knockdown of NPM by siRNA significantly decreased the drug resistance of MCF-7/MTX cells, suppressed PI3K/Akt pathway and promoted the downstream cells apoptosis. CONCLUSION The high expression of NPM has an important role in the formation of breast cancer drug resistance, and it is expected to be a novel molecular target for breast cancer treatment in clinical.     

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??OBJECTIVE To study the effect of isoalantolactone on inhibiting proliferation of MCF-7 and induce apoptosis in vitro and further to explore its machinism via mitochondrial and phosphatidylinositol 3-kinase/Akt signaling pathways. METHODS The subject investigated isoalantolactone in MCF-7 cells proliferation inhibition by MTT and SRB methods, and matching the results of two methods; observing morphological changes by inverted microscope and each phase of apoptosis of MCF-7 cells effected by isoalantolactone after 24 h with Hoechst 33258 staining method. Using transmission electron microscopy to observe MCF-7 cells morphology change to determine the mechanism of research; rhodamine 123 tag, laser confocal scanning microscope detection isoalantolactone on the effect of MCF-7 cells mitochondrial membrane potential; Using Western blot to the expression of Bcl-2,Bax,Akt and p-Akt; detecting caspase-3 activity in MCF-7 cells by colorimetry method. RESULTS Isoalantolactone has strong inhibition of proliferation in MCF-7 cells, IC₅₀ values of MTT and SRB methods were 15.21 and 14.908 ??g??mL^-1, and in a dose -dependent manner; the morphological of MCF-7 cells was changed after the treatment by Hoechst staining method; morphological changes were observed under transmission electron microscopy of cells display, the drug group cells showed typical apoptotic characteristics of different periods. With the concentrations of isoalantolactone increasing, the level of mitochondrial membrane potential reduced. Western blot result showed that, isoalantolactone could down regulate the expression of anti apoptotic protein Bcl-2, p-Akt, and up regulate the expression of pro-apoptotic protein Bax, had no effect on the expression of Akt protein. And the activity of caspase-3 could be raised by increasing dosage, compared with the control group with significant difference(P<0.01). CONCLUSION Isoalantolactone effectively inhibites the proliferation of MCF-7 cells through mitochondrial and phosphatidylinositol 3-kinase/Akt signaling pathways, which is regulated by activation of caspase-3, down-regulation of Bcl-2, and up-regulation of Bax. Isoalantolactone-induced apoptosis is involved in mitochondrial and the PI3K/Akt pathway.     

丁硫氨酸亚砜胺逆转人乳腺癌多药耐药细胞株耐药性的体外研究

 目的 探讨丁硫氨酸亚砜胺(BSO)对体外培养的人乳腺癌细胞株多药耐药性的影响。方法 以谷胱甘肽（GSH）还原酶循环法检测丁硫氨酸亚砜胺处理前后细胞内谷胱甘肽含量的变化;四甲基偶氮唑蓝比色法检测丁硫氨酸亚砜胺预处理对多柔比星( ADM) 50%抑制浓度（IC50）的影响并进一步计算耐药倍数和逆转倍数;流式细胞仪检测丁硫氨酸亚砜胺对乳腺癌多耐药细胞株MCF-7/ADM凋亡及细胞周期的影响。结果 耐药细胞MCF-7/ADM内谷胱甘肽含量较人乳腺癌MCF-7细胞内谷胱甘肽含量明显增高;丁硫氨酸亚砜胺显著抑制MCF-7/ADM细胞内谷胱甘肽的合成,而对MCF-7细胞内谷胱甘肽合成影响较小;丁硫氨酸亚砜胺在一定浓度范围内能降低多柔比星对MCF-7/ADM细胞的IC₅₀,在50,100,200,400,800 μmol·L^-1浓度时的耐药的逆转倍数分别为1.25、2.02、 8.42、12.65和9.71倍,而对MCF-7细胞的IC₅₀无明显影响;与单纯应用多柔比星组相比,丁硫氨酸亚砜胺及多柔比星联合用药组凋亡细胞比例明显增加,G0/G1期细胞比例增加。结论 丁硫氨酸亚砜胺可通过抑制细胞谷胱甘肽的合成,部分逆转乳腺癌耐药细胞的耐药性,这种作用可能是通过诱导细胞凋亡实现的。     

Paris saponin VII from trillium tschonoskii reverses multidrug resistance of adriamycin-resistant MCF-7/ADR cells via P-glycoprotein inhibition and apoptosis augmentation

Ethnopharmacological relevance

Saponins of several herbs are known to induce apoptosis in some cancer cells and are proposed to be promising modulators of drug resistance. In the present study, we extracted Paris saponin VII (PS VII), a kind of saponin, from Trillium tschonoskii Maxim. and observed its effect on adriamycin-resistant breast cancer cells.

Materials and methods

An adriamycin-resistant human breast cancer cell line, MCF-7/ADR cells were exposed to different concentrations of PS VII (0–100 μmol/L). Then, flow cytometric assays and a human apoptosis array were used to detect apoptotic cells and apoptosis related protein expression. P-glycoprotein levels and intracellular rhodamine 123 (RH-123) accumulations were measured to evaluate the expression and activity of P-glycoprotein.

Results

PS VII dose dependently suppressed cell viability as well as triggered apoptosis and modulated drug resistance of MCF-7/ADR cells. Further results showed that PS VII treatment in MCF-7/ADR cells led to increased TNFR1, TRAIL R1/DR4, TRAIL R2/DR5, and FADD expression, and activation of PARP, caspase-8, and 3. In parallel to the alterations, P-glycoprotein expression and activity were also reduced.

Conclusion

These findings showed that PS VII might be an effective tumouristatic agent for the treatment of MDR breast cancer.     

EGCG对两株耐药肿瘤细胞的细胞毒增敏作用及抑瘤作用研究

目的:研究EGCG对人耐药肝癌细胞BEL7404/Adr和耐药口腔癌细胞KBV200的细胞毒增敏作用及对裸鼠移植瘤的抑瘤作用。方法:MTT法检测药物对体外培养细胞的毒性作用,采用BEL7404/ADR或KBV200细胞种植于裸鼠皮下,建立耐药肿瘤模型,观察用药后对裸鼠体重、抑瘤率、病理改变以及RTPCR和免疫组化法分别检测瘤组织mdr1和P糖蛋白的表达。结果:EGCG在100mg/L以下剂量对两株耐药肿瘤细胞的抑制率均小于10%,EGCG与抗肿瘤药物联合应用可明显提高抗肿瘤药物的细胞毒作用;体内与抗肿瘤药物联合应用对两种肿瘤抑瘤率明显高于单用抗肿瘤药物组,mdr1mRNA和Pgp的表达下降。结论:EGCG与抗肿瘤药物联合应用可增强化疗药物对耐药肿瘤细胞BEL7404/Adr和耐药口腔癌细胞KBV200的细胞毒作用,机制可能与降低MDR1mRNA表达、降低Pgp表达有关。