靶标诱导变构解离SELEX技术筛选皮质醇特异核酸适体

目的通过指数富集配体系统进化（SELEX）技术获得皮质醇特异性核酸适体,建立高品质、超敏、易用和稳定的皮质醇检测试剂盒。方法人工合成两端固定序列,中间为35 bp随机序列,生成80 bp长度ssDNA文库,捕获序列固定在磁珠上,文库与其退火组装,皮质醇的特异核酸适体通过我们建立的靶标诱导变构解离SELEX（TISSD-SELEX）技术获得。最后一轮的PCR产物经克隆测序,MegAlign和RNAstructure软件分析其一级和二级结构。实时（real-time）apta-PCR方法分析G12的亲和活性。结果经过12轮筛选后,获得10个皮质醇的核酸适体。序列分析显示,特异核酸适体以高G含量核酸序列为主,软件预测其中8个序列主要以G四联体二级结构为主,候选核酸适体G12显示了可以作为生物探针用于皮质醇检测。结论成功建立TISSD-SELEX技术,获得小分子靶标皮质醇核酸适体。小分子靶标无需将其偶联在固相介质或大分子上,对靶分子结构、性质无特殊要求,因而有望成为小分子靶标核酸适体筛选的通用技术方法。     

噬菌体φ29末端酶大亚基gp16特异RNA适体的筛选

目的：筛选噬菌体φ29末端酶大亚基gpl6特异结合RNA适体。方法：采用SELEX技术，以微扎板为固定介质，在由25个碱基组成的随机区的RNA文库中进行筛选。结果与结论：经9轮筛选获得与gpl6特异结合的RNA适体，结合百分数从未经筛选的14.4％增加到第9轮的37．8％。测序结果大致分为5个家族。其二级结构多呈茎环或凸环结构。抑制性适体的筛选正在进行中。     

基于毛细管电泳的细胞SELEX方法的初步建立

目的：初步建立一种基于毛细管电泳技术的细胞指数式富集的配基系统进化（SELEX）技术,实现快速、高效和微量筛选。方法：以表达有绿色荧光蛋白的HepG2细胞作为靶细胞,FITC标记的DNA文库作为初始文库,采用带有激光诱导荧光检测器的毛细管电泳（CE）进行检测分离,收集制备次级文库。同时采用常规方法进行了一轮细胞筛选,以进行比较。结果及结论：流式分析结果显示与常规方法相比,引入毛细管电泳分离技术后经过一轮筛选,特异配基即获得了较好的富集。这表明基于毛细管电泳的细胞SELEX方法获得了初步建立,为实现肿瘤细胞的快速微量筛选奠定了基础。     

寡核苷酸适配子在核医学中的应用

寡核苷酸适配子（aptamer，ataptable oligomer）是用指数富集配基的系统进化（SELEX）技术，通过体外筛选、扩增和富集获得能和小分子物质、多肽、蛋白质、细胞器、核酸及细胞和组织等靶物质高亲和、高特异结合的修饰寡核苷酸。适配子（aptamer）来源于拉丁语“aptus”一词，意为“使适合”。     

应用噬菌体展示技术筛选细胞周期素B2启动子DNA的结合蛋白

目的筛选细胞周期素B2（cyclin B2）启动子DNA结合蛋白,探索cyclin B2的表达调节机制.方法应用噬菌体展示技术,以cyclin B2启动子DNA片段作为固相筛选分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行4轮“吸附-洗脱-扩增”富集过程,噬斑裂解液PCR扩增后,进行DNA序列分析和同源性生物信息学搜索.结果噬菌体经富集后,筛选出20个阳性克隆,成功构建了克隆载体.序列测定后经过同源性搜索,确定了和cyclin B2启动子特异结合的肝细胞蛋白,共编码6种已知蛋白.结论用噬菌体人肝cDNA文库筛选得到cyclin B2启动子DNA结合蛋白,分析了这些蛋白的功能,为研究cyclin B2基因的转录调节机制奠定了基础.     

受体结合实验及其在放射性显像剂研究中的应用进展

受体结合实验是一种重要的药物筛选方法,它通过体外实验来考察配体与受体的结合能力。目前,很多放射性显像剂是利用放射性配体与体内受体结合的高度选择性来进行受体显像的。因此,受体结合实验是放射性显像剂研究中广泛使用的一种体外评价方法,在放射性显像剂设计与筛选中发挥了重要作用。     

受体结合实验及其在放射性显像剂研究中的应用进展

受体结合实验是一种重要的药物筛选方法,它通过体外实验来考察配体与受体的结合能力.目前,很多放射性显像剂是利用放射性配体与体内受体结合的高度选择性来进行受体显像的.因此,受体结合实验是放射性显像剂研究中广泛使用的一种体外评价方法,在放射性显像剂设计与筛选中发挥了重要作用.     

筛选环孢素适体的SELEX技术的建立

运用指数富集的配体系统进化(systematic evolution of ligand by exponential enrichment, SELEX)技术,筛选随机ssDNA文库和针对环孢素(CsA)的特异性适体,为建立检测全血CsA浓度的快速而简便的实验室诊断方法奠定基础.     

应用噬菌体展示技术筛选乙型肝炎病毒核心启动子结合蛋白

目的 通过筛选乙型肝炎病毒(HBV)核心启动子(core promoter)结合蛋白,为HBV复制机制的研究探索新的途径。方法 应用噬菌体表面展示技术,以HBV核心启动子的聚合酶链反应产物作为固相筛选分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行5轮“吸附-洗脱-扩增”的筛选过程,经噬斑的PCR扩增后,构建克隆载体,最后对所筛选克隆进行DNA序列分析和同源性搜索。结果 噬菌体经富集后,从随机筛选的20个克隆中得到6个阳性克隆,成功构建了克隆载体。序列测定后经过同源性搜索,确定了和HBV核心启动子结合的肝细胞蛋白——羧肽酶N(CPN)。结论 用噬菌体人肝cDNA文库筛选得到HBV核心启动子的结合蛋白,分析了该蛋白的编码基因,为进一步研究HBV的复制机制创造了新的途径。     

VEGF受体3高亲和噬菌体融合肽的筛选及亲和功能研究

目的:利用噬菌体展示技术,筛选VEGF受体3(VEGFR3)胞外区蛋白高亲和噬菌体融合肽,并测量其亲和常数。方法:用噬菌体展示固相结合法,经过4个循环的筛选,ELISA法鉴定噬菌体单克隆的亲和性,测定亲和力高的阳性噬菌体融合蛋白的DNA序列,竞争法ELISA检测优势克隆与靶蛋白的特异性,并通过非竞争性ELISA固项法,得到融合肽与VEGFR3的抗原抗体结合反应曲线,计算融合肽的亲和常数。结果:4轮亲和筛选,噬菌体出现良好的富集,8个阳性克隆中,经测序有4个克隆序列相同(phage-WHGSLKQNLWWY);竞争性ELISA显示噬菌体融合肽与VEGFR3具有良好的亲合性,并能被VEGF-D分子抑制,融合肽的亲和常数为(1.505±0.184)×107M-1。结论:噬菌体12肽库筛选的VEGFR3高亲和融合肽(phage-WHGSLKQNLWWY)可为多肽分子的改造及靶向药物的开发提供依据。