The Research on Chimeric MHC-Ⅰ Gene Responsing to Allogeneic Dendritic Cells

目的:构建分子嵌合主要组织相容性复合体(MHC)-Ⅰ基因小鼠骨髓造血干细胞,并探讨其诱导脾脏T细胞对异基因小鼠树突状细胞(DC)反应的机制.方法:密度梯度法分离培养BALB/c小鼠骨髓造血干细胞.构建携带C57BL/6小鼠MHC-Ⅰ基因慢病毒载体(病毒感染组),携带无意义基因慢病毒载体(阴性对照组).分别感染BALB/c 小鼠骨髓造血干细胞,构建分子嵌合细胞.分别取病毒感染组、阴性对照组及未加入病毒的空白对照组造血干细胞输注BALB/c小鼠后7d,获取脾脏T淋巴细胞,分别与C57BL/6小鼠DC进行混合淋巴细胞培养,测定刺激指数.结果:成功体外分选及培养BALB/c小鼠骨髓造血干细胞.病毒感染组C57BL/6小鼠MHC-Ⅰ蛋白表达率可达98.17％.单向混合淋巴细胞培养结果显示,C57BL/6小鼠DC对输注病毒感染组细胞后BALB/c小鼠脾脏T细胞刺激指数明显降低(P＜0.01).结论:输注分子嵌合MHC-Ⅰ基因造血干细胞后,小鼠脾脏T细胞对异基因小鼠DC反应明显减低.     

MSCs联合来氟米特对异基因鼠B细胞的免疫调节

目的 探讨体外骨髓间充质干细胞(MSCs)联合来氟米特(LEF)对BALB/c鼠B细胞的免疫调节作用.方法 从5～6周龄BALB/c鼠骨髓中分离培养MSCs,并通过其形态的均一性及流式细胞术(FCM)检测其表面标志以鉴定其纯度.用EZ-SepTM Mouse 1X分离脾脏淋巴细胞,经脂多糖(LPS)刺激,并与LEF和/或MSCs作用.分为A组(脾细胞)、B组(脾细胞 LEF)、C组(脾细胞 MSCs)和D组(脾细胞 LEF MSCs).用MTT法检测B细胞的增殖.FCM检测B细胞CD69 、CD86 表达情况,以及B细胞凋亡情况.结果 MSCs对B细胞增殖有明显抑制作用,MSCs联合LEF后抑制作用更强.C组吸光值(OD值)为0.303±0.016,明显高于D组的0.250±0.013(P<0.01).C组CD86 B细胞百分率较A组明显降低[(76.17±1.13)%vs(87.57±1.66)%](P<0.01).D组CD86 B细胞百分率显著低于C组[(60.94±1.22)%vs(76.17±1.13)%](P<0.01).MSCs和/或LEF对B细胞CD69 的表达和B细胞凋亡均无显著影响.结论 MSCs联合LEF对BALB/c鼠B细胞有免疫负调节作用,但机制复杂,可能与抑制B细胞增殖、干预B细胞不同时期活化有关.     

耐受性树突状细胞对再生障碍性贫血小鼠骨髓造血功能的影响

目的探讨小鼠骨髓单个核细胞培养出的耐受性树突状细胞(tDCs)输注对免疫介导性再生障碍性贫血模型小鼠骨髓造血功能的影响。方法采用昆明小鼠30只,参照姚军等方法建立免疫介导性再生障碍性贫血模型,实验分模型组、tDCs组、照射组、正常组。tDCs组分别于制模后0d、3d、5d从小鼠尾静脉输注耐受性树突状细胞1×106/只,观察各组小鼠外周血象变化、濒死时(或造模28d时)骨髓有核细胞数量和骨髓病理学特征。结果模型组外周血WBC显著低于tDCs组和照射组,分别为(0.7±0.2)×109/L,(4.27±0.64)×109/L,(5.89±0.34)×109/L。tDCs组小鼠单侧股骨有核细胞数量显著高于模型组,而与照射组结果一致。结论tDCs输注可减轻再生障碍性贫血模型小鼠骨髓造血衰竭程度。     

高渗脱水药物对正常大鼠脑部优化散射系数的影响及临床意义

目的 高渗脱水药物对大鼠脑部优化散射系数(μs')的影响.方法 60只SD大鼠随机均分为三组,分别经尾静脉注射生理盐水(C组)、20%甘露醇(A组)或3.2%盐水(B组),剂量均为10 ml/kg.用特制内置四光纤探头活体在位连续动态观察大鼠脑部μs'的变化情况.结果 C组注射前后大鼠脑部μs'未见明显变化,A组与B组分别下降了(2.38±0.45)%与(2.41±0.36)%,明显低于C组(P＜0.05).结论 大鼠脑部μs'可以作为高渗脱水药物作用的评估指标.     

骨髓腔内移植对异基因骨髓移植小鼠造血的影响

为探讨骨髓腔内骨髓移植 (IBM-BMT)对异基因骨髓移植小鼠造血功能的影响 ,将供鼠 C5 7BL/6(H-2 b)骨髓细胞经微量注射器直接注入到经致死量照射后的受鼠 BALB/c(H-2 d )胫骨骨髓腔 ,在骨髓移植后 1、7、14天分别检测受鼠外周血红细胞、白细胞、血小板、骨髓有核细胞数 ;骨髓移植后 7、14天分别检测受鼠骨髓中的骨髓脾集落形成单位 (CFU-S)。结果显示 ,IBM-BMT组小鼠移植后 7、14天的外周血红细胞、白细胞、血小板、骨髓中的有核细胞数 ,骨髓脾集落形成单位均显著高于传统骨髓移植组 (IV-BMT)(P<0 .0 1)。提示 IBM-BMT较 IV-BMT更能促进小鼠异基因骨髓移植后造血功能重建。     

芬太尼和脂多糖迟发预处理对缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的 诱导大鼠心肌迟发预处理保护作用,测定心肌细胞凋亡率、Caspase、细胞色素C的变化.探讨DPC对心肌细胞凋亡的影响及作用机制.方法 健康SD大鼠32只,随机分为4组,每组8只.芬太尼组(A组):大鼠腹腔注射芬太尼,24小时后建垃缺血再灌注损伤模型;脂多糖组(B组):腹腔注射脂多糖,24小时后处理同A组.生理盐水组(C组):腹腔注射生理盐水,24小时后处理同A组.对照组(D组):不注射任何药物,24小时后处理同A组.TUNEL法检测心肌细胞凋亡;caspase-3试剂盒测定其活性;Western blot法检测细胞色素C.结果 HE染色:损伤重区域的心肌仍保存细胞轮廓,横纹不清或消失,收缩带形成.损伤轻区域细胞轮廓清晰.横纹不消失.TUNEL染色:散在的细胞核呈棕色凋亡细胞.A组和B组心肌细胞凋亡毕分别为(9±3)%和(11±3)%低于C组(17±5)%;A组和B组caspase-3活性(分别为0.43±0.11和0.40±0.13)低于C组(0.75±0.23);A组和B组细胞色素C蛋白表达(分别为0.67±0.11和0.63±0.18)低于C组(0.98±0.19),均有显著差异(P＜0.05).结论 芬太尼、脂多糖诱导的迟发预处理中存在心肌细胞凋亡.且心肌细胞凋亡率、细胞色素C、Caspase-3降低.     

B细胞慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤治疗现状

B细胞慢性淋巴细胞白血病(B-CLL)/小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)是发生于淋巴造血组织的、克隆性持续增生的成熟的小淋巴细胞肿瘤(SLL).目前具有治疗指征的B-CLL/SLL初治患者一线化疗选择包括单一核苷类似物氟达拉滨、烷化剂(苯丁酸氛芥或环磷酰胺)加或不加利妥昔单抗,以及氟达拉滨为主或烷化剂为主联合化疗方案加或不加利妥昔单抗.     

氧自由基清除剂对急性肺损伤大鼠核因子-κB的作用及机制研究

目的 探讨氧自由基清除剂依达拉奉对脂多糖诱导的急性肺损伤大鼠核因子-κB（NF-κB）的作用及机制.方法 将30只雄性SD大鼠随机分为3组（n=10）：对照组（A组）、模型组（B组）、依达拉奉组（C组）.B、C组大鼠腹腔注射脂多糖5 mg/kg进行造模,A组大鼠腹腔注射0.9％氯化钠注射液5 mg/kg进行对照.造模后C组大鼠腹腔注射依达拉奉10 ml/kg进行干预,A、B组大鼠腹腔注射0.9％氯化钠注射液10 ml/kg进行对照.6h后处死大鼠,抽取腹主动脉血液行血气分析测定血氧分压（PO2）,用免疫组织化学法测定肺组织中NF-κB的含量,用ELISA测定TNF-α的含量.结果 B、C组大鼠PO2低于A组,差异有统计学意义（P＜0.05）;C组大鼠PO2的下降幅度小于B组,与B组相比,C组的PO2高,差异有统计学意义（P＜0.05）.B、C组大鼠NF-κB、TNF-α高于A组,差异有统计学意义（P＜0.05）;C组大鼠NF-κB、TNF-α的上升幅度小于B组,与B组相比,C组的NF-κB、TNF-α低,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 依达拉奉对脂多糖致急性肺损伤大鼠肺组织起保护作用,其机制与抑制肺组织NF-κB的表达从而抑制肺部炎症反应有关.     

5-氮杂-2-脱氧胞苷提高结肠癌SW620细胞株对5-FU的化学敏感性

目的 探讨5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-aza-CdR)可能增强结肠癌SW620细胞株对5-氟尿嘧啶(5-FU)化学敏感性的作用.方法 分别用不含药物组(A组)、5-aza-CdR(B组)、5-FU(C组)以及5-aza-CdR联合5-FU(D组)作用人结肠癌SW620细胞株后,光镜下观察细胞形态学改变,MTT法测定细胞的生长情况和流式细胞术检测细胞凋亡.结果 A、B、C、D组细胞存活率分别为100％、(65.85±0.95)％、(45.14±1.44)％、(30.18±0.89)％;B、C、D组细胞存活率均明显低于A组(P＜0.05),D组低于B、C组(P＜0.05).A、B、C、D组细胞凋亡率分别为(4.50±0.61)0％、(16.80±0.57)％、(12.66±0.43)％、(42.07±0.85)％;与A组比较,B、C、D组引起细胞凋亡增加(P＜0.05);与B组、C组比较,D组促进细胞凋亡作用更明显(P＜0.05).结论 5-aza-CdR在体外提高了结肠癌SW620细胞对5-FU的化学敏感性.     

苦参素注射液对环磷酰胺所致大鼠全血细胞及骨髓造血功能影响

目的 探讨苦参素注射液对环磷酰胺所致大鼠全血细胞及骨髓造血功能影响.方法 选择SD雄性大鼠45只,分为对照组、模型组、苦参素组,每组15只.模型组和苦参素组均给予环磷酰胺造模.造模第3天开始给药,苦参素组大鼠给予苦参素注射液.给药结束后,观察三组全血细胞和骨髓造血情况.结果 模型组大鼠体重较对照组显著下降(P＜0.05);苦参素组大鼠体重较模型组显著升高(P＜0.05);模型组白细胞计数和血小板计数分别与对照组比较,均显著下降(P＜0.05);苦参素组白细胞和血小板计数较模型组显著增加(P＜0.05);模型组骨髓有核细胞计数显著低于对照组(P＜0.05);苦参素组骨髓有核细胞数显著高于模型组(P＜0.05).结论 苦参素注射液能够减轻环磷酰胺所致大鼠全血细胞减少,改善环磷酰胺大鼠骨髓造血功能.     

胸腺内注射异基因抗原诱导同种异体肢体移植免疫耐受的实验研究

目的：探讨胸腺内注射异基因抗原对同种异体肢体移植存活的影响。方法：Wistar大鼠为供体,SD大鼠为受体。将SD大鼠随机分成4组,A组（自体肢体移植组）、B组（异体肢体移植组）、C组（异体肢体移植加用免疫抑制剂组）、D组（胸腺内注射组）。术后观察肢体的存活时间,术后7d进行组织学检查。结果：肢体存活时间C组和D组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）,与B组比较,差异有统计学意义（P〈0．01）。组织学检查,D组优于B、C组（P〈0．05）。结论：胸腺内注射异基因抗原可诱导对异体肢体移植的特异性免疫耐受。     

VEGF基因转染间充质干细胞移植与单纯间充质干细胞移植对大鼠心肌梗死的疗效对比

目的探讨VEGF基因转染骨髓间充质干细胞与单纯骨髓间充质干细胞移植对大鼠心肌梗死的疗效。方法将SD大鼠建立心肌缺血模型,1周后随机取30只采用随机分组法分为3组,A组为联合移植组,B组为单纯干细胞移植组,C组为对照组,通过一系列检测,对比3组的疗效。结果 A组的疗效优于B组和C组,B组的疗效优于C组（P〈0.05）。结论 VEGF基因转染骨髓间充质干细胞移植比单纯骨髓间充质干细胞移植的综合疗效好。     

脾窝异位辅助性肝移植治疗大鼠急性肝衰的早期实验研究

目的建立稳定的急性肝功能衰竭和脾窝异位辅助性肝移植大鼠模型,研究移植肝对大鼠急性肝功能衰竭的早期支持作用,探讨原肝再生与移植肝萎缩之间的关系。方法随机抽取近交SD大鼠将其分为：A组（n=40）、切除脾脏和左侧肾脏．将小体积移植肝（30％）植入该受体脾窝;B组（n=20）为对照组．切除85％肝脏＋脾脏＋左侧肾脏。观察两组术后存活率、血生化变化、两肝重量及病理变化。结果A组术后1d、3d、7d、14d存活率明显高于同期B组（P〈0．05）：A组术后肝功能指标随时间进行性下降,术后14d基本接近正常,且大大低于同期B组水平,与同期B组比较有统计学意义（P〈0．05）：A组大鼠原肝随时间进行性增生,移植肝在早期无明显改变,14d左右开始萎缩。结论脾窝辅助性肝移植治疗大鼠急性肝衰方法科学、合理、可行;移植肝对大鼠急性肝衰有明显的支持作用;原肝术后呈进行性增生改变．移植肝在早期无明显变化,随着大鼠原肝再生、肝功能逐步恢复移植肝开始出现萎缩性改变。     

白细胞介素-10联合抗CD40L单克隆抗体对大鼠小肠移植早期排斥反应的研究

目的探讨重组大鼠白细胞介素-10(rIL-10)联合抗大鼠CD40L单克隆抗体对抑制大鼠小肠移植早期排斥反应的作用,为小肠移植免疫提供实验依据。方法将30只雄性SD大鼠和Wistar大鼠(各15只),建立(SD→Wister)大鼠小肠移植模型,随机分为A、B、C3组各10只。A组为生理盐水对照组;B组应用rIL-10;C组应用rIL-10联合抗CD40L单克隆抗体。3组均于术后第2天开始注射。术后第5、7天从3组随机各取5只,取小肠移植物,行组织病理学检查;采受体大鼠的外周血检测IL-2、干扰素-γ(INF-γ)表达水平。结果组织病理学检查:与A组相比,B、C组早期排斥反应明显延迟,且C组早期排斥反应较B组轻;外周血血清学检测:B、C组受体大鼠血清IL-2、INF-γ较A组明显降低,且C组较B组均有不同程度的下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 rIL-10联合抗大鼠CD40L单克隆抗体能有效抑制大鼠小肠移植的早期排斥反应。     

骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑缺血再灌注损伤的修复作用

目的探索骨髓间充质干细胞(MSCS)移植对脑梗死大鼠的脑分化及神经功能的修复作用。方法 30只SD大鼠随机分为假手术组、再灌注组和MSCs移植组。脑缺血再灌注损伤模型采用拴线法建立,术后对各组大鼠进行神经功能损害严重程度评分(NSS)及大脑组织切片观察比较。结果缺血1、7 d MSCs移植组大鼠NSS与另外两组相比无显著性差异(P>0.05),但14、21 d时MSCS移植组NSS均明显低于缺血对照组(P<0.05)。结论 MSCs在损伤后的脑组织内能够存活并且分化为神经元、胶质细胞等,对动物神经损伤后组织重建及功能恢复有一定的修复作用。     

改良大鼠腹腔内心脏移植模型80例复制体会

目的 总结复制改良大鼠腹腔异位心脏移植模型的体会.方法 健康远交系Wistar大鼠为供体,SD大鼠为受体,各80只,将供心移植于受体的腹腔内,供心的升主动脉及右肺动脉分别与受体的腹主动脉和下腔静脉做端侧吻合;术后第3、5、7天各取5例移植心脏行组织学检查.结果 成功建立75例大鼠异位心脏移植模型,供心缺血时间(28±5.5)min,手术成功率93.75%(75/80).大鼠移植后均呈急性排斥反应改变.结论 通过调整动脉吻合口与静脉吻合口管径比率进一步完善改良移植模型,可稳定诱导急性排斥反应发生.     

骨髓间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤后再修复作用的研究

目的探讨间充质干细胞（MSCS）移植对大鼠脊髓损伤后脑源性神经营养因子（BDNF）表达的影响。方法选取SD大鼠4只作骨髓间充质细胞的分离与培养，提取MSCS；制做脊髓横断损伤模型，细胞移植组24只，PBS（磷酸盐缓冲液）液组24只，空白对照组12只。于脊髓损伤后第7天，无菌条件下，细胞移植组以微量注射器缓慢注入含MSCS的培养液5μl，磷酸盐缓冲液组5μl，对照组未加任何干预因素。分别于术后7d、14d、28d麻醉下行心脏灌流固定取T10节段脊髓，细胞移植组与磷酸盐缓冲组取出损伤节段的脊髓，空白对照组于同一节段取出相应脊髓。应用免疫组化法观察MSCS移植后大鼠脊髓损伤区BDNF的表达变化。结果脑源性神经营养因子在正常大鼠脊髓组织中有一定表达，间充质干细胞移植术后7d、14d及28d，细胞移植组脑源性神经营养因子均高水平表达，与缓冲液组相比较差别明显，具有统计学意义。结论间充质干细胞在移植后通过上调脑源性神经营养因子的表达从而促进轴突的再生，可能是治疗脊髓损伤的重要机制。     

大鼠颈部异位心脏移植急性排斥反应的早期病理变化

目的 观察并比较同种同基因和异基因大鼠心脏移植术后早期急性排斥反应的病理改变的动态变化，进一步了解急性排斥反应相关的机理。方法 建立大鼠颈部心脏移植模型，采用HE染色的方法，观察术后不同时间移植心脏的病理改变。结果 同基因大鼠心脏移植组术后1、3、5天心肌可见轻度水肿，心肌细胞结构正常，无变性坏死。异基因大鼠术后病理检查显示排斥反应显著，组织学分级在3A级以上。结论 同基因大鼠心脏移植术后无移植排斥反应发生，异基因大鼠术后3～5天是发生急性排斥反应的高峰期，尤以第5天明显。     

同种异体神经与自体神经瘤联合修复周围神经缺损的运动功能研究

目的探讨通过以优化法处理后的脱细胞同种异体神经和自体神经瘤组成的联合体修复大鼠长段坐骨神经缺损,观察大鼠运动功能恢复情况。方法30只SD大鼠随机分为2组,A组实验组为异体神经与自体神经瘤联合移植组;B组对照组为自体神经移植组。Wistar大鼠作为神经供体,取单侧坐骨神经,制备脱细胞同种异体神经。在术后的不同时间段进行坐骨神经功能指数评价、神经电生理检查。结果A组术后8周电生理检测再生神经的传导速度明显慢于B组(P<0.05),术后16周两组差异无统计学意义(P>0.05)。A组和B组动物的坐骨神经功能指数差异无统计学意义(P>0.05)。结论同种异体神经与自体神经瘤的联合体可以修复周围神经缺损,是神经移植的一种良好替代体。     

苦参碱对大鼠原位肝移植冷缺血再灌注中肝窦内皮细胞损伤的影响

目的：探讨苦参碱（Mat)对大鼠原位肝移植冷缺血再灌注损伤的肝窦内皮细胞的保护作用及其机制,方法：应用大鼠原位肝移植模型,供肝保存5小时,126只大鼠随机分为对照组,Mat40mg/kg治疗组,Mat80mg/kg治疗组和假手术组,分别检测移植术后1、2、4小时血透明质酸及肝组织细胞间粘附分子－1的含量,并观察肝血窦内皮细胞形态学的改变,结果：与对照组合比较,治疗组术后各时点的透明质酸和细胞间粘附分子－1表达均显著降低,肝血窦内皮细胞形态变化也有明显改善。结论：苦参碱在大鼠原位肝移植冷却血再灌注中保护肝血窦内皮细胞免受损伤。