全反式维甲酸对脐血粒-单系祖细胞HOXB6基因表达的影响

目的探讨脐血造血干祖细胞(HSPC)向粒-单系(CFU-GM)增殖过程中HOXB6mRNA表达及全反式维甲酸(ATRA)对HOXB6mRNA表达的影响。方法1.采用造血祖细胞体外培养技术,以ATRA持续干扰人类造血干祖细胞,观察人脐血HSPC经人粒细胞-单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)诱导后,在培养过程第3天,7天和12天的CFU-GM集落生成情况。2.采用实时荧光定量PCR技术(FQ-RT-PCR)检测造血祖细胞增殖分化过程中HOXB6基因的表达水平。3.结果用DNA相对拷贝数和RNA表达相对量(2-△△Ct)表示HOXB6基因相对表达量。结果1.人类造血干祖细胞向粒单系增殖分化过程中,各组细胞HOXB6基因均表达;2.随时间延长,CFU-GM-HOXB6-mRNA在增殖分化的第7天表达最强烈,第12天表达明显减弱;3.与正常对照组比较,ATRA可上调HOXB6基因的表达。结论1.在脐血CFU-GM祖细胞的不同增殖阶段,HOXB6基因呈现持续稳定的表达,提示HOXB6是人类造血干祖细胞向粒单系正常增殖分化过程中的调控基因之一;2.ATRA能显著上调HOXB6基因的表达。     

造血干细胞分化过程中HOXB6基因表达及干预研究

目的探讨脐血造血干细胞(HSC)向粒-单系(CFU-GM)、红系(CFU-E)和淋巴系祖细胞(CFU-TL)增殖分化过程中HOXB6基因的表达情况及全反式维A酸(ATRA)对其的影响。方法1.采用造血干/祖细胞体外培养技术,以ATRA持续干扰人类脐血造血干/祖细胞,观察HSC经人粒细胞-单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)、促红细胞生成素(EPO)和植物血凝素(PHA)分别诱导后,在培养第3天、第7天和第12天的CFU-GM、CFU-E及CFU-TL集落生成情况。2.采用实时荧光定量RT-PCR技术(FQ-RT-PCR)检测造血干细胞增殖分化过程中HOXB6基因的表达水平。结果1.人类造血干细胞向CFU-GM、CFU-E和CFU-TL增殖分化过程中,各组细胞HOXB6基因均有表达。2.随时间推移,CFU-GMHOXB6 mRNA在增殖分化的第3天开始表达,第7天表达最强烈,第12天表达明显减弱;CFU-E HOXB6 mRNA表达在第3天、第7天和第12天均持续增强;而在CFU-TL中,HOXB6 mRNA表达在第7天最强烈,第12天表达减弱。3.与对照组比较,ATRA可上调各组HOXB6基因的表达。结论1....     

同源盒基因B簇在造血干/祖细胞增殖分化中的作用

同源盒(HOX)基因是造血干/祖细胞增殖分化的主控基因。HOX基因参与造血调控且与造血细胞发育有关,影响造血干细胞的数量和红系、粒系、巨核系及淋巴系增殖分化。本文综述HOX基因结构特征及HOX基因B簇中的HOXB2、HOXB3、HOXB4、HOXB6、HOXB8在造血干/祖细胞增殖分化中的作用。     

造血干细胞向淋巴系祖细胞增殖分化过程中HOXC6基因表达的研究

目的探讨人脐血造血干细胞(HSC)向淋巴系祖细胞增殖分化过程中HOXC6基因表达的情况及全反式维甲酸(ATRA)对HOXC6基因表达的影响。方法采用造血干/祖细胞体外培养技术,以ATRA持续诱导人脐血造血干细胞,观察人脐血HSC经植物血凝素(PHA-M)诱导后,在培养过程第3、7和12天的淋巴系祖细胞集落生成情况;采用实时荧光定量PCR技术检测人脐血造血干细胞向淋巴系祖细胞增殖分化过程中HOXC6基因的表达水平。结果人脐血造血干细胞向淋巴系祖细胞增殖分化过程中,HOXC6基因表达呈现时间规律性。结论HOXC6基因在增殖分化的第7天表达最强烈,第12天表达明显降低,提示HOXC6基因与人脐血造血干细胞向淋巴系祖细胞增殖分化过程密切相关,可能是其调控基因之一。ATRA能显著上调HOXC6基因的表达。     

同源盒基因A簇及其与白血病的关系研究进展

同源盒基因(HOX)是一类控制胚胎发育和细胞分化的调节基因,参与造血干/祖细胞的增殖、分化、成熟等的调控。HOX基因A簇是造血干/祖细胞增殖分化的主控基因,可影响造血干细胞的数量,参与造血干细胞向红系、粒系、巨核系与淋巴系的分化,并可能是导致白血病发病的靶基因。现就有关HOX基因A簇及其与白血病的关系研究进展综述如下。     

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目的研究脐血红系祖细胞的HOXB6基因的表达情况以及人类巨细胞病毒(HCMV)感染对红系祖细胞的HOXB6基因表达的影响,以探讨HCMV导致脐血红系祖细胞损伤的机制。方法在泸州医学院附属医院儿科以实时荧光定量PCR技术(FQ-RT-PCR)检测人类巨细胞病毒感染和(或)用全反式维甲酸(ATRA)处理后HOXB6基因的表达水平。结果人脐血红系祖细胞可表达HOXB6基因;HCMV感染后,红系祖细胞HOXB6基因的表达明显下调;ATRA能显著上调红系祖细胞HOXB6基因的表达水平,且能够在一定时间内上调HCMV感染后的红系祖细胞HOXB6基因的表达。结论HCMV感染能诱导脐血红系祖细胞HOXB6的表达下调,HC-MV有可能通过调控HOXB6基因表达异常而引起红系祖细胞的增殖障碍。     

脐血造血干祖细胞增殖过程中人类巨细胞病毒感染对hoxa9、hoxa10基因表达影响的研究

目的在基因水平探讨人类巨细胞病毒(HCMV)感染导致脐血CFU-G损伤的机制,探讨人类脐血造血干细胞(HSC)向粒系祖细胞(CFU-G)增殖过程中hoxa9、hoxa10基因表达的情况。方法从2006年5月至2007年10月收集12例正常足月顺产新生儿断脐后的胎盘段脐血,采用造血干细胞体外培养技术及荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)方法,以HCMV-AD169和(或)全反式维甲酸(ATRA)持续干扰HSC,观察正常对照组、ATRA组、HCMV-AD169组、ATRA+HCMV组的造血干祖细胞经人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)诱导后,在增殖分化过程中第3、7和12天检测CFU-Ghoxa9、hoxa10基因表达情况。结果各组hoxa9、hoxa10基因均在CFU-G增殖分化的第7天表达量最高(P0.01),第12天表达量明显减弱(P0.01),与正常对照组比较,CFU-Ghoxa9、hoxa10基因表达受ATRA(6×10-8mol/L)上调,而受HCMV下调(P0.01),与HCMV组比较,ATRA可上调HCMV感染的CFU-Ghoxa9、hoxa10基因的表达。结论 CFU-G的增殖分化与hoxa9、hoxa10基因的表达相关。HCMV可能通过调控hoxa9、hoxa10基因表达异常引起造血功能异常,ATRA不仅能显著上调正常CFU-Ghoxa9、hoxa10基因的表达,而且能上调HCMV感染的CFU-Ghoxa9、hoxa10基因的表达。     

人类巨细胞病毒对粒单系祖细胞分化过程中HOXB6、A5基因的影响

目的探讨人类造血干细胞(HSPC)向粒单系(CFU-GM)增殖过程中HOXB6、A5基因的表达情况,及人类巨细胞病毒(HCMV)对其的影响。方法采用real-timePCR技术测定正常对照组与HCMV组HSPC向CFU-GM增殖过程中HOXB6、A5基因的表达水平。结果①HOXA5基因表达多为阴性,HOXB6基因在增殖过程的第3天开始表达,第7天增高,第12天显著降低(P<0.05)。②相对于正常组,HCMV感染组HOXB6基因表达下调(P<0.05)。结论HOXA5可能不是人类HSPC向CFU-GM增殖分化过程的主控基因;HOXB6是人类HSPC向CFU-GM定向分化的主控基因之一,其表达呈现时间规律性;HCMV干扰的细胞组HOXB6表达下调的同时,其细胞集落生成较正常组差。提示HCMV可能通过调控HOXB6基因表达异常,引起造血干细胞增殖分化异常。     

经人类巨细胞病毒感染的人脐血造血干细胞向淋巴系造血祖细胞增殖分化过程中同源盒b4、b6基因的表达

目的 探讨经人类巨细胞病毒(HCMV)感染的人脐血造血干细胞(HSC)向淋巴系造血祖细胞(CFU-TL)增殖分化过程中同源盒(hox)b4、b6基因的表达.方法 取健康母亲健康足月顺产儿断脐后的胎盘段脐血,采用造血祖细胞体外培养技术,分组以HCMV-AD169病毒液和(或)全反式维A酸(ATRA)持续干预,观察其不同时间点各组细胞集落生成情况,并在鉴定为CFU-TL集落细胞后不同时间点分别提取各组细胞核精核酸(RNA)并检测其完整性;将提取到的总RNA反转录为互补脱氧核糖核酸,在不同时间点采用实时荧光定量反转录PCR(FQ-RT-PCR)技术检测各组hoxb4、hoxb6基因的表达.结果 1.培养的集落细胞经瑞-姬染色法染色,鉴定为CFU-TL.2.各组所提取的RNA结构基本完整.3.人脐血HSC向CFU-TL增殖分化过程中(体外),各组hoxb4、hoxb6基因均有表达.且随培养时间推移,hoxb4基因表达的相对水平逐渐降低;而hoxb6基因表达的相对水平在培养第7天最高,第12天降低.4.与空白对照组比较,ATRA组的hoxb4、hoxb6基因表达的相对水平显著增高,而HCMV组的hoxb4、hoxb6基因表达的相对水平较低.5.与HCMV组比较,HCMV加ATRA组的hoxb4、hoxb6基因表达的相对水平较高.结论 1.hoxb4、hoxb6基因在人脐血HSC向CFU-TL增殖分化过程中(体外)均有表达,提示其均与淋巴系统造血密切相关.2.HCMV能下调CFU-TL hoxb4、hoxb6基因的表达(体外),提爪HCMV可能通过调控hoxb4、hoxb6基因表达异常导致造血功能异常.3.ATRA能显著上调正常CFU-TLhoxb4、hoxb6基因的表达.实用儿科临床杂志,2009,24(10):757-759     

HCK基因在小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化过程中的表达

目的 探讨HCK基因在小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化过程中的表达及HCK基因在维持胚胎干细胞未分化状态中的意义.方法 培养小鼠胚胎干细胞,并诱导其向心肌细胞分化.抽提其胚胎干细胞未分化及分化第2、4、6、8天的总RNA,应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法对HCK基因mRNA的表达进行半定量分析;同时抽提胚胎干细胞未分化及分化第2、4、6、8天的总蛋白,应用Western-blot方法对HCK蛋白的表达进行半定量分析.采用SPSS 11.5软件进行统计学分析,P＜0.05为有统计学差异.结果 HCK基因mRNA在未分化的胚胎干细胞(D0)及分化的第2天(D2)均有表达,而在分化的第4天(D4)开始已不能检测到有表达,HCK基因mRNA的表达水平随小鼠胚胎干细胞的分化呈急剧下调趋势;HCK蛋白的表达与mRNA的表达相一致,在小鼠胚胎干细胞的分化进程中逐渐下调,至第4天已基本检测不出.结论 HCK基因随着小鼠胚胎干细胞向心肌分化,表达呈下调的趋势,HCK基因可能在维持胚胎干细胞未分化状态中起重要作用.     

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??Abstract??Objective??To observe the expression of hoxa9 gene and hoxa10 gene in the process of the differentiation and proliferation of hematopoietic stem cell to Colony Forming Unit-Granulocyte??CFU-G??in vitro??and to explore the possible mechanism of HCMV-induced maldevelopment to human cord blood Granulocyte Progenitor in genic level. Methods??Twelve cases of cord blood were collected from fetal placenta umbilical vein. By the colony culture in vitro?? the impact of HCMV-AD169 and ATRA on the CFU-G colony formation was observed?? then detect the expression of hoxa9 and hoxa10 genes in the differentiation progress of Hematopoietic Stem Cell ??HSC?? to CFU-G affected by HCMV and/or ATRA on the third?? seventh?? and twelfth day. Results??Homeobox genes did have a regulatory function in the differentiation process of hematopoiesis. Compared with the expression of hoxa9 and hoxa10 genes on day 3?? the quantity of hoxa9 and hoxa10 genes was obviously higher on day 7 and lower on day 12 respectively in each group. Compared with the expression of hoxa9 and hoxa10 genes of normal group?? the expression of hoxa9 and hoxa10 of the group ATRA was up-regulated remarkably??while the expression of hoxa9 and hoxa10 of the group HCMV was down-regulated. ATRA was against the down-regulated effect caused by HCMV. Conclusion??The hoxa9 and hoxa10 gene are correlated to the manipulation of the proliferation and differentiation of granulocyte progenitor cell. The abnormal expression of hoxa9 and hoxa10 gene induced by HCMV may play an important role in HCMV-induced abnormal hematogenic damage. ATRA?? 6×10-8 mol/L??can up-regulate the expression of hoxa9 and hoxa10 genes??which confirms the theory that the normal hematopoietic lineage determination and maturation rely on the stable and consistently expression of Homeobox genes.     

丹参酮ⅡA对HL-60细胞人端粒酶反转录酶表达的影响

目的 研究丹参酮ⅡA(TanⅡA)对HL-60细胞的人端粒酶反转录酶(hTERT)表达的影响,探讨TanⅡ诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制.方法 用RPMI 1640培养HL-60细胞,培养24 h后分为3组[TanⅡA组、全反式维A酸(ATRA)组、对照组],分别加入500 μg·L-1TanⅡA、500 μg·L-1ATRA和0.1 mL·L-1二甲基亚砜治疗5d.加药前和加药后每天分别收集细胞,采用锥虫蓝染色后计数活细胞,流式细胞仪(FCM)检测HL-60细胞凋亡率,半定量RT-PCR法测定HL-60细胞hTERT相对表达水平.结果 与对照组比较,药物治疗2d后,TanⅡA组和ATRA组HL-60细胞的生长均明显受到抑制(Pa＜0.05),TanⅡA组和ATRA组的抑制作用比较差异无统计学意义(p＞0.05).TanⅡA组和ATRA组在药物治疗2d后细胞凋亡率分别为32.11％,23.31％,均明显高于对照组(6.08％)(Pa＜0.05),且细胞凋亡率逐日上升,而对照组细胞凋亡率无明显变化.药物处理1d后,TanⅡA组和ATRA组的HL-60细胞hTERT相对表达水平均明显低于对照组(Pa＜0.05),且表达水平逐日下降,而对照组表达水平无明显变化.结论 丹参酮ⅡA抑制HL-60细胞生长、诱导细胞凋亡可能与下调hTERT基因表达水平有关.     

全反式维甲酸对K562细胞的诱导分化作用

目的：全反式维甲酸(ATRA)对肿瘤细胞具有广泛的抑制增殖、促进分化作用。本研究通过体外培养检测ATRA对K562细胞是否具有诱导分化作用。方法：采用联苯胺染色、瑞氏染色、非特异性酯酶染色、硝基四唑氮蓝还原试验4种不同的染色方法及流式细胞术,观察经1μmol/L及2.5μmol/L ATRA诱导1d,4d,5d后,K562细胞出现诱导分化特征。结果：1μmol/L及2.5μmol/L ATRA均可诱导K562细胞向粒系分化。培养4d,1μmol/L ATRA组61.5％的K562细胞、2.5μmol/L组39％的K562细胞显示出向粒系成熟方向分化;培养5d,处理组的分化细胞数仍明显高于对照组(P<0.05),但两种浓度ATRA的诱导分化强度无统计学差异(P>0.05)。且均未出现向红系或单核细胞方向分化的特征。流式细胞仪检测ATRA诱导前后CD13及CD71的表达,1μmol/L ATRA诱导K562细胞1d,CD13抗原表达阳性率为8.0％,2.5μmol/L组则为6.7％,均高于对照组(2.1％)。培养5d,1μmol/L和2.5μmol/L AFRA组的CD13分别升高到28.1％,37.8％,而CD71则分别下降至1.2％和0.9％。与对照组比差异均具有显著性(P<0.05)。结论：ATRA可诱导K562细胞向粒系成熟方向分化。     

缺血启动未成熟大鼠脑白质内源性修复功能的研究

目的：探讨缺血启动未成熟脑白质的内源性修复机制。方法：5日龄 Sprague-Dawley 新生大鼠随机分为假手术（Sham）组和PVL组。分别于建模后7 d及21 d光镜、电镜下评估脑白质病变及髓鞘形成情况,免疫组化检测脑白质O4+少突胶质细胞（OL）前体,观察SVZ区祖细胞的激活、增殖、迁移和分化情况。结果：与Sham组比较,PVL组在建模后7 d和21 d光镜下脑白质病理均呈轻或重度病变;病理评分均明显增高;髓鞘形成数量明显减少,厚度变薄;免疫组化显示O4+OL前体明显减少。建模48 h后,PVL组SVZ 区 BrdU、NG2共阳性祖细胞明显增殖并向脑室周围迁移,至7 d达到高峰;从72 h开始,脑室周围出现呈BrdU、O4共阳性OL前体,至21 d,新生OL前体明显多于同时段Sham组。结论：缺血可启动新生大鼠脑白质的内源性修复机制,诱导SVZ 区胶质源性神经祖细胞激活、增殖、迁移至脑室周围和分化为OL前体。