紫杉醇诱导HL-60细胞凋亡对Bcl-2基因家族的影响

,而此凋亡可能与Bad的表达上调和Bcl-2基因表达下调有关,而与Bax和Bcl-xl的表达无关.     

SeO2诱导白血病细胞凋亡及对凋亡相关基因Bcl-2和p53表达调控的影响

目的：研究SeO2对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4、红白血病细胞K562、急性粒细胞白血病细胞株HL-60的增生、凋亡及Bcl-2和p53表达水平的影响。方法:采用流式细胞术测定细胞的凋亡率及Bcl-2和p53的表达。结果:10和30mmol／L SeO2能抑制3种细胞增生。30mmol／L SeO2作用48h能使54．0％的NB4细胞、46．5％的K562细胞和49．6％的HL-60细胞发生凋亡；能使NB4和K562细胞Bcl-2表达显著下降、促进p53的表达。结论:SeO2对3种白血病细胞均有诱导凋亡作用，在凋亡过程中涉及了细胞内凋亡相关基因Bcl-2和p53表达和调控。     

蝎毒抗癌多肽对CNE-2Z细胞生长周期移行和p53表达的影响

目的 :观察蝎毒抗癌多肽 (APBMV)对CNE 2Z细胞生长周期和p5 3表达的影响。方法 :采用流式细胞仪双标法。结果 :APBMV处理CNE 2Z细胞 48h后 ,进入S期的细胞明显减少 ,处于G1期和G2期的细胞明显增多 ,APBMV 16mg/L处理CNE 2Z细胞 48h后 ,G1期、S期和G2期细胞的百分比分别为 5 9.7%、32 .3 %和 7.9% ,空白对照组的百分比分别为 5 3 .3%、45 .2 %和 1.5 % ,二者比较差异有显著性 (P <0 .0 1或P <0 .0 0 1)。空白对照组CNE 2Z细胞P5 3蛋白 2 4h和 48h表达量处于较高水平 (2 7.2 3± 0 .93)和 (31.6 7± 1.75 ) ,经APBMV处理 2 4h或 48h后 ,P5 3蛋白表达量明显下降 ,与空白对照组相比差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论 :APBMV能够阻止CNE 2Z细胞周期的移行 ,并抑制抑癌基因p5 3的表达     

马钱子碱对人白血病HL-60细胞Bcl-2与Bax基因表达的影响

目的:观察Bcl-2与Bax基因在马钱子碱诱导人白血病细胞株HL-60凋亡作用中的表达.方法:(1)用不同浓度马钱子碱溶液处理HL-60细胞,24、48、72 h后MTT法检测各组细胞的生长抑制率并计算IC50值;(2)用AO/EB染色法荧光显微镜下观察细胞的形态学变化;(3)用RT-PCR技术检测Bcl-2与Bax基因的表达.结果:马钱子碱可明显抑制HL-60细胞增殖并呈剂量和时间依赖性;以320 μg/mL马钱子碱作用48 h后大部分细胞核染色质呈桔红色,细胞核呈固缩状或圆珠状凋亡形态;不同浓度马钱子碱处理细胞后,其Bcl-2基因的表达随马钱子碱浓度的增加而降低,Bax基因的表达随马钱子碱浓度的升高而升高.结论:马钱子碱可明显抑制人白血病细胞株HL-60的增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2基因的表达和上调Bax基因的表达有关.     

蝎毒抗癌多肽对CNE-2Z细胞生长周期移行和p53表达的影响

目的观察蝎毒抗癌多肽(APBMV)对CNE-2Z细胞生长周期和p53表达的影响.方法采用流式细胞仪双标法.结果APBMV处理CNE-2Z细胞48h后,进入S期的细胞明显减少,处于G1期和G2期的细胞明显增多,APBMV16mg/L处理CNE-2Z细胞48h后,G1期、S期和G2期细胞的百分比分别为59.7%、32.3%和7.9%,空白对照组的百分比分别为53.3%、45.2%和1.5%,二者比较差异有显著性(P<0.01或P<0.001).空白对照组CNE-2Z细胞P53蛋白24h和48h表达量处于较高水平(27.23±0.93)和(31.67±1.75),经APBMV处理24h或48h后,P53蛋白表达量明显下降,与空白对照组相比差异有显著性(P<0.01).结论APBMV能够阻止CNE-2Z细胞周期的移行,并抑制抑癌基因p53的表达.     

SeO2诱导白血病细胞凋亡及对凋亡相关基因Bcl-2和p53表达调控的影响

目的 研究SeO₂对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4、红白血病细胞K562、急性粒细胞白血病细胞株HL-60的增生、凋亡及Bcl-2和p53表达水平的影响。方法 采用流式细胞术测定细胞的凋亡率及Bcl-2和p53的表达。结果 10和30mmol/LSeO2能抑制3种细胞增生。30mmol/LSeO₂作用48h能使54.0%的NB4细胞、46.5%的K562细胞和49.6%的HL-60细胞发生凋亡;能使NB4和K562细胞Bcl-2表达显著下降、促进p53的表达。结论 SeO₂对3种白血病细胞均有诱导凋亡作用,在凋亡过程中涉及了细胞内凋亡相关基因Bcl-2和p53表达和调控。     

冬凌草甲素对HL-60细胞p53表达及细胞周期的影响

目的探讨冬凌草甲素对HL-60细胞p53表达及细胞周期的影响。方法通过PI染色,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡峰,并以RT-PCR检测p53基因的表达。结果流式细胞仪分析显示,冬凌草甲素处理后使细胞周期发生变化:G1期、S期细胞的比例减少,G2/M期细胞的比例增加,凋亡的细胞数比例增多,且随着药物浓度的增加而逐渐增加。RT-PCR检测结果显示,20μmol/L冬凌草甲素作用后,与对照组相比,HL-60细胞p53 mRNA水平显著升高,且随时间延长表现得更为明显。结论冬凌草甲素能使细胞周期发生变化和p53基因的上调,从而诱导细胞发生凋亡。     

富铁对HL-60细胞Bcl-2基因表达的影响

目的 :探讨富铁对HL 60细胞Bcl 2基因表达的影响 ,揭示铁促进肿瘤细胞增殖的机制。方法 :体外加入不同浓度的三氯化铁培养HL 60细胞 6h、12h、2 4h、48h ,亲和免疫组化LSAB法检测HL 60细胞Bcl 2基因表达。结果 :Bcl 2表达在 5 0 μmol/L、10 0 μmol/L的三氯化铁作用HL 60细胞 12h、2 4h和 48h时最高 ,与对照组相比有差异 (P <0 0 5 )。结论 :铁可促进肿瘤细胞生长 ,铁诱导Bcl 2表达增高可能是铁促进HL 60细胞增殖的机制之一     

Bcl-2shRNA表达载体的构建及其对HL-60细胞生长的抑制作用

目的构建Bcl-2短发夹样RNA（short hairpin RNA,shRNA）序列的表达载体并研究其对HL-60细胞生长的抑制作用。方法化学合成2段编码短发夹RNA序列针对Bcl-2基因66个碱基的寡核苷酸,克隆到Pgenesil-1载体的u6启动子的下游,重组构建RNAi质粒,同时设立阴性对照;然后经酶切电泳和DNA测序鉴定。采用脂质体介导的转染方法将重组的RNAi质粒转入HL-60细胞后,采用RT-PCR检测Bcl-2mRNA表达水平;采用MTT法测定细胞增殖情况。结果重组构建的两个Bcl-2 shRNA1、shRNA2载体经双酶切电泳分析及插入基因片段序列分析,结果表明66个碱基成功插入到预期位点,并且序列完全一致。转染Bcl-2 shRNA1、shRNA2载体分别入HL-60细胞24h,其Bcl-2 mRNA表达水平均降低,但转染Bcl-2 shRNA1引起的Bcl-2 mRNA表达下降更为明显,分别与转染阴性shKNA及未转染组比较,有显著性差异（P〈0.05）。MTT测定显示转染Bcl-2 shRNA1、shRNA2载体入HL-60细胞在72、96h细胞生长明显受到抑制,分别与转染阴性shRNA、单纯脂质体组及未转染组比较,差异有显著性（P〈0.05）。结论成功地构建了两个Bcl-2 shRNA1、shRNA2表达载体,且Bcl-2 shRNA可序列特异性地抑制HL-60细胞的生长。     

阿司匹林诱导HL-60细胞凋亡的实验研究

目的:研究非甾体类抗炎药阿司匹林(ASA)对体外诱导人急性白血病细胞的凋亡作用及其相关机制.方法:采用MTT法测定ASA对HL-60细胞的抑制率,通过光镜、流式细胞仪(FCM)、原位末端标记法(TUNEL)观测ASA诱导HL-60细胞凋亡,半定量RT-PCR检测基因表达.结果:浓度为2.5～10mmol/L的ASA能抑制HL-60细胞增殖,诱导细胞凋亡;ASA与阿糖胞苷(Ara-c)抗肿瘤作用具有相加效应;ASA可下调HL-60细胞c-myc mRNA水平表达.结论:一定浓度ASA在体外有抑制急性白血病细胞生长和诱导细胞凋亡的作用,其机制可能与c-myc基因下调有关.     

EGCG通过下调Bcl-2诱导KG1A白血病细胞凋亡

目的研究EGCG对KG1A白血病细胞的作用,探讨其作用机制。方法使用人的白血病细胞株KG1A细胞。MTT细胞毒性测定评价对白血病细胞的作用,使用annexin v染料标记细胞,应用流式细胞仪检测细胞凋亡。RT-PCR检测KG1A细胞Bcl-2家族mRNA的表达。结果EGCG引起KG1A细胞活性的下降。EGCG诱导KG1A细胞凋亡,且呈时间依赖性。EGCG诱导凋亡与下调Bcl-2和Bcl-xl有关。结论EGCG可以通过下调Bcl-2和BCl-xl诱导KG1A细胞凋亡。这些结果有助于提供新的有效联合方案,尤其是针对复发难治白血病的治疗。     

米托蒽醌对HL-60细胞生长的影响

目的：探索米托蒽醌（MTN）对HL－60细胞生长的影响。方法：取对数生长期HL－60细胞，不同浓度MTN作用不同时间后，利用MTT法观察MTN对HL－60细胞的抑制效应，透射电镜，DNA电泳观察MTN作用HL－60细胞后其形态学及DNA的变化。结果：（1）毫微克级的MTN对HL－60细胞有明显的抑制效应。且此效应具有时间，剂量依赖关系。（2）MTN作用后的HL－60细胞透射电镜观察胞膜完整，出现核碎裂，凋亡小体等形态学特征。DNA电泳出现200bp左右的梯形条带。结论：MTN对HP－60细胞有明显的抑制作用。小剂量的MTN对HL－60细胞以诱导细胞凋亡为主，大剂量的MTN对HL－60细胞以细胞毒作用为主。     

冬凌草甲素诱导GBC-SD细胞凋亡及对bcl-2,p53,fas/apo-1和c-myc表达的影响

目的:探讨冬凌草甲素(RuA)对人胆囊癌细胞株(GBC-SD)诱导凋亡的机制。方法:用不同浓度的RuA处理GBC-SD细胞,MTT法检测RuA对GBC-SD细胞生长的抑制作用,通过倒置显微镜、扫描电子显微镜、流式细胞术、荧光分光光度法观察凋亡细胞的形态结构变化,定量检测细胞凋亡及半胱天冬酶(caspase-3)的活性,免疫组化法检测核磷蛋白p53、bcl-2蛋白、fas/apo-1及c-myc蛋白的表达。结果:RuA能诱导细胞凋亡,并呈浓度依赖性。药物作用24h后,对照组和实验组细胞中bcl-2,p53,fas/apo-1和c-myc蛋白的表达差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:RuA诱导GBC-SD细胞凋亡与bcl-2,p53,fas/apo-1和c-myc的表达有关。     

神经元凋亡与颞叶癫痫患者海马硬化的关系

目的:探讨神经元凋亡与颞叶癫痫患者海马硬化的关系。方法:取24例颞叶癫痫患者手术切除标本,用光镜、电镜及原位末端标记(TUNEL)方法检测神经细胞凋亡;应用免疫组化方法检测细胞凋亡相关基因表达产物bcl-2、bax及P53蛋白的表达。结果:对照组患者光镜、电镜检查及TUNEL染色均未发现凋亡的神经细胞;癫痫组患者光镜检查及TUNEL染色未发现凋亡的神经细胞,但在电镜检查的8例标本中,3例有少量早期凋亡征象的神经元。免疫组化染色结果表明,对照组患者脑组织内bcl-2蛋白无表达,癫痫组患者脑内bcl-2蛋白表达明显增强(P<0.01);bax蛋白在癫痫组与对照组中均微弱表达,两者差异无统计学意义(P>0.05);P53蛋白在对照组中无表达,在癫痫组中表达明显增强(P<0.05)。结论:神经元凋亡部分参与了癫痫患者海马硬化的形成。bcl-2、P53蛋白在这一过程中可能发挥了作用。     

P53、Bcl-2和C-myc基因表达在心室重构中的作用

目的探讨心肌缺血再灌注损伤导致心室重构的发生机制。方法建立家兔心肌缺血再灌注模型,采用免疫组化,HE染色,血流动力学检测等技术,观察p53、bcl-2c、-myc基因蛋白表达在心肌重构中的作用。结果(1)p53、bcl-2基因蛋白共同调控心肌细胞凋亡,在IR后4 h达到高峰,与对照组比较有极显著的差异(P<0.01)。影响了血流动力学改变。(2)c-myc基因蛋白在缺血再灌注后4~8 h达到高峰。与对照组比较有极显著的差异(P<0.01)。导致心肌细胞肥大。结论在心肌缺血再灌注过程中p53、bcl-2、c-myc基因蛋白的表达导致了心室的重构。     

PUVA诱导HL-60细胞凋亡时对Fas、FasL表达的影响

[目的]探讨补骨脂素（PSO）加长波紫外线（UVA）光化学疗法（PUVA）诱导人白血病细胞HL-60凋亡时对Fas、FasL表达的影响。[方法]以HL-60细胞为研究对象。以细胞凋亡率、电镜下细胞超微结构改变以及细胞Fas、FasL在基因、蛋白水平的表达为检测指标,观察中药补骨脂中提取的PSO加波长为360nm的UVA对人白血病细胞诱导凋亡的作用以及部分作用途径,并采用多因素方差分析法进行统计学处理。[结果]（1）PSO、UVA照射及PUVA均可诱导HL～60细胞发生凋亡,对照组、80μg／mL PSO组、5min UVA组及PUVA（80μg／mL PSO＋5min UVA）组凋亡率分别为（10．60±0．31）％、（26。94±0．26）％、（28．53±0．05）％、（37．72±0．09）％,各组间P〈0．01,PUVA的作用明显强于前两者。（2）电镜下观察经PUVA处理后的HL-60细胞超微结构,可见明显的凋亡形态学改变。（3）PSO、UVA照射及PUVA均可上调HL-60细胞Fas在基因、蛋白水平的表达,下调FasL在基因、蛋白水平的表达。上述四组FasmRNA的表达量分别为（8．40±0．59）×10^3、（1．62±0.36）×10^5、（1.50±0.26）×10^5、（7．88±0．38）×10^6拷贝数／μg;Fas蛋白的表达量分别为（3．29±0．39）％、（18．73±1．22）％、（18．17±1．07）％、（47．03±1．36）％;FasL mRNA的表达量分别为（8．69±0．44）×10^7、（2．71±0．29）×10^7、（2.64±0．31）×10^7、（2．61±0.33）×10^5拷贝数/μg;FasL蛋白的表达量分别为（58．67±1．75）％、（37．40±1.73）％、（33．90±1．90）％、（15．60±1．42）％,各组间P〈0．01,PUVA的作用明显强于前两者。[结论]（1）PUVA可诱导白血病细胞HL-60发生凋亡,作用强于PS0及UVA照射。（2）PUVA诱导HL-60凋亡的途径之一为上调HL-60细胞FasmRNA表达水平,下调FasL mRNA表达水平。     

对映-贝壳杉烷型二萜化合物Wangzaozin A对人早幼粒白血病HL-60细胞生长抑制和凋亡诱导的作用

目的 研究对映-贝壳杉烷型二萜Wangzaozin A对人早幼粒白血病细胞HL-60生长抑制、周期阻滞、凋亡诱导作用以及相关的机制.方法 利用倒置显微镜观察和台盼蓝排染法检测了Wangzaozin A对HL-60细胞生长的影响;采用流式细胞术和吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双染法检测化合物对细胞周期分布的影响以及诱导HL-60细胞凋亡的能力;进一步利用单细胞凝胶电泳法测试化合物对细胞DNA的损伤.结果 1～4 μmol/L的Wangzaozin A对HL-60细胞具有较强的生长抑制作用,较高浓度(3 μmol/L和4μmol/L)和较长处理时间(48～72 h)有较强的致死效应;1～ 2.5μmol/L药物处理细胞24h或48 h条件下细胞周期分布主要表现为G1期阻滞;4μmol/L药物处理12 ～60 h条件下细胞周期分布主要表现为很强的S期阻滞;2～4μmol/L药物作用24 h或48 h可诱导凋亡产生,其凋亡率呈显著水平(P＜0.01),相同条件下,药物对细胞DNA的损伤与对照相比差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 该化合物对HL-60细胞DNA的损伤作用极可能是引起细胞生长抑制、周期阻滞及凋亡的直接原因.