1,2,3,4,6-O-五没食子酰基葡萄糖对MPP+诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的 考察1,2,3,4,6-O-五没食子酰基葡萄糖(1,2,3,4,6-penta-O-galloyl-β-D-glucose,β-PGG)对MPP⁺诱导的帕金森病细胞模型中PC12细胞凋亡的保护作用及其机制研究。方法 PC12细胞孵育于高糖DMEM培养基中,在药物处理前1周,将神经生长因子(NGF)加入培养基中,使培养基中NGF的终质量浓度为50 ng/mL。将细胞分为对照组、MPP⁺组以及50 μmol/L β-PGG预处理7、12、20、30 h组,观察预处理不同时间对MPP⁺中PC12细胞存活影响。采用台盼蓝染色法检测细胞死亡情况,MTT法检测细胞活力,免疫印迹法检测Bcl-2、Bax、Fas、FasL、procaspase-3、procaspase-8、procaspase-9蛋白表达情况,并检测caspase-3、caspase-8、caspase-9活力。结果 对照组PC12细胞死亡率最低,MPP⁺组PC12细胞死亡率最高,从β-PGG预处理12 h起PC12细胞死亡率较MPP⁺组均明显降低(P< 0.01)。MPP⁺组PC12细胞活力最低,50 μmol/L β-PGG预处理12 h时PC12细胞活力进一步增高,预处理20 h时细胞活力最高。β-PGG预处理5 h后即可见Bcl-2、procaspase-3、procaspase-8、procaspase-9蛋白含量增加,至15 h时增加达到高峰;与之相反的是,β-PGG预处理5 h后即可见Bax、Fas、FasL蛋白含量减少,至30 h时达最少。50 μmol/L β-PGG预处理PC12细胞15 h后caspase-3、caspase-8、caspase-9的活力分别为MPP⁺组的36.5%、40.2%、42.2%。结论 β-PGG对MPP⁺诱导PC12细胞凋亡具有保护作用,其机制是通过增强Bcl-2的表达、抑制Bax、Fas、FasL的表达以及降低caspase-3、caspase-8、caspase-9的活力实现了抑制MPP⁺引起的PC12细胞凋亡,促进PC12细胞的存活。     

人参皂甙Rg1对抗多巴胺诱导的PC12细胞凋亡

目的:探讨外源性多巴胺诱导PC12细胞凋亡以及人参皂甙Rg1保护作用的分子机制。方法:流式细胞仪定量测定PC12细胞的凋亡和Bcl-2、Bax蛋白的表达;电子显微镜观察PC12细胞的形态;凝胶电泳评价DNA的断裂;荧光分光光度计法测定caspase-3的活力;半定量RT-PCR分析bcl-2和bax mRNA的表达。结果:多巴胺(浓度为0.15、0.30、0.45和0.60mmol/L)诱导PC12细胞凋亡,各剂量组细胞凋亡率分别从对照组1.1％±0.4％增加到41％±3％,46.4％±2.7％,53％±3％和64.5％±2.7％;人参皂甙Rg1 10μmol/L预处理24h后,较多巴胺0.45mmol/L单独处理时,PC12细胞的凋亡率和caspase-3的活力分别从53％±3％和683±8(平均荧光强度)下降到1.9％±0.6％和325±5,Bcl-2蛋白阳性率从14.3％±1.1％增加到25.9％±1.6％,Bax蛋白阳性率从48％±3％下降到35％±3％。结论:人参皂甙Rg1通过抑制cas-pase-3的激活并调节Bcl-2和Bax两者间蛋白的比值对抗多巴胺对PC12细胞凋亡的诱导作用。     

氧化槐果碱对胃癌MGC80-3细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察氧化槐果碱对胃癌MGC80-3细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法 采用CCK-8、Hoechest 33342染色、倒置显微镜和流式细胞术测定氧化槐果碱干预后对细胞的增殖、凋亡的影响,qRT-PCR检测胃癌MGC80-3细胞中Bcl-2、Bax mRNA水平,Western blot法检测胃癌MGC80-3细胞中Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白水平。结果 氧化槐果碱能抑制胃癌MGC80-3细胞增殖（P<0.05）,并具有时间和浓度依赖性。0.48,0.95,1.91 mmol·L^-1氧化槐果碱能诱导细胞凋亡（P<0.05）,凋亡抑制剂Z-DEVD-FMK能逆转氧化槐果碱的凋亡诱导作用,0.95,1.91 mmol·L^-1氧化槐果碱能上调Bax的mRNA水平,下调Bcl-2的mRNA水平,差异均有统计学意义（P<0.05）。0.95,1.91 mmol·L^-1氧化槐果碱能上调Bax、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9的蛋白水平,下调Bcl-2蛋白水平,差异均有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。凋亡抑制剂Z-DEVD-FMK能逆转氧化槐果碱对Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白的影响。结论 氧化槐果碱能通过调节Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9的表达水平,抑制胃癌MGC80-3细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

芍药苷对6羟基多巴胺致PC12细胞损伤的保护作用

目的:探讨芍药苷对6羟基多巴胺(6-OHDA)致大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)的细胞损伤保护作用及其可能机制.方法:体外培养PC12细胞,用6-OHDA建立细胞损伤模型.MTT和乳酸脱氢酶(LDH)活性测定存活率;RT-PCR检测Bcl-2、Bax的mRNA表达,Hochest33342/PI双染检测细胞凋亡率.结果:25、50、100 μmol·L-1芍药苷可显著减少6-OHDA诱导的PC12细胞凋亡,降低LDH漏出率,增加Bcl-2 mRNA和减少Bax mRNA表达.结论:芍药苷可显著减少6-OHDA诱导的PC12细胞凋亡,其作用机制可能与调节Bax、Bcl-2表达有关.     

尿石素A对乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡的影响及其机制研究

目的 研究尿石素A对乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡的影响并探讨其作用机制。方法 CCK-8法考察不同浓度尿石素A作用12、24、36、48 h对MCF-7细胞增殖能力的影响;细胞凋亡染色法考察20、40 μmol/L的尿石素A对MCF-7细胞凋亡的影响;实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测c-Myc、Cyclin D1、Bcl-2、Bax mRNA的表达水平;Western blotting法检测c-Myc、Cyclin D1、Bcl-2、Bax蛋白的表达水平。结果 尿石素A对MCF-7细胞增殖具有抑制作用且呈时间浓度相关性;细胞凋亡染色显示,20、40 μmol/L尿石素A给药后均能够诱导MCF-7细胞凋亡;RT-qPCR及Western blotting结果显示,20、40 μmol/L尿石素A能够显著降低MCF-7细胞中c-Myc、Cyclin D1、Bcl-2 mRNA及蛋白的表达水平（P<0.05、0.01）,升高Bax mRNA及蛋白的表达水平（P<0.05、0.01）。结论 尿石素A具有抑制MCF-7细胞增殖并诱导其凋亡的作用,其作用机制可能与抑制c-Myc、Cyclin D1、Bcl-2表达,升高Bax表达水平有关。     

异丙肾上腺素对大鼠心肌细胞凋亡相关基因表达的影响

目的　研究异丙肾上腺素(isoprenaline, Iso)诱导大鼠急性心肌缺血与心肌细胞凋亡相关基因表达的关系。方法　sc大剂量Iso建立大鼠急性心肌缺血模型。RT-PCR法检测凋亡相关基因Fas,CPP32,Bcl-2和Bax在心肌的表达。并用同样方法,观察苦豆碱(aloperine, Alo, 20 mg.kg^-1)和普萘洛尔(propranolol, Prop, 2 mg.kg^-1)对急性心肌缺血大鼠心肌细胞凋亡相关基因表达的影响。结果　急性心肌缺血模型大鼠心肌的Fas,CPP32和Bcl-2基因表达显著增加,Bax变化不明显;Alo和Prop能降低缺血心肌中Fas和CPP32基因的表达,增加Bcl-2基因的表达,且Prop对Bax表达有下调作用。结论　sc大剂量Iso可诱导大鼠心肌细胞凋亡相关基因异常表达;Alo和Prop对该模型大鼠心肌相应基因的异常表达亦有影响。     

人参皂苷Rg1对抗多巴胺对PC12细胞凋亡的诱导作用

通过测定细胞的凋亡率 ,内源性NO的水平和iNOSmRNA的表达及半胱天冬酶 3的活性 ,探讨人参皂苷Rg1对抗多巴胺对PC12细胞凋亡诱导作用的可能机理 .结果表明多巴胺 (0 .15～ 0 .60mmol·L- 1)可诱导PC12细胞凋亡 ,预先经过 10 μmol·L- 1Rg 1处理后 ,PC12细胞的凋亡率显著下降 (P <0 .0 0 1) ,同时NO2- 水平和iNOSmRNA表达水平及半胱天冬酶 3活力较单纯多巴胺处理组明显降低(P <0 .0 0 1) .结果提示 ,Rg1减少细胞内源性NO的生成及抑制半胱天冬酶 3的活化可能是Rg1对抗多巴胺诱导PC12细胞凋亡的重要机理 .     

香叶木苷对人肝癌HepG2细胞凋亡及Bcl-2/Bax基因表达的影响

目的 研究香叶木苷对人肝癌HepG2细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用,并探讨其相关分子机制。方法 将HepG2细胞分为对照组和香叶木苷组,香叶木苷组分别加入终质量浓度为1、5、25 μg/mL的香叶木苷DMSO溶液,对照组加入等体积的DMSO。药物处理24 h后,台盼蓝染色及Live/Dead染色检测香叶木苷对HepG2细胞活性的影响;CCK-8及EdU染色检测香叶木苷对HepG2细胞增殖的影响;TUNEL染色检测香叶木苷对HepG2细胞凋亡的影响;实时荧光定量PCR（qRTPCR）及Western blotting法检测香叶木苷对Bcl-2、Bax mRNA和蛋白水平的影响。结果 与对照组比较,香叶木苷降低HepG2细胞活力、抑制细胞增殖,5、25 μg/mL组差异显著（P<0.05、0.01、0.001）;促进HepG2细胞凋亡,各浓度组均差异显著（P<0.01、0.001）,且均呈剂量相关性。经5 μg/mL香叶木苷处理后,HepG2细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2的mRNA水平显著降低（P<0.001）,而促凋亡蛋白Bax的mRNA水平显著升高（P<0.001）,Bcl-2/Bax蛋白水平显著降低（P<0.001）。结论 香叶木苷抑制HepG2细胞活力和增殖、促进凋亡,作用机制与调控Bcl-2/Bax表达有关。     

乌骨藤中C21甾体苷诱导SACC-83和SACC-LM细胞凋亡的作用及其机制研究

目的 研究乌骨藤提取物C₂₁甾体苷对唾液腺腺样囊性癌（salivary adenoid cystic carcinomacv,SACC）低侵袭细胞株（salivary adenoid cystic carcinoma-83,SACC-83）和肺高转移细胞株（SACC-LM）增殖抑制和诱导凋亡的作用及其机制。方法 用不同浓度（5,10,20,40,60,80,100 μmol·L^-1） C₂₁甾体苷处理SACC-83和SACC-LM细胞48 h后,MTT法检测细胞活力,并计算药物的IC₂₀和IC₅₀;细胞克隆形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测SACC-83及SACC-LM细胞凋亡情况;实时荧光定量PCR和Western blot检测SACC-83和SACC-LM细胞Bcl-2、Bax、caspase 3的mRNA和蛋白的表达。结果 不同浓度的C₂₁甾体苷降低SACC-83和SACC-LM细胞活力,抑制细胞增殖,并且作用于SACC-83细胞C₂₁甾体苷的IC₂₀浓度为7.49 μmol·L^-1,IC₅₀浓度为38.34 μmol·L^-1;作用于SACC-LM细胞的C₂₁甾体苷IC₂₀浓度为9.30 μmol·L^-1,IC₅₀浓度为46.04 μmol·L^-1;细胞克隆集落形成明显减少。C₂₁甾体苷IC₂₀浓度分别促进SACC-83及SACC-LM细胞凋亡,且随着给药时间延长,凋亡率增加,具有显著性差异（P<0.05,P<0.01）。经7.49,9.30 μmol·L^-1 C₂₁甾体苷分别处理SACC-83及SACC-LM细胞后,Bcl-2的mRNA及蛋白水平显著降低（P<0.01）,而Bax、Caspase 3的mRNA和蛋白水平显著升高（P<0.05）。结论 乌骨藤C₂₁甾体苷抑制SACC-83及SACC-LM细胞增殖、促进凋亡,其作用机制可能与调控Bcl-2、Bax和Caspase 3表达有关。     

芍药苷对醋酸铅诱导海马神经元凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响

目的 探讨芍药苷(paeoniflorin,PF)对醋酸铅诱导海马神经元凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。方法 分离培养胎鼠海马神经元细胞,细胞免疫荧光染色鉴定纯度。MTT测定海马神经元细胞活力以确定醋酸铅最适造模浓度及时间,同时筛选合适剂量PF干预海马神经元凋亡。依据MTT测定结果,分为空白组、模型组和20,40,80 μmol·L^-1 PF组干预海马神经元细胞,作用24 h后,加醋酸铅染毒,检测细胞色素C (cytochrome C,Cyt-C)含量、线粒体膜电位及细胞内Ca²⁺浓度。流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blotting测定海马神经元细胞中caspase-3、cleaved-caspase-3、caspase-8、cleaved-caspase-8、caspase-9、cleaved-caspase-9、Bax、Bcl-2蛋白表达水平。结果 细胞免疫荧光染色鉴定结果显示分离培养的细胞为海马神经元细胞,且纯度较高。MTT测定结果显示醋酸铅最适造模浓度及时间为25 μmol·L^-1染毒24 h;PF剂量为20,40,80 μmol·L-1可显著改善海马神经元细胞活性,呈剂量依赖性。与空白组相比,模型组Cyt-C含量、凋亡率、细胞内Ca²⁺浓度显著升高(P<0.01),线粒体膜电位显著降低(P<0.01)。与模型组相比,40 μmol·L^-1 PF组和80 μmol·L^-1 PF组可降低Cyt-C含量、凋亡率、细胞内Ca²⁺浓度(P<0.05或P<0.01),升高线粒体膜电位(P<0.01),20 μmol·L^-1PF组可显著升高线粒体膜电位(P<0.05)。此外,一定剂量的PF可下调cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-8、cleaved-caspase-9、Bax蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达。结论 PF可抑制醋酸铅诱导的海马神经元凋亡,可通过调控Bcl-2/Bax蛋白表达发挥神经保护作用。     

葛根异黄酮对MPP~+诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的探讨葛根异黄酮(Total isoflavones from puerarialobata,TIP)对甲基-苯基-吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyr-idinium,MPP+)诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及其机制。方法用不同浓度TIP预处理体外培养的PC12细胞后,加入MPP+诱导多巴胺能神经损伤模型,用MTT法检测PC12细胞活力,采用实时定量RT-PCR检测Bcl-2和BaxmRNA的表达水平。结果MPP+处理48~96 h,细胞活力较空白对照组降低,阴性对照组Bax 2-ΔΔCt升高,而Bcl-22-ΔΔCt降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。与阴性对照组比较,葛根异黄酮组Bax 2-ΔΔCt降低,而Bcl-2 2-ΔΔCt升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论葛根异黄酮对MPP+诱导的PC12细胞凋亡具有抑制作用,下调Bax和上调Bcl-2 mRNA表达可能是其作用的机制之一。     

大黄素诱导白血病U937细胞凋亡及机制初探

目的研究中药大黄素(Emodin)对人髓系白血病细胞株U937细胞增殖及凋亡的影响,探讨bcl-2/bax比值变化和procaspase-3(CPP32)的激活在其中的作用。方法MTT法绘制细胞生长曲线;克隆形成试验观察大黄素对U937细胞增殖的影响;线粒体膜电位检测、DNA倍体分析及DNA凝胶电泳分析细胞凋亡;PCR及检测大黄素作用前后bcl-2/bax基因及蛋白表达的变化;流式细胞术测定大黄素作用前后caspase-3活性变化及检测CPP32的蛋白表达的变化。结果大黄素能抑制U937细胞增殖,作用72h的半数抑制浓度(IC50)约为30μmol·L-1;线粒体膜电位、亚G1峰(凋亡峰)及DNA片段化的检出证实大黄素能诱导U937细胞凋亡,并呈量效关系。大黄素作用后G0/G1期细胞比例较对照组增高,S期比例下降,且与药物浓度呈正相关。大黄素作用后U937细胞bcl-2/bax基因及蛋白的表达水平比值下降,被激活的caspase-3阳性细胞增多,CPP32蛋白表达水平下降,并呈时效关系。结论大黄素能通过诱导凋亡来抑制U937细胞增殖,bcl-2/bax比值的降低及CPP32的活化可能参与了大黄素抑制U937细胞增殖和诱导凋亡的过程。     

神经妥乐平对H2O2致PC12细胞损伤的保护作用

目的 探索神经妥乐平对H2O2诱导的PC12细胞氧化应激损伤的影响及其潜在机制.方法 用CCK-8法检测细胞存活率,以流式细胞术检测细胞氧化损伤的发生、细胞内活性氧的生成及线粒体膜电位的变化,荧光显微镜观察细胞内活性氧的产生,qRT-PCR测定Caspase-3、Bax和Bcl-2 mRNA的表达.结果 PC12细胞存活率随H2O2浓度的增加而逐渐下降.其中,450μM H2O2处理细胞24 h后细胞存活率、凋亡率、坏死率明显降低;细胞内活性氧水平表达明显升高;线粒体膜电位JC-1红/绿荧光比值下降;Bax和Caspase-3的mRNA表达升高,而Bcl-2的mRNA表达下降,以上指标与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).而预先给予0.01UN/ml的NTP处理细胞12h可明显提高细胞存活率,降低细胞凋亡率和坏死率,减少细胞内活性氧生成并提高线粒体膜电位,抑制Bax和Caspase-3的mRNA表达,促进Bcl-2 mRNA的表达,以上指标与H2O2组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 NTP能抑制H2O2诱导的PC12细胞损伤,其神经细胞保护作用可能与其降低细胞内活性氧水平、维持线粒体膜电位的高能状态和抑制促凋亡基因表达、促进抗凋亡基因表达有关.     

前列腺素A1通过NF—κB介导抑制大鼠心脏微血管内皮细胞凋亡

目的:研究前列腺素Al(PGAl)对心脏微血管内皮细胞凋亡的影响.方法:培养分离大鼠心脏微血管内皮细胞,建立缺氧再给氧模型,通过原位缺口末端标记观察PGAl对内皮细胞凋亡的作用;通过凝胶电泳迁移率测定NF-κB的活性;用Western blot法测定Bcl-2和Bax蛋白表达;用Northern blot法测定bcl-2 mRNA的表达.结果:PGAl能明显减少缺氧再给氧内皮细胞的凋亡,抑制NF-κB的活性,升高Bcl-2蛋白及bcl-2 mRNA的表达,不改变Bax蛋白的表达,导致Bcl-2/Bax增加.结论:PGAl通过NF-κB介导抑制大鼠心脏微血管内皮细胞的凋亡.     

Oridonin induces apoptosis of HeLa cells via altering expression of Bcl-2 ／ Bax and activating caspase-3 ／ ICAD pathway

INTRODUCTIONHerbal medicine, Donglingcao (rabdosiarubescens), has been traditionally used in China for thetreatment of various diseases such as leukemia.Oridonin (Fig 1) is a diterpenoid compound isolated fromRabdosia rubescens (hemsl). It has various pharmaco-logical and physiological effects such as anti-inflammation, anti-bacteria, anti-tumor[1-3] and has beenused for the treatment of human cancers, especiallyFig 1. Chemical structure of oridonin.esophageal carcinoma[4]. This comp…     

蒺藜皂苷对PC12细胞凋亡的保护作用及机制

目的探讨蒺藜皂苷(gross saponin tribulus terrestris,GSTT)对过氧化氢(H2O2)诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(pheochromocytoma cells,PC12)凋亡的保护作用及其机制。方法PC12细胞分为对照组、模型组及蒺藜皂苷高(GSTT1)、低(GSTT2)剂量组。用H2O2刺激PC12细胞使其发生凋亡,MTT法检测PC12细胞活性,倒置相差显微镜观察细胞形态,Hoechst 33258荧光核染色,流式细胞仪检测PC12细胞亚二倍体峰比率及Western blot方法检测与凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax。结果与模型组比较蒺藜皂苷组随着剂量的增加PC12细胞存活率提高(P<0.01),凋亡细胞减少,凋亡比率下降(P<0.01),Bcl-2表达增加(P<0.05),而Bax的表达降低(P<0.05)。结论蒺藜皂苷可抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与抑制线粒体途径的细胞凋亡及影响凋亡相关蛋白的表达有关。     

Octylphenol induces apoptosis in cultured rat Sertoli cells

In this study, the effects of 4-tert-octylphenol (OP) were examined on the viability of rat cultured Sertoli cells using the MTT assay and OP-induced apoptosis was detected by transmission electron microscope (TEM), flow cytometric analysis and Hoechst staining. In addition, RT-PCR was used to analyze the levels of Bcl-2 and Bax mRNA. Bcl-2, Bax and caspase-3 protein expressions were determined by Western blot analysis. Sertoli cells were treated with OP from 30 to 60microM for 6-24h. Decreased viability of Sertoli cells and increased apoptosis occurred in a concentration- and a time-dependent manner. The expression of Bcl-2 was down-regulated, while the expression of Bax up-regulated. OP also down-regulated the expression of 32kDa procaspase-3, which was cleaved to generate active subunit (17kDa). These results suggest that OP may induce Sertoli cell apoptosis by regulation of Bcl-2/Bax and caspase-3 activation.