川芎嗪干预转化生长因子β1诱导肝星状细胞结缔组织生长因子表达中p38丝裂酶原激活蛋白激酶的途径

背景:前期研究发现川芎嚷可通过抑制肝星状细胞的增殖和阻断Ⅰ,Ⅲ胶原的合成,下调结缔组织生长因子的表达等,发挥抗肝纤维化的作用,但具体机制尚小清楚.目的:观察川芎嗪对体外培养肝星状细胞表达结缔组织生长因子的影响,以及p38丝裂酶原激活蛋白激酶(p38MAPK)信号通路在其中的作用.方法:用5 μg/L转化牛长因子β1诱导活化体外培养的肝星状细胞,用川芎嗪和p38MAPK特异阻断剂SB203580进行干预,以RT-PCR法检测结缔组织生长因子mRNA和Ⅰ型胶原mRNA的表达,Western blot法检测磷酸化p38MAPK蛋白的表达.结果与结论:经转化生长因子β1诱导后.肝星状细胞中结缔组织生长因子和Ⅰ型胶原mRNA表达显著增强(P<0.01),用川芎嗪和SB203580干预后,结缔组织生长因子和Ⅰ型胶原mRNA的表达均出现不同程度的下降.但川芎嗪和川芎嗪+SB203580混合干预对这两者的基因表达抑制作用比单独的SB203580干预更强.川芎嗪和SB203580对磷酸化p38MAPK蛋白表达也都有明显的抑制作用(P<0.01),但SB203580和川芎嗪+SB203580对其磷酸化蛋白表达抑制作用更明显,而SB203580与川芎嗪+SB203580无明显差异(P>0.05).因此,推测川芎嗪可能通过抑制转化生长因子β 1诱导的结缔组织生长因子基因表达,阻断Ⅰ型胶原合成,其作用途径可能与抑制p38mapk信号通路有关,同时认为川芎嗪抗纤维化可能是多重作用靶点.     

脂多糖诱导血管平滑肌细胞分泌白细胞介素-6及p38丝裂素活化蛋白激酶的调控作用

目的 探讨p38丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路在脂多糖(LPS)作用下血管平滑肌细胞(VSMC)分泌白细胞介素-6(IL-6)中的调节作用.方法 将体外培养的大鼠胸主动脉VSMC分为LPS刺激组、p38MAPK抑制剂SB203580干预组、SB203580对照组和溶液对照组.LPS组以终浓度100μg/L的LPS与VSMC共同孵育;干预组VSMC以p38MAPK抑制剂SB203580 10μmol/L预处理2 h,再加入终浓度100 9g/L的LPS共同孵育;对照组仅以SB203580 10 μmol/L预处理2 h;溶液组仅加入去血清培养液培养.各组于培养0、3、6、12、24 h后采用实时聚合酶链反应(real-time PCR)和酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测细胞IL-6 mRNA和上清液中IL-6蛋白表达.结果 LPS刺激3 h,VSMC中IL-6 mRNA和蛋白表达即出现明显增高CmRNA(21.3±3.2)×104,蛋白(296.2±19.6)ng/L],12 h达高峰CmRNA(131.4±11.2)×104,蛋白(897.7±34.0)ng/L],24 h有所降低[mRNA(15.3±4.7)×104,蛋白(194.3±24.0)ng/L],但仍显著高于溶液组(mRNA(9.4±1.9)×104,蛋白(29.4±4.4)ng/L,均P<0.05].干预组3、6、12 h可明显抑制LPS诱导VSMC中IL-6的分泌[mRNA(15.4±3.6)×104、(43.2±6.6)X 104、(56.2±5.5)×104,蛋白(180.3±23.6)、(432.2±56.8)、(546.2±57.9)ng/L,均P<0.05].结论 LPS诱导VSMC可明显增加IL-6的mRNA和蛋白表达,p38MAPK抑制剂SB203580可显著抑制IL-6转录和蛋白合成,表明p38MAPK信号转导通路可能通过直接或间接作用参与了IL-6的分泌调节作用.     

乌司他丁通过p38丝裂原活化蛋白激酶通路治疗大鼠脓毒症急性肝损伤的相关性研究

目的探讨乌司他丁对脂多糖(LPS)诱导的大鼠脓毒症急性肝损伤的治疗作用及相关机制,并与p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路特异性阻断剂SB203580的疗效进行比较。方法通过尾静脉注射5 mg/kg的LPS制造LPS诱导的大鼠脓毒症急性肝损伤模型。将清洁级雄性Sprague-Dawley大鼠32只分为4组:空白组(尾静脉注射1 m L等渗Na Cl溶液),LPS组(尾静脉注射1 m L的LPS),LPS+乌司他丁(UTI)组(建模后立即腹腔注射1 m L乌司他丁),LPS+p38MAPK通道阻断剂(SB)组(建模后立即腹腔注射1 m L SB203580),每组8只。建模后24 h处死大鼠,取下腔静脉血测定大鼠血清中谷氨酸-丙酮酸转氨酶(ALT)、胆红素(BIL)和碱性磷酸酶(AKP)的浓度,利用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠肝组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,Western-blotting法测定大鼠肝组织磷酸化p38蛋白水平表达,以及通过肝组织病理切片和电镜下观察肝细胞微结构的变化。结果建模后24 h,LPS组有2只大鼠死亡。四组大鼠血清AKP水平无显著性差异(F=1.153,P=0.351);与空白组比较,LPS组大鼠血清ALT[(10.7±1.8)U/L vs.(46.3±5.0)U/L]、BIL[(0.63±0.12)μmol/L vs.(1.55±0.16)μmol/L]、肝组织TNF-α[(4 621±793)ng/L vs.(7 222±773)ng/L]、磷酸化p38蛋白水平[(12 073±172)ng/L vs.(15 515±630)ng/L]均显著升高(P均0.05);病理切片提示LPS组肝细胞水样变性、炎症细胞浸润、肝细胞再生;电镜结果也提示肝细胞核固缩,线粒体嵴肿胀、断裂或者消失,内质网结构不清。而LPS+UTI组和LPS+SB组肝组织TNF-α、磷酸化p38蛋白表达均与空白组无显著差异(P均0.05);病理切片提示两组肝细胞水样变性、炎症细胞浸润、肝细胞再生较LPS组轻,但较空白组仍严重;电镜结果显示肝细胞核、线粒体及内质网结构变化较LPS组减轻。与空白组相比,LPS+SB组血清ALT无显著差异(P0.05),而LPS+UTI组血清ALT明显升高[(10.7±1.8)U/L vs.(29.5±2.5)U/L,P0.05],提示SB203580对血清ALT作用更明显;而与空白组比较,LPS+UTI组血清BIL水平无显著差异(P0.05),而LPS+SB组血清BIL明显升高[(0.63±0.12)μmol/L vs.(1.52±0.20)μmol/L,P0.05],提示乌司他丁对血清BIL作用更明显。结论乌司他丁可减轻LPS引起的大鼠脓毒症急性肝损伤,是通过p38MAPK通路来发挥炎症抑制作用的。与p38MAPK通路特异性阻断剂比较,两者在减轻TNF-α、磷酸化p38蛋白等作用上相似,但是对血清学指标的影响有一定差别。     

P38MAPK在脂多糖诱导人单核细胞产生肿瘤坏死因子中的作用

目的:探讨P38信号通道(P38MAPK)在脂多糖(LPS)诱导人单核细胞表达肿瘤坏死因子(TNFα)中的作用.方法:采用免疫沉淀法、免疫复合物蛋白激酶测定法、Western blotting检测P38MAPK在LPS诱导的人单核细胞产生TNFα中的激活程度,应用逆转录聚合酶链式反应(RTPCR)和酶联免疫吸附法(ELISA)观察P38信号通道抑制剂SB203580对单核细胞TNFα mRNA和蛋白质表达的影响.结果:LPS刺激单核细胞引起P38MAPK激活和TNFα表达明显增多,P38MAPK抑制剂SB203580对单核细胞TNFα表达有显著抑制作用.结论:P38MAPK可能是LPS诱导人单核细胞表达TNFα的重要通路.     

p38 MAPK抑制剂对急性肺损伤的治疗作用

目的 观察p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂SB203580对LPS诱导的兔急性肺损伤(ALI)的保护作用及其机制.方法 用大肠杆菌内毒素(LPS)制备兔ALI模型;测定不同时间点的动脉血气分析、血清TNF-α和ICAM-1浓度;测量肺干/湿质量比值(肺D/W)及观察肺组织病理学改变.结果 动物注射内毒素1 h后P_(A-a)O_2、血浆TNF-α和ICAM-1水平、肺损伤评分均明显升高(P＜0.05),肺D/W下降(P＜0.05);应用SB203580治疗后,P_(A-a)O_2、血浆TNF-α和ICAM-1水平、肺损伤评分均明显下降(P＜0.05),肺D/W升高(P＜0.05).结论 本研究结果 表明,p38 MAPK抑制剂SB203580对内毒素诱导的ALI,可以明显减轻低氧血症、减轻肺水肿、改善组织病理学和减轻炎症反应.     

SB203580减轻高原低氧大鼠脑水肿的实验研究

探讨SB203580对于高原低氧大鼠脑组织水通道蛋白1(AQP1)和水通道蛋白4(AQP4)表达及脑水肿的影响。方法 SPF级雄性SD大鼠54只,随机分为常压常氧对照组(sham组)、低压低氧模型组(HH组)和低压低氧+药物干预组(SB203580组)。应用低压低氧实验舱模拟高原环境,构建高原低氧大鼠脑损伤模型。SB203580组每日腹腔注射P38MAPK抑制剂SB203580(10 mg/kg),连续注射7 d。采用HE染色观察大鼠脑组织病理变化。干湿比重法测定脑组织含水量,荧光定量PCR法检测脑组织AQP1和AQP4 mRNA的表达。结果与对照组比较,低压低氧组大鼠脑组织含水量增加(P0.05),脑组织AQP1和AQP4表达显著升高(P0.01)。与低氧组比较,SB203580组大鼠脑含水量明显降低(P0.05),脑组织中AQP1和AQP4 mRNA表达显著降低(P0.01),脑组织的病理损伤较小。结论 SB203580可减轻高原低氧大鼠AQP1和AQP4mRNA表达及脑水肿。其机制可能与SB203580抑制P38MAPK信号通路的激活相关。     

周期性张应力诱导成纤维细胞凋亡中p38MAPK信号通路的作用

背景:当牙齿受异常咬合力时会导致牙体吸收、牙周组织的大量破坏.目的:研究牙周膜成纤维细胞在受到周期性张应力刺激后是否发生凋亡及p38MAPK信号通路是否参与该凋亡过程.方法:取4～7代成纤维细胞,同步化后随机分为对照组、加力组和SB203580组.加力组和SB203580组细胞加载力值为12%表面应变率,加力频率为6个循环/min,即5 s拉伸,5 s松弛.SB203580组细胞在加力前1 h加入终浓度为20 mmol/L的p38MAPK抑制剂SB203580.分别在加力6,12,24 h,取各组细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR检测细胞凋亡基因bax mRNA的表达.结果与结论:与对照组比较,加力后成纤维细胞凋亡率及bax mRNA表达增加(P < 0.05),且随着加力时间的延长而增强,12 h达高峰,之后逐渐下降.与加力组比较,SB203580组对应时间点细胞凋亡减少(P < 0.05),bax mRNA表达降低.说明细胞受到力学刺激会发生凋亡,而丝裂原活化蛋白激酶p38MAPK信号通路参与了该凋亡过程.     

丝裂原活化蛋白激酶p38与低浓度一氧化碳对脂多糖诱导肺损伤大鼠肺炎症反应的作用

目的:观察低浓度一氧化碳(CO)吸入对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)大鼠肺炎症反应的影响及影响过程中丝裂原活化蛋白激酶p38(p38 MAPK)的变化.方法:4组SD大鼠静脉注入5 mg/kg质量LPS或等容量生理盐水,1 h后.对照及LPS组吸入室内空气,C0吸人及LPS+CO吸入组吸入250 ppm CO.观察3 h后放血处死,取肺组织,酶联免疫吸附法测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)及白细胞介素-10(IL-10)含量.蛋白印迹法测定磷酸化p38 MAPK表达.结果:LPS组TNF-α、IL-6、磷酸化p38 MAPK表达明显升高、IL-10显著降低,与对照组及CO吸人组比较,差异有统计学意义(P均<0.01).LPS+CO吸入组TNF-α、IL-6显著低于、IL-10和磷酸化p38 MAPK表达明显高于LPS组(P均<0.05).结论:p38 MAPK信号转导通路可能参与了低浓度CO吸入对LPS诱导ALI大鼠肺炎症反应的抑制.     

乌司他丁经p38MAPK通路对脓毒症大鼠急性肾损伤影响的研究

目的研究乌司他丁（UTI）经p38MAPK通路对脓毒症大鼠急性肾损伤（AKI）的影响。 方法采用脂多糖（LPS）诱导脓毒症AKI大鼠模型,将32只SD大鼠随机分为4组,空白对照组、脂多糖组（LPS组）、乌司他丁处理组（LPS+UTI组）、p38MAPK阻断剂干预组（LPS+SB组）,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测肾组织中肿瘤坏死因子α（TNF-α）和转化生长因子（TGF-β1）的表达,采用蛋白质免疫印迹试验（Western Blotting）检测肾组织中磷酸化p38MAPK蛋白的表达,并在光镜和电镜下观察肾小球及肾小管的变化。 结果与空白对照组相比,LPS组光镜下肾小球充血肿胀,肾球囊扩张,近曲肾小管上皮细胞肿胀明显,细胞核淡染,部分出现核浓缩、破碎甚至溶解现象,肾间质充血、水肿、大量炎性细胞浸润;电镜下肾小球毛细血管内皮细胞窗孔消失或闭塞,基底膜部分断裂消失,足细胞足突广泛融合消失,近曲肾小管上皮细胞质内线粒体排列紊乱,结构模糊,高度肿胀,有空泡样现象;均提示脓毒症肾损伤严重,且肾组织TNF-α、TGF-β1和p38MAPK蛋白的表达明显升高。与LPS组相比,LPS+UTI组肾组织TNF-α、TGF-β1和p38MAPK蛋白的表达均较LPS组下降［TNF-α（pg/ml）：4915.00±267.06 vs 8836.00±739.51;TGF-β1（pg/ml）：257.71±23.88 vs 354.39±29.44;p-p38MAPK/β-actin：0.158±0.022 vs 0.300±0.044,均P＜0.05］,LPS+SB组肾组织中TNF-α、TGF-β1和p38MAPK蛋白的表达较LPS组均下降［TNF-α（pg/ml）：4856.75±167.23 vs 8836.00±739.51;TGF-β1（pg/ml）：249.56±23.42 vs 354.39±29.44;p-p38MAPK/β-actin：0.136±0.017 vs 0.300±0.044,均P＜0.05］,但LPS+UTI组与LPS+SB组差异无统计学意义（P＞0.05）。 结论乌司他丁对脓毒症急性肾损伤有保护作用,且可能是通过抑制TGF-β1/p38MAPK信号转导通路来实现的。     

SB203580对肠缺血再灌注大鼠p38 MAPK及细胞凋亡的影响

目的：探讨大鼠肠缺血再灌注（IR）时p38 MAPK特异性抑制剂SB203580对p38 MAPK、凋亡调控因子及凋亡细胞表达的影响。方法：Wistar大鼠30只随机分为对照组（C组）、缺血再灌注组（Ⅰ组）和SB203580组（S组）（n=10）,采用肠IR模型检测p38 MAPK、Bcl-2、Bax、TNF-及凋亡指数的水平。结果：Ⅰ组中p38 MAPK、凋亡调控因子及凋亡细胞的表达均显著高于C组（P〈0.05）,而S组中p38 MAPK、TNF-α及凋亡细胞的表达减少,Bcl-2/Bax比值增高（P〈0.05）。结论：SB203580抑制了小肠组织中p38 MAPK通路的活化,从而增加了Bcl-2的表达、减少了Bax和TNF-α的释放,在缓解细胞凋亡的过程中起到了重要的作用。     

转化生长因子β1作用下绒毛膜癌JEG-3细胞c-myc mRNA表达

目的观察在转化生长因子β1(TGF-β1)、-β1受体Ⅰ抑制剂(LY364947)和p38MAPK抑制剂(SB203580)作用下,绒毛膜癌JEG-3细胞中c-myc mRNA的表达变化。方法用5 ng/ml的TGF-β1以及1μM、3μM TGF受体Ⅰ抑制剂(LY364947)和1μM、3μM p38MAPK抑制剂(SB203580)作用JEG-3细胞,用qRT-PCR技术检测各组细胞中c-myc mRNA的表达差异。结果与正常对照组比较,5 ng/ml TGF-β1组细胞中c-myc mRNA的表达水平升高(P0.05);p38 MAPK抑制剂(SB203580)和TGF-β受体Ⅰ抑制剂(LY364947)均抑制了c-myc mRNA的表达,且抑制作用与应用浓度呈正相关(P0.05)。结论 c-myc作为TGFβ1/Smads通路的下游靶基因,其调控有赖于TGFβ1与受体Ⅰ的结合,同时,在绒毛膜癌JEG-3细胞中,TGF-β1介导的Smad途径与p38 MAPK信号转导存在交互作用。     

离体肝脏早期缺血再灌注期间p38信号转导途径对TNFα mRNA表达的影响

目的：研究离体肝脏缺血再灌注期间丝裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinase,p38MAPK）信号转导途径对肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factorα,TNF-α）mRNA表达的影响。方法：建立兔离体肝脏缺血再灌注模型,对照组（n=12）灌注液中不加特异性p38MAPK抑制剂SB202190,抑制组（n=12）灌注液中加入SB202190（浓度为3μmol/L）。分别于肝脏离体前,冷保存末,再灌注10 min、30 min、60 min及120 min时获取离体肝组织标本。应用Western-blot法及免疫沉淀法检测离体肝组织中p38MAPK表达的水平及活性,RT-PCR法检测TNF-αmRNA表达水平。结果：对照组p38MAPK活性在冷保存末及再灌注10 min、30 min、60 min均较离体前和再灌注120 min显著升高（P〈0.01）,也显著高于同时相点的抑制组（P〈0.01）;抑制组p38MAPK活性在组内各时相点的变化无显著性差异（P〉0.05）。两组肝脏于离体前、冷保存末及再灌注10 min及30 min,肝组织中仅有少量TNF-α mRNA表达,组间及组内比较无显著性差异（P〉O．05）;至再灌注60min及120min,对照组TNF-α mRNA的表达水平显著性高于组内其它时相点（P〈0．01）,而抑制组虽然也显著高于组内其它时相点（P〈O．05）,但却显著性低于同时相点对照组的表达水平（P〈O．01）。离体再灌注期间供肝组织中p38MAPK活性与供肝组织内TNF-α mRNA的表达水平呈显著性正相关（r=0．996,P〈0．01）。结论：p38MAPK对TNF-α生成的调节作用层次可能在转录水平,提示p38MAPK信号转导途径对TNF-α mRNA的调节可能是导致离体肝脏缺血再灌注损伤的重要机制之一。     

miR-204-5p靶向TRIB3对脂多糖诱导的肺微血管内皮细胞损伤的影响

目的 探讨miR-204-5p对脂多糖(LPS)诱导的肺微血管内皮细胞损伤的影响及其可能作用机制。方法 采用LPS诱导大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)建立细胞损伤模型，实验分组：NC组、LPS组、LPS+miR-con组、LPS+miR-204-5p组、LPS+si-con组、LPS+si-TRIB3组、LPS+miR-204-5p+pcDNA组、LPS+miR-204-5p+pcDNA-TRIB3组；MTT法检测细胞活力；qRT-PCR、Western blot检测miR-204-5p、TRIB3表达；流式细胞术检测细胞凋亡；ELISA检测TNF-α、IL-6水平；双荧光素酶实验检测miR-204-5p与TRIB3的靶向关系。结果 与NC组比较，LPS组细胞活力、miR-204-5p表达量降低(1.00±0.10比0.43±0.04),细胞凋亡率、TRIB3 mRNA(1.00±0.09 vs 2.13±0.18)和蛋白(0.40±0.04 vs 0.83±0.08)水平、TNF-α、IL-6水平升高(P<0.05);过表达miR-204-5p或敲低TRIB3可升高细胞活力，...     

长链非编码RNA NNT-AS1在肺炎患儿血清中的表达及其对脂多糖诱导的肺上皮细胞损伤的影响

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA) NNT-AS1在肺炎患儿血清中的表达及其对脂多糖（LPS）诱导的肺上皮细胞损伤的影响。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测NNT-AS1相对表达水平。将肺泡上皮细胞BEAS-2B分为对照组、LPS组（1 mg/L的LPS处理细胞）、LPS+si-NC组（转染si-NC,LPS处理细胞）、LPS+si-NNT-AS1组（转染si-NNTAS1,LPS处理细胞）、LPS+si-NNT-AS1+SB203580组（转染si-NNT-AS1,LPS处理和MAPK信号通路抑制剂SB203580细胞）。qRT-PCR检测NNT-AS1相对表达水平，流式细胞术检测细胞凋亡，蛋白质印迹法（Western blot）检测cleaved-caspase3、Bax、p-ERK1/2、p-p38 MAPK蛋白表达，ELISA检测IL-6、IL-1β、TNF-α。结果 NNT-AS1在肺炎患儿血清中的相对表达水平高于健康对照。与对照组相比，LPS组中NNT-AS1相对表达水平、凋亡率、cleaved-caspase3、Bax、p-ERK1/2、p-p38MA...     

磷酸化p38MAPK在实验性自身免疫性脑脊髓炎轴索损伤中的作用

目的 观察p38MAPK在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE )中的活化及其与早期神经元轴索损伤的关系和变化规律,以及p38MAPK阻滞剂SB203580对轴索损伤的调节作用.方法 使用SJL雌性小鼠建立EAE模型,分别对模型组、SB203580组和对照组各时间点取脑和脊髓,行HE和Luxol Fast Blue(LFB)染色,并行磷酸化p38MAPK抗体染色;对相邻脑组织切片同时行淀粉样前体蛋白(APP)免疫组化检测.用图像分析系统对脑白质病灶内神经元胞浆阳性信号数目、覆盖面积及阳性信号平均密度值进行测量.结果 PLP肽段免疫的小鼠发病具有缓解-复发的特点,局部白质区域出现脱髓鞘改变.与模型组比较,SB203580组改变较轻,符合其行为学观测结果,且小鼠的体重增加明显高于模型组( P<0.01).除对照组,其余各组在各时间点均有APP蛋白表达.与模型组相比,SB203580组干预后APP蛋白表达较轻,阳性细胞数目与强度均明显下降( P<0.01);磷酸化p38MAPK在EAE小鼠免疫后第7天就有明显表达.与模型组相比,SB203580组p38MAPK表达较轻,阳性数目与强度均明显下降( P<0.01).结论 p38MAPK阻滞剂SB203580不仅能够抑制EAE中p38MAPK活化,而且可以有效下调EAE轴索损伤的标志性指标APP的表达;p38MAPK可能参与了EAE的轴索损伤过程.     

p38MAPK抑制剂对钛颗粒刺激巨噬细胞分泌炎症因子的影响

目的:探讨p38MAPK抑制剂(SB203580)对外培养的RAW246.7细胞分泌炎症因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)]的影响。方法:以体外正常培养RAW246.7细胞为A组,以0.1 mg/m L钛颗粒(Ti Ps)刺激RAW246.7细胞为B组,以10μmol/L SB203580干预的B组细胞为C组。Western blot检测p-p38MAPK蛋白表达,ELISA检测细胞分泌TNF-α,IL-6水平。结果:与A组比较,B组p-p38MAPK蛋白含量培养液上清中TNF-α、IL-6含量都明显升高(P<0.05);与B组比较,C组p-p38MAPK蛋白明显抑制(P<0.05),培养液上清中TNF-α、IL-6含量都明显下降(P<0.05);与A组比较,C组p-p38MAPK蛋白明显抑制(P<0.05),培养液上清中TNF-α、IL-6含量亦有所减少,但两组之间的差异没有统计学意义(P>0.05)。结论:Ti Ps能通过刺激RAW246.7细胞,激活p38MAPK通路,上调TNF-α、IL-6等炎症因子的表达。p38MAPK信号通路可作为抑制炎性骨溶解的新靶点,对临床上防治人工关节置换术后无菌性松动具有重要意义。     

高压氧和SB203580联合应用对大鼠脑缺血再灌注紧密连接蛋白claudin-1的表达及血脑屏障通透性的影响

目的:探讨高压氧(HBO)和SB203580联合应用对大鼠脑缺血再灌注紧密连接蛋白claudin-1的表达及血脑屏障的通透性影响。方法:雄性Wistar大鼠,随机分成假手术组(sham)、脑缺血再灌注组(IR)、HBO+脑缺血再灌注组(HBO+IR)、脑缺血再灌注组+SB203580(IR+SB203580)、HBO+脑缺血再灌注+SB203580组(IR+HBO+SB203580)。复制局灶性脑缺血再灌注模型,IR+SB203580组和IR+HBO+SB20358组于脑缺血再灌注前30min经侧脑室注射100μlP38MAPK信号传导通路抑制剂SB203580,HBO+IR组与IR+HBO+SB203580组并于再灌注期间行0.25MPa(2.5ATA)HBO治疗5次,在处死动物前1h经尾静脉注射2%伊文思兰(EB),采用EB法检测缺血再灌注后血脑屏障通透性的变化。应用免疫组织化学的方法和Westernblot法分别观察claudin-1蛋白缺血再灌注72h后脑组织中的分布及claudin-1蛋白的表达水平的变化。结果:Claudin-1的蛋白表达与sham组相比于再灌注后72h表达显著降低(P<0.01),同时伴有脑组织EB的含量显著增高(P<0.01)。HBO+IR组与IR+SB203580组较IR组脑组织claudin-1蛋白表达水平明显增加(P<0.01,P<0.05),脑组织EB的含量显著降低(P<0.01)。IR+HBO+SB203580组相比脑组织中claudin-1蛋白表达与IR+HBO组、IR+SB203580较比显著增加(P<0.01),脑组织EB的含量显著降低(P<0.01)。结论:高压氧从蛋白水平可明显增加脑缺血再灌注脑组织中紧密连接相关蛋白claudin-1的蛋白表达,从而降低血脑屏障通透性;高压氧与SB203580二者具有协同作用。     

鞘内注射p38MAPK抑制剂对骨癌痛大鼠的抗伤害效应

目的:探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号转导通路在大鼠骨癌痛中的作用.方法:雌性SD大鼠32只,体重150～170g,随机分为4组(n=8):生理盐水对照组(NS组)、骨癌痛组(BC组)、二甲基亚砜组(DMSO组)和p38MAPK抑制剂组(SB203580组).骨髓腔内注射Walk-er256细胞悬液制备大鼠骨癌痛模型,注射后10d DMSO组和SB203580组分别鞘内注射5%二甲基亚砜、SB203580(10 μg)10μl,各组随机取8只大鼠,于注射前、注射后1、3、5、7、10d,鞘内给药后1、3、6、12、24h时采用von Frey丝测定术侧后爪机械缩足反射阈值(MWT),用负重仪测大鼠双后肢负重差值.结果:骨髓腔内注射Walker256细胞悬液后7天大鼠术侧后爪MWT开始降低,双后肢负重差值开始增大;鞘内注射SB203580提高了MWT,减小了双后肢负重差值.结论:鞘内注射SB203580可减轻骨癌痛引起的痛敏,p38MAPK信号转导通路在骨癌痛中起重要作用.     

脂联素对小鼠主动脉平滑肌细胞体外钙化作用机制的研究

[目的]探讨脂联素对主动脉平滑肌细胞(ASMCs)体外钙化的作用机制.[方法]体外培养脂联素基因敲除小鼠ASMCs,以α-磷酸奈酚法检测钙化指标碱性磷酸酶(ALP),Western Blot检测脂联素受体(AdipoR)表达及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)激活.siRNA-AdipoR或加用MAPK信号转导阻断剂,观察脂联素对ASMCs钙化作用的变化.[结果]在小鼠ASMCs检测出AdipoR 1表达.脂联素干预后激活p38MAPK.若抑制AdipoR 1表达或使用p38 MAPK信号转导阻断剂SB203580,脂联素抑制ALP活性的作用消失.[结论]脂联素通过AdipoRl/p38信号转导途径抑制小鼠ASMCs体外钙化.     

双异丙酚预处理对内毒素诱导的人中性粒细胞释放白细胞介素-8和肿瘤坏死因子-α及相应mRNA表达的影响

目的 探讨双异丙酚预处理对内毒素(LPS)诱导的健康成年人静脉血中性粒细胞(polymorphonuclear leukocyte,PMN)释放白细胞介素(interleukin,IL)-8和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α的影响及其应mRNA表达的变化.方法 采集健康成人志愿者静脉血分离提纯PMN,用1640培养液制成悬液;试验分为6组:Ⅰ组(空白对照组,PMN+培养液),Ⅱ组(双异丙酚溶剂对照组,intralipid),Ⅲ组(双异丙酚组,终浓度5 mg/L双异丙酚),Ⅳ组(内毒素组,终浓度1 mg/L LPS),Ⅴ组(内毒素+溶剂对照组,intralipid+终浓度1 mg/L LPS),Ⅵ组(双异丙酚+内毒素组,终浓度5 mg/L双异丙酚+终浓度1 mg/L LPS).加药培养12h后,ELISA法检测培养上清液TNF-α、IL-8的浓度,荧光定量PCR检测PMN IL-8 mRNA、TNF-αmRNA表达量.结果 与Ⅰ组比较,Ⅳ组、Ⅴ组、Ⅵ组IL-8浓度升高,Ⅳ组TNF-α浓度升高(P<0.05);与Ⅳ组比较,Ⅵ组IL-8和TNF-α浓度降低(P<0.05).与Ⅰ组比较,Ⅳ组、Ⅴ组、Ⅵ组IL-8mRNA表达上调,Ⅳ组TNF-α mRNA表达上调(P<0.05);与Ⅳ组比较,Ⅵ组IL-8 mRNA和TNF-α mRNA表达下调(P<0.05).结论 双异丙酚预处理可通过抑制内毒素诱导的人PMN释放IL-8、TNF-α,下调JL-8、TNF-α的mRNA表达,对PMN介导的炎症反应具有抑制作用.