脂质体包裹MUC2反义核酸抑制胃癌细胞增殖的初步探讨

背景与目的：我们前期研究发现粘蛋白MUC2在胃癌组织中的表达与肿瘤的生物学行为密切相关。本研究拟观察MUC2反义脱氧寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)对人胃癌细胞SGC7901生长抑制作用。方法：应用硫代磷酸修饰的MUC2 ASODN经阳离子脂质体包裹后转染入SGC7901细胞,采用MTT法、形态学观察测定MUC2 ASODN对SGC27901细胞的增殖抑制作用,免疫组化检测细胞中MUC2和p16蛋白的表达情况。结果：不同浓度ASODN均能抑制SGC7901细胞的增殖,在48h抑制作用最强,0．5μmol／L ASODN对细胞的抑制率为55％,随时间延长抑制作用逐渐减弱。SGC7901细胞转染MUC2 ASODN后,与对照组相比,光镜下观察到细胞数量减少、体积变小、核分裂明显减少、可见较多的坏死。透射电镜下见线粒体肿胀、细胞内脂滴增多、髓样结构、染色质边集等。免疫组化SP法染色显示转染ASODN后,SGC7901细胞MUC2蛋白表达水平明显降低,p16蛋白表达明显增强。结论：使用人工合成MUC2 ASODN能有效抑制人胃癌细胞SGC790l的增殖。     

蛇毒cystatin基因转染抗人胃腺癌细胞体外侵袭作用的研究

目的:探讨蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂(sv-cystatin)对人胃腺癌细胞SGC7901侵袭转移的抑制作用.方法:采用人工拼接方法合成蛇毒cystatin cDNA,构建pcDNA3.1/sv-cystatin真核表达质粒,经脂质体转染将pcDNA3.1/sv-cystatin质粒和pcDNA3.1质粒分别导入胃腺癌细胞系SGC7901:利用RT-PCR和Western blot检测SGC7901细胞中sv-cystatin基因的表达;应用细胞-基质粘附实验、细胞运动实验及重建基底膜侵袭实验分析svcystatin表达对SGC7901细胞粘附、运动和侵袭能力的影响.结果:转染sv-cystatin基因后,SGC/sv-cystatin细胞克隆中可检测到sv-cystatin的明显表达,SGC/sv-cystatin细胞的运动能力和体外穿越重建基底膜的能力明显低于转染空载体细胞和未转染的SGC7901细胞,但其体外粘附能力未见明显变化.结论:sv-cystatin基因的表达可使胃癌SGC7901细胞体外运动能力及侵袭能力明显减弱,提示sv-cystatin具有抑制胃癌细胞侵袭转移的作用.     

Semaphorin 5A基因在胃癌侵袭和转移中的作用

目的探讨Semaphorin 5A基因在胃癌侵袭和转移中的作用机制。方法应用RNA干扰技术,构建Sema-phorin 5A-siRNA、Scrambled-siRNA表达载体,并分别转染胃癌细胞株SGC7901,建立Semaphorin 5A稳定表达抑制的胃癌细胞株SGC7901-Sema5A-si和对照组SGC7901-Scram-si胃癌细胞株;采用Western blotting、ELISA和RT-PCR方法,检测MMP2、MMP9在上述2种胃癌细胞株中的表达;应用MMP2、MMP9抗体处理胃癌细胞株,观察其对胃癌细胞株SGC7901-Sema5A-si和Semaphorin 5A侵袭、转移能力的影响。结果 SGC7901-Sema5A-si中MMP9表达水平明显低于SGC7901-Scram-si中的表达水平（P〈0.05）,MMP2在2种胃癌细胞株中表达水平无明显差异（P〉0.05）;MMP9抗体能够阻断Semaphorin 5A基因介导的胃癌侵袭和转移,MMP2抗体对Semaphorin 5A基因介导的胃癌侵袭和转移无影响。结论Semaphorin 5A可能通过MMP9表达促进胃癌发生侵袭和转移。     

沉默MTA1表达对胃癌SGC7901细胞增殖和侵袭能力的影响

目的:观察转移相关基因1（MTA1）基因沉默对人胃癌细胞SGC7901增殖和迁移侵袭能力的影响,探讨 MTA1基因在胃癌发生发展中的作用。方法:利用脂质体法将靶向MTA1的小分子干扰 RNA（siRNA） 转染到胃癌细胞株 SGC7901中。运用Real time PCR 和Western blot 技术检测SGC7901细胞内MTA1的 mRNA和蛋白表达水平。CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell小室实验观察细胞迁移和侵袭能力。结果:MTA1 siRNA 可有效抑制SGC7901细胞MTA1基因在 mRNA 和蛋白水平上的表达（P﹤0.01）。CCK-8实验表明MTA1 siRNA 转染后细胞增殖不受影响;Transwell小室实验表明细胞迁移和侵袭能力明显下降。结论:沉默MTA1表达可抑制胃癌细胞株 SGC7901迁移和侵袭,而不影响细胞增殖。MTA1在胃癌侵袭转移过程中可能发挥重要作用。     

丹参酮ⅡA对胃癌细胞迁移和侵袭能力的抑制作用及机制

背景与目的：有研究证实,丹参酮ⅡA (tanshinone ⅡA)对肿瘤细胞具有抑制增殖、诱导分化和促凋亡的作用,并可抑制骨肉瘤细胞迁移和侵袭。但丹参酮ⅡA抑制胃癌侵袭和转移的机制尚不明确。本研究主要探讨丹参酮ⅡA对人胃癌SGC7901细胞体外迁移和侵袭的影响。方法：不同浓度(0.5、1、2、4 μg/mL)丹参酮ⅡA分别作用体外培养的胃癌SGC7901细胞24、48、72 h后,MTT比色法检测细胞增殖活力的改变;细胞划痕实验观察细胞的迁移能力的改变;3D侵袭实验观察细胞侵袭能力的改变;Real-time PCR和蛋白质印迹法(Western blot)分别检测细胞间黏附分子1(ICAM-1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)mRNA和蛋白的表达水平改变。结果：1、2、4 μg/mL丹参酮ⅡA对胃癌细胞株SGC7901有明显的抑制作用,且抑制作用存在时间-剂量依赖性(P<0.05);2 μg/mL丹参酮ⅡA呈时间依赖性抑制SGC7901细胞迁移;1、2、4 μg/mL丹参酮ⅡA呈浓度依赖性抑制SGC7901细胞侵袭;丹参酮ⅡA下调SGC7901细胞ICAM-1、MMP-2、MMP-9表达,同时可上调TIMP-2表达(P<0.05)。结论：丹参酮ⅡA可抑制胃癌SGC7901细胞的迁移和侵袭,上调TIMP-2的表达,下调ICAM-1、MMP-2、MMP-9的表达,可能是其作用机制之一。     

三氧化二砷对胃癌细胞系SGC7901的生长及VEGF表达的影响

目的：研究三氧化二砷（As2O3）对胃癌细胞株SGC7901的生长及血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响.方法：体外培养胃癌细胞株SGC7901,加入不同浓度的As2O3干预,用Western bloting和荧光定量RT-PCR法测定VEGF蛋白和mRNA表达,加入外源性重组人VEGF165,观察VEGF对肿瘤细胞生长的刺激以及As2O3对此作用的抑制.结果：胃癌细胞株SGC7901经As2O3作用后,VEGF的蛋白表达明显减少,但VEGFmRNA拷贝数无差异.在SGC7901细胞培养中加入外源性VEGF165,其细胞活力有所增加,细胞存活率均大于100％;当同时加入VEGF165和As2O3时,其细胞存活率明显减低.结论：As2O3在蛋白水平抑制胃癌细胞株SGC7901的VEGF表达,抑制SGC7901的生长.     

Bmi-1基因RNAi对胃癌细胞SGC7901及AGS作用的初步研究

目的:构建Bmi-1基因的RNAi表达载体,观察其对胃癌细胞SGC7901与AGS增殖、侵袭能力的影响.方法:利用慢病毒表达体系pHelper1.0/pHelper2.0/pGCL-GFP,构建Bmi-1基因的RNAi重组质粒vshRNA-Bmi-1.适时定量PCR和蛋白质印迹法分别检测稳定转染vshRNA-Bmi-1后胃癌细胞中Bmi-1 mRNA及蛋白的表达;MTT法及小室侵袭实验检测胃癌细胞增殖和侵袭能力的变化.结果:稳定转染vshRNA-Bmi-1后SGC7901及AGS细胞Bmi-1 mRNA表达均明显下降,抑制率分别为85%及80%.SGC7901细胞中Bmi-1蛋白表达无明显变化,而在AGS细胞中明显下降.Bmi-1干扰后SGC7901细胞的生长及侵袭能力无明显变化,而AGS细胞增殖减慢、侵袭能力减弱.结论:成功构建Bmi-1基因的RNAi表达载体,vshRNA-Bmi-1重组质粒明显下调Bmi-1 mRNA 在胃癌细胞SGC7901和AGS中的表达.Bmi-1基因的RNAi能抑制胃癌细胞AGS的增殖和侵袭能力.     

RhoC小干扰RNA抑制胃癌细胞的迁移和侵袭

目的：研究Ras homologyC（RhoC）在胃癌转移中的作用。方法：利用Vector NTI软件设计并构建RhoC的小干扰RNA（siRNA）载体，利用脂质体介导法将一组RhoCsiRNA分别转染胃癌SGC7901细胞。筛选出稳定抗性克隆；Westernblot检测RhoCsiRNA转染后的抑制效应，Cell Counting Kit-8检测RhoC siRNA转染细胞株的生长速度；MTT法检测转染细胞株对化疗药物的敏感性；损伤刮擦实验和TRANSWELL小室实验分别检测转染细胞株的迁移与侵袭能力。结果：在计算机辅助下成功地设计并构建了5个RhoC的小干扰RNA载体，Western blot显示其中一个RhoC的小干扰RNA RhloC-s362对RhoC的表达有明显的抑制作用；尽管下调RhoC的表达对胃癌细胞的生长和药物敏感性元明显影响，但可显著抑制肿瘤细胞的迁移与侵袭。结论：RhoC siRNARhoC-s362能够明显抑制胃癌SGC7901细胞中RhoC的表达，并进而抑制胃癌细胞的迁移与侵袭，提示RhoC可能在胃癌转移中发挥重要作用。     

siRNA沉默Snail基因对胃癌SGC7901细胞株增殖及侵袭能力的影响

目的探讨转录因子Snail在胃癌SGC7901细胞株增殖及侵袭转移过程中的作用,为胃癌的基因治疗提供有效靶点。方法化学合成针对Snail的靶向siRNA,同时以转染阴性对照siRNA、转染脂质体转染试剂和空白细胞作为对照。RT-PCR检测转染效率,MTT检测Snail siRNA对SGC7901细胞增殖能力的影响,Boyden chamber检测Snail siRNA对SGC7901细胞侵袭能力的影响。结果与各对照组相比,转染SnailsiRNA组SGC7901细胞Snail mRNA的表达下降,且随转染时间延长,Snail mRNA的表达下降明显(P<0.05)。MTT结果显示转染Snail siRNA组SGC7901细胞在转染后48、72 h较对照组增殖能力明显下降(P<0.05);Boyden chamber结果显示转染Snail siRNA组SGC7901细胞在转染后48、72 h较对照组穿膜细胞数明显下降(P<0.05);转染Snail siRNA组各时间点之间增殖能力和侵袭转移能力的差异也有统计学意义(P<0.05)。结论转录因子Snail在胃癌的发生、发展及侵袭转移中发挥重要作用,可作为胃癌基因治疗的有效靶点。     

国产聚乙烯亚胺应用于基因转染的研究

目的:观察国产聚乙烯亚胺(polyethylenimine, PEI)对肿瘤细胞的基因转染效率及细胞毒作用,探讨国产PEI转染Bcl-2反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASODN)对增强顺铂(cisplatin, DDP)诱导胃癌细胞株SGC7901凋亡的影响.方法:分别以国产和进口的PEI为载体,将携带增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent proteins ,EGFP)报告基因的质粒转入肺腺癌A549细胞、胃癌SGC7901细胞和宫颈癌HeLa细胞中,FCM法检测转染效率,MTT法检测不同浓度PEI作用下A549细胞、SGC7901细胞和HeLa细胞的存活率.以国产PEI为载体将Bcl-2 ASODN 转染SGC7901细胞后,不同质量浓度DDP处理转染细胞,FCM法检测转染细胞的凋亡率.结果:国产和进口PEI介导的EGFP报告基因转染肿瘤细胞的效率相当.不同浓度的国产PEI对肿瘤细胞的存活率均无明显影响.以国产PEI为载体转染获得的SGC7901/Bcl-2 ASODN细胞,在质量浓度为0～4 μg/mL DDP作用后,凋亡率明显上升.结论:国产PEI是一种安全有效的基因转染载体. Bcl-2 ASODN能够上调DDP对胃癌SGC7901细胞的凋亡率.     

Integrinβ1 asODN-inhibition of Cell Attachment and Invasion of the Human Gastric Cancer Cell Line SGC7901

OBJECTIVE To study the inhibition of adhesion and invasion of SGC7901cells into the ECM by integrinβ1 antisense oligodeoxynucleotide asODN.METHODS asODN and control ODN were transfected into SGC7901 cells using liposomes as vectors. The distribution of the ODN was followed by immunochemistry and changes in the expression of integrinβ1 mRNA and protein were determined by RT-PCR and FCM, respectively. The adhesion and invasion into the ECM were measured by the MTT and Boyden chamber methods, respectively.RESULTS Integrinβ1 asODN which was transfected into SGC7901 cells distributed evenly in the cytoplasm and nucleus. PCR and FCM revealed a weakened band at 489bp and a left-shift curve, respectively. Adhesion and invasion assays showed decreased activity with an inhibition rate of 54% and 76%. The extent of decrease induced by integrinβ1 asODN was larger than that caused by random control ODN (P＜0.001).CONCLUSION Transfection of integrinβ1 asODN into SGC7901 cells induced a decrease in the expression of integrinβ1 mRNA and protein,resulting in a decrease in adhesion and invasion into the ECM, with a greater effect than random control ODN.     

转染bcl-2反义寡核苷酸增强5-FU诱导胃癌细胞株SGC-7901凋亡

目的　探讨转染bcl 2反义寡核苷酸 (ASODN)能否增强 5 氟脲嘧腚 (5 -FU)诱导胃癌细胞株SGC790 1的细胞凋亡。方法　通过脂质体转染bcl 2ASODN和对照序列 ,凋亡率由流式细胞仪检测。酶联免疫法 (ELISA)用于检测细胞内源性bcl 2蛋白的表达 ,以证实反义序列的特异性。结果　和对照ODN相比 ,转染bcl 2ASODN显著增强 5 FU诱导的细胞凋亡率 (P<0 .0 1)。ELISA法显示SGC790 1的内源性bcl 2蛋白表达下降 (P <0 .0 1)。结论　bcl 2ASODN能增强 5 FU诱导胃癌细胞的凋亡率 ,这将为胃癌治疗提供有用的实验室依据。     

转染金属蛋白酶抑制剂对胃癌细胞体外侵袭能力的影响

目的：探讨基质金属蛋白酶抑制剂（ＴＩＭＰ－２）对ＳＧＣ－７９０１胃癌细胞体外侵袭能力的影响。方法：将人全长ＴＩＭＰ－２基因经脂质体包裹转染ＰＡ３１７细胞系，Ｇ４１８筛选，感染人ＳＧＣ－７９０１胃癌细胞系，经体外细胞增殖、细胞电泳率、软琼脂形成和侵袭小室的实验综合分析其生物学行为改变。结果：经ＴＩＭＰ－２基因转不的ＳＧＣ－７９０１细胞和ＭＦＣ细胞和细胞电泳率。软琼脂形成和侵袭能力均明显低于对照组，而     

Integrin?l asODN - inhibition of cell attachment and invasion of the human gastric cancer cell line SGC7901

Objective To study the inhibition of adhesion and invasion of SGC7901 cells into the ECM by integrin?l antisense oligodeoxynucleotide asODN. Methods asODN and control ODN were transfected into SGC7901 cells using liposomes as vectors. The distribution of the ODN was followed by immunochemistry and changes in the expression of integrin?l mRNA and protein were determined by RT-PCR and FCM, respectively. The adhesion and invasion into the ECM were measured by the MTT and Boyden chamber methods, respectively. Results Integrin?l asODN which was transfected into SGC7901 cells distributed evenly in the cytoplasm and nucleus. PCR and FCM revealed a weakened band at 489bp and a left-shift curve, respectively. Adhesion and invasion assays showed decreased activity with an inhibition rate of 54% and 76%. The extent of decrease induced by integrin?l asODN was larger than that caused by random control ODN (P<0.001 ). Conclusion Transfection of integrin?l asODN into SGC7901 cells induced a decrease in the expression of integrin?l mRNA and protein, resulting in a decrease in adhesion and invasion into the ECM, with a greater effect than random control ODN. This work was supported by the 973 State Project of Important Basic Research and the Key Project of the Department of Education, Liaoning Province.     

臭牡丹总黄酮通过Keap1/Nrf2/ARE信号通路对胃癌SGC7901细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨臭牡丹总黄酮(total flavone of clerodendrum bungei,TFCB)通过Keap1/Nrf2/ARE信号通路对胃癌SGC7901细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:用臭牡丹总黄酮溶液干预人胃癌SGC7901细胞,然后采用MTT法检测TFCB对SGC7901细胞增殖能力的影响;划痕修复及Transwell小室侵袭实验检测TFCB对SGC7901细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blot及RT-PCR法检测TFCB对SGC7901细胞Keap1、Nrf2及maf蛋白及mRNA表达的影响。结果:低、中、高剂量组TFCB均显著抑制了SW620细胞的增殖、迁移和侵袭,随着药物干预浓度的增加,抑制程度逐渐增加。与空白对照组比较,低剂量干预组TFCB处理后Nrf2及maf蛋白相对表达量均显著下降(P＜0.05),Keap1蛋白相对表达量显著升高(P＜0.05),但Keap1、Nrf2及maf mRNA表达量无显著的统计学差异(P＞0.05);高中剂量干预组TFCB处理后Nrf2及maf蛋白及mRNA相对表达量亦显著下降,Keap1蛋白及mRNA表达量显著升高,并且在高中低剂量干预组间Keap1、Nrf2及maf蛋白及mRNA相对表达量均有统计学差异(P＜0.05)。结论:TFCB可明显抑制人胃癌SGC7901细胞的增殖、迁移和侵袭,且其作用机制可能与TFCB阻滞Keap1-Nrf2-ARE信号通路的信号传导,抑制通路蛋白及mRNA合成有关。