锌对热应激大鼠垂体POMC mRNA表达的影响

目的：通过锌对热应激大鼠垂体阿黑皮素原（ＰＯＭＣ）ｍＲＮＡ表达的影响研究，探讨锌对热应激大鼠的保护机理。方法：２０只ＳＤ雄性大鼠随机等分４组，即高锌高温暴露组（Ａ组）、中锌高温暴露组（Ｂ组）、低锌高温暴露组（Ｃ组）和正常锌室温对照组（Ｄ组）。在ＡＩＮ－９３Ｍ饲料配方基础上，以碳酸锌为锌源，配制成高锌、中锌、低锌和正常锌饲料，每公斤饲料锌含量测定值分别为９２．２ｍｇ、４５．６１ｍｇ、２１．７０ｍｇ和４５．６１ｍｇ。４组大鼠在室温下饲以相应饲料１４天后，将Ａ、Ｂ、Ｃ组大鼠置于高温室（Ｔｄｂ４０℃，Ｔｗｂ３０．８℃）中连续暴露３小时。用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交分析法（探针为地高锌标记的ＰＯＭＣｃＲＮＡ），观察垂体ＰＯＭＣｍＲＮＡ表达水平。结果：（１）高温应激可使大鼠垂体ＰＯＭＣｍＲＮＡ表达水平增高；（２）高锌摄入可使热应激大鼠垂体ＰＯＭ－ＣｍＲＮＡ表达水平升高，而低锌摄入则相反。结论：锌对热应激大鼠垂体ＰＯＭＣ基因有调控作用，作用环节可能在转录水平上     

锌对热应激大鼠细胞免疫功能和NK活性的影响

目的：观察锌对热应激大鼠细胞免疫功能和自然杀伤细胞（ＮＫ）活性的影响。方法：用高、中、低锌饲料（饲料中锌含量分别为９２．２０、４５．６１和２１．７０ｍｇ／ｋｇ）喂养三组大鼠１５天。然后，将动物置于４１．５℃的人工气候室内进行热暴露，于热暴露后５ｍｉｎ、３０ｍｉｎ和６０ｍｉｎ时断头处死，进行淋巴细胞转化实验及ＮＫ细胞活性测定。结果：无论是否经受热暴露，高锌组淋巴细胞增殖反应与ＮＫ活性均显著高于中、低锌组。结论：热应激时，锌对热应激大鼠的细胞免疫功能和自然杀伤细胞活性有增强作用，可通过提高机体免疫力而抵抗热应激     

锌对热暴露大鼠血浆与肝、肾上腺中锌、铜、铁含量的影响

目的：　测定热暴露大鼠血浆、肝、肾上腺 Ｚｎ 、 Ｃｕ 、 Ｆｅ 含量以探讨锌对热暴露动物某些微量元素的影响。方法：　４８ 只７ ～８ 周龄雄性 Ｓ Ｄ 大鼠随机等分为高锌（ Ｈ Ｚ） 、中锌（ Ｍ Ｚ） 和低锌（ Ｌ Ｚ） 三组。每组大鼠再等分为两部分,一部分用于高温暴露,另一部分用于室温对照。每公斤高、中、低锌饲料锌含量测定值（ ｍ ｇ） 分别为９２ ．２ 、４５ ．６ 、２１ ．７ 。三组大鼠在室温下预饲相应饲料１４ｄ 后,将高温暴露大鼠转入高温室（ Ｔｄ Ｂ４０ ．５ ℃, Ｔｗ ｂ３０ ．８ ℃） 连续暴露３ｈ 后,即刻断头取样。用 Ａ Ａ Ｓ 火焰法测定样品中 Ｚｎ 、 Ｃｕ 、 Ｆｅ 含量。结果：　（１） 与室温对照值比,热暴露３ｈ 后,血浆 Ｚｎ 、 Ｆｅ 浓度下降, Ｃｕ 浓度升高,肝 Ｚｎ 和肾上腺 Ｃｕ 含量增加;（２） 在室温对照值之间, Ｈ Ｚ 组血浆锌浓度显著高于 Ｌ Ｚ 组;（３） 在热暴露值之间, Ｈ Ｚ 组肾上腺 Ｃｕ 含量显著或非常显著地高于 Ｍ Ｚ 组与 Ｌ Ｚ 组。结论：　（１） 补锌主要影响热应激大鼠体内微量元素 Ｚｎ与 Ｃｕ 的代谢或分布,而对 Ｆｅ 的影响较小;（２） 高锌（９２ ．２ ｍ ｇ／ｋｇ 饲料） 摄入可使热应激大鼠血浆 Ｚｎ 浓度升高、肾上腺     

不同水平饲料锌与热暴露对大鼠某些脑区锌、铜、铁含量的影响

选用４８只ＳＤ雄性大鼠随机等分３组，即Ａ组、Ｂ组和Ｃ组。再从每组中分出８只用于高温暴露，另８只用于室温对照，在ＡＩＮ－９３Ｍ饲料配方基础上，以碳酸锌为锌源，配制成Ａ、Ｂ、Ｃ组锌饲料。每千克饲料锌含量测定值：Ａ组为９２．２ｍｇ，Ｂ组４５．６１ｍｇ，Ｃ组２１．７０ｍｇ。根据动物分组，饲以各组大鼠相应水平锌饲料１４天后，将用于高温暴露的大鼠置于高温室（Ｔｄｂ４０℃，Ｔｗｂ３０．８℃）连续暴露３小时。用原子吸收分光光度计火焰法测定大鼠海马、大脑皮层和小脑Ｚｎ、Ｃｕ、Ｆｅ含量。实验结果发现：①高温暴露可使海马铜含量显著增加：②高温暴露后，海马铜含量比小脑和大脑皮层铜含量高，而在室温对照大鼠，小脑铜含量却比大脑皮层和海马铜含量高。③摄入不同水平饲料锌主要影响小脑铜的含量，对铁的影响较小。④中、高水平膳食锌摄入可使热应激大鼠小脑铜含量降低     

锌对热应激大鼠POMC衍生肽的影响

大鼠喂饲高锌（ＨＺ）、中锌（ＭＺ）、低锌（ＬＺ）饲料２周后，在高温室（干球４０．５℃，湿球３０．８℃）连续暴露３ｈ，观察锌对阿黑皮素原（ＰＯＭＣ）衍生肽的影响。结果发现：（１）高温刺激可致垂体β－内啡肽（β－Ｅｐ）含量下降、血浆β－Ｅｐ和ＡＣＴＨ浓度升高；（２）在室温下摄入不同锌水平饲料可使大鼠血浆ＰＯＭＣ衍生肽浓度发生变化，高锌摄入有助于增加血浆β－Ｅｐ和ＡＣＴＨ水平，而低锌摄入则使血浆β－Ｅｐ和ＡＣＴＨ水平下降；（３）摄入不同锌水平大鼠经高温暴露３ｈ后，垂体β－Ｅｐ含量下降程度不同（ＨＺ组下降最少，ＭＺ组次之，ＬＺ组下降最多），血浆β－Ｅｐ和ＡＣＴＨ浓度升高也各异（ＨＺ组和ＭＺ组增高较少，ＬＺ组增加最多）。据此结果，还就锌对热应激鼠发挥保护作用的机制进行初步探讨，提出了锌增强机体热耐受能力的假说。     

锌对热应激大鼠红细胞免疫功能的影响

用高、中、低锌饲料喂养的大鼠经热暴露５分钟、３０分钟和６０分钟后进行血红细胞Ｃ３ｂ受体酵母菌花环试验、红细胞免疫复合物花环试验,结果发现：无论是否经受热应激,红细胞Ｃ３ｂ受体及红细胞免疫复合物花环率均为高锌组高于中锌组,中锌组高于低锌组（差异有显著性）。提示锌不足导致红细胞免疫粘附功能减弱,降低其清除免疫复合物的能力,从而降低机体细胞免疫功能,不利于抵抗热应激。相反,充足的锌则有助于机体热耐力的形成。     

锌对热应激大鼠β-内啡肽的影响

目的：探讨锌对热应激大鼠β－内啡肽的影响。方法：分别以高、中、低锌饲料（锌含量分别为９２．２０、４５．６１、２１．７０ｍｇ／ｋｇ饲料）喂养三组大鼠，并于热暴露５、３０和６０ｍｉｎ时断头处死进行β－内啡肽测定。结果：三组大鼠热暴露后血液中β－内啡肽含量变化的趋势一致：受热５ｍｉｎ后即上升，至３０ｍｉｎ时继续升高，至６０ｍｉｎ时有所下降，但含量仍然比５ｍｉｎ时高。无论哪一个时间点上，高锌、中锌组含量均比低锌组高，统计学上有显著性差异。结论：足够的锌摄入能提高血浆β－内啡肽水平，锌摄入不足导致血浆β－内啡肽含量减少，而在高温反应中，β－内啡肽能减轻热和疼痛刺激所致的生理反应，由此可认为，锌通过提高血浆β－内啡肽水平而发挥体温调节作用，增强机体热耐力。     

接触苯工人血清热应激蛋白70抗体滴度分析

目的 了解接触苯工人血浆热应激蛋白７０滴度及其与工人健康之间的关系。方法 选择接触苯浓度≥４０ｍｇ／ｍ＾３工人４２名为高暴露组,接触苯浓度〈４０ｍｇ／ｍ＾３工人５０名为低暴露组,另选择不接触苯等职业有 ４２名为对照组采用新产酶联免疫肿附法测定其血浆热应激蛋白７０抗体滴度,并分析其他指标之间的关系。结果 高暴露组血浆热６应激蛋白７０抗体１：２０阳性率（２６．２％）明显高于对照组（９．５％）,并且高暴     

HSP70高表达对K_(562)细胞热耐力的影响

用硫酸镉诱导细胞ＨＳＰ７０ 高表达,ＲＴ—ＰＣＲ 检测ＨＳＰ７０ｍ ＲＮＡ 水平并观察ＨＳＰ７０ 水平对细胞热耐力的影响。发现硫酸镉作用于细胞１ｈ 后,细胞的ＨＳＰ７０ 水平显著增高, ＨＳＰ７０ 水平高的细胞其热耐力明显强于ＨＳＰ７０ 水平低的细胞组;ＨＳＰ７０ 水平与细胞热耐力间正相关。提示化学因素诱导的ＨＳＰ７０ 表达增高可以保护热暴露细胞,提高细胞热耐力     

HSP70高表达对K562细胞热耐力的影响

为探讨ＨＳＰ７０高表达与细胞热耐力的关系,用硫酸镉诱导细胞ＨＳＰ７０高表达;ＲＴ－ＰＣＲ检测ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ水平;观察ＨＳＰ７０水平对细胞热耐力的影响。结果：硫酸镉作用于细胞１ｈ后,细胞的ＨＳＰ７０水平显著增高,ＨＳＰ７０水平高的细胞其热耐力明显强于ＨＳＰ７０水平低的细胞组;ＨＳＰ７０水平于细胞热耐力间正相关。结论：化学因素诱导的ＨＳＰ７０表达增高可以保护热暴露细胞,提高细胞热耐力。     

复方人参制剂对热应激大鼠的保护作用研究

目的观察复方人参制剂对热应激鼠的保护作用。方法34只SD大鼠被随机分为对照组（Ⅰ组,n＝17）、复方人参制剂组（Ⅱ组,n＝17）。热应激前1h分别以水及复方人参制剂(0.5ml／100g体重)灌胃。动物于人工气候室内受热直至死亡。测定直肠温度、下丘脑hsp70含量等指标。结果(1)体温的变化Ⅱ组动物热应激过程肛温各时点的测定值均较对照组低,其中热至40min时低0.18℃,热至60min、80min、100min时则分别低0.56℃、0.70℃、0.71℃（P＜0.05）。Ⅰ、Ⅱ组肛温的平均上升速率分别为（0.044±0.022）℃／min、(0.029±0.015)℃／min（P＜0.05）。(2)动物热耐受时间和死亡率Ⅰ、Ⅱ组动物的平均热耐受时间分别为(162.8±62.9)min、(217.4±59.3)min,后者比前者延长54.6min（P＜0.05）;其动物死亡率,在热暴露2小时、3小时、4小时时Ⅰ组分别为41.2%、52.9%和82.4%,Ⅱ组则分别为11.8%、23.5%和52.9%,P值均小于0.05。(3)下丘脑hsp70含量的变化Ⅰ、Ⅱ组动物分别热暴露至死亡时,其下丘脑hsp70的含量为(47.72±19.03)μg／mg、(54.32±18.54)μg／mg（P＜0.05）,且hsp70含量与动物的热耐受时间呈高度正相关（r＝0.7074,P＜0.001）。结论复合人参制剂具潜在的预防性的抗热损伤功能。     

诱导分化剂和热应激对K562细胞JWA和热应激蛋白70表达的影响

目的　研究诱导K5 6 2细胞分化和热应激过程中 ,JWA表达的特点 ,探讨JWA与热应激蛋白 (Hsp70 )表达的关系以及参与诱导分化和热应激可能的机制。方法　分别建立K5 6 2细胞诱导分化和热应激模型 ,采用Western blot方法检测JWA、Hsp70、热休克转录因子 (HSF1)、HSF2蛋白表达水平。结果　 (1)佛波酯 (TPA ,10 0ng ml)、氯化高铁血红素 (hemin ,3× 10 - 5mol L)、阿糖胞苷 (Ara C ,80ng ml)、阿霉素 (adriamycin ,4× 10 - 8mol L)、全反式维甲酸 (ATRA ,1× 10 - 6 mol L)、三氧化二砷 (As2 O3,1× 10 - 6 mol L)分别诱导K5 6 2细胞 4 8h ,JWA、Hsp70蛋白表达水平均明显增加 ;HSF2在hemin、Ara C、ad riamycin诱导下表达增加 ;(2 )在 4 2℃不同时间 (10、2 0、30、4 5、6 0、90min)和不同温度 (39℃、4 2℃、4 5℃ )处理下 ,Hsp70表达水平的变化与JWA蛋白表达水平的变化趋势基本相似 ,且HSF1在热应激早期表达。结论　在诱导分化、热应激过程中 ,JWA与Hsp70蛋白表达水平均明显上调 ,且变化趋势有一定的相似 ,但所涉及的细胞内信号转导通路可能不是惟一的。JWA表达与HSF1或HSF2似乎没有直接的特征性联系。     

诱导分化联合热休克处理对K562细胞JWA和热休克蛋白70表达的影响

目的　研究不同诱导分化剂单独或与热休克联合作用下 ,K562细胞JWA蛋白表达的特点和规律 ,探讨JWA与热休克蛋白 70 (Hsp70 )表达的关系以及可能涉及的信号调节机制。方法　建立诱导K562细胞定向分化以及和热休克联合作用的实验模型 ,用Westernblot方法检测JWA、Hsp70、热休克转录因子 1(HSF1)、HSF2等蛋白表达。结果　 (1)佛波酯 (TPA ,10 0、2 0 0ng/ml)或阿霉素 (adri amycin ,4× 10 - 8mol/L)处理细胞 48h后 ,再热休克 (42℃ )处理 2h ,JWA和Hsp70蛋白表达均增加 ;而氯化高铁血红素 (hemin ,3× 10 - 5 mol/L ,48h)、阿糖胞苷 (Ara C ,80ng/ml,48h)和三氧化二砷 (As2 O3,1× 10 - 6 mol/L ,48h)处理后再热休克处理细胞 2h ,则JWA和Hsp70蛋白表达均下调 ;全反式维A酸(ATRA ,1× 10 - 6 mol/L ,48h)处理细胞后 ,再热休克处理 ,则JWA和Hsp70蛋白表达无明显变化。 (2 )不同诱导分化剂处理K562细胞后再热休克处理 ,HSF1和HSF2表达变化均不明显。结论　JWA不但参与K562细胞的诱导分化调节 ,也参与细胞对热应激的调节 ,JWA可能是多种化学诱导分化剂和热休克的共同靶基因。诱导K562细胞分化过程中 ,Hsp70的表达不需要热休克转录因子介导 ,JWA可能是一种与Hsp70信号通路平行的新的信号分子。我们的实验结果首     

过氧化氢处理K562细胞中JWA基因的表达及其与DNA损伤和凋亡的关系

目的研究过氧化氢(H2O2)诱导K562细胞氧化应激过程中,JWA蛋白、热休克蛋白(hsp70和hsp27)和p53蛋白的表达特点,探讨JWA参与细胞应答氧化应激的作用和可能机制。方法用0．01、0．1、1mmol／L的H2O2处理K562细胞10、30、60、180min建立氧化损伤模型;用0．1mmol／L H2O2处理不同时间(6～48h)和不同浓度(0．5～1000μmol／L)的H2O2处理48h分别诱导K562细胞凋亡,然后用DNA琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA损伤和凋亡,用免疫印迹方法检测热休克蛋白(hsp70和hsp27)、p53以及JWA的蛋白表达水平。结果在DNA损伤模型中,H2O2活跃地调节JWA的表达,JWA对氧化应激的应答比热休克蛋白更快速,JWA和hsp70的表达规律相似;在低剂量H2O2(0．01mmol／L)处理时,JWA和热休克蛋白的表达均显著增高;在细胞凋亡模型中,JWA、hsp70、hsp27和p53的表达均显著增高,其中,JWA、hsp70和p53三者的表达规律相似。结论JWA是一个有效的环境应答基因并活跃地参与细胞应答氧化应激所致的DNA损伤和细胞凋亡的信号通路,其介导的信号通路可能与hsp70和p53有关。     

阿维菌素原药诱导大鼠肝组织热应激蛋白70基因表达的研究

目的研究阿维菌素原药诱导大鼠肝组织HSP70基因表达的变化,为阿维菌素原药环境污染早期监控及暴露人群的保护提供依据。方法将清洁级Wistar大鼠随机分成3个染毒组和1个对照组,每组12只,雌雄各半,3个染毒组每日经口灌胃不同浓度阿维菌素原药植物油稀释液,最终染毒剂量分别为2.5、1.25、0.625 mg/kg,连续染毒14 d,对照组给予等量花生油。观察大鼠一般状况,测定血清总蛋白(TP),并运用RT-PCR扩增技术观察肝组织HSP70 mRNA表达的变化。结果2.5 mg/kg剂量组雌性大鼠血清TP低于对照组(P<0.05);各染毒组动物肝组织HSP70 mRNA表达呈剂量-效应关系,2.5 mg/kg及1.25 mg/kg剂量组HSP70 mRNA表达明显增加(P<0.05)。结论阿维菌素原药能够敏感地诱导HSP70基因的表达,提示检测HSP70基因表达可作为阿维菌素原药早期监控的指标之一。