二甲双胍对巨核细胞白血病细胞株Dami细胞增殖的抑制作用及其机制

目的：研究二甲双胍对巨核细胞白血病细胞株Dami细胞生长的影响,初步探讨二甲双胍抑制Dami细胞增殖的分子机制。方法：将培养的Dami细胞分为空白对照组,1、2、4、8、16和32 mmol?L-1二甲双胍处理组;MTT法检测不同浓度二甲双胍作用后Dami细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期分布,免疫印迹分析Cdc2和Cyclin B1蛋白的表达以及Cdc2蛋白的磷酸化修饰。结果：MTT检测,与空白对照组比较,32 mmol/L二甲双胍处理组0、24、48、72和96 h Dami细胞增殖抑制率明显升高［（35.1±2.3）%、（49.7±5.1）%、（78.8±0.9）%、（79.1±3.0）%和（85.2±3.2）%］（P<0.01）;在二甲双胍处理72 h后,1、2、4、8、16和32 mmol/L处理组Dami细胞增殖抑制率分别为（33.8±1.3）%、（51.9±2.2）%、（59.4±1.6）%、（65.5±2.0）%、（75.5±0.9%）和（79.1±3.0）%,二甲双胍对Dami细胞的增殖抑制作用呈时间和剂量依赖性。流式细胞术检测,与空白对照组比较,1、2和4 mmol/L二甲双胍处理组G2/M期细胞比例从（26.0±0.5）%升高至（38.5±1.5）%、（48.4±1.1）%和（58.2±2.7）%,4 mmol?L-1二甲双胍处理组G2/M期细胞比例明显高于对照组（P<0.01）。免疫印迹分析,与空白对照组比较,4 mmol/L二甲双胍处理组Cdc2和Cyclin B1的表达水平明显下降,Cdc2在Try15位点磷酸化明显上调,而在Thr161位点的磷酸化明显下调。结论：二甲双胍能抑制Dami细胞增殖并诱导其发生G2/M期阻滞,其机制可能与Cdc2/Cyclin B1复合物的活化受到抑制有关。     

双密达莫抑制流感病毒A(H_1N_1)核蛋白基因作用的实验研究

探讨双密达莫抑制流感病毒A(H1N1)核蛋白基因(NPG)的作用。方法采用荧光定量RT-PCR法检测药物抑制流感病毒NPG效应。结果药物对MDCK细胞的毒性范围:1∶64稀释为无毒界限。病毒半数细胞感染量(TCID50)为6.5.25μL-1。直线相关性分析结果显示:阈值循环数与不同浓度的定量模板的对数呈负相关(r=-0.999,P<0.05)。病毒对照组RNA水平明显高于实验组[(5.50±1.82)×109拷贝数.μL-1 vs(8.59±2.17)×107拷贝数.μL-1,P<0.01)]。结论双密达莫能阻断流感病毒核蛋白的合成,为防治流感提供了分子实验依据。更多还原     

Akt抑制剂MK2206对舌鳞癌TCA-8113细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制

目的：探讨Akt抑制剂MK2206对舌鳞状细胞癌(舌鳞癌)TCA-8113细胞增殖和凋亡的影响,并阐明其可能的作用机制。方法：取处于对数生长期舌鳞癌TCA-8113细胞株随机分为对照组和1、5、25、125及250 nmol/L MK2206实验组。在不同剂量及时间处理因素下,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,蛋白质印迹分析检测细胞中caspase-9、Bad 、GSK-3β、p-Akt和T-Akt蛋白表达水平。 结果：舌鳞癌TCA-8113细胞在MK2206
作用12、24和36 h的半数抑制浓度（ＩＣ５０）分别为（112.54±1.67）、（79.67±2.01）和(33.33±1.98） nmol/L。FCM法检测,1、5、25、125和250 nmol?L-1 MK2206作用舌鳞癌TCA-8113细胞12 h后,细胞凋亡率分别为（14.2±0.74）%、（19.3±0.45）%、（35.1±0.45）%、（39.6±0.48）%和（52.1±0.19）%,与对照组比较差异均有统计学意义（P<0.01）。蛋白质印迹分析,随着MK2206药物剂量和作用时间的增加,p-Akt、Bad 和GSK-3β蛋白表达水平下降,与对照组β-actin比较其条带的颜色变暗;caspase-9蛋白表达水平升高,与对照组β-actin比较其条带的颜色变深。T-Akt蛋白表达变化不明显,与对照组β-actin比较条带的颜色无明显不同。结论：Akt抑制剂MK2206可抑制舌鳞癌TCA-8113细胞增殖并诱导凋亡。     

登革Ⅱ型病毒前膜蛋白基因反向重复序列具有干扰病毒复制的作用

目的构建含有登革Ⅱ型病毒（DENV-2）前膜蛋白（prM）基因反向重复序列（irRNA）的重组质粒,评价其抑制病毒复制的
效果。方法DENV-2接种乳鼠,提取总RNA,在正义和反义引物两端分别加上XhoⅠ和EcoRⅠ的识别位点,将经RT-PCR 扩增
的prM全长基因片段插入pcDNA3.1(+)中,形成含有prM反向序列的重组质粒pcDNA-asprM;于另一对正义和反义引物两端引
入酶切位点NheⅠ和BglⅡ,经RT-PCR 扩增prM 全长基因片段插入pMD18-T-vector 中,形成含有正向序列的重组质粒
pMD18-T-prM。限制性内切酶NheⅠ和KpnⅠ分别酶切重组质粒pMD18-T-prM和重组质粒pcDNA-asprM,得到片段prM和线
性化载体pcDNA-asprM,连接构建成含有prM反向重复序列的重组质粒pcDNA-irRNA。筛选的阳性重组质粒pcDNA-irRNA
用脂质体法转染至BHK-21细胞中,半定量PCR和实时荧光定量PCR分析评估该质粒抑制登革病毒复制的效果。结果成功构
建具有prM反向重复序列的重组质粒pcDNA-irRNA。经转染pcDNA-irRNA的实验组与未转染质粒阳性对照组相比,半定量
PCR结果显示DENV-2攻击96 h后NS3的mRNA表达水平下降28%;实时定量PCR分析显示,DENV-2攻击72 h后实验组病毒
拷贝数比阳性对照组少1.44倍,攻击96 h后实验组的NS1表达量明显低于阳性对照组（P<0.05）。结论DENV-2 prM反向重复
序列具有干扰病毒复制的效果,为登革病毒基因疫苗的研究提供理论依据。
     

登革病毒NS1蛋白的原核表达及其在登革热快速诊断中的应用

【目的】重组表达1型登革病毒(DENV-1)和3型登革病毒(DENV-3)NS1蛋白,制备多克隆抗体,建立特异、敏感的登革病毒NS1抗原ELISA检测法。【方法】RT-PCR扩增DENV-1和DENV-3 NS1全长基因,经T-A克隆后,将目的基因分别与质粒PET30a(+)连接构建重组质粒,转化大肠杆菌BL21感受态细胞。阳性克隆经IPTG诱导表达,并对目的蛋白进行纯化。用纯化的NS1蛋白免疫BALB/c小鼠,制备鼠抗NS1多克隆抗体。应用NS1多克隆抗体建立登革病毒NS1抗原双抗体夹心ELISA检测法。【结果】成功构建了高效表达DENV-1和DENV-3 NS1蛋白的原核表达系统,获得纯化的NS1蛋白;用重组NS1蛋白免疫BALB/c小鼠后获得高效价(>1:30 000)的抗DENV-1和DENV-3 NS1的特异性抗体;用NS1多克隆抗体建立了登革病毒NS1抗原双抗体夹心ELISA检测法,该法可特异性检出登革病毒NS1抗原,敏感性达到1 ng/mL,与黄病毒的其它成员无交叉反应,表明具有良好的特异性。【结论】本研究成功构建了DENV-1和DENV-3 NS1蛋白的原核表达系统,高效表达了具有良好免疫原性及免疫反应性的DENV-1和DENV-3重组NS1蛋白;建立了检测登革病毒NS1抗原的双抗体夹心法,并证明该检测法具有较高的灵敏度和特异性,具有良好的应用前景。     

幽门螺杆菌脂多糖对胃粘膜shh信号通路相关蛋白Gli、Ptch-1表达的影响

目的：观察幽门螺杆菌（Helicobacter Pylori,Hp）脂多糖刺激下胃粘膜细胞Shh信号通路发生的变化。 方法：应用热酚水法提取Hp脂多糖,动态浊度法检测脂多糖浓度,将人胃粘膜上皮细胞系GES-1进行细胞培养后分成6组,分别以浓度为0 μg/ml、1 μg/ml、10 μg/ml、20 μg/ml、30 μg/ml、40 μg/ml的Hp脂多糖进行刺激。刺激24 h后,应用MTT法观察各组细胞活性,Western Blot法对各组细胞中Shh信号通路相关蛋白Gli、Ptch-1的表达水平进行检测。 结果：不同浓度Hp脂多糖刺激24h后,MTT法检测结果显示随着Hp脂多糖浓度增加,Hp脂多糖对GES-1细胞增殖抑制越强,分别为25.8%±2.7%,34.2%±3.1%,46.3%±3.4%,60.8%±2.1%,82.9%±2.8%（r=0.985,P<0.001）;Western Blot检测结果显示随着Hp脂多糖浓度增加,Gli、Ptch-1表达逐渐下降,Gli相对表达值分别为1.286±0.180、0.963±0.067、0.850±0.085、0.566±0.058、0.549±0.056、0.377±0.047（r=-0.945,P<0.001）;Ptch-1相对表达值分别为1.688±0.088、1.466±0.061、1.170±0.065、1.042±0.064、0.648±0.057、0.482±0.074（r=-0.985,P<0.001）。 结论：Hp脂多糖能使Shh信号通路中相关蛋白的表达明显降低,提示Hp对胃粘膜Shh信号通路的影响可能是通过脂多糖实现的。     

miRNA93和miRNA192在H3N2亚型SIV病毒复制及宿主抗病毒免疫中的作用

目的 探讨分离于广西猪流感病毒SW/Guangxi/NS2783/2010和SW/Guangxi/NS650/2012跨种属感染人肺腺癌A549细胞的miRNA93和miRNA192对病毒复制及宿主抗病毒免疫的影响。方法 通过测定不同稀释浓度的病毒感染细胞HA滴度值,确定病毒最佳稀释浓度。荧光定量PCR检测病毒感染细胞后miRNA93和miRNA192表达,Western blot检测病毒NP和HA蛋白表达水平;转染miRNA93和miRNA192抑制剂后,重新检测miRNA93、miRNA192、IFN-β及病毒NP、HA蛋白表达水平。结果 不同稀释度病毒感染人A549细胞后HA滴度的结果显示病毒SW2783的最佳稀释度为10^-3,而SW650的HA滴度无明显变化趋势,提示病毒SW2783对人A549细胞具有较好的适应性和感染能力。荧光定量PCR和Western blot结果提示两株病毒感染细胞后病毒NP和HA蛋白表达均先升高后降低,加入miRNA93抑制剂,两株病毒NP和HA蛋白的表达均上调;加入miRNA192抑制剂,病毒SW2783的HA蛋白表达下调（P=2.10×10^-4）,而SW650的HA蛋白表达上调（P=5.45×10^-5）,NP蛋白反而下调（P=0.034）;ELISA结果提示病毒SW2783和SW650感染细胞后炎症因子IFN-β表达水平随感染时间延长而升高。结论 研究表明miRNA93和miRNA192的表达与SIV病毒增殖及宿主抗病毒免疫有关,可作为干预猪流感病毒跨种属感染的新靶点。     

游离脂肪酸通过刺激整合素连接激酶表达促进肾癌786-O细胞增殖

目的：探讨游离脂肪酸（free fatty acids, FFAs）异常对人肾癌786-O细胞增殖以及整合素连接激酶（integrin-linked kinase, ILK）蛋白表达的影响。方法：分别用0、0.05、0.1和0.2 mmol/L的油酸（oleic acid,OA）作用人肾癌786-O细胞48 h,其中0 mmol/L组作为对照组。利用MTT方法检测各组细胞增殖情况,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况,Western blot方法检测各组细胞中ILK、Akt和p-Akt蛋白的表达水平。结果：MTT检测结果显示,0.05、 0.1和0.2 mmol/L OA组与对照组相比,细胞增殖活性显著增高（光密度0.657±0.056、0.682±0.028、0.718±0.042 vs. 0.495±0.034,P均＜0.001）;而不同浓度的OA对786-O细胞的凋亡作用并不明显（凋亡率2.42%±0.25% vs. 2.33%±0.87% vs. 2.25%±0.51%, P=0.082）;与对照组相比,OA组中的ILK、p-Akt蛋白表达显著上调。结论：FFAs通过刺激ILK/Akt通路可促进细胞增殖,可能与肾癌发生有关。     

三七总皂苷抑制HSC-T6增殖的实验研究

目的研究三七总皂苷对HSC-T6细胞增殖的影响。方法将复苏后处于对数生长期的HSC-T6单细胞悬液稀释成浓度为2.0×10^5个/ml,并以0.1ml/孔接种,置于37℃、5%CO2培养箱内培养,24h后将不同稀释度的三七总皂苷按0.1ml/孔加入培养孔。实验另设培养液空白对照组和细胞对照组。每24h观察细胞形态及其生长状况,实验第4天取细胞上清液,所余细胞以MTT法用酶标仪测定OD值,计算出药物对细胞增殖的抑制率。结果三七总皂苷1/1、1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、1/128倍比稀释浓度时的抑制率分别为83.9%、82%、83%、80.4%、85.3%、79.8%、70.7%、58.9%。1/128以下浓度组的抑制率逐渐降低。结论三七总皂苷对HSC-T6细胞的增殖有明显抑制作用,且有明显的浓度依赖,在128倍稀释浓度时仍有较高抑制率且细胞破坏较轻。     

淫羊藿苷对NB4白血病细胞株增殖和凋亡的影响及其作用机制

目的:研究淫羊藿苷(ICA)对急性早幼粒细胞白血病NB4细胞株增殖和凋亡的影响,探讨其作用机制。方法:选取处于对数生长期的 NB4细胞,随机分为空白对照组和不同浓度(4、8、16、32和64 μmol·L^-1)ICA组,采用MTT法检测作用不同时间(24、48和72h)后各组 NB4细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞24h时细胞周期进程及48h时凋亡情况,采用Western blotting法检测各组NB4细胞48h时凋亡相关蛋白的表达水平。结果:细胞培养不同时间(24、48和72h)后,各ICA组细胞增殖抑制率高于空白对照组(P<0.05),随ICA浓度增加和作用时间延长,细胞增殖抑制率升高(P<0.05)。各浓度ICA(4、8、16、32和64μmol·L^-1)组NB4细胞48 h后细胞凋亡率分别为(6.52±4.12)%、(10.07±2.36)%、(15.41±3.64)%、(25.18±1.24)%和(29.41±1.43)%,与空白对照组[(2.39±1.87)%]比较差异均有统计学意义(P< 0.05)。各浓度ICA(8、16、32和64μmol·L^-1)组NB4细胞24 h后 S期NB4细胞百分率降低,G₁期细胞百分率升高,与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。Western blotting 检测,与空白对照组比较,各浓度ICA组NB4细胞Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05),而Bax蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论:ICA通过抑制Bcl-2蛋白表达水平和上调Bax蛋白表达水平诱导急性早幼粒细胞白血病NB4细胞株凋亡。     

不同稀释度A型肉毒毒素治疗偏侧面肌痉挛的疗效观察

目的 观察不同稀释度A型肉毒毒素(BTX-A)治疗偏侧面肌痉挛(HFS)的疗效.方法 65例HFS患者随机分为A组(33例)和B组(32例),分别采用25 U/ml和50 U/ml稀释度BTX-A注射治疗.观察两组的BTX-A用量、治疗效果、疗效持续时间及不良反应发生率.结果 A组注射点数为(12±2)点、BTX-A用量为(25±7) U,B组注射点数为(10±1)点、BTX-A用量为(42±9) U,两组注射点数和BTX-A用量间差异均有统计学意义(P＜0.05).两组患者治疗效果和疗效持续时间比较差异均无统计学意义(P＞0.05).A组共有7例发生不良反应,不良反应发生率为21.21%;B组共有13例发生不良反应,不良反应发生率为40.62%,两组不良反应发生率间差异有统计学意义(χ2=3.47,P＜0.05).结论 使用25 U/ml稀释度BTX-A注射治疗HFS与使用50 U/ml稀释度的疗效相似,但可显著减少BTX-A用量和不良反应发生率.     

Inhibitive effect of cremophor RH40 or tween 80-based self-microemulsiflying drug delivery system on cytochrome P450 3A enzymes in murine hepatocytes

This study examined the effect of self-microemulsiflying drug delivery system (SMEDDS) containing Cremophor RH40 or Tween 80 at various dilutions on cytochrome P450 3A (CYP3A) enzymes in rat hepatocytes, with midazolam serving as a CYP3A substrate.The particle size and zeta potential of microemulsions were evaluated upon dilution with aqueous medium.In vitro release was detected by a dialysis method in reverse.The effects of SMEDDS at different dilutions and surfactants at different concentrations on the metabolism of MDZ were investigated in murine hepatocytes.The cytotoxicity of SMEDDS at different dilutions was measured by LDH release and MTT technique.The effects of SMEDDS on the CYP3A enzymes activity were determined by Western blotting.Our results showed that dilution had less effect on the particle size and zeta potential in the range from 1:25 to 1:500.The MDZ was completely released in 10 h.A significant decrease in the formation of 1’-OH-MDZ in rat hepatocytes was observed after treatment with both SMEDDS at dilutions ranging from 1:50 to 1:250 and Cremophor RH 40 or Tween 80 at concentrations ranging from 0.1% to 1% (w/v), with no cytotoxicity observed.A significant decrease in CYP3A protein expression was observed in cells by Western blotting in the presence of either Cremophor RH40 or Tween 80-based SMEDDS at the dilutions ranging from 1:50 to 1:250.This study suggested that the excipient inhibitor-based formulation is a potential protective platform for decreasing metabolism of sensitive drugs that are CYP3A substrates.     

登革病毒非结构蛋白1 氨基端抗原性分析及其检测登革病毒感染动物血清

目的    精确分析登革病毒(dengue virus,DENV)非结构蛋白1（non-structural protein 1, NS1)氨基(N)端抗原性和免疫原性,探讨NS1 N端多肽用于分型检测DENV感染可行性。方法    合成4型DENV 标准株NS1蛋白 N端1-15氨基酸残基序列多肽（D-1 P1、D-2 P1、D-3 P1和D-4 P1）,采用ELISA方法检测多肽同DENV NS1 血清型特异性单抗和各型DENV分别免疫小鼠血清的反应性,竞争抑制法进一步验证单抗和对应多肽反应特异性。分析4型DENV 标准株NS1 N端1-15氨基酸残基序列多肽在Pubmed中已报道的各型DENV分离株中的保守性。结果     6株DENV 1型特异性单抗（5A48A3, 5A65A2, 5B29A1, 5B71A8, 5C29A3和5E68A17）特异性的同D-1 P1;6株DENV-2 NS1型特异性单抗（5D21A1、5E19A5、 5A62A12、5A70A4、5E30A5和5E48A15）特异性的同D 2 P1反应。D-1 P1仅识别DENV 1免疫小鼠血清, 其他多肽同各型DENV 1免疫小鼠血清反应无差异。DENV-1、2、3、4 NS1 N端保守性依次为98.96%、89.09%、83.58%和57.81%。结论     DENV-1 NS1 N端是DENV-1血清型特异性优势线性表位,该多肽可用于研制诊断DENV-1感染试剂盒;DENV-2 NS1 N端是DENV-2血清型特异性表位,以上研究有助于DENV亚单位疫苗和DENV感染分型诊断试剂盒的研制。     

清开灵注射液对小鼠TB细胞增殖与功能的影响

目的：研究清开灵注射液在体内对正常小鼠胸腺及脾脏指数,迟发型过敏反应（DTH）及T、B细胞活化增殖的影响,探讨其免疫调节作用及机制。方法：将小鼠随机分为正常对照组、DTH对照组、清开灵注射液低、中、高三个剂量组及阳性药物组。各组小鼠给予不同浓度的清开灵注射液,阳性药物或生理盐水腹腔注射后,对各组小鼠胸腺及脾脏指数,DTH反应强度以及T、B细胞增殖活化能力进行比较。结果：清开灵注射液大、中两个剂量组的小鼠胸腺指数明显低于正常对照组,存在极显著性差异（P〈0.01）,而清开灵注射液对小鼠脾脏指数无明显影响（P〉0.05）;三个剂量的清开灵注射液均能明显抑制DTH反应,与DTH组相比,差异显著（P〈0.05）;清开灵注射液三个剂量组均可明显降低正常小鼠由ConA刺激的T细胞非特异性增殖反应,其中以大剂量组作用最为明显,和正常组相比,差异极显著（P〈0.001）。而对由LPS刺激的B细胞非特异性增殖反应,则无显著性影响（P〉0.05）。结论：清开灵注射液体内可有效抑制T细胞的活化增殖及功能从而调节机体的免疫反应。 更多还原     

MPT64检测作为结核分枝杆菌生长指标的研究

目的分析把检测MPT64作为结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）生长指标的可行性。方法对MTB阳性液体培养物进行MPT64检测,分析其作为MTB生长指标的有效性;对不同稀释浓度（1mg/ml、0.1mg/ml、0.01mg/ml和0.001mg/ml）的MTB阳性液体培养物进行MPT64检测,分析该项检测的指示最低限;对不同放置时间（10d、30d、60d）的MTB阳性液体培养物进行MPT64检测,分析指示的稳定性。结果 20份MTB阳性液体培养物的MPT64检测均阳性,该项检测能100%有效指示MTB的生长;3份MTB阳性液体培养物1mg/ml、0.1mg/ml、0.01mg/ml稀释浓度的MPT64检测均阳性,其中2份MTB阳性液体培养物0.001mg/ml稀释浓度的MPT64检测阳性,而另1份则检测阴性,该项检测的指示最低限为0.01mg/ml;10份MTB阳性液体培养物放置30d、60d后MPT64检测均为阳性,该项检测用于指示MTB生长具有很好的稳定性。结论 MPT64检测可作为MTB生长的一种指示手段。     

乳腺癌术后放疗联合复方苦参注射液治疗对患者免疫功能及生存质量的影响

目的：观察术后放疗联合复方苦参注射液治疗乳腺癌的临床疗效及其对患者细胞免疫功能及生活质量的影响,为临床乳腺癌患者术后治疗提供有力依据。方法回顾性分析我院乳腺放疗科2013年1月至2014年12月收治的128例术后放疗乳腺癌患者的临床诊治资料,其中术后放疗者64例为对照组,术后放疗联合复方苦参注射液静脉滴注者64例为观察组,共治疗6个月。于治疗前及治疗6个月后第二天检测两组患者的细胞免疫功能,比较两组患者美容效果、生活质量和不良反应。结果治疗6个月后观察组患者的CD3+、CD4+、NK细胞及CD4+/CD8+值较治疗前明显提高[(65.7±6.9) vs (58.3±8.1)、(38.7±4.9±6.9) vs (24.5±3.0)、(65.6±8.3)%vs (39.6±5.3)%、(1.18±0.21) vs (0.59±0.14)],而CD8+值较治疗前明显下降[(31.0±2.9) vs (42.7±4.5)],差异均有统计学意义(P<0.05);对照组患者的CD8+及NK细胞数较治疗前稍增加[(43.3±4.4) vs (42.1±4.9)、[(41.3±5.8)%vs (40.1±5.1)%],其他指标较治疗前略下降,差异均无统计学意义(P>0.05);观察组患者的美容优良率为92.2%(59/64),略优于对照组89.1%(57/64),差异无统计学意义(P>0.05);观察组患者的生存质量改善者52例(81.3%),明显高于对照组30例(46.9%),差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者的皮肤反应和骨髓抑制明显优于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论术后应用复方苦参注射液联合放疗治疗乳腺癌,其可减少不良反应,增强患者细胞免疫功能,且术后不会对乳房美容效果产生较大影响,有利于改善患者生活质量。     

登革病毒HLA-A*0201限制性T细胞表位诱导免疫反应的研究

目的：探讨登革病毒（DENV）HLA-A*0201限制性T细胞表位诱导DENV血清型间交叉反应性T细胞的效应。方法：基于已鉴定DENV-1中HLA-A*0201限制性CD8+ T细胞表位（NS4b40-48TLYAVATTI）序列,合成在其他血清型中相似的候选表位,采用MHC-肽复合物稳定性实验检测候选表位与HLA-A*0201结合力。采用酶联免疫斑点（ELISPOT）实验研究已鉴定表位及候选表位免疫HLA-A*0201转基因小鼠产生的CD8+ T细胞识别相同及相似表位能力;采用ELISPOT实验研究不同DENV血清型感染HLA-A*0201转基因小鼠是否产生能识别已鉴定表位及候选表位的T细胞反应。结果：DENV-3中NS4b39-47TLYAVATTV与HLA-A*0201具高结合力,但DENV-2中NS4b39-47TLYAVATTF与HLA-A*0201结合力弱。DENV-1-NS4b40-48和DENV-3-NS4b39-47免疫的转基因小鼠脾、淋巴结和外周血中存在可识别DENV-1-NS4b40-48、DENV-2-NS4b39-47和DENV-3-NS4b39-47的交叉反应性CD8+ T细胞。在DENV-1,-2,-3感染的转基因小鼠体内也存在类似的T细胞反应。结论：DENV-3中NS4b39-47TLYAVATTV为新的CD8+ T细胞表位,该表位及已报道表位NS4b40-48TLYAVATTI均可诱导DENV血清型间交叉反应性CD8+ T细胞反应,二者有助于我们研究DENV血清型间交叉反应性CD8+ T细胞的功能以及用于评估DENV候选疫苗的T细胞免疫效应。     

不同剂量布托啡诺硬膜外注射对大鼠神经功能行为的影响

目的 观察不同剂量的布托啡诺硬膜外注射对大鼠神经功能及行为学的影响.方法 雄性SD大鼠,体质量180～210g,于L1-2处行硬膜外置入PE-530导管,3d后,取无运动障碍的大鼠32只,随机分为4组:生理盐水(NS)组(C组,n=8)、布托啡诺组(B1组n=8,B2组n=8,B3组n=8).C组硬膜外注射NS 30μl,B1、B2、B3组分别硬膜外注射布托啡诺60,120和240μg,都溶于30μl NS.置管成功后第1～5天给药,1次/d.在未给药时(T0)、第1～4天给药后6h(T1～4)及第5天给药后6h、24h、72h(T5～T7),各组行斜板试验和BBB(BASSO,BEATTTE,BRESNAHAN)评分.结果 布托啡诺60μg组在各时间点BBB评分和斜板试验和C组比较,差异无显著性(P＞0.05);B2组、B3组在T0～T3时间点,BBB评分和斜板试验和C组比较,差异无显著性(P＞0.05).随着时间的变化,给药后第4天(T4)BBB评分[(18.50±2.00)分、(16.38±2.33)分]和斜板试验[(58.75±5.17)°、(59.38±3.20)°]比C组[(21.00±0.00)分、(65.00±3.78)度]明显降低,差异有显著性(P＜0.05),并持续到T7.结论 布托啡诺60μg连续给药对大鼠神经功能及行为学无影响,但布托啡诺120μg和布托啡诺240μg连续给药会损害大鼠神经功能,产生行为学的影响.

Abstract：

Objective To observe the effect of epidural injection with different dose of butorphanol on the rats' neurological function.Methods A PE-530 catheter was inserted into the epidural space of all the SpragueDawley rats (male, weighting 180 ～210 g) at L1-2 level.After three days, a total of 32 rats without any motor dysfunction were randomly divided into 4 groups as follows saline(NS) group (group C, n= 8 )and butorphanol injection (B) group( B1∶ n=8;B2∶ n=8;B3∶ n=8).Rats in group C were epidurally injected NS 30 μl each ,and rats in group B1, B2 and B3 were respectively epidurally injected Butorphanol 60 μg/30μl, 120 μg/30 μl,240 μg/30 μl (all diluted with NS) ,and 1 time per day for5 days.The neurological function of rats was recorded before injection (T0) and 6h after injection on day 1 ～4(T1 ～T 4) and 6h,24h and 72h after injection on day 5 (T5 ～T7) by BBB (BASSO,BEATTIE and BRESNAHAN ) Score and the inclined plane test .Results Compared with group C ,the BBB score and the inclined plane test of group B1 showed no significant difference throughout the experimental period(P＞ 0.05 ).There was also no significant difference at T0 ～ T3 of group B2 and group B3 compared with group C (P ＞ 0.05 ), while at T4, the BBB score ( ( 18.50 ± 2.00 ) points, ( 16.38 ± 2.33 ) points) and the inclined plane test( (58.75 ± 5.17 )°, (59.38 ± 3.20) ° ) of the two groups were both obviously decreased when compared with group C( (21.00 ±0.00) points, (65.00 ±3.78)°, P＜0.05) ,and the same significant differences appeared at T5,T6 and T7 (P ＜ 0.05 ).Conclusion Repeated epidural injection of butorphanol 60 μg have no effect on neurological function of rats,while repeated epidural injection of butorphanol 120 μg and 240 μg could impaire the neurological function.     

CtBP2异常表达对前列腺癌PC3细胞增殖效应影响的研究

目的:探讨CtBP2在前列腺癌中的表达情况,并明确其异常表达对前列腺癌PC3细胞增殖效应的影响。方法:采用免疫组化、qPCR及Western blot检测CtBP2的表达情况,采用细胞计数法、单克隆集落形成实验及MTT法检测细胞的增殖能力。结果:在前列腺癌组织中CtBP2 蛋白高表达率为97.5%（156/160）,表达水平较良性前列腺增生组织显著升高（P＜0.05）,细胞计数及MTT实验结果表明CtBP2 Silencer组较Vector control组及Parent control组,其增殖能力降低分别为70%及75%（P＜0.05）,单克隆集落形成实验结果显示Blank Control 组、Vector control组和Silencer组PC3细胞培养12 d后可见克隆数分别为（136±11）、（128±12）和（56±9）（P＜0.05）,克隆面积为（342±22）mm²、（322±23）mm²和（122±16）mm²（P＜0.05）。结论:CtBP2在前列腺癌中高表达,而减低其表达水平可显著抑制前列腺癌细胞增殖能力。