NORE1基因调控胃癌细胞迁移、侵袭及机制研究

目的研究Ras相关区域家族5(NORE1)基因过表达对胃癌细胞迁移、侵袭的影响及其作用机制。方法采用前瞻性研究将胃癌细胞分为NORE1过表达组和对照组,分别转染人的胃癌AGS细胞和SGC7901细胞,Westren blot检测细胞转染效率;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭的能力;Westren blot检测胃癌AGS细胞和SGC7901细胞中星形胶质细胞上调基因1(AEG-1)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的蛋白表达水平。结果转染NORE1过表达质粒后,胃癌AGS细胞和SGC7901细胞中NORE1表达量显著高于对照组(P0.05)。胃癌细胞AGS、SGC7901的迁移、侵袭能力减弱,与对照组具有显著差异(P0.05)。与对照组相比,NORE1过表达组胃癌细胞AGS、SGC7901中AEG-1蛋白和MMP-9蛋白的表达量显著下降(P0.05)。结论胃癌细胞中NORE1基因可以通过调节AEG-1蛋白和MMP-9蛋白的表达量影响其迁移和侵袭能力。     

过表达SOCS5对非小细胞肺癌增殖、迁移和侵袭的作用及机制研究

摘要：目的?分析细胞因子信号传导抑制因子5(SOCS5)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响，并探讨其可能的作用机制。方法?应用癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析SOCS5在肺癌组织中的表达情况； western blot检测SOCS5在NSCLC细胞系PC-9、A549和SPC-A-1及正常支气管上皮细胞系16HBE中的表达水平；选择SOCS5表达水平最低的NSCLC细胞系进行SOCS5过表达质粒转染，实验设对照(NC)组和SOCS5过表达质粒转染(oe-SOCS5)组。采用MTS试验检测各组细胞增殖能力；划痕试验检测各组细胞迁移能力；Boyden试验检测各组细胞侵袭能力；western blot检测各组细胞中PI3K/Akt/mTOR信号通路活性。结果?TCGA数据库分析结果显示，SOCS5?mRNA在肺腺癌和肺鳞癌组织中的表达水平显著低于正常肺组织(P<0.05)。western blot结果显示，SOCS5蛋白在PC-9、A549和SPC-A-1细胞中的表达水平均低于其在16HBE细胞中的表达水平(P<0.05)；选择表达水平最低的PC-9细胞进行SOCS5过表达质粒转染，结果发现与NC组相比，oe-SOCS5组PC-9细胞增殖、迁移和侵袭能力均降低(P<0.05)；western blot结果显示，与NC组相比，oe-SOCS5组细胞pPI3K、pAkt和pmTOR蛋白的表达水平均降低(P<0.05)。结论?SOSC5在NSCLC中呈异常低表达，过表达SOCS5可抑制NSCLC细胞的增殖、迁移和侵袭能力，抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路的激活可能是作用机制之一。     

长链非编码RNA LINC00473对人胃癌细胞增殖和迁移能力的影响

目的探讨LINC00473在人胃癌细胞系中的表达水平及其对胃癌细胞生物学行为的影响。方法采用实时荧光定量PCR检测胃癌细胞中LINC00473的表达水平;转染靶向LINC00473的siRNA片段或LINC00473过表达载体以构建敲减或过表达的胃癌细胞系;通过CCK-8细胞增殖实验、平板克隆形成实验、Transwell迁移实验、western blot实验检测细胞的增殖和迁移能力以及EMT相关蛋白标志物表达水平的变化。结果与GES-1细胞相比,LINC00473在胃癌细胞中的表达水平明显降低(P0.05)。与siNC转染对照组相比,敲减LINC00473表达后,靶细胞的增殖能力(F=163.10,P0.01)、克隆形成(t=3.29,P0.05)和迁移能力(t=4.68,P0.05)明显增加;E-cadherin表达减弱(t=4.08,P0.05),N-cadherin(t=5.06,P0.01)、Snail(t=7.69,P0.01)和Vimentin(t=3.82,P0.05)蛋白的表达水平升高。与Vector转染对照组相比,上调LINC00473表达后靶细胞的增殖能力(F=186.00,P0.01)、克隆形成(t=3.22,P0.05)和迁移能力(t=5.52,P0.01)明显下降;E-cadherin表达升高(t=2.90,P0.05),N-cadherin(t=7.44,P0.01)、Snail(t=2.78,P0.05)和Vimentin(t=4.64,P0.01)蛋白的表达水平降低。结论敲减LINC00473的表达可促进胃癌细胞的增殖、迁移的能力,可能通过调控EMT参与胃癌细胞的迁移。     

miR-373对人胃癌SGC7901细胞生物学行为的影响

目的探讨miR-373在人胃癌SGC7901细胞中表达情况及其对胃癌细胞增殖、迁移的影响。方法人胃癌SGC7901细胞和正常胃黏膜上皮GES-1细胞采用反转录PCR法检测miR-373相对表达量。人胃癌SGC7901细胞分为miR-373类似物组、miR-373抑制物组和空白对照组,分别转染miR-373 mimic、miR-373 inhibitor和miR-373 NC。转染后24、36、48、72 h,采用MTT法检测3组细胞增殖率,转染后48 h,采用Transwell小室迁移实验检测迁移细胞数。结果胃癌SGC7901细胞miR-373相对表达量(0.39±0.05)明显高于正常胃黏膜上皮GES-1细胞(0.23±0.04)(P0.05);miR-373类似物组细胞miR-373相对表达量(0.78±0.11)明显高于miR-373抑制物组(0.17±0.02)和空白对照组(0.36±0.06)(P0.05),空白对照组高于miR-373抑制物组(P0.05);转染后24 h,3组细胞增殖率比较差异无统计学意义(P0.05),转染后36、48、72 h,miR-373类似物组细胞增殖率明显高于miR-373抑制物组和空白对照组(P0.05),空白对照组高于miR-373抑制物组(P0.05);转染后48 h,相同面积下miR-373类似物组迁移细胞数[(181.28±11.29)个]明显多于miR-373抑制物组[(61.82±8.29)个]和空白对照组[(109.73±8.22)个](P0.05),空白对照组多于miR-373抑制物组(P0.05)。结论 miR-373可能作为癌基因作用于胃癌组织,且能增强胃癌细胞的增殖和迁移能力。     

SH2B1沉默对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT通路的影响

目的研究沉默SH2B1基因表达对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡及3-磷酸肌醇激酶(PI3K)/蛋白质丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(AKT)通路的影响。方法体外培养胃癌SGC-7901细胞,采用SH2B1 siRNA转染SGC-7901细胞作为研究组,采用国际通用的与所有基因均无同源序列的non-target siRNA转染作为阴性对照组(NC组),以未经处理的胃癌SGC-7901细胞作为空白对照组(BC组),48h后收集各组转染成功细胞,采用荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SH2B1 mRNA表达情况,采用蛋白质印迹法(Western Blot)检测SH2B1蛋白表达情况;采用细胞计数试剂盒(CKK-8)检测细胞增殖情况,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,同时检测Ki67、增殖细胞核抗原(PCNA)、Caspase-9、PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达情况。结果研究组SGC-7901细胞SH2B1蛋白及mRNA表达量较BC组和NC组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);转染后,siRNA组SGC-7901细胞增殖明显受到抑制、平板克隆形成率较BC组和NC组明显降低,凋亡率明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与BC和NC组比较,研究组SGC-7901细胞PI3K、p-AKT蛋白、Ki67及PCNA蛋白呈低表达,差异有统计学意义(P<0.05),Caspase-9蛋白呈高表达,AKT蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论沉默SH2B1基因表达可能通过抑制PI3K/ATK信号通路激活,抑制SGC-7901细胞增殖,促进凋亡。     

ARK5、MMP-2和MMP-9在胃癌中的表达及与侵袭转移的关系

目的:探讨ARK5、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)在胃癌组织中的表达及与胃癌侵袭转移的关系。方法:免疫组织化学方法检测66例胃癌组织及20例正常胃组织中ARK5、MMP-2、MMP-9的表达;脂质体介导法将ARK5-siRNA转染入胃癌细胞株SGC-7901(siARK5/SGC7901细胞组),以SCRsiRNA转染组(scr/SGC7901细胞组)作为对照组,Western blot检测转染后ARK5、MMP-2、MMP-9蛋白表达;Transwell侵袭实验检测细胞体外侵袭能力。结果:ARK5、MMP-2、MMP-9在胃癌组织中的阳性表达率分别为68%、76%、68%,三者之间差异具有统计学意义(P<0.05);ARK5的表达与胃癌的浸润深度、细胞分化程度、TNM分期及淋巴结转移呈正相关(P<0.05),与年龄、性别、肿瘤大小无关(P>0.05);转染后siARK5/SGC7901细胞组表达ARK5、MMP-2和MMP-9蛋白水平降低,体外侵袭能力明显降低(P<0.05)。结论:ARK5、MMP-2和MMP-9在组织中的表达有相关性,ARK5与胃癌的侵袭和转移密切相关,可作为判断预后的指标和化学治疗的靶点。     

人胃癌组织中PLK1基因的表达及其生物学特性分析

目的探讨胃癌患者丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶polo样激酶1基因(PLK1)的表达水平及其对胃癌细胞增殖和抗凋亡能力的作用机制。方法用荧光定量PCR及免疫组织化学染色法检测PLK1基因及蛋白质在胃癌组织中的表达水平;用pc DNA3.1-PLK1及其对应空质粒载体转染胃癌细胞系SGC7901及MKN45,用annexin V-PI共染法及Brd U法检测其对细胞增殖及凋亡的影响;用western blot检测联蛋白(β-catenin)及STAT3通路激活情况。结果与正常胃黏膜组织(0.06±0.01)相比,PLK1基因在人胃癌组织中的表达水平(0.19±0.05)增高,差异有统计学意义(t=19.08,P0.01);免疫组织化学染色法结果表明,PLK1蛋白在胃癌组织中的阳性率为90.0%(54/60),显著高于癌旁组织的51.7%(31/60),差异有统计学意义(χ2=21.34,P0.05);Brd U法结果表明,加入抑制剂BI2536可抑制SGC7901和MKN45细胞PLK1酶活性(P均0.05);annexin V-PI共染法结果表明,转染PLK1的SGC7901和MKN45的细胞凋亡率分别为21.1%和19.6%,与未转染SGC7901和MKN45的细胞凋亡率(分别为32.5%和29.8%)比较,显著降低(P均0.01);western blot结果表明,加入抑制剂BI2536可降低细胞中β-catenin和STAT3通路各蛋白质的表达水平(P均0.05)。结论 PLK1在胃癌组织中过量表达,并通过β-catenin及STAT3通路促进胃癌细胞的增殖。     

沉默SETD8基因表达对骨肉瘤MG-63细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用

目的探究siRNA下调含SET结构域(赖氨酸甲基转移酶) 8(SETD8)基因表达对骨肉瘤MG-63细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其可能的机制。方法采用脂质体法将特异性针对SETD8基因的siRNA转入骨肉瘤MG-63细胞中,得到关于SETD8基因沉默表达的MG-63稳定的细胞系即实验组,将杂序siRNA用脂质体法同时转染骨肉瘤MG-63细胞,得到关于Control siRNA的MG-63细胞系即对照组,未经转染的骨肉瘤MG-63的稳定的细胞系即空白组。以上三组细胞系通过应用细胞毒性活性检测法(CCK-8法)、平板克隆法同时检测被SETD8基因沉默后骨肉瘤MG-63细胞的增殖能力,侵袭迁移小室即(Transwell小室)法检测骨肉瘤MG-63细胞的侵袭和迁移能力,实时荧光定量法即(PCR法)以及蛋白质印迹法即(Western Blot法)检测SETD8基因沉默表达效果及细胞内SETD8,β-catenin,cyclin D1,vimentin、MMP3的mRNA和相应蛋白的表达水平。结果 SETD8 siRNA转染后,骨肉瘤MG-63细胞的增殖能力显著低于对照组(control siRNA转染MG-63细胞)和空白组(未经转染的MG-63细胞)(P 0. 05); Transwell小室结果显示,沉默SETD8基因组的侵袭和迁移能力明显下降;实验组(SETD8 siRNA转染MG-63细胞)中SETD8、β-catenin、cyclin D1、vimentin、MMP3的mRNA及蛋白表达水平显著低于阴性对照组和空白对照组(P 0. 05)。结论 siRNA下调SETD8基因表达可以抑制骨肉瘤MG-63细胞的增殖、侵袭和迁移能力,Wnt/β-catenin信号通路可能参与并调控这一过程。     

营养缺乏自噬因子1对人脑胶质瘤U251细胞增殖侵袭能力的影响

目的探讨营养缺乏自噬因子1对人脑胶质瘤U251细胞增殖侵袭能力的影响。方法复苏培养人脑胶质瘤U251细胞,建立转染小干扰RNA(siRNA)的NAF1组(si-NAF1组)、阴性对照组(si-NC组)、未转染siRNA对照组(control组),采用CCK-8实验检测细胞增殖能力、平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力、细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力、Transwell法观察各组细胞侵袭能力变化。结果与control组比较,NAF1-siRNA干预U251细胞后,si-NAF1组NAF1的mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P均<0.05),其增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达水平降低,细胞增殖能力下降,克隆形成能力明显减弱,迁移能力明显降低,穿过Transwell膜的细胞数量明显减少(P均<0.05)。si-NC组与control组各项结果比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论转染siRNA后NAF1表达下降,进而下调PCNA水平,抑制人脑胶质瘤U251细胞的增殖能力;同时MMP-9蛋白表达水平下降,抑制U251细胞的迁移和侵袭能力。     

MiR-520a对胃癌SGC7901细胞增殖、侵袭、迁移以及顺铂药物敏感性的影响

目的:探讨miR-520a在胃癌中的表达以及对胃癌细胞生物学功能的影响。方法:通过real-time PCR检测miR-520a在胃癌组织和胃癌细胞中的表达。采用慢病毒在胃癌细胞SGC7901中过表达miR-520a,在体外观察miR-520a对胃癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移以及对顺铂(DDP)敏感性的影响。并通过异种移植瘤实验观察过表达miR-520a对胃癌细胞在裸鼠体内生长的影响。结果:与癌旁正常组织相比,miR-520a在胃癌组织中的表达明显降低。与正常胃黏膜上皮细胞GES-1相比,miR-520a在胃癌SGC7901细胞中的表达明显降低,且在顺铂耐药SGC7901/DDP细胞中的表达更低。miR-520a过表达能够促进SGC7901细胞凋亡,抑制细胞增殖、侵袭和迁移。miR-520a过表达促进SGC7901细胞对DDP的药物敏感性增加。异种移植瘤实验发现miR-520a过表达的细胞在裸鼠体内形成的肿瘤生长速度减慢。结论:miR-520a可抑制胃癌发生与发展,提高胃癌细胞对顺铂的敏感性。     

Tip30基因过表达对人胃癌细胞生长的影响及分子机制

目的 探讨Tip30基因过表达对人胃癌AGS细胞增殖、凋亡的影响及相关分子机制.方法 人胃癌AGS细胞中Tip30基因过表达采用腺病毒转染法,使用实时定量PCR和Western blotting验证Tip30过表达的效果,分别采用MTT法、划痕试验检测细胞增殖、迁移情况,流式细胞术分析细胞凋亡,Western blotting分析p53、Bax、Bcl-2蛋白表达. 结果 过表达组AGS细胞Tip30基因mRNA和蛋白表达水平均显著高于对照组(P＜0.05).与对照组比较,Tip30过表达后,细胞增殖、体外迁移能力均显著减弱(P＜0.05);Tip30过表达后AGS细胞凋亡率相比对照组显著增大,Tip30过表达促进AGS细胞凋亡与上调p53、Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达水平相关. 结论 Tip30基因过表达可抑制人胃癌AGS细胞增殖活性、体外迁移能力,且促进胃癌细胞凋亡.     

DNMT1表达降低对结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 研究降低DNMT1表达对结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法 应用反转录实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测DNMT1在结直肠癌细胞株HCT-8和正常肠上皮细胞株NCM460的表达水平。通过LV-hDNMT1-shRNA慢病毒转染结直肠癌细胞株HCT-8,下调DNMT1在结直肠癌细胞系中表达;细胞功能学实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力;qRT-PCR、Western blot和亚硫酸氢盐甲基化特异性PCR(MSP)方法检测各组细胞中增殖、迁移和侵袭相关指标基因表达水平和甲基化水平。结果 结直肠癌细胞HCT-8 DNMT1 mRNA表达水平略高于NCM460。降低HCT-8细胞DNMT1表达,细胞增殖、迁移和侵袭能力增强,Ki-67表达增加,MMP9基因甲基化程度降低其基因表达水平增加、TIMP3基因甲基化程度升高其基因表达降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 DNMT1表达降低可促进结直肠癌细胞的HCT-8增殖、迁移和侵袭,其机制可能通过调控MMP9、TIMP3基因甲基化水平影响其蛋白表达,进而对肿瘤细胞侵袭转移产生影响。     

金雀异黄素抑制SGC7901细胞增殖、迁移和粘附的研究

目的探讨金雀异黄素(Gen)对人胃腺癌SGC7901细胞增殖、迁移以及与血管内皮细胞粘附的影响。方法利用细胞计数和MTT方法检测Gen对SGC7901细胞增殖的影响;利用细胞划痕实验检测Gen对SGC7901细胞迁移的影响;在单层脐静脉内皮细胞上加入SGC7901细胞,检测Gen对SGC7901细胞与血管内皮细胞粘附的影响;利用免疫荧光实验观察Gen对SGC7901细胞中E-cadherin、β-catenin和肌动蛋白(actin)的分布的影响;利用Western blotting检测Gen对SGC7901细胞中FAK、p-FAK、E-cadherin、β-catenin蛋白表达的影响。结果Gen可以抑制SGC7901细胞的增殖、迁移和粘附,影响SGC7901细胞中E-cadherin、β-catenin和actin的分布,下调p-FAK和E-cadherin的表达。结论Gen抑制SGC7901细胞的增殖、迁移和与血管内皮细胞粘附,可能是通过诱导细胞中E-cadherin、β-catenin和actin的重排、下调p-FAK和E-cadherin的表达等实现的。     

咪达唑仑通过下调circASXL1抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探讨咪达唑仑对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的可能机制。方法 体外培养胃癌HGC-27细胞，用不同剂量(10、20、40μmol/L)咪达唑仑干预24 h后，CCK-8法、克隆形成实验、Transwell分别检测细胞增殖抑制率、克隆数、迁移及侵袭，蛋白质印迹法检测细胞中E-cadherin和N-cadherin蛋白表达，qRT-PCR法检测细胞中circASXL1表达。分别以53例癌旁组织、胃黏膜上皮细胞GES-1为对照，qRT-PCR法检测53例胃癌组织和HGC-27细胞中circASXL1表达。同时，咪达唑仑干预HGC-27细胞24 h后，qRT-PCR法检测细胞中circASXL1表达。转染circASXL1小干扰RNA或过表达载体至HGC-27细胞，上述相同方法观察circASXL1对HGC-27细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果 与对照组比较，HGC-27细胞经不同剂量咪达唑仑干预后，细胞增殖抑制率、E-cadherin蛋白表达均升高(P<0.05),细胞克隆数、迁移数、侵袭数及N-cadherin蛋白表达均降低(P<0.05)。胃癌组织中circASXL1的表达明...     

AKIP1在胃癌中的临床意义及生物学功能

目的:研究A激酶相互作用蛋白1(A kinase-interacting protein 1,AKIP1)在胃癌组织中的表达水平及临床意义,并探讨AKIP1在胃癌中的生物学功能。方法:采用qRT-PCR检测AKIP1 mRNA在50例胃癌组织和其配对的癌旁组织中的表达水平,分析AKIP1 mRNA在胃癌组织中的表达水平与患者临床病理参数的关系,采用Kaplan-Meier生存曲线分析AKIP1 mRNA表达对患者预后的影响。采用蛋白质印迹法检测4对新鲜胃癌组织和癌旁组织中AKIP1蛋白的表达。采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测AKIP1 mRNA、蛋白质在胃癌细胞系SGC-7901,MKN-45,MGC-803和人正常胃黏膜上皮细胞RGM-1中的表达;MGC-803经脂质体分别转染AKIP1 siRNA(si-AKIP1)和对照(si-NC)48 h后,采用MTS实验检测各组细胞增殖能力,采用Boyden实验检测各组细胞侵袭能力,采用Transwell实验检测各组细胞转移能力。结果:qRT-PCR结果显示AKIP1 mRNA在胃癌组织中的表达显著高于癌旁组织,其高表达与TNM分期和淋巴结转移有关(P0.05),胃癌组织中AKIP1 mRNA表达高水平的患者生存期较短。蛋白质印迹法结果显示AKIP1蛋白在胃癌组织中的表达显著高于癌旁组织。AKIP1mRNA和蛋白在胃癌细胞系SGC-7901,MKN-45,MGC-803中的表达均显著高于人正常胃黏膜上皮细胞RGM-1,且在MGC-803细胞中的表达最高(P0.05);转染AKIP1 siRNA后,MGC-803细胞增殖、侵袭和转移能力均下降(P0.05)。结论:AKIP1在胃癌组织和细胞系中均高表达,且高表达与TNM分期、淋巴结转移及不良预后相关,同时干扰AKIP1的表达抑制胃癌细胞增殖、侵袭和转移。AKIP1可以作为胃癌患者预后分子标志物及潜在治疗靶点。     

lncRNA HCG11-201对肾癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)HCG11-201在肾癌组织中的表达及影响癌细胞增殖和侵袭的分子机制。方法生物信息学方法预测HCG11-201表达与肾癌患者预后的相关性。实时荧光定量PCR(qPCR)检测肾癌组织和癌旁正常组织、肾癌细胞系和正常肾小管上皮细胞中HCG11-201的表达,选择表达最少的肾癌细胞系转染,分别将HCG11-201质粒(实验组)或阴性对照质粒(对照组)转至肾癌细胞。qPCR检测HCG11-201质粒转染效率。MTT法检测转染后细胞增殖活性,Transwell小室实验检测转染后细胞侵袭能力。生物信息学方法预测HCG11-201可吸附结合的微小RNA(miRNA)及miRNA下游基因。qPCR和Western blot检测miRNA和下游基因表达。结果GEPIA数据库显示,HCG11-201相对表达水平越高,患者总生存期越长(P<0.01)。肾癌组织HCG11-201相对表达水平显著低于癌旁正常组织(P<0.01)。肾癌细胞HCG11-201相对表达水平显著低于正常肾小管上皮细胞(P<0.01),其中Caki-1细胞相对表达水平最低(P<0.01)。与对照组比较,实验组Caki-1细胞HCG11-201相对表达水平显著升高(P<0.01),细胞增殖活性显著降低(P<0.05),细胞的侵袭能力显著降低(P<0.05)。HCG11-201可互补结合miR-522,miR-522可互补结合线粒体融合蛋白2(mitofusion-2)。与对照组比较,实验组Caki-1细胞miR-522的相对表达水平显著降低(P<0.01),mitofusion-2的mRNA相对表达水平和蛋白水平显著升高(P<0.01)。结论lncRNA HCG11-201在肾癌组织和细胞系低表达,与肾癌患者预后相关。过表达HCG11-201可明显抑制肾癌细胞增殖和侵袭,其分子机制可能为HCG11-201吸附miR-522进而上调mitofusion-2基因的表达。     

人端粒酶逆转录酶基因沉默对肺腺癌细胞侵袭、增殖、凋亡的影响

目的:探讨靶向人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的小干扰RNA(siRNA)转染对肺腺癌细胞株A549生物学行为的影响。方法:构建靶向hTERT的siRNA表达质粒转染A549细胞,通过Western blot检测蛋白的表达水平,确定有效后,通过Transwell小室检测细胞体外侵袭能力,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术测定转染后肿瘤细胞的细胞周期和凋亡率。结果:成功构建靶向hTERT的siRNA表达质粒。实验组siRNA转染后的细胞侵袭能力较对照组减弱(P<0.01),生长抑制率明显高于阴性对照组(P<0.01),且表现出时间依赖性。流式细胞术测定显示,实验组siRNA转染48h后,肿瘤细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。结论:靶向hTERT的siRNA转染后可以显著降低A549细胞侵袭能力,抑制增殖,诱导细胞凋亡的发生。     

下调miR-572抑制人胃癌细胞株凋亡、迁移和侵袭机制的实验研究

目的　探讨下调微小核糖核酸（ miRNA, miR）-572对人胃癌细胞凋亡和迁移能力的影响及机制。方法　实时荧光定量 PCR（quantitative real-time PCR, qPCR）法检测 miR-572,第 10号染色体缺失的磷酸酶、张力蛋白同源物基因 (phosphatase and tensin hmmlogydeleted on ten, PTEN)和蛋白激酶 2 (protein kinase 2,AKT2)在不同胃癌细胞株（ HGC-27, AGS和 SGC-7901）和正常胃黏膜上皮细胞 GES-1中的表达情况。在胃癌细胞株 AGS细胞中加入 miR-572 inhibitor后, CCK8检测细胞活力; Tranwell实验检测细胞侵袭和迁移能力;流式细胞术检测细胞凋亡比例; qPCR检测 miR-572, PTEN和 AKT2的表达量。结果　miR-572和 AKT2在胃癌细胞系 HGC-27（6.97±1.62,4.98±1.34）,AGS（7.21±1.32, 5.39±1.14）和 SGC-7901（5.97±1.44,4.02±1.02）中较正常胃黏膜上皮细胞 GES-1表达升高（ 1.00±0.24,1.00±0.21）, PTEN表达降低（ 0.49±0.16,0.39±0.11,0.54±0.33 vs 1.00±0.13）,差异均有统计学意义 (t=2.727~3.197,均 P＜ 0.05);与对照组比较,转染 miR-572 inhibitor后,miR-572和 AKT2在 AGS中表达下调 (P＜ 0.05),PTEN表达上调 (P＜ 0.05); CCK8实验结果显示转染 miR-572 inhibitor后,与对照组比较 miR-572抑制剂组细胞活力降低 (P＜ 0.05);Transwell实验发现,与对照组比较 miR-572抑制剂组细胞的侵袭和迁移能力降低 (P＜ 0.05);流式细胞实验结果表明,与对照组相比 miR-572抑制剂组细胞的凋亡比例降低 (P＜ 0.05)。结论　下调 miR-572可抑制胃癌细胞的凋亡、侵袭和迁移,其机制可能是通过 PTEN/AKT2信号通路。     

MTDH基因沉默对B淋巴瘤细胞增殖及侵袭的影响

目的探讨异黏蛋白(MTDH)基因沉默对B淋巴瘤细胞增殖及侵袭能力的影响。方法在B淋巴瘤细胞Raji中转染MTDH siRNA和siRNA对照,分别命名为MTDH siRNA组和siRNA对照组,将没有转染的细胞作为对照组。qRT-PCR和Western blot方法检测细胞中MTDH表达水平,MTT方法检测细胞增殖和黏附能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭及迁移能力,Western blot检测细胞中波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、活化的Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白水平。结果MTDH siRNA细胞中MTDH mRNA和蛋白水平均明显低于对照组和siRNA对照组(P<0.05)。与对照组和siRNA对照组比较,MTDH siRNA细胞增殖和黏附能力降低,细胞凋亡率升高,细胞侵袭和迁移能力也降低,细胞中Vimentin、MMP-2、MMP-9蛋白水平降低,Cleaved Caspase-3蛋白水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论MTDH基因沉默下调B淋巴瘤细胞增殖能力,抑制B淋巴瘤细胞侵袭和迁移。     

胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1表达对鼻咽癌细胞系CNE1发生发展的研究

目的探讨胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1(IGFBP-rP1)对鼻咽癌细胞系CNE1细胞的增殖、侵袭、迁移能力的影响。方法构建2条特异性针对IGFBP-rP1基因的小干扰RNA(siRNA32、siRNA34)及其阴性对照siRNA,将CNE1细胞分为4个转染组:siRNA32组(siRNA32转染)、siRNA34组(siRNA34转染)、阴性对照组(阴性对照siRNA转染)、空白组(不做任何处理),分别培养24h或48h后检测相关指标。结果siRNA32组和siRNA34组IGFBP-rP1mRNA及蛋白表达水平显著低于阴性对照组和空白组(P0.05);siRNA32组和siRNA34组CNE1细胞迁移数、穿过PVP-F膜的CNE1细胞数显著低于阴性对照组和空白组(P0.05);培养24、48h后,siRNA32组和siRNA34组CNE1细胞增殖OD值显著低于阴性对照组和空白组(P0.05);培养48h后,siRNA32组和siRNA34组G0/G1期、G2/M期细胞所占比例显著高于阴性对照组和空白组(P0.05);siRNA32组和siRNA34组S期细胞所占比例显著低于阴性对照组和空白组(P0.05)。结论抑制IGFBP-rP1表达能降低鼻咽癌CNE1细胞的增殖、侵袭、迁移能力,为临床治疗鼻咽癌提供一种新的思路。