结核分枝杆菌感染快速检测方法与产品评价

结核病是一种由结核分枝杆菌感染引起的慢性传染病,它严重危害人类的健康和社会发展。中国结核病发病人数居世界第3位,是结核病高负担国家之一,当前结核病防治工作面临巨大挑战。对结核分枝杆菌感染的准确诊断在结核病防治起着关键作用。目前结核分枝杆菌感染的主要检测方法包括涂片、培养、免疫学检测方法和分子生物学检测方法等,免疫学检测方法和分子生物学检测方法众多,且生产厂家和产品众多,本文主要对这两种方法的各公司的各种产品的实验室评价进行综述。     

结核分枝杆菌基因突变检测方法研究进展

结核分枝杆菌全基因组测序工作的完成,为开展结核病基因研究提供了理论基础,对结核分枝杆菌基因突变的研究也成为当前结核病研究领域的热点之一。高分辨率熔解（high resolution melting, HRM）、基因芯片、DNA直接测序等分子生物学新技术的发展和应用,为结核分枝杆菌基因突变研究提供了更有效的方法。现综合国内外近年来的文献,分类介绍应用于结核分枝杆菌基因突变检测的各种方法的原理、应用情况等,同时也对GeneXpert、结核分枝杆菌线性探针（line probe assay,LiPA）、基因芯片等当前比较成熟并有望得到广泛应用的商品化基因突变检测技术进行介绍。     

以结核分枝杆菌mRNA为靶点的检测方法与意义的评价

结核病是结核分枝杆菌引起的传染性疾病，目前仍然是全球范围最严重感染性疾病之一。至今，人们对结核分枝杆菌及结核病的很多方面都还处在科研探索的过程中。现代科学技术的发展为研究结核分枝杆菌的生物学特性以及结核病的快速诊断和治疗都带来广阔的发展前景。自从20世纪80年代核酸体外扩增技术应用于结核分枝杆菌的检测以来，进入以PCR为代表的分子生物学技术检测结核分枝杆菌的新阶段，人们不断对其进行着研究和探索，近几年新出现的以结核分枝杆菌mRNA为靶点的体外扩增检测具有一定意义上的开发和应用价值。     

结核病病原学诊断评价方法探讨——与《结核病病原学分子诊断专家共识》作者商榷

最新发布的《结核病病原学分子诊断专家共识》有助于提高我国结核病临床诊断水平,但笔者对共识中“结核分枝杆菌复合群核酸检测与传统细菌学检测方法的比较”存在不同看法。目前,分子诊断试剂发展迅速,但不同检测试剂的敏感度和特异度有较大差异,应慎重评价分子诊断和细菌学诊断结果,共识中“任何一种分子生物学检测方法结果阳性、细菌学检测方法阴性时,应以分子生物学检测结果为准,视为结核分枝杆菌阳性”的结论难以成立。     

应用噬菌体报告系统快速检测结核分枝杆菌的药物敏感性

早期诊断耐药结核分枝杆菌是防治耐药结核病的关键和基础。1993年起噬菌体报告系统（LRPs）陆续应用于结核分枝杆菌的鉴定及耐药检测，噬笛体生物扩增法（PhaB）也在国内被用于检测结核分枝杆菌的耐药性。我们利用新的重组噬菌体phAE142建立LRPs检测方法，检测了106株结核分枝杆菌对4种常用抗结核药物的耐药性，评价LRPs在结核病临床和流行病学研究中应用的可行性。     

噬菌体生物扩增法检测尿液结核分枝杆菌对肾结核的诊断价值探讨

目的 利用噬菌体生物扩增法检测尿液结核分枝杆菌,评价其对肾结核诊断价值。 方法 对肾结核患者63例应用涂片抗酸染色法检测结核分枝杆菌、结核分枝杆菌培养、噬菌体生物扩增法进行尿液结核分枝杆菌检测,聚合酶链反应法检测结核菌DNA。同时选正常人群21人作为对照组行尿液噬菌体生物扩增法检测结核分枝杆菌,聚合酶链反应法检测结核分枝杆菌DNA。结果 肾结核患者尿液行噬菌体生物扩增法检测结核分枝杆菌阳性率明显高于涂片抗酸染色法检测结核分枝杆菌及结核分枝杆菌培养（P<0.01）。与PCR法比较差异无统计学意义（P>0.05）,噬菌体生物扩增法检测尿液中结核分枝杆菌对肾结核诊断有较高的特异度(95.2%)和灵敏度(69.8%)。 结论 噬菌体生物扩增方法检测尿液结核分枝杆菌对肾结核诊断具有重要的参考价值。     

应用蛋白芯片技术快速诊断肺结核病的研究

目的评价结核分枝杆菌蛋白芯片在检测临床标本中结核分枝杆菌抗体的应用价值。方法应用结核分枝杆菌蛋白芯片检测117例结核病患者的血清标本、103例肺部其他疾病患者和健康入的血清标本，并与痰涂片镜检法相比较。结果在菌阳肺结核、菌阴肺结核中，结核分枝杆菌抗体芯片检测的阳性率分别是100％（26／26）、49．6％（45／91），在肺部其他疾病患者和健康人中，结核分枝杆菌抗体芯片检测的阴性率是98．1％（101／103）。结论结核分枝杆菌抗体检测蛋白芯片是一种集基因工程技术、芯片技术和免疫学技术的检测一体化的新型结核病快速诊断方法，具有简便、快速、大量、敏感性高和特异性强、检测成本较低的特点，是结核病、尤其是菌阴结核病辅助诊断的有效方法。     

以结核分枝杆菌mRNA为靶点的检测方法与意义的评价

结核病是结核分枝杆菌引起的传染性疾病，目前仍然是全球范围最严重感染性疾病之一。至今，人们对结核分枝杆菌及结核病的很多方面都还处在科研探索的过程中。现代科学技术的发展为研究结核分枝杆菌的生物学特性以及结核病的快速诊断和治疗都带来广阔的发展前景。自从20世纪80年代核酸体外扩增技术应用于结核分枝杆菌的检测以来，进入以PCR为代表的分子生物学技术检测结核分枝杆菌的新阶段，     

结核分枝杆菌抗体检测蛋白芯片在结核病快速诊断中的应用

目的利用结核分枝杆菌抗体检测蛋白芯片检测临床标本中结核分枝杆菌抗体,评价该蛋白芯片在结核病快速诊断中的应用价值。方法应用涂片镜检法、培养法和结核分枝杆菌抗体检测蛋白芯片检测121例结核病患者的血清标本,103例肺部其它疾病患者和健康人的血清标本。南京大渊公司采     

结核/非结核分枝杆菌核酸快速检测方法临床应用价值

目的 评价结核/非结核分枝杆菌核酸快速检测方法的临床应用价值。 方法 应用实时荧光PCR技术对420例标本进行临床试验研究,并与抗酸杆菌涂片和分枝杆菌培养方法对照比较。 结果 结核分枝杆菌核酸检测灵敏度为48.5%（其中菌阳标本灵敏度为95.8%,菌阴标本灵敏度为14.5%）,特异度99.3%,阳性预测值为99.1%,阴性预测值为55.5%;临床试验388例痰标本中检测出1例非结核分枝杆菌核酸阳性,经测序确认,准确率100%;同时对32例非结核分枝杆菌临床分离株进行核酸检测,并经测序确认,准确率100%。 结论 应用实时荧光PCR技术,能实现在1支管内同时进行结核分枝杆菌/非结核分枝杆菌的核酸检测。该方法具有简单快速、特异性好污染性少的特点。可作为实验室辅助检测结核/非结核分枝杆菌核酸方法之一。     

用DNA 芯片快速检测结核分支杆菌对利福平的耐药性

目的：研制一种新型DNA芯片，用于结核分支杆菌对利福平的耐药性快速检测，方法：根据结核分支杆菌rpoB基因的序列信息设计探针并制作DNA芯片，PCR扩增并荧光标记包含结核分支杆菌rpoB基因突变热点的目的片段，与芯片杂交，同时以DNA测序法为对照，结果：17株随机抽取的耐利福平结核分支杆菌菌株有14株可用DNA芯片检测出来，效率可达83％，患者痰液中少量的DNA足够进行芯片检测，无须进行培养。结论：用DNA芯片来检测结核分支杆菌对利福平的耐药性具有较高的特异性和灵敏度，该法快速，精确，可以应用于临床耐药性检测。     

应用噬菌体裂解法快速鉴定结核分支杆菌

目的 研究噬菌体裂解试验对结核分支杆菌快速鉴定的意义。方法 应用结核分支杆菌噬菌斑技术快速检测结核分支杆菌、非结核分支杆菌和非分支杆菌及肺结核患者痰标本。结果 结核分支杆菌H37Rv、牛分支杆菌和非洲分支杆菌噬菌体裂解试验均为阳性,10株常见非结核分支杆菌和7株非分支杆菌均为阴性;30株结核分支杆菌临床分离株本法检测结果全部阳性;20份涂阳培阳肺结核患者痰标本,本法阳性19份（95％）;21份涂阴培阳痰标本,本法阳性15份（71％）;19份涂阴培阴痰标本,5份阳性（26％）。结论 噬菌体裂解试验可以快速鉴定结核分支杆菌,用其检测痰标本中的结核分支杆菌具有很高的特异性和较高的敏感性。     

AmpliSensor—聚合酶链反应定量检测肺结核患者外周血结 …

目的 探讨ＡｍｐｌｉＳｅｎｓｏｒ－聚合酶链反应定量检测外周血中结核分支杆菌ＤＮＡ在肺结核的应用价值。方法 采用ＱｌＡａｍｐ和ＡｃｕＰｕｒｅ法提取，制备全血中模板ＴＢ－ＤＮＡ，应用ＡｍｐｌｉＳｅｎｓｏｒ－ＰＣＲ定量检测，并与ＩＳ６１１０－单管巢式聚合酶链反应（ＳＮ－ＰＣＲ）作比较。结果２００例肺结核患者的血液标本中，两种方法测得结核分支杆菌ＤＮＡ的阳性率分别为６０．５％、６３．５％。８５例非结核肺病     

耐药结核分枝杆菌快速检测方法的研究进展

传统的耐药结核分枝杆菌的诊断依赖药物敏感试验.近年来,随着技术的进步,出现了大量的先进检测手段,在敏感性、特异性、检测周期方面皆优于传统方法.基于核酸扩增的分子生物学技术为临床耐药结核分枝杆菌的快速检测打开了一个广阔的前景.在自动测序分析的帮助下,耐药结核的确诊越来越简便、准确,对结核菌基因中耐药突变位点的快速检测还能够为临床诊疗提供早期的帮助信息,甚至能识别潜在的感染.本文对目前已有的快速检测方法的研究进展进行综述.     

双抗原夹心胶体金免疫层析法快速检测结核分枝杆菌抗体的研究

目的 建立一种简易、快速和准确的双抗原夹心胶体金免疫层析法,用于检测结核病患者血清中的抗MTB抗体.方法 采用胶体金标记相对分子质量分别为6000、16 000和38 000的重组MTB早期分泌抗原靶蛋白(ESAT),成为重组MTB融合蛋白ESAT-16-38,研制出双抗原胶体金免疫层析检测卡,对浙江省德清县疾病预防控制中心2007-2009年临床确诊的结核病患者血清163份(其中肺结核痰MTB阳性57份、痰MTB阴性64份和肺外结核42份)和对照血清573份(其中体检者血清224份、急性肺炎和支气管炎患者血清217份、肺吸虫患者血清132份)样本进行检测,并与MTB蛋向芯片抗体法的检测结果进行比较.检出率的比较采用χ2检验.结果 双抗原法和蛋白芯片法检测结核病患者血清的阳性符合率分别为73.0%(120/163)和72.4%(118/163),差异无统计学意义(χ2=0.062,P＞0.05);检测对照血清的阴性检出率分别为93.9%(538/573)和92.0%(527/573),差异无统计学意义(χ2=0.635,P＞0.05);未见与肺吸虫患者血清有交叉反应,双抗原法对痰MTB阳性血清的检出率高达87.7%(50/57).结论 重组ESAT-6和ESAT-16双抗原胶体金免疫层析检测卡具有较高的敏感度和特异度,与蛋白芯片法的检测结果相似,且方法简便、快速,有很好的重现性和稳定性.

Abstract：

Objective To establish a simple,fast and accurate double antigen colloidal gold immunochromatographic technique for detecting Mycobacterium tuberculosis antibody from tuberculosis patients.Methods The fusion protein ESAT-6-16-38 was constructed by using gene cloning technique for the 6,16 and 38 kDa early secreted antigenic target from Mycobacterium tuberculosis.The ESAT-6-16-38 fusion protein was marked to colloidal gold to eatablish the double antigen colloidal gold immunochromatographie assay.Serum samples from 163 patients with tuberculosis,including 57 sputumpositive cases,64 sputum-negative cases,and 42 cases with extrapulmonary tuberculosis,were collected during 2007and 2009 from the Disease Prevention and Control Center of Deqing County.In addition,573 controls(224 healthy volunteers,217 patients with acute pneumonia and bronchitis,132 patients with paragonimiasis)were recruited for comparison.Mycobacterium tuberculosis specific antibodies were detected by using immunochromatographic and protein chip technique.Detection rate was compared with Chi-square test. Results Among the 163 tuberculosis patients,the positive rates of immunochmmatographic detection and protein chip were 73.0%(120/163)and 72.4%(118/163)respectively;the difference was not statistically significant(χ2=0.062,P＞0.05).Among the 573 controls,the negative rates of immunochromatographic detection and protein chip were 93.9%(538/573)and 92.0%(527/573)respectively;the difference was not statistically significant(χ2=0.635,P＞0.05).There was no cross reaction in the paragonimiasis patients.The positive rate of the immunoehromatographie assay was as high as 87.7%(50/57)in the sputmn-positive patients.Conclusions The double antigen immunoehromatographie technique is an easy to operate, rapid,highly sensitive, specific, and reproducible method for the detection of Mycobacterium tuberculosis antibodies.     

耐药结核分枝杆菌快速检测方法的研究进展

传统的耐药结核分枝杆菌的诊断依赖药物敏感试验.近年来,随着技术的进步,出现了大量的先进检测手段,在敏感性、特异性、检测周期方面皆优于传统方法.基于核酸扩增的分子生物学技术为临床耐药结核分枝杆菌的快速检测打开了一个广阔的前景.在自动测序分析的帮助下,耐药结核的确诊越来越简便、准确,对结核菌基因中耐药突变位点的快速检测还能够为临床诊疗提供早期的帮助信息,甚至能识别潜在的感染.本文对目前已有的快速检测方法的研究进展进行综述.     

耐药结核分枝杆菌快速检测方法的研究进展

传统的耐药结核分枝杆菌的诊断依赖药物敏感试验.近年来,随着技术的进步,出现了大量的先进检测手段,在敏感性、特异性、检测周期方面皆优于传统方法.基于核酸扩增的分子生物学技术为临床耐药结核分枝杆菌的快速检测打开了一个广阔的前景.在自动测序分析的帮助下,耐药结核的确诊越来越简便、准确,对结核菌基因中耐药突变位点的快速检测还能够为临床诊疗提供早期的帮助信息,甚至能识别潜在的感染.本文对目前已有的快速检测方法的研究进展进行综述.     

结核分枝杆菌实验室检测产品和技术应用进展

结核病是全球面临的重大公共卫生问题,结核病患者的早期快速检测对提高患者的疗效,并有效阻断结核人际传播至关重要.结核病诊断能力不足是导致发现率和报告率较低的根本原因,尤其在患者面对交通、经济负担等一系列问题时,进一步加剧患者的漏诊.然而传统的结核分枝杆菌实验室检测方法已无法满足临床的实际需求,亟待在结核病高负担国家使用和...     

应用基因芯片技术检测结核分枝杆菌链霉素耐药性的研究

目的研制一种新型DNA芯片,用于快速检测结核分枝杆菌耐链霉素rpsl和rrs基因突变。方法根据结核分枝杆菌rpsl和rrs基因序列设计探针并制作DNA芯片,用TAMRA(四甲基罗丹明)标记的引物扩增结核分枝杆菌rpsl和rrs基因突变热点的片段,与DNA芯片杂交,同时以聚合酶链反应-单链构象多态性(polymerase chain reaction-single stranded conformation polymorphism,PCR-SSCP)和DNA测序法为对照。结果144株结核分枝杆菌临床分离株中,42株链霉素敏感株的PCR-SSCP和DNA芯片杂交结果与结核分枝杆菌标准株完全相同;102株链霉素耐药株中有79株检测到rpsl基因突变77.5%(79/102),其中74株为43位密码子AAG→AGG突变,5株为88位密码子AAG→AGG突变;rrs基因突变5%(5/102),4株为513位密码子A→C突变,1株为516位密码子C→T突变,均与PCR-SSCP和DNA芯片杂交结果一致,余18株未检测到突变。结论用DNA芯片可快速、特异地检测出大多数结核分枝杆菌耐链霉素分离株的rpsl和rrs基因突变,可用于临床耐药性的检测,指导临床用药。     

实时荧光定量PCR法分析结核分枝杆菌对异烟肼耐药的分析

目的利用实时荧光定量PCR技术快速检测异烟肼耐药结核分枝杆菌。方法收集到医院就诊的结核病疑似患者痰液样本,提取痰液样本的总DNA,利用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术对结核分枝杆菌感染进行快速筛查,并与传统药敏试验进行比较,对两者的灵敏度、特异性、一致性进行比较分析。结果检测346例结核病人临床分离培养样本,药敏试验检出257例异烟肼敏感标本,101例异烟肼耐药标本;实时荧光定量PCR法共检测出异烟肼敏感和耐药标本225例98例,灵敏度为86.64%,特异性为93.92%,一致率为93.12%。结论跟传统药物敏感性实验相比,实时荧光定量PCR法检测速度快速、特异性强、灵敏度较高,可用于结核分枝杆菌耐异烟肼突变的快速检测,适于耐多药结核病的快速筛查。