耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌耐药基因分型

目的分析天津市第三中心医院住院患者临床分离的耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)的菌株类型、耐药机制及耐药基因分型,为临床合理用药提供依据。方法收集医院2016年6月-2017年10月临床分离的CRE菌株23株。应用VITEK-2 Compact全自动微生物分析仪进行细菌鉴定和药敏试验; Carba NP试验检测产碳青霉烯酶类型; PCR技术进行耐药基因bla_(KPC)、bla_(VIM)、bla_(NDM)、bla_(SME)、bla_(IMP)的检测。结果临床分离的23株CRE,肺炎克雷伯菌19株,大肠埃希菌4株;主要来自于尿液和痰标本;药敏结果显示23株CRE均对美罗培南、亚胺培南、厄他培南和头孢他啶耐药;对他唑巴坦的耐药率为95.7%(22/23); NP试验阳性率为73.9%;bla_(KPC)、bla_(VIM)、bla_(NDM)、bla_(IMP)基因阳性,检出率依次为52.2%、30.4%、4.3%、4.3%,未检出bla_(SME)耐药基因。结论天津市第三中心医院患者检出的CRE中,耐药基因主要是bla_(KPC),其次是bla_(VIM),医院需对携带bla_(KPC)、bla_(VIM)基因的耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌加强耐药检测,合理使用抗菌药物,并做好防护和消毒措施以防止医院感染和该类细菌的暴发流行。     

耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的耐药特征及基因分型

目的研究耐碳青霉烯肠杆菌科细菌的耐药特征及基因分型,为研究耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的耐药机制提供实验依据。方法收集重庆某三甲医院2017年1月-2017年12月临床分离的81株耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌,采用聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)法检测KPC、IMP、VIM、NDM和OXA-48共5种主要的碳青霉烯酶耐药基因并行测序验证,并利用VITEK-MS质谱仪对所有菌株进行鉴定,采用最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)法测定其对15种常用抗生素的敏感性,通过WHONET 5.6软件对药敏资料进行统计分析。结果 81株耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌中有73株确定为产碳青霉烯酶,其中KPC型51株、NDM型14株、IMP型8株,未检出VIM型和OXA-48型耐药基因;其中肺炎克雷伯菌61株、大肠埃希菌5株、阴沟肠杆菌4株、弗劳地枸橼酸杆菌3株,分别来自ICU 37株、神经外科10株、康复科7株、RICU 6株、NICU 6株、CCU 4株、创伤外科3株;73株临床分离菌对头孢唑林、氨苄西林/舒巴坦、氨曲南和亚胺培南耐药率均高达100.0%,对头孢曲松、头孢他啶、头孢吡肟、头孢替坦和复方新诺明均90.0%。结论医院患者临床分离的耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌对多种抗菌药物的耐药率较高,且大多数的耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌均携带有耐药基因,临床应加强对耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的监测和控制,合理选用抗生素。     

耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的耐药基因研究

目的调查分析医院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌分布、耐药性及耐药基因的携带,为耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌感染的抗菌药物合理选用、遏制其持续感染和暴发流行提供依据。方法收集医院2009-2013年临床分离6 132株肠杆菌科细菌,采用聚合酶链反应(PCR)法检测耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌相关耐药基因KPC、IMP、VIM、NDM、OXA,并测序分析基因型别,数据采用SPSS 17.0软件进行统计分析。结果 6 132株肠杆菌科细菌中检测到27株耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌,检出率为0.44%;耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌除对阿米卡星和妥布霉素的耐药率分别为3.70%和25.93%外,对大多数临床常用抗菌药物呈高度耐药;27株耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌均扩增出碳青霉烯酶基因,其中KPC阳性13株占48.15%、IMP阳性13株占48.15%、VIM阳性8株占29.63%、OXA阳性3株占11.11%。结论产碳青霉烯酶是临床分离耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的重要耐药机制,且主要为KPC和IMP基因型,在临床加强对耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的监测和控制十分重要。     

血液分离碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌耐药机制及同源性研究

目的探究血流感染碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药性、耐药机制及同源性,以指导临床合理使用抗菌药物。方法收集某院2015-2017年临床分离自血液标本的非重复性CRKP,拉丝试验筛查高毒力肺炎克雷伯菌。改良碳青霉烯灭活法(mCIM)检测碳青霉烯酶表型,PCR法检测血清型基因(K1、K2、K20、K54等)及碳青霉烯酶基因(bla_(KPC)、bla_(IMP)、bla_(VIM)、bla_(NDM)、bla_(OXA-48)等),rep-PCR分析同源性。结果共收集到46株CRKP,主要来源于ICU(43.5%)。CRKP除对磺胺甲噁唑/甲氧苄啶和替加环素有较高的敏感性外,对其余抗菌药物的耐药率均大于60.0%。mCIM试验阳性率为93.5%。bla_(KPC)、bla_(IMP)、bla_(NDM)、bla_(VIM)基因阳性,检出率依次为65.2%、13.0%、10.9%、4.4%。1株同时携带bla_(KPC)、bla_(IMP),1株同时携带bla_(KPC)、bla_(VIM),1株同时携带bla_(IMP)、bla_(NDM),1株同时携带bla_(IMP)、bla_(VIM)。4种血清型基因被检出,K1、K2、K20、K54的检出率分别为4.4%、4.4%、4.4%、2.2%。rep-PCR结果显示46株CRKP分为A～F 6个型,以A型为主(80.4%),主要分布于ICU。值得注意的是,其中1株CRKP被鉴定为碳青霉烯类耐药高毒力肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant hypervirulent K.pneumoniae, CR-hvKP),血清型基因为K2。结论医院血液分离CRKP的耐药性已十分严重,与其携带bla_(KPC)、bla_(IMP)、bla_(NDM)密切相关,且可能存在克隆性传播。同时,临床已分离出CR-hvKP,应该引起高度重视。     

多重PCR检测肠杆菌科细菌碳青霉烯类耐药基因型

目的采用多重PCR技术快速、高效检测耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)的耐药基因型,为CRE的预防和控制提供依据。方法收集北京积水潭医院住院患者分离得到的58株CRE菌株。CRE菌株表型检测采用改良Hodge试验和亚胺培南/亚胺培南联合EDTA E-test协同试验进行。CRE菌株基因型检测采用多重PCR扩增反应体系(包括11对碳青霉烯酶基因引物:A组为bla_(IMP),bla_(SPM),bla_(VIM),B组为bla_(BIC),bla_(NDM),bla_(KPC),bla_(OXA),C组为bla_(AIM),bla_(GIM),bla_(SIM),bla_(DIM))。对bla_(KPC)阳性的肺炎克雷伯菌行全酶基因编码区PCR扩增及产物测序。结果 58株CRE菌株中52株为肺炎克雷伯菌,占89.66%; 3株为大肠埃希菌,占5.17%; 2株为阴沟肠杆菌,占3.45%; 1株为弗劳地枸橼酸杆菌,占1.72%。改良Hodge试验阳性52株(89.66%),亚胺培南/亚胺培南联合EDTA E-test协同试验阳性2株(3.45%)。CRE中检出bla_(IMP)基因型1株(1.72%),为肺炎克雷伯菌;bla_(KPC)基因52株(89.66%),其中肺炎克雷伯菌为50株(86.21%),2株为大肠埃希菌(3.45%);bla_(NDM)基因1株(1.72%),为阴沟肠杆菌; 11种基因检测全阴性为4株(6.90%),分别为肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、大肠埃希菌、弗劳地枸橼酸杆菌各1株,基因检测阳性者均无重叠。bla_(KPC)基因阳性的肺炎克雷伯菌全酶基因编码区测序结果为bla_(KPC-2)亚型。结论北京积水潭医院患者检出的CRE中,以肺炎克雷伯菌为主。共检测出3种基因型,其中bla_(KPC-2)型是医院CRE的主要基因型,提示医院感控部门要加强对肺炎克雷伯菌耐药的监控,避免耐药率进一步上升。     

耐碳青霉烯酶肠杆菌感染患儿的耐药特征及基因分型

目的研究小儿感染耐碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的耐药特征及基因分型,提高临床诊治水平。方法收集2010年10月-2013年10月在医院就诊的患儿中分离得到的54株耐碳青霉烯酶肠杆菌,按照琼脂稀释法测定菌株对于抗菌药物的耐药性,采用改良Hodge试验和改良双纸片协同试验对54株肠杆菌科细菌产生的碳青霉烯酶和金属β-内酰胺酶的表型进行检测,采用PCR法检测耐药菌株的耐药基因。结果从分离出的3 146株肠杆菌科细菌中共检出54株耐碳青霉烯酶肠杆菌,检出率1.72%;其中肺炎克雷伯菌31株占57.4%,大肠埃希菌13株占24.1%,阴沟肠杆10株占18.5%;耐碳青霉烯酶肠杆菌的标本分布以痰液为主占48.1%,其次为尿液和血液;肺炎克雷伯菌对亚胺培南、美罗培南耐药率分别为71.0%和80.6%、大肠埃希菌的耐药率分别是84.6%和100.0%、阴沟肠杆菌的耐药率分别为80.0%和100.0%;54株耐碳青霉烯酶肠杆菌中,改良Hodge试验阳性检出总准确率达到94.4%,改良双纸片协同试验阳性检出总准确率达到98.1%,经PCR检测呈阳性的有49例占90.7%。结论小儿感染耐碳青霉烯酶肠杆菌科细菌中,肺炎克雷伯菌最多,其次为大肠埃希菌和阴沟肠杆菌,3种细菌对于碳青霉烯类抗菌药物美罗培南的耐药性高于亚胺培南,主要产生B类金属酶(IMP),肺炎克雷伯菌还产生碳青霉烯酶A类(KPC)。     

郑州市耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药趋势分析

目的了解本地区耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)表型并进一步分析其耐药机制,帮助临床合理使用抗菌药物。方法收集2014年1月-2017年8月细菌感染患者送检标本中分离的CRKP菌株82株,统计流行病学特征,用WHONET 5.6软件分析结果,EDTA双纸片协同法检测金属酶表型,PCR方法检测耐药基因。结果 82株CRKP中,科室主要分布在重症医学科和神经外科,标本主要为痰和尿。耐药特征表现为对包括碳青霉烯类在内的绝大部分β-内酰胺类抗菌药物耐药或敏感性降低,部分菌株对米诺环素、替加环素、磷霉素仍保持较高的敏感性。表型检测产金属酶的有20株,耐药机制检测结果显示有64株肺炎克雷伯菌产碳青霉烯酶(KPC)。结论本地区耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药机制主要以KPC为主,临床应加强对其监测,合理使用抗菌药物。     

呼吸与危重症医学病房分离的碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌的分子流行病学

目的了解呼吸与危重症医学病房分离的碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌的分子流行病学特点。方法收集陆军军医大学大坪医院2018年1-12月呼吸与危重症医学病房分离的20株碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌,检测其对常用抗菌药物的敏感性,通过聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)扩增主要的碳青霉烯酶基因(bla_(KPC-2)、bla_(IMP)、bla_(VIM)、bla_(SPM)、bla_(NDM-1)和bla_(OXA-48)),利用脉冲场凝胶电泳(Pulsed field gel electrophoresis,PFGE)对20株碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌进行同源性分析。结果呼吸与危重症医学病房分离的20株碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌对10种常用抗菌药物的耐药率均40.0%; 20株碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌中有6株携带bla_(VIM)基因,6株携带bla_(SPM)基因,2株携带bla_(KPC)基因,剩余6株未携带耐药基因; PFGE结果显示,20株碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌可分为A～F共6个谱型,其中E型占35%,C型占20%。结论医院呼吸与危重症医学病房分离的碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌主要以产SPM型和VIM型碳青霉烯酶为主,存在部分耐碳青霉烯铜绿假单胞菌的克隆传播,临床上应严格做好耐药菌的防控工作,避免耐碳青霉烯铜绿假单胞菌在呼吸与危重症医学病房感染暴发流行。     

临床分离碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌常见耐药基因检测及同源性分析

目的了解天津市南开医院临床分离碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌(CRAB)的流行特征、耐药机制及基因同源性,为CRAB感染的防治提供依据。方法收集38株临床非重复分离的CRAB,进行碳青霉烯酶和金属β-内酰胺酶表型筛选,分析其耐药性、流行特征、耐药机制及基因同源性。结果 38株临床分离的CRAB主要来自痰液标本,ICU分离菌株数最高;米诺环素和替加环素未出现耐药株;碳青霉烯酶表型检测有33株阳性菌株,阳性率为86.8%;未检出产金属β-内酰胺酶菌株;38株CRAB均携带bla_(OXA-23)和bla_(OXA-51)基因,未检出bla_(OXA-24)、bla_(OXA-58)、bla_(KPC)、bla_(GES)、bla_(IMP)、bla_(GIM)、bla_(VIM)和bla_(NDM-1)基因,插入序列ISAba1检测均阳性,ISAba125扩增阳性2株,均未检出插入序列ISAba4;ERIC2-PCR基因分型提示为同一来源克隆株。结论本院分离的CRAB为同一克隆株,且都携带耐药基因bla_(OXA-23)和bla_(OXA-51)及插入序列ISAba1,提示存在克隆传播。     

耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌KPC-2与NDM-1基因的研究

目的检测耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌产酶情况以及KPC-2和NDM-1耐药基因的检出,分析耐碳青霉烯类抗菌药物的耐药机制。方法采用改良Hodge试验、亚胺培南-EDTA纸片协同试验和AmpC酶三维试验检测29株耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌产酶情况;PCR法检测KPC-2及NDM-1两种碳青霉烯酶耐药基因。结果 29株分离菌中26株菌改良Hodge试验阳性,7株亚胺培南-EDTA纸片协同试验阳性,7株AmpC酶三维试验阳性,16株携带KPC-2型碳青霉烯酶耐药基因,占55.17%,未扩增出NDM-1碳青霉烯酶耐药基因。结论耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌的耐药机制主要是产碳青霉烯酶。