柚皮素对脂多糖诱导的脓毒症小鼠肠粘膜损伤保护作用研究

目的:研究柚皮素(Nar)对脂多糖(LPS)诱导的脓毒症小鼠肠道粘膜损伤的保护作用。方法:将雄性25～30 g ICR小鼠随机分为对照组(control组,腹腔注射等量的PBS)、脓毒症模型组(LPS组,腹腔注射LPS)和柚皮素治疗组(LPS+Nar组),每组12只,造模后24 h取材进行肠道组织病理检测及评分;免疫荧光法检测细胞凋亡、肠道上皮紧密连接蛋白闭锁小带蛋白-1(ZO-1)和Occludin表达;免疫组织化学方法检测细胞凋亡关键蛋白Caspase3表达。结果:与脓毒症模型组相比,Nar治疗组小鼠肠道病理损伤显著减轻。脓毒症模型组小鼠肠道上皮细胞凋亡显著增加,Nar治疗后肠道上皮细胞凋亡减轻,Caspase3表达下降,差别有统计学意义(P 0.01)。荧光染色检测显示,与对照组相比,脓毒症模型组小鼠肠道Occludin表达显著下降,Nar干预组较脓毒症模型组表达上升(P 0.05);脓毒症模型组小鼠肠道ZO-1表达显著下降,Nar干预组较脓毒症组表达上升(P 0.05)。结论:Nar对LPS诱导的脓毒症小鼠肠道粘膜具有一定的保护作用,有望为保护脓毒症肠粘膜屏障功能提供新的治疗方法。     

鱼油代谢物保护素D1对重症急性胰腺炎小鼠肠粘膜损伤保护作用的研究

目的:研究保护素D1,一种鱼油的代谢产物,对重症急性胰腺炎(SAP)小鼠肠粘膜损伤的保护作用。方法:将雄性25～30 g ICR小鼠随机分为假手术组(Sham组,行开腹关腹假手术操作)、重症胰腺炎模型组(SAP组,开腹胰管结扎建立SAP模型)和保护素D1治疗组(SAP+protectin D1组,SAP造模1 h后经眼内眦注射保护素D1,2 ng/只),每组12只,造模后24 h取材进行肠道组织病理检测及评分;免疫荧光法检测细胞凋亡、肠道上皮紧密连接蛋白闭锁小带蛋白-1(ZO-1)和Occludin表达;免疫组织化学方法检测细胞凋亡关键蛋白Caspase3表达。结果:与SAP组相比,保护素D1治疗组小鼠肠道病理损伤显著减轻。SAP组小鼠肠道上皮细胞凋亡显著增加,保护素D1治疗后肠道上皮细胞凋亡减轻,Caspase3表达下降,差异有统计学意义(P 0.01)。荧光染色检测显示,与假手术组相比,SAP模型组小鼠肠道Occludin表达显著下降,保护素D1治疗组较SAP模型组表达上升(P 0.01);SAP组小鼠肠道ZO-1表达显著下降,保护素D1治疗组较SAP组表达上升(P 0.05)。结论:保护素D1对SAP模型小鼠肠道粘膜具有保护作用,有望为SAP肠粘膜屏障功能损害提供新的治疗方法。     

双歧杆菌G9-1保护轮状病毒感染新生大鼠肠道稳态的机制

目的研究双歧杆菌G9-1保护轮状病毒(RV)感染新生大鼠肠道通透性及肠道稳态的机制。方法将27只新生SD大鼠随机以1∶1∶1比例分为对照组(配方奶灌胃)、RV感染组(配方奶+0.6 ml RV培养液灌胃)和治疗组(配方奶+0.6 ml RV培养液灌胃,次日以双歧杆菌G9-1溶液灌胃),苏木精伊红(HE)染色评估三组新生大鼠肠道组织病理变化,异硫氰酸荧光素-葡聚糖(FITC-Dextran)示踪法检测肠道通透性,酶联免疫吸附法检测血清D-乳酸(DLA)、二胺氧化酶(DAO)水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肠组织紧密连接相关蛋白-1(ZO-1)、紧密连接蛋白闭锁蛋白(Occludin)、闭合蛋白-1(Claudin-1)mRNA表达,蛋白免疫印迹电泳(Western blot)检测ZO-1、Occludin、Claudin-1蛋白表达,并分析其肠道菌群变化。结果治疗组新生大鼠肠组织病理学评分、FITC-Dextran含量、血清DLA、DAO水平低于RV感染组(P0.05),治疗组肠组织紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-1 mRNA和蛋白表达高于RV感染组(P0.05);治疗组双歧杆菌数量高于RV感染组(P0.05),乳酸杆菌、大肠埃希菌数量与RV感染组比较,无统计学差异。结论双歧杆菌G9-1可有效降低RV感染新生大鼠肠道通透性,修复肠道屏障功能,改变肠道菌群结构,维持肠道稳态平衡。     

BBI阻断LPS对肠道上皮细胞间紧密连接蛋白的抑制作用

目的探讨大豆来源的蛋白酶抑制剂(BBI)是否能阻断脂多糖(LPS)对肠道上皮细胞间紧密连接蛋白的下调作用及其机制。方法用CCK8试剂盒检测LPS和BBI对HT-29细胞的毒性作用。用BBI预处理HT-29细胞6 h,再用LPS刺激,分别用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法(Western Blot)检测细胞紧密连接蛋白(ZO-1,Occludin)、TLR4及MyDD8的表达;通过Western Blot检测NF-κB的激活。结果LPS 1 000 ng/mL和BBI1 000μg/mL对HT-29细胞均无毒性作用。LPS可显著地上调HT-29细胞TLR4表达,且上调作用具有时间与剂量效应;能明显下调紧密连接蛋白的表达,其下调作用与LPS浓度成正比;能明显激活NF-κB,且具有剂量效应;LPS对HT-29细胞的这种作用可被BBI显著地抑制。结论通过抑制LPS诱导的肠道上皮细胞TLR4的表达和NF-κB的活化,BBI能显著地阻断LPS对肠道上皮细胞间紧密连接蛋白的抑制作用。     

腹腔暴露对大鼠肠黏膜屏障的影响

目的:观察腹腔暴露对大鼠肠黏膜屏障的影响。方法:将30只大鼠随机分为五组,即对照组、假手术组、腹腔暴露1 h组、腹腔暴露2 h组和腹腔暴露3 h组,每组6只。腹腔暴露组大鼠剖腹后暴露腹腔,但不进行任何手术操作,暴露相应时间后关腹。假手术组大鼠仅作腹壁切口,不打开腹腔。对照组大鼠仅作相应的麻醉。术后24 h,取血检测血清D-乳酸水平,并取回肠组织测定肠道FD4清除率、小肠黏膜紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的表达水平,同时观察小肠组织的病理变化。结果:腹腔暴露组较对照组大鼠血清D-乳酸水平有所上升,肠道FD4清除率有所增加,小肠黏膜紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的表达水平均有所下降,小肠黏膜病理形态有所改变,并且这种差异随腹腔暴露时间的延长而逐渐显著。Pearson相关性检验分析表明,腹腔暴露组大鼠血清D-乳酸水平和肠道FD4清除率与肠黏膜损伤Chiu's评分均呈显著的正相关。结论:腹腔暴露大鼠肠黏膜屏障功能受损,并随着腹腔暴露时间的延长而逐渐加重。     

盐酸右美托咪定调节重症急性胰腺炎大鼠自主神经功能对肠黏膜屏障的影响

目的:探讨盐酸右美托咪定(Dex)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠自主神经活性和肠黏膜屏障的可能作用. 方法:将24只大鼠随机分为对照组、SAP组和Dex组.对照组为假手术组,SAP组通过胰胆管逆行注射牛磺胆酸钠建立SAP模型,Dex组在建立SAP模型后持续静脉输注Dex注射液.持续监测大鼠心率变异性(HRV),观察自主神经功能的变化.用蛋白质印迹法检测小肠黏膜组织紧密连接蛋白Occludin和ZO-1的表达.用ELISA法检测肠黏膜炎性因子TNF-α和IL-6的表达.在造模后4、8和12 h抽血,用ELISA法检测血清肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)变化.通过肠黏膜组织髓过氧化物酶(MPO)活性评估肠道中性粒细胞活性,通过丙二醛(MDA)水平评估肠道脂质氧化应激水平. 结果:SAP组大鼠HRV明显降低,Dex组大鼠HRV明显高于SAP组.Dex能降低SAP大鼠肠黏膜炎性因子、MPO和MDA水平,上调紧密连接蛋白ZO-1的表达.并且,Dex组大鼠血清iFABP水平明显低于SAP组. 结论:Dex能降低SAP大鼠交感神经活性,减轻肠黏膜损伤.     

DHA对细菌脂多糖诱导的孕鼠炎症和胎鼠生长受限的作用

目的 探讨二十二碳六烯酸（docosahexaenoicacid,DHA）通过调节肠道紧密连接蛋白拮抗细菌脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）诱发的孕鼠炎症和胎儿生长受限的影响及机制。方法 模型建立：ICR孕鼠分为对照、DHA、LPS和DHA+LPS四组，每组11只孕鼠，DHA和DHA+LPS组全孕期（GD0-17）给予DHA(300mg/kg)灌胃处理，其余两组灌以等量的玉米油；LPS和DHA+LPS组在GD15-17灌胃1 h后腹腔注射LPS(100μg/kg)，其余两组给予等量的生理盐水处理，GD18取材时测量胎鼠、胎盘发育指标。机制探索：分组同上，每组6只孕鼠，DHA和DHA+LPS组在GD0-15给予DHA(300 mg/kg)灌胃处理，其余两组灌以等量的玉米油；LPS和DHA+LPS组在GD15灌胃1小时后腹腔注射LPS(100μg/kg)，其余两组给予等量的生理盐水处理，LPS注射1h后收集孕鼠血清及小肠组织。ELISA检测孕鼠血清中IL-6、TNF-α及DAO的水平；Westernblot、qPCR和IHC法检测母鼠小肠上皮紧密连接相关蛋白的表达及分...     

吡咯烷二硫代氨基甲酸对脂多糖诱导小鼠急性呼吸窘迫综合征肺组织凋亡因子表达影响的研究

目的探讨吡咯烷二硫代氨基甲酸(PDTC)对脂多糖(LPS)诱导小鼠急性呼吸窘迫综合征(ARDS肺组织细胞凋亡的机制。方法实验小鼠随机分为对照组、模型组和干预组。采用腹腔内注射LPS 20 mg/kg复制小鼠ARDS动物模型,干预组在注射LPS前30 min腹腔内注射PDTC 120 mg/kg,分别在注射LPS后4、8、12 h三个时相收集标本;对照组腹腔内注射NS 20 m L/kg进行比较。RT-PCR法检测各组肺组织中Bcl-2、Bax及caspase-3的表达水平;荧光酶标分析法检测各组肺组织中caspase-3蛋白酶水平。结果①一般状况:对照组小鼠呼吸平顺、饮食正常、活动自如;模型组小鼠腹腔注射LPS后,呼吸急促,饮食量下降,活动减少;干预组小鼠相对模型组其呼吸较畅顺,饮食量及活动能力下降不明显。模型组及干预组随着实验时间的延长其症状呈加重趋势。②各组肺组织Bcl-2、Bax及caspase-3的表达水平:模型组及干预组肺组织Bcl-2表达水平均较对照组明显增加,干预组增加程度较模型组多,模型组及干预组随实验时间推移呈上升趋势(P <0. 05)。模型组肺组织Bax、caspase-3表达水平较对照组明显升高,干预组介于对照组与模型组之间,模型组及干预组随实验时间延长呈上升趋势(P <0. 05)。③各组肺组织caspase-3蛋白酶水平:模型组肺组织caspase-3蛋白酶水平较对照组含量增加明显,干预组介于对照组与模型组之间,模型组及干预组蛋白酶水平随实验时间延长呈减少趋势(P <0. 05)。结论 PDTC预处理能减轻LPS诱导小鼠ARDS肺组织损伤,其机制与上调抑凋亡因子Bcl-2、下调促凋亡因子Bax及caspase-3等密切相关。     

妊娠期母体使用抗生素和益生菌对后代小鼠肠道发育和肠道菌群的影响

目的 探究妊娠晚期使用头孢曲松和两歧双歧杆菌TMC3115对断乳期小鼠肠道上皮组织发育及肠道菌群构建的影响。方法 24只妊娠10～13 d BALB/C小鼠随机分为对照组、头孢曲松组和TMC3115组(n=8)。妊娠期小鼠分别每日用生理盐水、头孢曲松(30 mg/d)、TMC31115菌悬液（含菌量为109 CFU/d）灌胃至分娩，新生小鼠由母鼠母乳喂养至断乳期（PND21）。采用HE染色观察小鼠结肠绒毛和隐窝深度；RT-PCR法检测各组小鼠肠道上皮组织发育相关蛋白(Ki67、Muc2)和紧密连接蛋白（ZO-1、Claudin-1、Claudin-2、Occludin）表达;二代测序法分析小鼠肠道菌群组成。结果 和对照组和头孢曲松组相比，TMC3115组小鼠的结肠隐窝深度、KI67 mRNA表达量显著(P<0.05)升高。TMC3115组小鼠紧密连接蛋白Occludin mRNA表达量也显著高于对照组(P<0.05)。对照组和TMC3115组肠道菌群中厚壁菌门相对丰度，头孢曲松组拟杆菌门相对丰度最高。和头孢曲松组相比，TMC3115组厚壁菌门和乳杆菌属相对丰度显著升高(P&...     

乌司他丁对脓毒症晚期大鼠肠黏膜屏障功能的影响

目的 探讨乌司他丁对脓毒症晚期大鼠肠黏膜屏障功能的影响。方法 选取18只SD雄性大鼠随机分为假手术组、脓毒症组和治疗组,每组6只。盲肠结扎穿孔术(CLP)建立脓毒症模型。假手术组切开腹壁后缝合,其余两组行CLP术。治疗组在建模后20 min经尾静脉注射乌司他丁,其余两组于相同时间点注射等容积生理盐水。各组大鼠于CLP后24 h处以安乐死。取心脏血、股动脉血及小肠标本。分别检测小肠病理光镜、空肠组织紧密连接蛋白(ZO-1)、血浆二胺氧化酶(DAO)、小肠微管相关蛋白质轻链3(LC3)和降解底物P62。结果 脓毒症组大鼠小肠绒毛顶端上皮脱落,固有层崩解,毛细血管出血和溃疡形成,乌司他丁治疗组显著减轻了上述病理改变;与假手术组相比,脓毒症组ZO-1水平降低(P<0.05),乌司他丁治疗组可提升其水平(P<0.05);与假手术组相比,脓毒症组DAO浓度升高(P<0.05),乌司他丁治疗组可降低其浓度(P<0.05);与假手术组相比,脓毒症组P62表达增加,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ下降(P<0.05);与脓毒症组比较,乌司他丁治疗组p62表达下降,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ上升(P<0.05)。结论 脓毒症晚期大鼠的肠上皮自噬功能受损;乌司他丁可通过提升其水平改善脓毒症大鼠肠黏膜屏障功能障碍。