TIEG1对HL-60细胞凋亡及Bcl-2/Bax表达的影响

本研究旨在观察TIEG1对HL-60细胞凋亡及Bcl-2/Bax表达的影响。用不同浓度的TIEG1处理HL-60细胞,采用MTT法检测细胞生长抑制率。用12.03 ng/ml TIEG1处理HL-60细胞,以流式细胞术检测细胞凋亡,以RT-PCR方法检测Bcl-2及Bax的表达变化。结果表明,TIEG1对HL-60细胞具有增殖抑制作用,其抑制效应呈时间及剂量依赖性。TIEG1 12.03 ng/ml增殖抑制作用较为明显。在细胞凋亡过程中,Bax表达呈升高趋势,而Bcl-2呈下降趋势(P<0.05)。结论:TIEG1可以抑制HL-60细胞增殖,进而诱导其凋亡,且呈时间、剂量依赖性。在TIEG1诱导HL-60细胞凋亡的过程中,Bcl-2/Bax与TIEG1诱导HL-60细胞凋亡相关。     

雷帕霉素对急性髓系白血病细胞系HL-60和HL-60/VCR生长的抑制作用

为了探讨mTOR抑制剂雷帕霉素对急性髓系白血病（acute myeloid leukemia;AML）细胞的增殖和药物敏感性的影响。以AML细胞株HL-60和多药耐药HL-60/VCR细胞系为研究对象,采用MTT法测定生长曲线和流式细胞术检测细胞周期;Western blot检测P糖蛋白（P-glycoprotein,Pgp）的表达。结果显示：与空白对照组细胞比较,雷帕霉素能抑制HL-60和HL-60/VCR细胞生长增殖（p〈0.05）,且随着浓度升高,增殖抑制率逐渐增高,24-72小时的细胞增殖抑制率随着时间的延长而有所增高（p〈0.05）,同时可阻滞细胞从G1期到S期的细胞周期转换。雷帕霉素抑制HL-60/VCR细胞的Pgp蛋白的表达。与柔红霉素单独应用相比,雷帕霉素50nmol/L、100nmol/L与柔红霉素联合应用使HL-60和HL-60/VCR细胞增殖抑制率明显增高（p〈0.05）,尤其是当先加雷帕霉素,而24小时后再加柔红霉素时。结论：mTOR抑制剂雷帕霉素对HL-60和多药耐药的HL-60/VCR细胞的生长均有抑制作用,除伴G0/G1期阻滞外,还增加细胞对柔红霉素的敏感性,这为临床难治性AML治疗提供新的治疗手段。     

三氧化二砷对急性髓系白血病细胞HL-60 Cdc20及Mad2的影响

目的:探讨三氧化二砷(As_2O_3)对急性髓系白血病细胞HL-60增殖过程中Cdc20及Mad2的影响。方法:不同浓度As_2O_3处理HL-60细胞24、48、72 h后CCK-8法检测细胞增殖情况;Real-Time PCR及Western blot技术检测不同浓度As_2O_3作用于HL-60细胞48 h后Mad2和Cdc20 mRNA及蛋白表达情况。结果:As_2O_3能显著抑制HL-60细胞增殖,并具有良好的时间剂量相关性。RT-PCR和Western blot检测结果表明,As_2O_34、8、10μmol/L作用于HL-60细胞后,Mad2表达上调,Cdc20表达下降(P0.05)。结论:As_2O_3对人急性髓系白血病HL-60细胞增殖具有较明显的抑制作用,其机制可能与上调Mad2表达和下调Cdc20表达有关。     

c-myc小干扰RNA诱导人髓系白血病细胞系HL-60细胞凋亡

本研究探讨c-myc小干扰RNA对白血病细胞系HL-60诱导凋亡的作用。将体外合成的siRNA转染HL-60细胞,观察形态学变化,应用MTT法绘制细胞生长曲线,用细胞集落培养观察c-mycsiRNA对HL-60细胞增殖的影响;应用DNA片段化分析细胞的凋亡,RT—PCR及Western blot检测c-mycsiRNA作用前后Comyc基因mRNA及蛋白表达水平的变化。结果表明：ComycsiRNA能明显抑制HL-60细胞增殖,半数抑制浓度（IC50）约为150nmol／L;DNA片段化的检出证实C-mycsiRNA能有效诱导HL-60细胞调亡,凋亡率与药物作用时间呈正相关。C-mycsiRNA与HL-60细胞作用后C-myc基因和蛋白的表达水平与作用时间呈负相关。结论：C-mycsiRNA能有效抑制HL-60细胞增殖,降低C-myc基因和蛋白的表达,诱导其凋亡。     

抑制SIX1表达对急性髓系白血病耐药细胞HL-60/ADR的影响

目的：建立抑制同源盒基因1(SIX1)表达的HL-60细胞及耐阿霉素的HL-60细胞（HL-60/ADR）,研究抑制SIX1对HL-60及HL-60/ADR细胞耐药作用的影响。方法：用慢病毒感染HL-60及HL-60/ADR细胞,经嘌呤霉素筛选获得稳定抑制SIX1表达的细胞株。采用CCK-8法检测各组细胞的增殖能力,流式细胞凋亡试剂盒检测细胞凋亡情况,实时定量PCR检测耐药相关基因的表达水平。结果：成功构建了抑制SIX1表达的HL-60及HL-60/ADR稳定转染细胞株。与对照组相比较,抑制SIX1的表达使HL-60及HL-60/ADR细胞的增殖明显受抑制（P<0.05）,细胞的凋亡率显著增加（P<0.05）,并且抑制SIX1表达后细胞对阿霉素的敏感性升高。结论：抑制SIX1的表达可以提高细胞对阿霉素的敏感性,其逆转耐药性的作用可能与促进细胞凋亡基因的表达有关。     

三氧化二砷对肝癌HepG2细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对人肝癌细胞系HepG2的凋亡诱导作用及其发生机制。方法体外培养HepG2细胞,用不同浓度的As2O3对HepG2细胞进行干预;采用MTT、Annexin V/PI双染及TUNEL法,观察其对HepG2细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用;采用流式细胞术定量检测凋亡相关蛋白Bcl-2与Bax表达的变化。结果 As2O3在体外能明显抑制HepG2细胞生长,具有时间剂量依赖关系。Annexin V/PI双染及TUNEL法结果显示:5～20μmol/L的As2O3作用24h均可诱导HepG2细胞凋亡,且呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(t分别=-2.96、-4.15、-7.33,P均<0.05);As2O3作用HepG2细胞24h时Bcl-2表达下降,Bax表达上升,Bcl-2/Bax比值降低,呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(t分别=3.59、5.65、6.94、7.62、7.92,P均<0.05)。结论一定浓度的As2O3能抑制HepG2细胞增殖,促进其凋亡,其机制可能与调控Bcl-2、Bax表达有关。     

白藜芦醇逆转急性髓系白血病细胞HL-60/ADR耐药的凋亡机制

目的:探讨白藜芦醇(Resveratrol,Res)逆转急性髄系白血病细胞HL-60/ADR耐药的凋亡机制。方法:将HL-60/ADR细胞分为对照组(Control)、阿霉素(ADR)处理组、Res处理组和ADR+Res联合处理组4组。应用CCK-8法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞内阿霉素(ADR)自发荧光强度和细胞凋亡率;RT-PCR法检测耐药基因MRP1、抗凋亡基因BCL-2和促凋亡基因BAX mRNA表达水平,Western blot法测定MRP1、BCL-2和BAX蛋白表达水平。结果:25、50、100和200μmol/L Res作用于HL-60/ADR细胞48 h后,细胞的最大抑制率分别为44%、61%、76%和81%,呈浓度依赖性(r=0.876,P0.05);与ADR组的半数抑制浓度(IC50)(8.534±1.111μmol/L)相比,ADR+Res组HL-60/ADR细胞的IC50(1.591±0.373μmol/L)明显减少(P0.05)。ADR联合Res后HL-60/ADR耐药细胞内ADR自发荧光强度明显增加(P0.05);Res组和ADR+Res组细胞凋亡率均显著增加(P0.05)。Res组和ADR+Res组的MRP1 mRNA、BCL-2 mRNA表达水平显著下降(P0.05),BAX mRNA表达水平明显上升(P0.05)。Res组和ADR+Res组M RP1、BCL-2蛋白表达水平显著下降(P0.05),BAX蛋白明显上升(P0.05)。结论:白藜芦醇具有逆转HL-60/ADR细胞耐药的作用,可能是通过促进HL-60/ADR细胞凋亡、抑制耐药蛋白M RP1而发挥作用,其促凋亡机制与抑制BCL-2和增强BAX表达有关。     

雷帕霉素通过EZH2/Hedgehog信号通路诱导慢性髓系白血病细胞凋亡

目的:探讨雷帕霉素诱导慢性髓系白血病(CML)细胞凋亡的机制。方法:对CML细胞K562用雷帕霉素10(A组)、15(B组)和20(C组) nmol/L分别处理24 h,对照组不加雷帕霉素。采用MTT法检测雷帕霉素对K562细胞增殖的影响, AnnexinV-FITC/PI双染法检测雷帕霉素对K562细胞凋亡的影响, RT-PCR检测雷帕霉素对K562细胞EZH2/Hedgehog信号通路基因表达水平,Western blot检测雷帕霉素对K562细胞凋亡及相关信号通路蛋白表达水平。结果:MTT法检测发现,不同浓度雷帕霉素对细胞增殖有明显抑制作用,其中C组的细胞存活率37.6%±3.4%,显著低于其它各组(P0.05)。通过AnnexinV-FITC/PI双染法检测发现,C组细胞的凋亡率为93.1%±8.1%,显著高于其它各组(P0.05)。Western blot检测发现,K562细胞在雷帕霉素作用后,C组的Caspase-3和BAX蛋白相对表达水平分别为0.36±0.04、0.39±0.06,显著高于其它各组(P0.05);BCL-2蛋白水平0.17±0.03,显著低于其它各组(P0.05)。RT-PCR检测发现,K562细胞在雷帕霉素作用后,EZH2与Hedgehog基因mRNA水平明显下降(P0.05),而Ptch1基因m RNA水平明显上升(P0.05)。Western blot检测发现,K562细胞在雷帕霉素作用后,其EZH2与Hedgehog蛋白表达水平下降,而Ptch1蛋白水平上升(P0.05)。C组的EZH2与Hedgehog蛋白相对水平分别为0.21±0.03、0.16±0.05,显著低于其它各组(P0.05);Ptch1蛋白水平0.46±0.06,显著高于其它各组(P0.05)。结论:雷帕霉素可抑制白血病细胞中EZH2蛋白表达,从而干扰Hedgehog信号通路的激活,并促进凋亡蛋白的表达,减少抗凋亡蛋白水平,最终诱导白血病细胞的凋亡。     

Bcl-2、Bax在急性白血病表达中的研究进展

白血病细胞对化疗耐药是当前成功治疗白血病的主要障碍之一，细胞耐药存在多种机制，近年来较多学者将研究的重点放在了细胞凋亡的抑制剂上。在诸多细胞凋亡的“抑制剂”中最引人注目的是Bcl-2基因，它是用以研究细胞凋亡抑制的最佳模型，它的表达状态在一定程度上决定肿瘤的发生、发展及癌细胞对化疗药物的敏感性。     

急性髓细胞白血病Bcl-2蛋白表达及其临床意义

目的：检测急性髓细胞白血病（AML）Bcl-2蛋白，并评价其与AML患者临床特征及多药耐药基因MDRl表达产物P170的关系。方法：免疫细胞化学ABC法检测白血病细胞中Bcl-2蛋白及P170表达。结果：AML中存在Bcl-2高水平表达，但复发的AML与初发AMLBcl-2表达无显著差异（P〉0．05）。初发AML中，Bcl-2阳性组患者完全缓解（CR）率显著低于Bcl-2阴性组（P〈O．01）。Bcl-2的阳性与阴性组中P170表达无显著差异（P〉0．05）。Bcl-2和P170间无相关表达（r1=0．171，P〉0．05），但Bcl-2／P170双阳性组化疗CR率显著低于双阴性组（P〈O．01）或P170／Bcl-2单阳性组（P〈O．05）。结论：初发AML中Bcl-2蛋白高水平表达与化疗耐药有关；Bcl-2与P170联合表达患者化疗反应更差。     

雷帕霉素诱导HL-60细胞自噬及UCH-L3的表达

目的:探讨雷帕霉素能否诱导人早幼粒细胞白血病细胞株(human promyelocytic leukemia cells,HL-60)发生自噬及在此过程中泛素羧基末端水解酶L3(ubiquitin C-terminal Hydrolase L3,UCHL3)的表达变化。方法:应用CCK-8法检测不同浓度雷帕霉素处理HL-60细胞后的生长抑制率。2μmol/L雷帕霉素作用HL-60细胞不同时间后,在荧光显微镜下观察HL-60细胞的形态变化;应用透射电镜观察自噬小体的发生情况,real-time PCR检测自噬标志性基因LC3-Ⅱ和UCHL-3的mRNA表达变化,Western blot检测UCH-L3的蛋白表达变化。结果:不同浓度雷帕霉素对HL-60细胞增殖均有抑制作用,与对照组相比,差异均有统计学意义(P0.05)。在荧光显微镜下,对照组细胞内荧光强度低,雷帕霉素组细胞荧光强度随着处理时间延长也相应增强。2μmol/L雷帕霉素处理细胞12和24 h后,在透射电镜下可见对照组内自噬小体数量少,而在处理组细胞内自噬小体数量增多,且形态典型特异;与对照组相比LC3-Ⅱ mRNA表达量增加,而UCH-L3的mRNA和蛋白表达量均下降(P0.05)。结论:雷帕霉素能诱导HL-60细胞发生自噬性死亡。UCH-L3可能在调控白血病细胞自噬性死亡中发挥作用。     

急性髓系白血病细胞对骨髓基质细胞增殖、凋亡的影响

目的:研究在白血病微环境下,急性髓系白血病细胞对骨髓基质细胞(BM-MSC)增殖、凋亡的影响。方法:选取过表达MLL-AF9的急性髓系白血病(AML)小鼠模型与野生型(WT)小鼠为研究对象。应用流式细胞分选仪分选WT小鼠与AML小鼠来源的BM-MSC并计数。通过倒置荧光显微镜分析不同来源的BM-MSC的形态及生长差异性。采用Brdu法检测不同来源的BM-MSC增殖率。采用Annexin V/PI法检测不同来源的BM-MSC凋亡率。结果:与WT小鼠来源的BM-MSC比较,AML来源的BM-MSC数量显著增加(P<0.01),细胞增殖率显著增高(P<0.001);凋亡率显著降低(P<0.05)。在体外培养BM-MSC,加入条件培养基的BM-MSC生长速度显著加快,但形态没有明显差异。结论:在白血病微环境中,AML细胞能够促进BM-MSC增殖,抑制其凋亡。     

熊果酸诱导人白血病HL-60细胞凋亡作用

熊果酸(Ursolic acid,UA),又名乌索酸,乌苏酸,是存在多种天然植物中的五环三萜类化合物,如白花蛇香草、山楂、女子贞、夏枯草等,熊果酸具有保护肝脏、降血脂、调节机体免疫、抗氧化和抗肿瘤等多种生物学活性[1,2],研究表明熊果酸可通过诱导细胞凋亡抑制多种肿瘤细胞的生长,如人乳腺癌、胃     

蛋白酶体抑制剂MG132诱导髓系白血病细胞HL-60细胞凋亡机制的研究

本研究探讨蛋白酶体抑制剂MG132诱导HL-60细胞的凋亡、凋亡途径及其对混合淋巴细胞反应的作用。流式细胞术检测MG132诱导HL-60细胞凋亡、阻断caspase-8和caspase-9通路、MG132诱导HL-60细胞凋亡的变化;Western blot检测MG132作用于HL-60细胞后P21、P27和P53蛋白的表达;应用75 Gy照射经MG132作用的HL-60细胞,然后用CCK-8检测HL-60细胞对健康人单个核细胞的增殖作用。结果表明:大剂量MG132可诱导HL-60细胞凋亡;阻断caspase-8和caspase-9通路后MG132诱导HL-60细胞的凋亡无明显变化,P21蛋白、P27蛋白在MG132作用于HL-60细胞后表达升高,小剂量MG132诱导的HL-60细胞对健康人单个核细胞有增殖作用。结论:大剂量MG132诱导HL-60细胞凋亡,对HL-60细胞有直接杀灭作用,MG132诱导的HL-60细胞凋亡不通过caqspase-8和caspase-9途径,P21和P27蛋白可能参与了MG132诱导的HL-60细胞凋亡,小剂量MG132促进健康人单个核细胞的增殖作用,提高机体的免疫性。     

sCD40L对急性髓系白血病HL-60细胞生物学行为的影响及其机制

可溶性CD40配体(sCD40L)是肿瘤坏死因子受体(TNFR)家族成员.由CD40信号肽和胞外功能区构成,在肿瘤细胞抗原递呈、免疫应答、增殖调控中发挥重要的作用[1-2].据报道,sCD40L可抑制肿瘤细胞增殖、促进癌细胞进入G1期而诱导细胞凋亡[3-4].     

姜黄素对人多发性骨髓瘤细胞表达Survivin、Bcl-2、Bax的影响

为探讨姜黄素对人多发性骨髓瘤细胞RPMI8226的抑制生长和诱导凋亡的作用机制,应用MTT法检测姜黄素对肿瘤细胞的杀伤效应;用流式细胞术（FCM）分析姜黄素作用后肿瘤细胞凋亡及细胞周期的变化;用RT-PCR方法检测Survivin、Bcl-2、Bax mRNA水平的变化。结果表明：姜黄素明显抑制RPMI8226细胞的增殖,并表现为时间、剂量依赖性,24、48小时IC50值分别为12.15μmol/L、4.9μmol/L;凋亡率由10.6%增加到36.9%（p〈0.05）,细胞发生G2/M期阻滞;RPMI8226细胞细胞强表达Survivin、Bcl-2,弱表达Bax。RPMI8226细胞经10μmol/L姜黄素处理24小时后,survivin、Bcl-2 mRNA表达下调,而Bax表达上调。结论：姜黄素抑制多发性骨髓瘤细胞RPMI8226增殖,并诱导凋亡。姜黄素的抗瘤机制可能与凋亡相关蛋白survivin、bcl-2、bax在转录水平的调节有关。     

Nucleostemin下调联合雷帕霉素对HL-60细胞自噬与凋亡影响的初步研究

目的：研究Nucleostemin(NS)下调联合雷帕霉素对HL-60细胞自噬和凋亡的影响并探讨其在HL-60细胞中的作用。方法：通过NS-RNAi-GV248重组慢病毒载体转染HL-60细胞后检测NS蛋白的表达。采用流式细胞术检测沉默NS和/或雷帕霉素处理24、48 h后HL-60细胞的凋亡变化;采用Western blot技术检测各组细胞中NS、LC3、p62、BCL-2、Bax蛋白的表达。结果：重组慢病毒载体成功下调HL-60细胞NS表达。经雷帕霉素处理后,细胞凋亡率均明显增加（P<0.05）,且48 h凋亡更明显。与NS敲低组、雷帕霉素组相比,NS下调联合雷帕霉素组处理48 h后,其凋亡明显增加（P<0.05）,LC3-II/LC3-I比值显著增加（P<0.05）,p62蛋白表达下降更显著（P<0.05）,并且BCL-2/Bax比值减低更明显（P<0.05）。结论：NS下调联合雷帕霉素可增强HL-60细胞的凋亡和自噬,并且其诱导HL-60细胞的凋亡可能与BCL-2、Bax蛋白的表达有关。     

双氢青蒿素与三氧化二砷对急性髓系白血病细胞凋亡的影响

目的：观察双氢青蒿素（DHA）联合三氧化二砷（ATO）对急性髓系白血病（AML）FLT3-ITD突变MOLM13细胞活力和凋亡的影响及其机制。方法：采用DHA和ATO单药或联合作用于MOLM13细胞,CCK-8法检测细胞活力,细胞平板克隆形成实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡及活性氧（ROS）产生,Western blot检测凋亡相关蛋白的表达水平。结果：与对照组相比,DHA和ATO单药或联合处理均可抑制细胞生长,激活ROS产生,从而诱导细胞凋亡,而DHA和ATO之间具有协同作用。Western blot结果显示,DHA能促进ATO通过降低Mcl-1、FLT3-ITD表达,显著上调c-PARP表达水平,激活细胞凋亡。结论：DHA联合ATO通过抑制Mcl-1表达、诱导FLT3-ITD蛋白降解诱导FLT3-ITD AML细胞株MOLM13发生凋亡。