IFN-γTGF-β在急性炎症-黑色素瘤模型中的动态变化及其实验研究*

目的:通过在小鼠背侧施加外科切口的方法构建黑色素瘤与急性炎症共存的动物模型,评估急性炎症与肿瘤进程的关系,观察肿瘤不同生长阶段干扰素-γ/转化生长因子-β（IFN-γ/TGF-β）的变化,初步探讨二者相互影响的机制。方法:选用6 周龄C57BL雄性小鼠建立黑色素瘤荷瘤动物模型,于左侧鼠蹊部接种B16F10单细胞悬液,分为单纯肿瘤组（对照组）和伤口+ 肿瘤组（实验组）,待肿瘤生长至0.5cm3时于实验组小鼠右侧背部构建伤口模型,动态观察肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线,利用ELISA 检测血清与肿瘤组织中IFN-γ/TGF-β 的表达水平;根据ELISA检测结果,建立注射外源性IFN-γ 的动物模型（回收实验）,观察TGF-β 表达水平的变化。结果:急性炎症对肿瘤的影响呈现为早期抑制阶段与晚期失抑制阶段。在早期抑制阶段,肿瘤生长减缓,IFN-γ 高表达,TGF-β 低表达;在晚期失抑制阶段,肿瘤生长恢复至正常速度,TGF-β 表达升高。外源注射IFN-γ 后,肿瘤生长曲线也表现为早期抑制时相和晚期失抑制时相。早期抑制时相中,TGF-β 在实验组与对照组表达无显著性差异（P>0.05）;晚期失抑制时相中,TGF-β 在血清及肿瘤中表达明显升高（P<0.05）。 结论:急性炎症初期由于IFN-γ 的作用,肿瘤的生长暂时受到抑制,随着时间推移TGF-β表达升高拮抗IFN-γ的抑制作用,使肿瘤获得再生长。      

射频治疗对荷H22肝癌小鼠脾淋巴细胞免疫功能的影响

背景与目的:射频治疗(radiofrequencytherapy)不同于手术之处在于治疗后的肿瘤组织仍留于体内,这种差别对机体细胞免疫功能的影响有待深入研究。本研究目的是评价射频治疗荷H22肝癌小鼠后脾淋巴细胞增殖活性、细胞毒作用及Th1/Th2细胞因子漂移状况的变化。方法:24只BALB/c小鼠随机分为射频治疗组、手术治疗组、荷瘤对照组及正常对照组4组。MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖活性,双色流式细胞技术检测脾淋巴细胞细胞毒作用,双抗体夹心ELISA法测定脾细胞培养上清中IL-2、IFN-γ、IL-4及IL-10细胞因子浓度,半定量RT-PCR测定脾细胞IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-10mRNA相对含量。结果:射频治疗组小鼠脾淋巴细胞增殖活性和细胞毒作用显著高于正常对照组、手术治疗组及荷瘤对照组(P<0.05)。射频治疗组IL-2和IFN-γ浓度及mRNA表达水平显著高于其他3组(P<0.05),IL-4和IL-10浓度及mRNA表达水平显著低于其他3组(P<0.05)。手术治疗组IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-10浓度及mRNA表达水平与正常对照组相比无显著性差异(P>0.05)。结论:射频治疗能够促进荷H22肝癌小鼠脾淋巴细胞活化、增殖,增强对同源肿瘤细胞的杀伤作用。射频治疗可以促进Th1类细胞因子IL-2和IFN-γ的表达。     

PD-1抑制剂联合高剂量照射对肺癌小鼠的抑瘤作用及对其免疫系统的影响

目的 探讨程序性死亡1(PD-1)抑制剂联合高剂量照射对肺癌荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用及对免疫系统的影响。方法 选取40只小鼠建立肺癌模型，造模成功小鼠随机分为模型组、PD-1抑制剂组、高剂量照射组、联合组(PD-1抑制剂联合高剂量照射),各10只，另设对照组10只。PD-1抑制剂组和联合组小鼠腹腔注射2 mg/mL的PD-1抑制剂100μL,对照组及模型组注射等量PBS,连续注射14 d;高剂量照射组和联合组小鼠肿瘤部位接受单次剂量10 Gy的电离照射。观察各组小鼠一般情况并记录体质量；ELISA法检测各组小鼠血清干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平；称取瘤质量并计算抑瘤率；检测各组小鼠胸腺指数、脾脏指数；HE染色观察肿瘤组织学变化；RT-PCR和Western blot分别检测小鼠肿瘤组织中PD-1、程序性死亡受体1(PD-L1)mRNA和蛋白表达情况。结果 与模型组比较，PD-1抑制剂组、高剂量照射组和联合组小鼠体质量、肿瘤生长抑制率、IFN-γ、IL-2、TNF-α、胸腺指数、脾脏指数水平升高，瘤质量、PD-1、PD-L1 mR...     

转基因表达的IFN-γ与重组IFN-γ对小鼠结肠癌的治疗作用

目的:评价IFN-γ转基因方法与肿瘤内注射重组IFN-γ对荷瘤小鼠的治疗作用。方法:用小鼠结肠癌细胞CT26接种于Balb/c小鼠皮下,建立小鼠皮下种植模型;小鼠成瘤后分成5组(每组9只),分别进行不同的干预。A组,瘤内注射阳离子脂质体Lipofectamine和含huIFN-γ全长基因的真核表达质粒pcDNA3-huIFN-γ的混合液,1周后重复1次;B组,瘤内注射重组huIFN-γ,每日1次,连续4周;C组,瘤内注射重组huIFN-γ,每周3次,连续4周;D组,瘤内注射生理盐水,每日1次,连续4周;E组,瘤内注射空载质粒pcDNA3与Lipofectamine的混合液,1周后重复1次。比较种植瘤的体积,并取肿瘤组织进行病理学检查及FCM分析。结果:与D、E组比较,A、B、C组抑瘤效应明显;A、B、C组皮下肿块镜下观察见大量淋巴细胞浸润,流式细胞仪检测显示CD3 、CD4 T淋巴细胞的百分率明显高于D、E组。结论:IFN-γ转基因治疗对荷瘤小鼠的肿瘤生长有抑制效应,转基因治疗组与重组IFN-γ每日给药组抑瘤效果相当,而优于重组IFN-γ间断给药组。     

Walker-256肿瘤对荷瘤大鼠Th1/Th2平衡的影响

目的 建立Walker-256大鼠种植瘤模型,研究Walker-256肿瘤对大鼠的Th1/Th2平衡的影响.方法 选取20只雌性SD大鼠,随机分为肿瘤组和对照组.肿瘤组大鼠皮下注射Walker-256肿瘤细胞悬液,建立肿瘤模型,对照组大鼠则皮下注射等量PBS.25天后,检测大鼠血细胞因子(包括IL-12、IFN-γ、IL-4、IL-10)和肿瘤最大径.结果 肿瘤组与对照组比较,肿瘤组IL-12明显下降(P<0.05),IFN-γ明显下降(P<0.05),IL-10明显上升(P<0.01).以IFN-γ/IL-4代表Th1/Th2,肿瘤组与对照组比较明显下降(P<0.05).Th1/Th2失衡与肿瘤生长情况存在相关性.结论 Walker-256肿瘤能够导致荷瘤大鼠Th1/Th2失衡.Th1/Th2失衡有利于肿瘤生长.     

人IL-12重组质粒对S-180荷瘤小鼠的治疗作用

目的：探讨人白细胞介素（imerleukin，IL）-12重组质粒对荷瘤小鼠的基因治疗作用．并进行初步的安全性评价。方法：建立肉瘤细胞（8-180）荷瘤小鼠模型，随机分为3组，每组10只，分别于注射瘤细胞后的第4、7、10、14和17天给予人IL-12重组质粒（pcDNA6-p70，100μg／只）、环磷酰胺（40mg／kg）及生理盐水（100μL／只）瘤体内注射。观察小鼠的存活时间；于致瘤后第21天处死小鼠，测肿瘤大小及质量，计算脾和胸腺指数；乳酸脱氢酶法检测NK杀伤活性；MTT法检测脾淋巴细胞增殖反应；ELISA法检测小鼠血清IFN-γ水平。对pcDNA6p70小鼠体内运用进行初步的安全性评价。结果：与生理盐水组相比．pcDNA6-p70瘤体内注射可显著延长荷瘤小鼠存活时间，P=0．03；缩小肿瘤体积，抑瘤率为30％，生理盐水组为0；增加脾（P=0．04）及胸腺（P=0．019）指数．增强其NK活性（P=0．001）及淋巴细胞增生反应（P=0．000），提高荷瘤血清IFN-γ水平（P=0．000）。安全性检测结果显示，pcDNA6p70在小鼠体内应用无明显毒副作用．P=0．58。结论：人IL-12重组质粒可通过增强机体的细胞免疫功能发挥对肿瘤的基因治疗作用。     

IL-12基因联合吡柔比星治疗裸鼠膀胱癌移植瘤的实验

目的 探讨联合应用白细胞介素12(IL-12)质粒和吡柔比星（THP）对人膀胱癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法 将人EJ膀胱癌细胞株裸鼠腋下接种,成瘤后设4组（每组6只）：联合组于骨骼肌注射IL-12真核表达质粒pcAGGS-mIL-12和腹腔注射THP;IL-12组骨骼肌注射pcAGGS-mIL-12;THP组腹腔注射THP;对照组肌肉及腹腔注射0.9%氯化钠溶液,以上注射每周2次,共4次。观察各组裸鼠肿瘤大小变化。4周后处死荷瘤鼠。免疫组织化学法检测肿瘤内VEGF 表达。ELISA法测定血液及肿瘤组织中IL-12和γ-干扰素(IFN-γ)的表达。结果 联合组肿瘤生长明显抑制,瘤重及体积明显小于其他组。ELISA法表明IL-12组和联合组 IL-12和IFN-γ都高表达。免疫组织化学法表明联合组VEGF基因表达量明显低于其他组（P<0.05）。结论 联合应用IL-12真核表达质粒pCAGGS-mIL-12和THP,对人膀胱癌裸鼠移植瘤的抑制作用明显强于单独应用IL-12和THP。     

细胞因子诱导的杀伤细胞对人宫颈癌HeLa-luc细胞荷瘤裸鼠模型的抗肿瘤作用

目的:探讨细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)抗肿瘤活性,及其作用机制.方法:人宫颈癌细胞HeLa-luc接种BALB/ C裸鼠建立动物模型.从健康人外周血单个核细胞诱导培养CIK细胞.CIK或PBS经瘤周注射入荷瘤鼠体内.应用活体生物发光成像技术观察肿瘤大小变化.观察肿瘤的体积和重量变化. ELISA法检测荷瘤鼠外周血中IFN-γ水平.HE染色观察肿瘤、肺脏、肝脏及脾脏的病理形态学变化.结果:CIK治疗后实验组(CIK)肿瘤明显比对照组(PBS)体积小,P<0.05.接种HeLa-luc细胞第5、8周的抑瘤率分别为47.18%、64.38%.接种HeLa-luc细胞第8周实验组血清中IFN-γ[(61.92±6.49) ρg/mL]明显高于对照组[(34.30±1.78) ρg/mL],P<0.01.实验组和对照组中,肿瘤组织形态学无明显差别.实验组肺脏、肝脏未见癌结节出现,但均有炎细胞浸润.对照组肺脏出现大量癌结节而肝脏未见癌结节出现.两组脾脏中均可见癌结节.结论:CIK细胞可以明显抑制肿瘤的生长,其机制可能与免疫细胞产生IFN-γ有关.该研究为肿瘤的临床过继免疫治疗提供了理论依据.     

OK-432对荷瘤小鼠脾细胞IL-12及Th1细胞因子分泌的诱导作用

目的：探讨溶血链球菌冻干制剂OK－432的抗肿瘤机理。方法：B16黑色素瘤细胞接种于C57BL／6小鼠皮下,3d后腹腔注射1KU的OK－432,每周1次,连续3周。观察肿瘤生长体积及荷瘤小鼠的生存期,并测定了OK－432在体内、体外对荷瘤脾细胞IL－2、IL－4,IL－6,IL－10,IL－12,IFN-γ分泌的结果。结果：OK－432能显著抑制B16黑色素瘤的生长,延长荷瘤小鼠的生存期（P＜0．05）;在体外OK－432可刺激荷瘤小鼠脾细胞IL－6,IL－10,IL－12,IFN-γ的分泌（P＜0．01）;腹腔注射OK－432后荷瘤小鼠脾细胞IL－2,IL－12,IFN-γ的分泌显著增加,而IL－10显著减少（P＜0．05）。提示OK－432治疗后荷瘤小鼠脾细胞Th1增加,Th2相对减少。结论：OK－432在体内可通过诱导荷瘤小鼠脾细胞IL－12的分泌,促进Th0向Th1分化,使宿主的免疫功能处于Th1优势状态,从而增强宿主的抗肿瘤作用。     

小鼠多亚型热休克蛋白/肽疫苗联合PD-L1免疫检查点抑制剂的抗肿瘤实验研究

  目的  应用小鼠肉瘤组织制备混合多亚型热休克蛋白/肽疫苗（mHSP/P），联合程序性死亡配体（PD-L1）抑制剂治疗小鼠肉瘤。  方法  免疫组织化学染色和Elisa蛋白定量鉴定肉瘤细胞MCA207中的热休克蛋白（HSP70、HSP90、Grp94）的表达。制备蛋白悬液，通过蛋白层析技术获取mHSP/P和Grp94/肽肉瘤疫苗（Grp94/P），以Western blot（WB）鉴定。流式细胞术测定细胞毒性作用。Elisa实验测定mHSP/P和Grp94/P刺激产生的干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子（TNF-α）。小鼠实验探究肉瘤疫苗对肉瘤生长以及小鼠生存状况的影响。免疫荧光染色MCA207肉瘤细胞表面PD-L1的表达，WB测定IFN-γ对PD-L1表达的影响。动物实验探究PD-L1抑制剂联合mHSP/P对肿瘤的影响。  结果  肿瘤组织携带多种亚型的HSP（HSP70、HSP90、Grp94）；成功制备肉瘤组织来源的mHSP/P和Grp94/P，Western blot对肿瘤疫苗鉴定并且流式细胞学测定未发现细胞毒性；制备的mHSP/P较Grp94/P刺激产生更多的IFN-γ和TNF-α细胞因子（P < 0.05）。肉瘤细胞表面PD-L1的表达随着IFN-γ的介入而增高；动物实验显示PD-L1抑制剂联合mHSP/P提高了免疫反应的抗肿瘤作用（P < 0.05）。  结论  肿瘤来源的mHSP/P和Grp94/P可以作为肿瘤疫苗在动物实验中使用。mHSP/P比Grp94/P能诱发更强的抗肿瘤免疫反应。IFN-γ刺激肉瘤细胞PD-L1的表达而导致免疫逃逸。PD-L1抑制剂联合mHSP/P提高了抗肿瘤作用。      

重组腺病毒介导γ-干扰素基因对小鼠结肠癌腹腔转移模型的实验治疗作用

背景与目的：肿瘤细胞靶向的细胞因子基因治疗是肿瘤治疗领域的研究热点。γ干扰素通过多种机制发挥抗肿瘤免疫的作用。本研究探讨利用γ-干扰素（IFN-γ）基因治疗对大肠癌的预防和治疗作用。方法：利用BALB／C小鼠成瘤的小鼠结肠癌CT26细胞株制备小鼠结肠癌腹腔转移瘤模型，用携带鼠IFN-γ基因的重组缺陷型腺病毒AdIFN-γ进行治疗，同时利用携带LacZ（β—galactosidase）基因的腺病毒AdLacZ和PBS（phosphate—buffered saline）作空白对照，检测经基因治疗后小鼠体内IFN-γ基因的表达情况、脾脏的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）活性变化、肝转移的发生及荷瘤小鼠的生存期。结果：经IFN-γ基因治疗后，与对照组相比，治疗组小鼠血清中IFN-γ表达量明显增加（P〈0．01），脾脏的CTL活性明显增强（P〈0．05），肿瘤生长受到抑制，肝转移的发生率明显下降，荷瘤小鼠的存活期明显延长。结论：利用IFN-γ基因治疗大肠癌具有明显的疗效，并对其肝转移具有一定的预防作用。     

多次小剂量pEgr-IFN-γ基因-放射治疗的抑瘤效应及其机制的研究

目的:探讨多次小剂量pEgr-IFN-γ基因-放射治疗对接种B16黑色素瘤小鼠的抑瘤效应及其免疫学机理.方法:肿瘤局部注射脂质体包裹的重组质粒pEgr-IFN-γ后36 h,接受不同剂量X射线照射,观察各组小鼠照后不同时间肿瘤生长速率和平均存活时间.照后第3天用RT-PCR法检测瘤内IFN-γ转录水平,ELISA法检测小鼠血清中IFN-γ含量,并于照后第15天检测小鼠部分免疫学指标.结果:照后第9～15天,4次(质粒 5Gy)组小鼠肿瘤生长速率明显低于质粒 20 Gy组,且平均生存时间明显延长;照后第3天质粒 20Gy组瘤内IFN-γ转录水平明显高于质粒组,照后第1,3天血清中IFN-γ含量明显高于质粒组和对照组,照后第15天脾脏NK细胞毒活性、IL-2和IFN-分泌活性均明显高于20 Gy照射组.结论:多次小剂量基因-放射治疗的抑瘤效应优于单次大剂量基因-放射治疗.基因-放射治疗组可能通过诱导瘤内IFN-γ表达增强,使血液中IFN-γ浓度升高,从而提高荷瘤机体免疫功能和抗肿瘤能力.     

百合多糖联合大蒜素对肝癌H22荷瘤小鼠肿瘤生长及血清细胞因子水平的影响

目的:探讨百合多糖联合大蒜素对肝癌H22荷瘤小鼠肿瘤生长及血清细胞因子水平的影响。方法:雄性 BALB/c小鼠腋下注射肝癌H22细胞计数瘤液建立荷瘤模型,分为百合多糖组（100 mg/kg）、大蒜素组（40 mg/kg）、百合多糖低剂量+大蒜素组（50 mg/kg+40 mg/kg）、百合多糖中剂量+大蒜素组（100 mg/kg+40 mg/kg）、百合多糖高剂量+大蒜素组（150 mg/kg+40 mg/kg）、正常组、模型组和环磷酰胺组（30 mg/kg）。处理7 d后,观察小鼠的肿瘤重量,计算抑瘤率;胸腺、脾脏称重,计算胸腺指数和脾脏指数;ELISA法检测血清免疫相关细胞因子IL-18、TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-6水平及促血管生长因子VEGF水平。结果:大蒜素组、百合多糖中剂量+大蒜素组、百合多糖高剂量+大蒜素组抑瘤率分别为27.27%、34.68%和30.64%。百合多糖中剂量+大蒜素组和百合多糖高剂量+大蒜素组胸腺指数明显高于模型组(P<0.01)。百合多糖高剂量+大蒜素组较模型组明显升高IL-18水平(P<0.01)。百合多糖中剂量+大蒜素组TNF-α水平高于模型组(P<0.05)。百合多糖中剂量+大蒜素组较模型组明显升高IL-2水平(P<0.01)。百合多糖高剂量+大蒜素组较模型组降低VEGF水平(P<0.05)。结论:百合多糖联合大蒜素能抑制肝癌H22荷瘤小鼠肿瘤的生长,提高荷瘤小鼠的胸腺指数,并促进小鼠分泌免疫相关细胞因子IL-18、TNF-α、IL-2,减少分泌VEGF。     

喉罩置入全麻对乳腺癌改良根治术患者术后免疫和基质金属蛋白酶的影响

目的:探究喉罩置入全麻和气管插管全麻对乳腺癌改良根治术患者术后的免疫因子和基质金属蛋白酶水平的影响。方法:征募了于2014年6月至2016年12月在我院就诊并进行手术的乳腺癌患者，随机分为喉罩置入全麻组（实验组）和气管插管全麻组（对照组），并采集患者术前半小时，术后3小时和24小时的血清，分别对两组患者进行血清免疫因子IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-13、IFN-γ和基质金属蛋白酶MMP-1、MMP-3、MMP-9的测定，并进行前后变化的比较。结果:IL-1β、IL-10、MMP-3和MMP-9的术前术后变化在实验组和对照组中是有差异的，IL-1β在两组术后均趋近减少，但实验组幅度更大（P<0.05）；IL-10术后在实验组增加，但在对照组减少（P<0.05）。MMP-3和MMP-9在两组术后均趋近增多，但对照组幅度更大（P<0.05）。结论:喉罩置入全麻较传统气管插管全麻对乳腺癌改良根治术患者而言，可以增强患者的抑癌免疫，并降低基质金属蛋白酶的水平，减少乳腺癌复发转移的可能性。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对非小细胞肺癌细胞凋亡诱导的基础研究

目的:观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对非小细胞肺癌小鼠模型肿瘤细胞凋亡诱导的作用。方法:30只小鼠接种浓度为5×106/ml非小细胞肺癌细胞Tc-1。荷瘤小鼠随机分为6组（空白对照组和5种浓度rhTRAIL实验组）。空白对照组每天注射一次灭菌生理盐水,实验组每天注射浓度不同的rhTRAIL溶液,各组均连续注射15d。每2d测量小鼠肿瘤长短直径,计算肿瘤体积。取小鼠脾脏细胞培养,测量培养液上清TNF-α浓度。结果:rhTRAIL给药组小鼠肿瘤体积明显低于空白对照组（P<0.05）,随着rhTRAIL浓度的增加,肿瘤体积相应减小;小鼠的Tc-1细胞凋亡率随着rhTRAIL浓度增高,其凋亡率逐渐升高;rhTRAIL给药组小鼠的TNF-α浓度均明显高于空白对照组,组间差异具有显著性（P<0.05）。结论:rhTRAIL能有效增强非小细胞肺癌小鼠体内的细胞因子分泌,诱导荷瘤小鼠的肿瘤细胞凋亡,表明rhTRAIL对非小细胞肺癌小鼠的肿瘤细胞具有一定的抑制作用。     

Th17细胞过继免疫治疗对荷弥漫大B细胞淋巴瘤小鼠肿瘤生长的影响

目的 探讨Th17细胞过继免疫治疗对荷弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)小鼠肿瘤生长的影响.方法 采用Mini MACS免疫磁珠分离纯化BALB/c小鼠脾来源的CD4+ CD62L+初始T细胞,采用"转化生长因子(TGF-β)、白细胞介素6(IL-6)、干扰素γ抗体(anti-IFN-γ)、白细胞介素4抗体(anti-IL-4)、白细胞介素23(IL-23)"因子组合体外诱导小鼠Th17细胞分化,采用ELISA法测定Th17细胞产生IL-17水平;采用DLBCL细胞株SUDHL-4接种SCID小鼠建立DLBCL荷瘤小鼠模型;选择0、8、18d(3组,5只小鼠/每组)对荷瘤小鼠进行Th17细胞过继免疫治疗,计算肿瘤体积,观察荷瘤小鼠生存期.结果 小鼠在接种SUDHL-4细胞8d左右均形成瘤结节,成瘤率为100％.与对照组小鼠相比,3个过继免疫治疗组小鼠肿瘤体积均明显缩小(P＜0.05),荷瘤小鼠生存期均显著延长(P＜0.05).结论 Th17细胞过继免疫治疗对DLBCL荷瘤小鼠具有抗肿瘤作用.     

树突状细胞疫苗对Walker-256荷瘤大鼠Th1／Th2平衡的调节作用

[目的]通过Walker-256大鼠种植瘤模型，探讨树突状细胞（DC）疫苗对大鼠Th1／Th2平衡的调节作用。[方法]选取25只雌性SD大鼠，在皮下注射Walker-256肿瘤细胞。10d后，将已经成瘤的大鼠按照体重配对，随机分为治疗组和肿瘤组。另外选取10只体重分别相同的雌性SD大鼠作为对照组。治疗组大鼠皮下注射负载Walker-256肿瘤细胞抗原的树突状细胞悬液，肿瘤组和对照组大鼠则皮下注射等量PBS。ELISA分别检测大鼠血细胞因子（包括IL-12、IFN-γ、IL-4和IL-10）。[结果]治疗组与肿瘤组比较，IL-12明显上升（P〈0．01），IFN-γ明显上升（P〈0．01），IL-4明显下降（P〈0．01），IL-10则无统计学意义。以IFN-γ／IL-4代表Th1／Th2，治疗组与肿瘤组比较明显上升（P〈0．05）。[结论]树突状细胞疫苗能够调节荷瘤大鼠Th1／Th2平衡。     

吉西他滨对卵巢癌移植瘤小鼠的免疫调节作用

目的:观察吉西他滨(gemcitabine,GEM)对卵巢癌移植瘤小鼠肿瘤免疫微环境的调节作用.方法:C57BL/6小鼠皮下注射卵巢癌ID8细胞构建卵巢癌移植瘤模型,实验组腹腔注射GEM,对照组注射生理盐水,观察肿瘤生长情况.流式细胞术检测小鼠脾脏及肿瘤组织的调节性T细胞(regulatoryT cells,Treg)及髓来源抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cell,MDSC),实时定量PCR检测小鼠肿瘤组织arginase-1(Arg-D和Foxp3 mRNA的表达,流式细胞仪检测小鼠脾脏CD8+T细胞的比例,ELLSE法检测小鼠血清IFN-γ及IL-2的表达.结果:GEM处理后的移植瘤小鼠肿瘤生长明显受到抑制[(366.8±44.88) vs (499.3±24.14)mm3,P＜0.01].移植瘤小鼠肿瘤组织及脾脏Treg比率明显降低[(12.71±2.31)％ vs (20.36±2.65)％、(10.09±1.69)％ vs (13.79±1.31)％,均P＜0.01].实验组的相关基因mRNA表达较对照组显著降低[Foxp3:(4.30±0.46)vs (6.35±0.58);Arg-1:(16.32±0.38)vs(13.26±0.37);均P＜0.01].实验组血清中的IFN-γ和IL-2含量明显高于对照组[IFN-γ:(71.90±2.28)vs (53.91±3.91) pg/ml;IL-2:(51.46±1.69)vs (40.90±1.50) pg/ml,均P＜0.01].结论:GEM下调卵巢癌移植瘤小鼠免疫抑制活性,并可上调小鼠抗肿瘤免疫原性,该结果可为GEM作为卵巢癌免疫治疗干预措施提供实验依据.     

以CRSIPR/Cas9 技术删除CTLA-4 后CTL抗裸鼠结肠癌移植瘤的效果

目的：探讨使用CRSIPR/Cas9 技术删除CTL的免疫检查点CTLA-4 后CTL的抗裸鼠结肠癌移植瘤的效果及其作用机制。方法：针对CTLA-4 设计特异性小向导RNA(small guide RNA，sgRNA)并构建sgRNA/Cas9 质粒，使用慢病毒载体转染质粒至CTL获得删除CTLA-4 的CTL（CTLA-4 KOCTL），并验证质粒的转染效率和CTLA-4 的删除效率。BALB/c裸鼠随机分为2 组进行实验，预防性注射CTLA-4 KO CTL（实验组）及CTL（对照组），3 d 后接种结肠癌细胞株LS174-T，观察成瘤率及成瘤时间。建立结肠癌移植瘤裸鼠模型，成瘤后裸鼠随机分为2 组，分别给予CTLA-4 KO CTL（实验组）及CTL（对照组）进行细胞治疗，观察移植瘤的体积、裸鼠的生存时间，并检测移植瘤裸鼠血清中TNF-α 及IFN-γ 分泌水平。结果：设计sgRNA并成功构建以慢病毒为载体的CRSIPR/Cas9 系统，使用构建好的CRSIPR/Cas9 系统转染CTL细胞，转染效率最高可达（28.80±0.62)%，转染后以流式细胞术检测CTLA-4 的删除效率，CTLA-4 KO CTL 组的CTLA-4 表达较CTL 组显著降低[ （0.91±0.25）% vs（42.70±2.72）%，P<0.01]。预防实验中，实验组结肠癌移植瘤发生率明显低于对照组（33.33% vs 100.00%，P<0.01）。治疗实验中，实验组肿瘤体积较对照组显著减少[ （503.0±23.9）vs（911.2±51.4）mm3，P<0.05]，实验组裸鼠相较于对照组生存时间明显延长（中位生存期：78 vs 42 d，P<0.05），实验组裸鼠血清TNF-α（[ 268.93±17.04）vs（148.26±20.07）pg/ml，P<0.05]及IFN-γ（[ 315.38±18.67）vs (202.92±29.32) pg/ml，P<0.05]的分泌水平较对照组明显增高。结论：以CRSIPR/Cas9 技术成功删除CTL中免疫检查点CTLA-4 后可以显著抑制裸鼠结肠癌移植瘤的成瘤率、增强CTL对荷结肠癌裸鼠的抗肿瘤作用，并明显增高荷瘤鼠血清中TNF-α 和IFN-γ 水平。     

自体肿瘤瘤苗对荷瘤鼠Th1、Th2型细胞因子及细胞毒作用的影响

目的研究经处理的H22肝癌细胞肿瘤瘤苗作为全细胞瘤苗对H22荷瘤小鼠体内Th1/Th2细胞比例和细胞因子的影响以及CTL的杀伤活性.方法用加重组白细胞介素2、重组粒细胞单核细胞集落刺激因子及福氏不完全佐剂制成疫苗,建立荷瘤小鼠模型,用51Cr释放法测定瘤苗免疫组、荷瘤组、正常组小鼠脾细胞对亲本H22肝癌细胞的杀伤活性;流式细胞仪检测单个核细胞中的Th1和Th2细胞,并取血检测血清中IL-10、IFN-γ水平.结果效靶比为200:1时,免疫小鼠脾细胞体外杀伤亲本H22肝癌细胞的杀伤率为38.3%,显著高于荷瘤组的13.6%,正常组的7.5%,以及对S180细胞的9.1%(P均＜0.05).瘤苗免疫组Th1细胞及Th1/Th2细胞的比值显著升高(P＜0.01),血清IFN-γ较对照组明显升高(P＜0.01);血清IL-10较对照组明显降低(P＜0.01).结论肿瘤细胞加小剂量IL-2和GM-CSF及佐剂组成的肿瘤细胞瘤苗可激发特异性细胞介导的免疫反应,改善抗肿瘤免疫反应.