MLN4924对紫杉醇耐药的前列腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究MLN4924对紫杉醇耐药的前列腺癌细胞增殖和凋亡的影响，从而为紫杉醇耐药前列腺癌的临床治疗提供新的理论依据。方法:不同浓度的MLN4924作用紫杉醇耐药的前列腺癌细胞PC3-TxR和DU145-TxR 48和72小时后，采用MTS检测细胞活力。Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、CDT1、p27以及EMT标志物水平。结果:MLN4924能够显著抑制PC3-TxR和DU145-TxR细胞的增殖，并且具有时间和浓度的依懒性。Western blot结果显示MLN4924作用后显著增加细胞内凋亡相关蛋白Caspase-3、CDT1和p27的表达。结论:MLN4924能够显著抑制紫杉醇耐药的前列腺癌细胞增殖、促进细胞凋亡，其相关机制为MLN4924可通过上调p27蛋白表达促进紫杉醇耐药的前列腺癌细胞凋亡。     

慢病毒载体介导RNA结合蛋白QKI-5过表达对前列腺癌细胞PC3增殖的抑制作用

目的:观察RNA结合蛋白Quaking-5（QKI-5）对雄激素非依赖性前列腺癌PC3细胞增殖的影响。方法:采用Western blot及逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测不同前列腺癌细胞株（PC3、LNCaP、DU145）及正常人前列腺上皮细胞（RWPE1）中QKI-5的表达水平;通过慢病毒感染并构建稳定过表达QKI-5的PC3细胞,噻唑蓝比色法（MTT法）绘制细胞生长曲线、流式细胞仪（FCM）检测细胞周期。 结果:3株前列腺癌细胞中QKI-5的表达水平明显低于正常前列腺上皮细胞,其中PC3细胞表达水平最低,细胞生长曲线显示稳定转染QKI-5的PC3细胞增殖能力明显低于对照组(P<0.05),FCM检测发现稳定转染QKI-5的PC3细胞同对照组比较出现了明显的G1期阻滞（P<0.05）。 结论:RNA结合蛋白QKI-5可能与前列腺癌的发生发展有着密切的联系,慢病毒介导的QKI-5基因能够抑制PC3细胞的增殖。     

lncRNA HEIG对宫颈癌细胞增殖、凋亡和迁移侵袭的影响及其分子机制

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)HEIG在宫颈癌组织和细胞中的表达及其生物学功能。方法:采用实时荧光定量PCR检测患者癌组织和癌旁组织、正常宫颈上皮细胞HCerEpic、宫颈癌细胞Hela和C33A中lncRNA HEIG的表达；敲低Hela细胞中HEIG表达，MTT法和流式细胞术分别检测Hela细胞的增殖、凋亡情况；Transwell小室法检测Hela细胞的迁移侵袭能力；Western blot检测AKT信号通路的变化。结果:lncRNA HEIG在宫颈癌组织和细胞中高表达；敲低HEIG可显著抑制宫颈癌细胞Hela的细胞增殖，促进细胞凋亡，抑制细胞迁移和侵袭能力，同时抑制AKT信号通路的活化。结论:lncRNA HEIG有可能作用于AKT信号通路抑制宫颈癌细胞增殖、促进细胞凋亡、抑制细胞迁移侵袭。     

血红素加氧酶-1在前列腺癌中的表达

目的探讨血红素加氧酶-1(HO-1)在人前列腺癌组织中的表达,以及HO-1活性对体外培养的前列腺癌细胞(PC3)的影响。方法　收集我院2000年1月至2007年4月前列腺癌根治性手术标本30例,前列腺增生开放手术大体标本30例。行RT-PCR检测HO-1的mRNA表达,免疫组化检测HO-1的表达。应用ZnPP、CoPP干预体外培养的PC3细胞,24h后,RT-PCR检测HO-1 mRNA的表达,MTT法酶标检测仪检测细胞A570nm值,流式细胞术检测细胞凋亡。结果人前列腺癌组织HO-1的mRNA表达明显高于良性增生前列腺组织;免疫组化前列腺癌中HO-1表达阳性率为76.9%,良性前列腺组织仅少许有微弱表达。应用ZnPP、CoPP干预PC3细胞后,RT-PCR可见ZnPP抑制PC3细胞HO-1表达,且随浓度增加抑制作用增加;CoPP可诱导HO-1表达,随浓度增加表达增强。MTT检测显示,ZnPP组PC3细胞A值随浓度增加而减少,而CoPP组随浓度增加A值增加,呈现浓度依赖性(P<0.05)。流式细胞技术结果显示,ZnPP可诱导PC3细胞凋亡,CoPP可保护细胞减少凋亡。结论人前列腺癌组织中HO-1基因表达及蛋白水平均显著高于良性前列腺组织;体外细胞实验证实,ZnPP可抑制前列腺癌PC3细胞系HO-1活性,抑制其增殖,诱导其凋亡。而CoPP可诱导前列腺癌PC3细胞系HO-1表达,抑制其凋亡,诱导其增殖。     

miR-409-3p通过抑制LHX2调控VEGF/VEGFR2信号通路促进前列腺癌细胞凋亡、抑制细胞增殖

目的:探讨微小RNA-409-3p（microRNA-409-3p,miR-409-3p）对前列腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其分子机制。方法:qRT-PCR与Western blot平行检测前列腺癌细胞中miR-409-3p与LIM同源框基因2（LIM-homeobox gene 2,LHX2）的表达;CCK-8实验检测miR-409-3p过表达对前列腺癌细胞增殖能力的影响,以及LHX2过表达对前列腺癌细胞增殖能力的恢复作用;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告基因检测miR-409-3p与LHX2的靶向作用关系;Western blot检测细胞中LHX2、CyclinD1、CDK4、Cleaved-caspase-3及VEGF/VEGFR2信号通路相关蛋白表达。结果:miR-409-3p在前列腺癌细胞中的表达水平显著低于正常前列腺上皮细胞（P＜0.05）,LHX2的表达水平高于正常前列腺上皮细胞（P＜0.05）;miR-409-3p过表达可显著抑制前列腺癌细胞增殖,促进细胞凋亡（P＜0.05）,并可上调Cleaved-caspase-3的表达（P＜0.05）,下调CyclinD1、CDK4、VEGF、t-VEGFR2、p-VEGFR2的表达（P＜0.05）;双荧光素酶实验证明miR-409-3p与LHX2存在靶向关系,miR-409-3p可负性调控LHX2的表达;LHX2过表达可部分逆转miR-409-3p对前列腺癌细胞增殖、凋亡及VEGF/VEGFR2信号通路的影响。结论:miR-409-3p可通过下调LHX2的表达而促进前列腺癌细胞凋亡、抑制细胞增殖,其作用机制可能与抑制VEGF/VEGFR2信号通路激活有关。     

siRNA抑制人前列腺癌细胞PC3的MDM2表达及细胞增殖

 目的 研究siRNA MDM2对人前列腺癌细胞PC3的MDM2表达和细胞增殖的作用。 方法 构建PGCsilencer^TM MDM2 siRNA,并转染入PC3细胞,分别用RT-PCR和 Western blot检测siMDM2对PC3细胞MDM2基因和蛋白表达的抑制作用;用MTT法检测siMDM2对PC3增殖抑制的作用,用流式细胞术检测siMDM2对PC3细胞凋亡的影响。 结果 PT-PCR和Western blot结果显示siMDM2能显著抑制PC3细胞MDM2基因和蛋白的表达,抑制率最高可达65%;MTT和流式细胞术结果证明siMDM2能显著抑制PC3细胞增殖并诱导细胞凋亡。 结论 siMDM2能特异有效地抑制MDM2在PC3中的表达,并抑制PC3细胞增殖,促进其凋亡。     

miRNA-135在调控前列腺癌细胞增殖中的应用及机制

目的 观察miRNA-135在调控激素非依赖性前列腺癌细胞增殖能力中的作用及其机制.方法 利用微小核糖核酸(miRNA)基因芯片检测激素非依赖性前列腺癌和激素依赖性前列腺癌组织中miRNA-135的表达差异.经过体外转染miRNA-135后对DU145和PC3细胞进行MTT检测,了解细胞的增殖情况.利用miRNA-135靶基因预测软件miRwalk和miRanda预测,初筛miRNA-135调控的基因和相关通路.结果 miRNA基因芯片结果显示,激素依赖性前列腺癌组织中miRNA-135的表达量高于激素非依赖性前列腺癌组织(P﹤0.05);miR-NA-135可以抑制DU145和PC3细胞的生长,尤其在第48 h和第72 h以后(P﹤0.05);转染miRNA-135后,前列腺癌细胞株DU145和PC3中STAT6的表达水平较转染NC的细胞株明显下调.结论 miRNA-135能够抑制激素非依赖性前列腺细胞DU145和PC3的增殖能力,有望成为前列腺癌治疗的新靶标.     

槐定碱通过JNK/MAPK信号通路介导前列腺癌PC3细胞的凋亡

目的:探究槐定碱对前列腺癌PC3细胞凋亡的影响,及其促进细胞凋亡可能的作用机制。方法:采用MTT法分析槐定碱对前列腺癌PC3细胞增殖的抑制作用;台盼蓝染色实验检测槐定碱对前列腺癌PC3细胞生长增殖的影响;Hoechst 33342染色法和流式细胞术检测槐定碱对前列腺癌PC3细胞凋亡的影响;Western blot检测槐定碱对前列腺癌PC3细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax、Bcl-2及凋亡信号通路蛋白p-JNK、p-p38、p-ERK表达的影响。结果:随着槐定碱浓度的升高,PC3细胞抑制率逐渐升高,作用呈剂量依赖性,细胞增殖受到明显抑制作用(P<0.05);槐定碱组的细胞凋亡率显著升高,Caspase-3、Bax促凋亡蛋白表达显著增高,而Bcl-2抑凋亡蛋白表达则显著降低(P<0.05);MAPK信号通路蛋白p-JNK表达显著升高(P<0.05),p-p38、p-ERK表达无显著性差异(P>0.05);JNK抑制剂SP600125逆转槐定碱对前列腺癌PC3细胞凋亡的促进作用(P<0.05);槐定碱能下调裸鼠瘤体体积、瘤体质量(P<0.05)。...     

前列腺癌诊断/预后和耐药分子标志物的筛选及其临床意义

目的：基于已发表的芯片数据通过生物信息学方法筛选差异表达基因，以发现前列腺癌诊断/预后和耐药相关分子标志物。方法：筛选GEO数据库中已发表的前列腺癌mRNA芯片数据GSE6956和前列腺癌细胞多烯紫杉醇耐药mRNA芯片数据GSE33455进行差异表达分析；通过生物学功能注释、基因通路富集分析、蛋白质相互作用网络（protein-protein interaction，PPI）分析等生物信息学方法发现和识别与差异表达基因相关的生物学功能和信号通路；比对TCGA数据库，验证差异表达基因在前列腺癌组织及癌旁组织中的表达，并通过Kaplan-Meier分析差异表达基因对前列腺癌患者生存率的影响；用qPCR方法验证差异表达基因在前列腺癌细胞株PC3及多烯紫杉醇耐药细胞PC3-DTX中的表达情况。结果：共筛选出227个在前列腺癌和前列腺癌多烯紫杉醇耐药细胞芯片数据中共同差异表达基因。差异表达基因主要富集到了癌症相关通路（Lysosome、Sphingolipid、FoxO、Acute myeloid leukemia），并主要参与细胞黏附、自噬和胞内蛋白转运等生物学过程。构建PPI网络选取18个连接度最高的基因作为Hub基因。Hub基因和共同差异表达基因中，上调基因CITED2、LRP12和RPL17-C18orf32与前列腺癌患者的不良预后显著相关。qPCR验证显示CITED2在多烯紫杉醇耐药细胞PC3-DTX中高表达。结论：通过生物信息学方法筛选出在前列腺癌组织和耐药细胞中共同差异表达，且与前列腺癌患者的不良预后密切相关的基因，为前列腺癌诊断/预后和耐药分子标志物的研究提供了新的思路。     

缺氧对人肝癌HepG2细胞凋亡及p38MAPK通路的影响

目的:探讨缺氧对人肝癌HepG2细胞凋亡及p38MAPK通路的影响。方法:用三气培养箱培养肝癌细胞HepG2,建立缺氧细胞模型,CCK-8 法检测HepG2细胞的增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Real-time PCR分析p38MAPK mＲNA的表达,Western blot法检测p38MAPK及p-p38MAPK蛋白的表达变化。结果:缺氧可抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,抑制细胞凋亡（P<0.05）;缺氧处理人肝癌HepG2细胞后,p38MAPK mＲNA的表达量下调(P<0.05);Western blot结果显示缺氧可下调p38MAPK、p-p38MAPK蛋白的表达（P<0.05）。结论:缺氧通过抑制p38MAPK通路抑制人肝癌HepG2细胞凋亡。     

口腔癌组织中TRAF6的表达及其对细胞自噬、凋亡及NF-κB/c-jun信号途径的影响

目的:探讨口腔癌组织中肿瘤坏死因子受体相关因子6（TNF receptor-associated factor 6,TRAF6）的表达及其对细胞自噬、凋亡及NF-κB/c-jun信号途径的影响。方法:qRT-PCR和Western blot检测TRAF6在口腔癌组织和口腔癌细胞系中的表达;qRT-PCR和Western blot检测沉默TRAF6在SCC-25细胞中的表达;EdU实验检测SCC-25细胞的增殖能力;Western blot检测SCC-25细胞中LC3 Ⅱ/LC3 I比例;细胞免疫荧光染色检测SCC-25细胞中自噬体数目;流式细胞术检测SCC-25细胞的凋亡率;Western blot检测SCC-25细胞中NF-κB和c-jun蛋白的表达。结果:TRAF6在口腔癌组织和口腔癌细胞系中高表达（P＜0.001）;沉默TRAF6使口腔癌细胞系中TRAF6的表达降低;沉默TRAF6使SCC-25细胞的增殖能力下降（P＜0.01）、LC3 Ⅱ/LC3 I比例下降（P＜0.001）和自噬体数目减少（P＜0.001）;沉默TRAF6使SCC-25细胞的凋亡率升高（P＜0.01）,NF-κB和c-jun蛋白磷酸化程度降低（均P＜0.001）。结论:TRAF6在口腔癌组织和口腔癌细胞中高表达,沉默TRAF6抑制SCC-25细胞自噬,增强SCC-25细胞的凋亡率及抑制NF-κB/c-jun信号途径的活性。     

胱硫醚β合成酶在前列腺癌中的异常表达及其对前列腺癌细胞增殖的调控作用

目的:探讨胱硫醚β合成酶(CBS)在前列腺癌中的差异表达情况,及其对前列腺癌细胞增殖的调控作用。方法:利用GEPIA网站分析来源于TCGA和GTEx数据库的492例前列腺癌组织和152例正常组织中CBS mRNA表达情况。利用ULCAN网站分析来源于TCGA数据库的497例前列腺癌组织和52例正常组织中CBS mRNA的表达情况。用RPIM-1640培养基培养前列腺癌细胞系DU145、PC3、LNCaP和C4-2,免疫印迹实验检测CBS蛋白表达情况。shRNA转染DU145细胞,分为对照shRNA组、CBS shRNA#1组或#2组,克隆形成实验检测细胞克隆形成数量,BrdU标记实验检测细胞增殖能力,免疫印迹实验检测AKT、mTOR、S6K蛋白表达情况,以及AKT S473位点、mTOR S2448位点、S6K T421/S424位点的磷酸化水平。将稳定表达对照shRNA、CBS shRNA#1或#2的DU145细胞注射入小鼠皮下,建立小鼠前列腺癌移植瘤模型,观察肿瘤生长情况。结果:数据库分析结果显示,与正常前列腺组织比较,前列腺癌组织中CBS mRNA的表达水平显著上升。CBS蛋白在...     

叶黄素对人前列腺癌PC3细胞增殖和凋亡影响的机制

目的 探究叶黄素对人前列腺癌PC3细胞增殖和凋亡影响的作用机制,为前列腺癌预防及治疗提供新的理论依据。方法 不同浓度叶黄素作用于PC3细胞,CCK8法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡变化;细胞划痕和Transwell实验观察细胞迁移和侵袭能力;RT-PCR和Western blot技术检测细胞中Bax、Bcl-2的mRNA水平和蛋白表达。结果 叶黄素显著抑制PC3细胞的增殖,并呈时间和浓度依赖性。叶黄素可以将细胞生长阻滞在G0/G1期,抑制细胞迁移和侵袭;还可促进细胞凋亡,使Bcl-2表达下降,Bax表达上升。叶黄素可在转录水平上下调Bcl-2 mRNA和上调BaxmRNA。结论 叶黄素抑制PC3细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与阻滞细胞周期、抑制细胞迁移、侵袭以及调节凋亡相关基因和蛋白表达有关。     

唑来膦酸通过NF-κB信号通路调控肺癌细胞的增殖和耐药

目的:探究唑来膦酸对肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）表型转化和HGF表达的作用及对肺癌细胞增殖和耐药的影响。方法:通过Transwell系统将M2巨噬细胞与小鼠肺癌细胞Lewis共培养,得到M2型TAM(M2-TAMs)。采用不同浓度唑来膦酸作用于M2-TAMs,采用ELISA和RT-PCR检测M1型标记（IL-1β、TNFα、IL-6和iNOS）、M2型标记（HGF、EGF、IL-10和Arg1）的表达改变,采用Western blot检测NF-κB的表达。建立Transwell M2-TAMs-Lewis共培养模型,采用MTT方法检测肿瘤细胞的增殖和对吉非替尼耐药的影响;采用NF-κB特异性抑制剂PDCT作用唑来膦酸处理的TAMs,进一步检测TAMs M1/M2表型改变。结果:随着唑来膦酸浓度的增加,TAMs M1表型显著增强,M2表型逐渐减弱;与对照组相比,唑来膦酸处理的TAMs显著抑制了肺癌细胞的增殖,增强了其对吉非替尼的敏感性。在NF-κB特异性抑制剂（PDTC）的作用下,唑来膦酸处理的TAMs M1表型减弱,而M2表型增强。结论:唑来膦酸通过活化NF-κB信号通路促进肿瘤相关巨噬细胞M1表型转化并抑制肺癌细胞的增殖和耐药。     

CD73过表达促进前列腺癌细胞增殖

目的:检测CD73过表达对前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响,并对其作用机制进行初步探讨。方法:以PC3细胞为研究对象,利用CD73过表达慢病毒转染PC3细胞,构建CD73过表达的PC3-CD73细胞模型,利用实时细胞分析系统检测CD73对PC3细胞增殖能力的影响,划痕修复实验检测CD73对PC3细胞迁移能力的影响,Transwell实验检测CD73对PC3细胞侵袭能力的影响,实时荧光定量PCR检测CD73对肿瘤细胞增殖、迁移相关分子表达水平的影响。结果:CD73过表达对PC3细胞的增殖具有显著的促进作用,然而对PC3细胞的迁移、侵袭无明显影响。实时荧光定量PCR结果显示CD73过表达对PC3细胞中EGFR、ERK、AKT以及EMT相关分子标志的表达水平无显著的影响。结论:CD73过表达通过EGFR/AKT通路以外的途径促进前列腺癌细胞增殖。     

lncRNA MIR205HG通过调控miR-122-5p促进食管鳞状细胞癌细胞的增殖和侵袭

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA) MIR205HG对食管鳞状细胞癌细胞增殖和侵袭的影响及其作用机制。方法:RT-PCR检测食管鳞状细胞癌组织以及癌旁组织中MIR205HG的表达量;CCK-8实验检测MIR205HG对食管鳞状细胞癌细胞Eca-109和TE-10增殖的影响;Western blot实验检测侵袭相关蛋白MMP-1和MMP-9以及血管内皮生长因子（VEGF）的蛋白表达水平。结果:结果显示,MIR205HG在食管鳞状细胞癌组织中的表达量显著高于癌旁组织的表达量（P＜0.05）;与转染对照si-RNA相比,当细胞转染si-MIR205HG时,MIR205HG的表达量显著被抑制（P＜0.05）;干扰MIR205HG显著抑制食管鳞状细胞癌细胞Eca-109和TE-10的增殖和侵袭（P＜0.05）;此外,si-MIR205HG促进miR-122-5p的表达,且MIR205HG与miR-122-5p表达量呈负相关（P＜0.05）;进一步的研究结果表明,抑制miR-122-5p逆转si-MIR205HG对TE-10细胞增殖和侵袭的抑制作用（P＜0.05）。结论:MIR205HG能够促进食管鳞状细胞癌细胞的增殖和侵袭,其作用机制是通过调控miR-122-5p来实现的,这一结果能够为食管鳞状细胞癌的临床治疗和诊断提供分子基础。     

葛根素通过TGF-β/Smads信号通路促进前列腺癌细胞凋亡的机制

目的:探讨葛根素（puerarin）通过TGF-β/Smads信号通路促进前列腺癌细胞凋亡的机制。方法:将不同浓度葛根素（0、25、50、75和100 μmol/L）分别孵育前列腺癌PC3细胞，并采用台盼蓝染色(trypan blue）检测细胞增殖情况；流式细胞术方法检测不同剂量葛根素对细胞凋亡率的影响；使用RT-PCR和Western blot检测葛根素对TGF-β1和Smad3的影响；采用TGF-β1抑制剂P144抑制TGF-β1活性，使用Western blot验证P144对TGF-β1表达含量的影响并检测其对细胞凋亡蛋白Casepase3、Bcl-2表达水平的影响。结果:葛根素以时间和剂量依赖的方式抑制PC3细胞的生长（P<0.05）；25、50、75和100 μmol/L葛根素对细胞存活的抑制率分别为25.7%、28.9%、32.5%和56.3%；流式细胞术检测结果指出25、50、75和100 μmol/L葛根素对PC3细胞的凋亡率分别为(4.36±2.62)%、(9.86±3.64)%、(15.95±5.22)%、(19.65±7.34)%，随着剂量的增长，PC3细胞凋亡率逐渐上升（P<0.05）；RT-PCR和Western blot检测提示随着葛根素浓度的升高，TGF-β1、Smad3和Caspase3在mRNA和蛋白水平表达含量显著升高，而Bcl-2则显著降低（P<0.05）；与葛根素单独处理组相比，葛根素+P144共处理组细胞，TGF-β1、Smad3和Caspase3蛋白表达水平显著下降，Bcl-2蛋白表达水平显著升高（P<0.05）。随后的流式细胞术检测结果指出，与葛根素单独处理组比，使用葛根素+P144共处理组细胞凋亡水平显著下降（P<0.05）。结论:葛根素可能通过激活TGF-β/Smad受体信号通路诱导Bcl-2下调和促进Caspase3的上调，从而诱导前列腺癌PC3细胞凋亡。     

牛蒡子苷元对卵巢癌细胞耐药性的影响

目的:探讨牛蒡子苷元对人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP细胞耐药性的影响及其可能的作用机制。方法:构建卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP。用不同浓度的牛蒡子苷元(1、5、10、15、20、25 mmol/L)分别处理SKOV3和SKOV3/DDP细胞,CCK-8法检测细胞生长,筛选适用浓度。随后用10 mmol/L牛蒡子苷元处理SKOV3/DDP细胞。流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测Caspase-3/9和Cleaved Caspase-3/9蛋白表达。CCK-8法检测细胞半数抑制浓度(50%inhibition concentration, IC₅₀)。RT-PCR和Western blot分别检测Survivin的mRNA和蛋白表达。在牛蒡子苷元处理的SKOV3/DDP细胞中转染Survivin过表达质粒检测IC₅₀和细胞凋亡水平。结果:不同浓度牛蒡子苷元对SKOV3和SKOV3/DDP细胞生长均有抑制作用,并且当牛蒡子苷元的浓度≥10 mmol/L时,对SKOV3/DDP细胞生长抑制作用高于SKOV3细胞(P&...