内脂素对THP-1源性巨噬细胞ATP结合盒转运蛋白A1表达的影响

目的：观察内脂素（visfatin）对人单核细胞株THP-1源性巨噬细胞ATP结合盒转运蛋白A1（ABCA1）表达的影响,探讨visfatin诱导THP-1源性泡沫细胞形成的机制。方法：THP-1单核细胞诱导分化为巨噬细胞,予不同浓度和时间的visfatin进行干预,分别运用油红O染色观察细胞浆脂滴变化,反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法和蛋白免疫印迹（Western blotting）法检测各组细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达,酶荧光学法检测细胞内总胆固醇（TC）和游离胆固醇（FC）含量,TC与FC之差为胆固醇酯（CE）含量。结果：与对照组比较,visfatin干预组细胞浆脂滴明显增多,细胞内FC和CE含量增加（均P<0.05）。Visfatin呈浓度和时间依赖性地下调ABCA1 mRNA和蛋白表达（P<0.05）。结论：Visfatin下调THP-1源性巨噬细胞ABCA1的表达,使细胞内FC流出减少,CE合成增加,从而诱导泡沫细胞的形成。     

PPARγ-ABCA1途径在肺炎衣原体诱导泡沫细胞形成中的作用

目的 观察过氧化物酶体增殖因子活化受体γ(PPARγ)、ATP结合盒转运体A1(ABCA1)在肺炎衣原体(C.pn)诱导巨噬细胞源性泡沫细胞形成的作用.方法 THP-1单核细胞给予160 nmol/L佛波酯(PMA)孵育72 h后,诱导分化为巨噬细胞,在与50 mg/L低密度脂蛋白(ME)共同孵育的情况下将细胞随机分为4组:对照组(未感染组)、C pn感染组、罗格列酮+C.pn感染组、罗格列酮组.运用油红O染色观察细胞质内脂滴的变化,酶荧光学法检测细胞内胆同醇酯含量的变化.分别运用RT-PCB和Western blot检测ABCA1、PPARγ mRNA和蛋白表达.结果 在负荷LDL的THP-1源性巨噬细胞内,C.pn感染呈浓度依赖性地下调ABCA1、PPARγ mRNA和蛋白表达.罗格列酮不仅浓度依赖性地抑制C. Pn诱导的ABCA1表达的下调,而且高浓度罗格列酮(10和20μmol/L)明显抑制C.pn诱导的巨噬细胞内脂滴的增多和胆固醇酯含量的增加(P<0.05).结论 C.pn经PPARγ途径下调ABCA1表达,进而诱导泡沫细胞形成,这可能为进一步阐明C.pn感染可促进动脉粥样硬化发生发展提供一个新的理论依据.     

肺炎衣原体下调THP-1源性巨噬细胞ABCA1、ABCG1表达的机制研究

目的:观察c-Jun氨基末端激酶(JNK)对肺炎衣原体(Cpn)诱导的THP-1源性巨噬细胞ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)、ATP结合盒转运蛋白G1(ABCG1)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达的调控作用,探讨Cpn下调THP-1源性巨噬细胞ABCA1/ABCG1表达的信号转导机制。方法:将THP-1单核细胞诱导分化为巨噬细胞后,观察Cpn感染对细胞内ABCA1/ABCG1及PPARγ mRNA和蛋白表达的影响。并用不同浓度的JNK特异性抑制剂SP600125对细胞进行预处理,观察SP600125对Cpn诱导的ABCA1/ABCG1、PPARγ mRNA和蛋白表达的影响。分别用RT-PCR和Western blotting检测各组ABCA1/ABCG1及PPARγ mRNA和蛋白表达。结果:Cpn下调THP-1源性巨噬细胞ABCA1/ABCG1及其上游调控基因PPARγ mRNA和蛋白表达。而SP600125能呈浓度依赖性地抑制Cpn感染所带来的上述影响。结论:Cpn可能通过JNK-PPARγ信号转导通路下调AB-CA1/ABCG1表达,减少巨噬细胞内胆固醇流出,促进动脉粥样硬化发生发展。     

可溶性Klotho蛋白抑制THP-1源性泡沫细胞形成

目的:探讨可溶性Klotho(KL)蛋白对THP-1源性泡沫细胞形成的影响。方法:THP-1单核细胞与160 nmol/L佛波酯孵育48 h后,诱导分化为THP-1源性巨噬细胞,给予THP-1源性巨噬细胞不同浓度(25、50、100和200μg/L)的可溶性KL蛋白预处理后,再由氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导其转变为泡沫细胞。油红O染色观察细胞内脂滴形成情况,通过液体闪烁计数法测定THP-1源性泡沫细胞内胆固醇流出情况,酶荧光法检测细胞内游离胆固醇及胆固醇酯的含量,并分别用Western blot法及RT-qPCR法检测酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(ACAT1)和ATP结合盒转运体A1(ABCA1)的蛋白及mRNA表达。结果:可溶性KL蛋白能增加THP-1源性巨噬细胞内胆固醇流出,抑制THP-1源性泡沫细胞形成,且可溶性KL蛋白呈一定浓度依赖性地抑制ox-LDL诱导的泡沫细胞形成过程中ACAT1表达的上调和ABCA1表达的下调(P<0.05)。结论:可溶性KL蛋白能够抑制THP-1源性泡沫细胞形成,其机制可能与靶向调控细胞内ACAT1和ABCA1的表达有关。     

Ghrelin对THP-1源性泡沫细胞ATP结合盒转运子A1和G1表达的调控作用

目的： 研究单核/巨噬细胞分化成为泡沫细胞过程中ghrelin对人ATP结合盒转运子A1和G1（ABCA1/ABCG1）表达的调控作用。方法: 体外培养人源单核细胞系THP-1,由佛波酯（PMA）作用使其分化为巨噬细胞,后者可在氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）存在条件下进一步转变为泡沫细胞。巨噬细胞加入不同浓度的Ghrelin预孵2 h后再加入ox-LDL作用不同时间,油红O染色法观察细胞内脂滴含量,运用PT-PCR法检测ABCA1和ABCG1 mRNA水平,Western blotting法检测ABCA1和ABCG1蛋白表达,采用酶法,通过荧光分光光度计检测细胞内外胆固醇含量并计算胆固醇流出率。结果: Ghrelin干预可明显减少细胞内脂滴的形成,显著增加胆固醇流出率,并能显著增加单核/巨噬细胞泡沫化过程中ABCA1和ABCG1 mRNA 水平和蛋白表达,且此作用呈浓度依赖性而不呈时间依赖性。结论: Ghrelin可能通过上调ABCA1和ABCG1转录翻译水平延缓动脉粥样硬化的发生。     

PPAR γ-ACAT1途径在肺炎衣原体诱导巨噬细胞泡沫化中的作用

目的： 观察过氧化物酶体增殖活化受体γ （PPAR γ）和酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1（ACAT1）在肺炎衣原体（C.pn）诱导巨噬细胞泡沫化中的作用。方法：给予C.pn （1×105-1×106IFU）感染 和/或PPAR γ的配体罗格列酮（1-20 μmol/L）孵育 THP-1源性巨噬细胞48h。运用油红O染色观察细胞浆内脂滴的变化,酶荧光学法检测细胞内胆固醇酯含量的变化。分别运用RT-PCR和Western blotting检测ACAT1、PPAR γ mRNA和蛋白表达。结果：高浓度的C.pn（5×105和1×106 IFU）感染使THP-1源性巨噬细胞内脂滴明显增多,胆固醇酯与总胆固醇的比值明显增加（>50%）。C.pn感染呈浓度依赖性上调ACAT1 mRNA和蛋白表达,并且浓度依赖性地下调PPAR γ mRNA和蛋白表达（P<0.05）。高浓度的罗格列酮（10、20 μmol/L）明显抑制C.pn诱导的细胞内脂质滴的增多和胆固醇酯含量的增加, 同时罗格列酮呈浓度依赖性抑制C.pn诱导的ACAT1 mRNA和蛋白表达的上调（P<0.05）。结论：C.pn 经PPAR γ途径上调ACAT1表达,进而诱导巨噬细胞泡沫化,这为进一步阐明C.pn感染促进动脉粥样硬化发生发展提供一个新的理论依据。     

内脂素通过过氧化物酶体增殖物激活受体γ信号转导通路下调ATP结合盒转运蛋白A1的表达

目的:观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)信号通路在内脂素(visfatin)调控人单核细胞株(THP-1)源性巨噬细胞ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)表达中的作用,探讨visfatin诱导泡沫细胞形成的机制和途径。方法:THP-1单核细胞诱导分化为巨噬细胞,随机分组,给予不同浓度的visfatin和PPARγ激动剂罗格列酮进行干预,分别运用油红O染色法观察细胞内脂滴形成情况,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和蛋白免疫印迹(Western blot)法检测各组细胞ABCA1及PPARγmR-NA和蛋白表达,酶荧光学法检测细胞内总胆固醇(TC)和游离胆固醇(FC)含量,TC与FC之差为胆固醇酯(CE)含量。结果:与对照组比较,visfatin干预组油红O染色显示细胞内脂滴形成增加,PPARγ及ABCA1 mRNA和蛋白表达水平降低(均P<0.05),细胞内FC含量升高(P<0.05);相关分析显示,visfatin呈浓度依赖性下调PPARγ及ABCA1 mRNA和蛋白的表达。与visfatin干预组比较,罗格列酮组ABCA1 mRNA和蛋白表达水平升高(均P<0.05),细胞内FC含量降低(P<0.05);相关分析显示,罗格列酮呈浓度依赖性上调ABCA1 mRNA和蛋白的表达。结论:visfatin通过PPARγ信号转导通路下调ABCA1表达,减少细胞内FC流出,从而诱导泡沫细胞形成。这可能为visfatin致动脉粥样硬化发病机制的研究提供了一个新的理论依据。     

载脂蛋白A-Ⅰ对三磷酸腺苷结合盒转运体A1的影响

目的：以THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象，观察载脂蛋白A-I对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出和三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)的影响,从而探讨载脂蛋白A-I对动脉粥样硬化(As)发生发展的影响。方法:用液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出, 高效液相色谱分析细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯含量, 运用逆转录-多聚酶链反应和Western 印迹分别检测ABCA1 mRNA 与ABCA1蛋白的表达,用流式细胞术检测细胞平均ABCA1荧光强度。 结果:载脂蛋白A-I引起THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞总胆固醇、游离胆固醇与胆固醇酯呈时间依赖性减少, 而ABCA1蛋白质水平、细胞平均ABCA1荧光强度以及细胞内胆固醇流出呈时间依赖性增加,但ABCA1 mRNA没有明显变化。巯基蛋白酶抑制剂(leupeptin 和ALLN)增加ABCA1蛋白质水平,而其它蛋白酶抑制剂(pepstatin A、aprotinin及phosphoramiddon)不增加ABCA1蛋白质水平,蛋白体抑制剂(lactacytin)和溶酶体抑制剂(NH4Cl)也不影响ABCA1蛋白质水平。 结论:巯基蛋白酶可降解THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1蛋白质,而载脂蛋白A-I可阻碍巯基蛋白酶降解ABCA1蛋白质,从而提高THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1 蛋白质水平, 增加细胞内胆固醇流出, 降低细胞内胆固醇聚积。     

NF-κB在AngⅡ介导THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出及ABCA1表达调控过程中的作用研究

目的：探讨核因子NF-κB活化对AngⅡ诱导的THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1基因表达、胆固醇含量的影响。方法：体外培养THP-1细胞以构建泡沫细胞模型，以AngⅡ和NF-κB活化抑制剂TPCK孵育细胞；以RT-PCR法、Western blot法测定THP-1源泡沫细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达状态；采用酶法，通过荧光分光光度计检测细胞内胆固醇含量，应用液体闪烁技术仪检测胆固醇流出的变化；借助Sandwich ELISA法测定核因子NF-κB活化／核易位情况。结果：AngⅡ可即刻激活NF-κB表达活性，并导致干预24小时后泡沫细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达下调；若预先用TPCK孵育，则TPCK可抑制AngⅡ对NF-κB的激活，且24小时后泡沫细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达下调幅度减小。结论：AngⅡ能引起THP-1源性泡沫细胞胆固醇含量显著增高（P〈0．05）、ABCA1表达显著减少（P〈0．05）。机制可能与AngⅡ即刻激活NF-κB信号途径，早期活化的NF-κB可阻遏THP-1源泡沫细胞ABCA1基因和蛋白的表达，继而影响泡沫细胞内胆固醇的流出有关。     

三磷酸腺苷结合盒转运体A1在THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出中的作用

目的:以THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象, 探讨ABCA1在THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出中的作用。方法:用液体闪烁计数器检测胆固醇流出。RT-PCR方法检测ABCA1mRNA的表达。结果:氧化型低密度脂蛋白可增加THP-1巨噬细胞胆固醇流出, 22(R)-羟基胆固醇剂量依赖性增加THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出, 而DIDS剂量依赖性减少THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出;逆转录聚合酶链反应显示, 22(R)-羟基胆固醇可增加THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1mRNA的表达, DIDS可抑制THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1mRNA的表达。结论:ABCA1在巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出中起着重要的作用, 并为开发和寻找对ABCA1表达有特异性调控作用的药物提供了新的思路。     

先兆子痫患者HLA-DQA1、-DQB、-DPA1基因多态性

目的：探讨人类白细胞抗原HLA-DQA1、-DQB1、-DPA1基因多态性与先兆子痫发病的关系。方法：采用序列特异性引物技术（PCR-SSP） 对46例先兆子痫患者和105例正常孕妇及其新生儿进行HLA-DQ-DPA1等位基因分型。结果：所有标本共检出11种HLA-DQA1基因表型、16种HLA-DQB1基因表型、6种HLA-DPA1基因表型。先兆子痫患者HLA-DQB1＊0301基因频率高于正常孕妇，差异有显著性（Pc=0．032，RR=2．43，AR=0．30），其余各基因表型频率两组比较差异均无显著性。结论：HLA-DQB1＊0301基因可能是一种先兆子痫发病的易感基因。     

HLA-DRB1, -DQA1, -DQB1, -DPA1 and -DPB1 genes in Japanese multiple sclerosis patients

Japanese MS patients and controls were examined for the distribution of HLA-DRB1, -DQA1, -DQB1, -DPA1 and -DPB1 alleles using in vitro amplification of genomic DNA and probing with sequence-specific oligonucleotides. No significant difference in frequency of the examined alleles was observed among the two groups. This is in contrast to Norwegian MS patients, where an association to a combination of certain DQA1 and DQB1 alleles has previously been demonstrated.     

Comprehensive sequence analysis of HLA-DQA1 and -DQB1 alleles and characterization of DRB1-QAP-DQA1-DQB1 haplotypes

It is well known that both chain and β chain of HLA-DQ are highly polymorphic. However the polymorphisms outside the hypervariable region were not fully examined so far. To further clarify the polymorphisms in DQ genes, we determined the nucleotide sequences of full length cDNA, spanning from the leader sequence to the stop codon, from 15 DQA1 alleles and 15 DQB1 alleles. We identified several new DQ alleles which had identical exon 2 sequence and were different in other exons. On the basis of the sequence analyses, a comprehensive PCR-based oligotyping system for DQA1 gene was established. We then characterized DRB1-QAP(DQA1 promoter)-DQA1-DQB1 haplotypes of B-lymphoblastoid cell lines homozygous for HLA and healthy unrelated Japanese and Norwegian populations. It was revealed that DQA1 alleles, which were identical in exon 2 but different in other exons, showed close linkage disequilibrium with diferent characteristic DRB1, QAP and DQB1 alleles. These results suggest that DR-DQ haplotypes have been generated in the early stage of molecular evolution.     

The Rad9-Hus1-Rad1 (9-1-1) clamp activates checkpoint signaling via TopBP1

DNA replication stress triggers the activation of Checkpoint Kinase 1 (Chk1) in a pathway that requires the independent chromatin loading of the ATRIP-ATR (ATR-interacting protein/ATM [ataxia-telangiectasia mutated]-Rad3-related kinase) complex and the Rad9-Hus1-Rad1 (9-1-1) clamp. We show that Rad9's role in Chk1 activation is to bind TopBP1, which stimulates ATR-mediated Chk1 phosphorylation via TopBP1's activation domain (AD), a domain that binds and activates ATR. Notably, fusion of the AD to proliferating cell nuclear antigen (PCNA) or histone H2B bypasses the requirement for the 9-1-1 clamp, indicating that the 9-1-1 clamp's primary role in activating Chk1 is to localize the AD to a stalled replication fork.     

Initial Changes of Rat Leukemia Induced by 1-Ethyl-1-Nitrosourea and 1-Butyl-1-Nitrosourea

The initial histological changes of leukemia were investigated in rats to which 1-ethyl- 1-nitrosourea and 1 butyl 1 nitrosourea were orally administered. The appearance of orthochromatic erythroblasts in the peripheral blood was used as the index of the initial stage of leukemia. The rat leukemia progressed from solitary lesions to scattered and further diffuse lesions. These leukemias are thought to begin as one, or only a few nodular foci, mainly in the bone marrow and partly in the spleen. Acta Pathol Jpn 42: 158–165, 1992.