糖尿病性骨质疏松模型雌激素、一氧化氮及转化生长因子β1的变化*

背景：糖尿病和卵巢去势是骨质疏松发生的两大主要原因,均会出现一氧化氮和转化生长因子β1的变化。 目的：探讨雌激素、一氧化氮、转化生长因子β1在糖尿病性骨质疏松模型中的变化及意义。 方法：采用链脲佐菌素诱导制备糖尿病大鼠模型,于造模后4,8,12,16周,进行骨密度检测,并应用放免法检测血清雌激素水平,硝酸还原酶法检测血清一氧化氮水平,ELISA法检测血清转化生长因子β1水平,免疫组织化学法检测骨中转化生长因子β1水平。 结果与结论：随着链脲佐菌素诱导时间的延长,糖尿病大鼠股骨骨密度逐渐降低(P < 0.05或P < 0.01);血清一氧化氮水平逐渐降低(P < 0.05或P < 0.01);血清转化生长因子β1水平逐渐升高(P < 0.01);血清雌激素水平轻度降低,与同时间点正常大鼠比较差异无显著性意义(P > 0.05)。免疫组织化学结果显示转化生长因子β1主要表达于成骨细胞的胞浆中,其阳性表达随链脲佐菌素诱导时间的延长逐渐下降(P < 0.01)。说明糖尿病大鼠血清一氧化氮水平和骨组织中转化生长因子β1水平的变化导致了骨吸收增加,骨形成减少,使骨密度降低,参与了糖尿病性骨质疏松的发生。     

外源Smad7转染肝星状细胞及对转化生长因子β1和Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响

背景：Smad7是转化生长因子β信号转导途径的主要抑制性蛋白,具有抗纤维化的作用。 目的：构建并鉴定大鼠Smad7真核表达质粒,观察外源Smad7可否有效转染肝星状细胞T6,并进一步研究其对转化生长因子β及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA 表达水平的影响。 设计、地点：基因重组及细胞观察实验,于新疆石河子大学医学院第一附属医院完成。 材料：pcDNA3.1(+)质粒为课题组保留;大肠杆菌DH5α系石河子大学医学院新疆地方与民族高发病教育部重点实验室所赠;肝星状细胞T6细胞由中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所提供品。 方法：采用基因重组技术将Smad7cDNA插入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建大鼠Smad7真核表达质粒。脂质体介导转染肝星状细胞T6细胞,分为正常对照、空质粒及转染组,G418筛选,挑取阳性细胞。 主要观察指标：反转录-聚合酶链反应法检测各组中Smad7、转化生长因子β及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达水平。 结果：酶切和测序结果证实Smad7真核表达质粒构建成功。Smad7转染组与正常对照组、空质粒组比较：Smad7 mRNA表达显著增加(P < 0.01);转化生长因子β、Ⅰ型胶原mRNA表达减少(P < 0.01);Ⅲ型胶原mRNA表达差异无显著性意义(P > 0.05)。正常对照组、空质粒组Smad7、转化生长因子β及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达差异无显著性意义(P值均> 0.05)。 结论：大鼠Smad7真核表达质粒构建成功,外源Smad7转染肝星状细胞T6细胞后可有效表达,并能降低转化生长因子β及Ⅰ型胶原mRNA 表达水平。     

补肾方药归经与实验性骨质疏松骨组织转化生长因子βmRNA的表达

背景：祖国医学中“肾主骨”的理论符合现代医学骨代谢调节机制，依此理论研制的补肾复方中药在骨质疏松症的治疗中虽取得较好的效果，但其归经作用途径需进行相关分子生物学方面的深入探讨。 目的：观察补肾方药归经与实验性骨质疏松骨组织转化生长因子β1 mRNA表达的关系。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2004-01/2007-12在河北医科大学中西医结合基础实验室完成。 材料：清洁级3个月龄健康雌性SD大鼠(未曾交配)70只，体质量（300±20）g，喂食低钙饲料，肌肉注射地塞米松建立骨质疏松模型。补肾方药由地黄、淫羊藿、山药、丹参、骨碎补、独活等药物组成。 方法：将SD大鼠随机分成7组：正常对照组、病理模型组、补肾方药口服组、肾经外贴组、膀胱经外贴组、依普拉封口服组、非经非穴位外贴组，每组10只。正常对照组不造模，补肾方药口服组造模大鼠按8 g/kg补肾方药灌胃给药；依普拉封口服组造模大鼠按10 mg/kg灌胃给药；正常对照组及模型组大鼠每天灌胃等体积的生理盐水；膀胱经外贴组造模大鼠取肾俞、飞扬穴，肾经外贴组选太溪、大钟穴，非经非穴位外贴组选非经非穴位，于脱毛区贴上相应的膏剂，左右交替进行，1次/d。 主要观察指标：检测连续给药16周后，造模各组和不造模正常对照组大鼠血清卵泡刺激素、黄体生成激素、促甲状腺素、孕酮水平，以双能X线骨密度仪检测腰椎骨密度，以反转录-聚合酶链反应检测骨组织转化生长因子β1 mRNA的表达。 结果：70只大鼠均进入结果分析。给药16周后，与模型组比较，补肾方药口服组、肾经外贴组、膀胱经外贴组、依普拉封口服组的血清卵泡刺激素、黄体生成激素、促甲状腺素、孕酮、骨密度明显增加（P均< 0.01），转化生长因子β1 mRNA的表达明显上调（P均< 0.01）。 结论：①补肾方药通过口服和外贴穴位两种不同途径给药均有效改善骨密度，发挥“归经”作用，该作用可能与靶器官骨组织上调转化生长因子β1 mRNA的表达有关。     

嗅鞘细胞移植脊髓全横断损伤大鼠大脑皮质运动区转化生长因子β表达的影响☆

背景：多项研究已证实嗅鞘细胞能促进脊髓损伤大鼠神经功能的恢复,但其分子机制还不清楚。 目的：观察嗅鞘细胞移植对脊髓全横断大鼠大脑皮质运动区转化生长因子β mRNA表达的影响。 方法：采用酶消化法培养GFP转基因小鼠嗅鞘细胞,制成细胞悬液。建立SD大鼠T9脊髓全横断模型,造模后分为假手术组、模型组和嗅鞘细胞移植组。应用RT-PCR方法检测各组大鼠大脑皮质运动区转化生长因子β mRNA的表达变化,用β-actin作内参。 结果与结论：模型组大鼠造模后3 d大脑皮质运动区转化生长因子β mRNA的表达量高于假手术组(P < 0.05),造模后7,14,21和28 d回到假手术组水平。嗅鞘细胞移植后21 d,嗅鞘细胞移植组转化生长因子β mRNA的表达量低于模型组(P < 0.05)。提示全横断脊髓损伤致大脑皮质运动区转化生长因子β mRNA早期表达上调,随后与假手术组相比无差别;嗅鞘细胞移植后期可逆转转化生长因子β mRNA的表达变化,有助于脊髓损伤的恢复。     

转化生长因子β1对大鼠肾小管上皮细胞中基质细胞衍生因子1表达的影响★

目的：已知转化生长因子β1与肾脏组织纤维化形成有密切关系。拟进一步探讨转化生长因子β1对大鼠近端肾小管上皮细胞（NRK52E）中基质细胞衍生因子1表达的影响。 方法：实验于2006-03/2007-05在四川大学生物治疗国家重点实验室神经分子生物实验室完成。①实验材料：大鼠近端肾小管上皮细胞株NRK52E，由澳大利亚Monash医学中心肾内科实验室提供；转化生长因子β1由cytolab公司提供。②实验分组：将大鼠近端肾小管上皮细胞分为正常对照组：无转化生长因子β1 干预；实验组：又分为在同一转化生长因子β1浓度(2 μg/L)下，培养6，12，24 h；在不同的转化生长因子β1浓度(2，5，10 μg/L)下，培养24 h。③利用免疫细胞化学技术对同一转化生长因子β1浓度(2 μg/L)干预不同时间后的大鼠近端肾小管上皮细胞中基质细胞衍生因子１的蛋白表达进行半定量分析，选择出最佳的作用时间点；通过反转录-聚合酶链反应、Western-Blotting以检测大鼠近端肾小管上皮细胞中基质细胞衍生因子1在不同转化生长因子β1浓度干预下培养24 h后的mRNA、蛋白表达变化情况。 结果：①培养12，24 h时,大鼠近端肾小管上皮细胞中基质细胞衍生因子1的蛋白表达比0 h增高(P < 0.05)；24 h时表达略高于12 h (P > 0.05)。提示，基质细胞衍生因子1的表达到达一平台期，24 h为最佳的作用时间点。②从mRNA水平和蛋白水平均证实，2 μg/L转化生长因子β1干预24 h后的大鼠近端肾小管上皮细胞中基质细胞衍生因子1的表达高于正常对照组 (P < 0.05)；随着转化生长因子β1的浓度增大，表达呈下降趋势，10 μg/L时表达低于2 μg/L时的表达(P < 0.05)。 结论：基质细胞衍生因子1在正常的大鼠近端肾小管上皮细胞中呈低表达状态，对转化生长因子β1的干预表现出一定的时间、剂量依赖性，基质细胞衍生因子1可能参与了肾间质纤维化的发生、发展。     

转化生长因子β2在发育性髋关节发育不良患儿圆韧带中的分布和表达

背景：发育性髋关节发育不良患儿关节松弛,很可能与细胞外基质成分有关。转化生长因子β2调控Ⅰ型胶原基因表达的关键性细胞因子,能促进成纤维细胞的生长、分裂,并能分泌胶原蛋白,是骨科学中纤维异常相关研究的方向之一。 目的：观察发育性髋关节脱位患儿和正常儿转化生长因子β2在圆韧带中分布规律与其mRNA及蛋白质表达的差异,探索髋关节松弛的原因。 方法：选取性别相同、年龄相近的6对发育性髋关节脱位患者与正常儿进行配对比较,采用免疫组化和半定量RT-PCR技术检测圆韧带中转化生长因子β2及其mRNA的分布规律与表达差异。 结果与结论：分泌转化生长因子β2的成纤维细胞贴近圆韧带关节侧的滑膜层,内部纤维层转化生长因子β2阳性表达细胞稀疏。发育性髋关节脱位患儿纤维层中表达转化生长因子β2的成纤维细胞数数量明显减少(P < 0.01),圆韧带中转化生长因子β2 mRNA表达也明显减少(P < 0.01)。由此推测,圆韧带中转化生长因子β2的分布减少和表达异常很可能与发育性髋关节发育不良患儿的髋关节松弛有关。     

胰岛素样生长因子1对人脂肪来源的间充质干细胞向软骨细胞定向诱导分化的作用☆

背景：近年研究者发现胰岛素样生长因子1还可以诱导骨髓来源间充质干细胞向软骨细胞方向分化,但目前尚未见胰岛素样生长因子1诱导脂肪来源间充质干细胞向软骨细胞方向分化及在此过程中与转化生长因子β1相互作用的报道。 目的：观察胰岛素样生长因子1诱导脂肪来源间充质干细胞向软骨细胞定向分化的可能性及在诱导分化中和转化生长因子β1的相互作用。 方法：获取脂肪来源间充质干细胞,以2×105 cells/cm2的密度接种于培养瓶,使用含胰岛素样生长因子1或(和)转化生长因子β1的无胰岛素软骨诱导剂诱导脂肪来源间充质干细胞。2周后获取细胞,制备细胞爬片,进行甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫组织化学染色,观察细胞内高硫酸化的蛋白聚糖和Ⅱ型胶原着色情况。RT-PCR检测Ⅱ型胶原蛋白、aggrecan及Sox9 mRNA的表达。 结果与结论：加入诱导剂后,甲苯胺蓝染色显示3个诱导组细胞呈多角形,胞浆及胞膜呈蓝色异染。Ⅱ型胶原免疫组织化学染色显示3个诱导组细胞胞浆及胞膜呈棕黄色着色。RT-PCR检测显示胰岛素样生长因子+转化生长因子组Ⅱ型胶原蛋白、aggrecan、Sox9 mRNA的表达均显著强于胰岛素样生长因子组和转化生长因子组,胰岛素样生长因子组和转化生长因子组显著强于对照组,而胰岛素样生长因子组与转化生长因子组差异无显著性意义。提示胰岛素样生长因子1可以单独诱导脂肪来源间充质干细胞向软骨细胞分化,表达软骨细胞特异性细胞表型,胰岛素样生长因子1与转化生长因子β1诱导脂肪来源间充质干细胞向软骨细胞分化有协同作用。     

脑微血管内皮细胞缺氧模型转化生长因子β1表达与脑溢安的干预

背景：临床及动物实验证实脑溢安能促进脑出血急性期血肿吸收及神经功能恢复，提高生活质量。 目的：观察脑溢安血清对体外缺氧培养的大鼠脑微血管内皮细胞转化生长因子β1 mRNA表达的影响。 方法：用分离培养的大鼠脑微血管内皮细胞移入厌氧培养箱培养18 h建立缺氧损伤模型，并随机分为正常组、模型组、正常血清组及含脑溢安血清组。正常组为同一批正常培养的脑微血管内皮细胞；模型组将正常培养的细胞放入厌氧培养箱内培养18 h；正常血清对照组细胞在培养液中加5%正常血清后，放入厌氧培养箱中培养18 h；脑溢安血清组细胞在培养液中加5%脑溢安血清后，放入厌氧培养箱内培养18 h。 结果与结论：缺氧培养使脑微血管内皮细胞存活数量减少，其表达的转化生长因子β1 mRNA增强，而脑溢安血清能明显增加脑微血管内皮细胞存活数量，降低转化生长因子β1 mRNA表达水平(P < 0.05)。说明脑溢安血清下调转化生长因子β1mRNA的表达可能是其抑制脑微血管内皮细胞的凋亡对缺氧损伤脑微血管内皮细胞的保护作用机制之一。     

电针干预膝骨关节炎过程中转化生长因子β的调控作用*

背景: 电针治疗膝骨关节炎具有良好的中枢和外周镇痛作用。研究显示转化生长因子β在膝骨关节炎发生中具有重要作用。 目的：从转化生长因子β调控角度,认识电针治疗膝骨关节炎的可能作用机制。 方法：健康3月龄雄性SD大鼠,随机分为正常组、模型组、电针组和药物组。通过结扎大鼠股静脉并强迫运动的方法,建立膝骨关节炎动物模型。造模1个月后,电针组刺激内膝眼(EX-LE4)和犊鼻(ST 35)穴位,深0.1寸,脉冲2 Hz刺激20 min,1次/d,药物组为关节腔内注射药物透明质酸钠,0.1 mL/次,1次/周。治疗2周后,采集各组动物膝关节滑膜组织,观察转化生长因子β1、转化生长因子β1受体Ⅰ、转化生长因子β受体Ⅱ的表达。 结果与结论：膝关节骨关节炎动物膝关节滑膜中转化生长因子β1水平增加(P < 0.05),经电针或透明质酸钠治疗后,膝关节滑膜中转化生长因子β1水平降低(P < 0.05),且转化生长因子β1受体Ⅰ,Ⅱ含量出现显著降低(P < 0.05)。提示电针治疗膝骨关节炎是通过下调转化生长因子β1的含量来改善骨关节炎症状的,受体含量的减少有助于膝骨关节炎的恢复。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对转化生长因子β1诱导体外血管外膜成纤维细胞表型的改变

背景：近年来的研究表明,血管外膜成纤维细胞在血管损伤后新生内膜的增生中起重要作用,但对于引起血管外膜成纤维细胞表型转化的机制尚不十分清楚。 目的：观察过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferators-activated receptor,PPAR)γ激动剂对转化生长因子β1诱导体外血管外膜成纤维细胞表型改变,同时检测对Ⅰ胶原蛋白表达的作用。 设计、时间及地点：随机分组设计,对比观察,于2007-07/2008-10在上海交通大学医学院附属第九人民医院组织工程实验室完成。 材料：鼠龄2个月的健康雄性SD大鼠,体质量约120 g,用于体外培养大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞;转化生长因子β1由美国GenWay Biotech公司提供;罗格列酮粉剂为北京高盟化工有限公司产品。 方法：实验分为3组：转化生长因子β1诱导组：以不同质量浓度的转化生长因子β1(3,5,10,15 μg/L)诱导成纤维细胞48 h;罗格列酮干预组：用不同浓度的PPAR-γ激动剂罗格列酮(5,10,30,50 μmol/L)干预成纤维细胞45 min后,加入转化生长因子β1 10 μg/L共同培养48 h;对照组：不添加任何干预措施。 主要观察指标：①免疫组织化学α-平滑肌肌动蛋白检测不同浓度转化生长因子β1、罗格列酮干预后成纤维细胞的表型改变。②蛋白免疫印迹检测成纤维细胞中平滑肌α2肌动蛋白及Ⅰ型胶原蛋白的表达。 结果：不同质量浓度转化生长因子β1诱导成纤维细胞48 h后,与对照组相比,5 μg/L转化生长因子β1可明显刺激成纤维细胞表型改变及细胞中平滑肌α2肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的表达,10 μg/L转化生长因子β1刺激细胞表型改变及平滑肌α2肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的表达最明显(P < 0.05),随后转化生长因子β1再增加至15 μg/L,与10 μg/L转化生长因子β1浓度组相比,其刺激细胞表型改变及平滑肌α2肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的表达不再增加(P > 0.05)。不同浓度罗格列酮干预10 μg/L转化生长因子β1诱导的成纤维细胞48 h后,与对照组相比,30 μmol/L可明显抑制成纤维细胞表型改变及细胞中平滑肌α2肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的表达(P < 0.05)。 结论：PPAR-γ激动剂罗格列酮能抑制转化生长因子β1诱导体外血管外膜成纤维细胞表型改变及平滑肌α2肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的表达。     

Satisfaction with quality of life varies with temperament types of patients with schizophrenia

We sought to explore the relationships of three temperament factors with domain-specific subjective quality of life (QOL) of patients with schizophrenia. Ninety patients with schizophrenia were evaluated using the Quality of Life Enjoyment and Life Satisfaction Questionnaire, the Tridimensional Personality Questionnaire, the Positive and Negative Syndromes Scale, the Distress Scale for Adverse Symptoms, the Insight and Treatment Attitudes Questionnaire, the Insight Self-Report Scale, and standardized questionnaires for self-reported emotional distress and stress process-related variables. Predictors of domain-specific QOL were identified using multiple regression techniques. Temperament factors explain 6% to 16% of variability in QOL domain scores among patients with schizophrenia after controlling for the remaining variables (emotional distress, social support, self-esteem, avoidance coping, age, side effects, and depression). We found that higher levels of novelty seeking are associated with better general QOL, physical health, and more positive subjective feelings, whereas higher levels of reward dependence are related to better satisfaction from social relationships. Higher levels of harm avoidance are associated with poorer satisfaction with general activities, and medication. Thus, temperament factors, as assessed by the Tridimensional Personality Questionnaire, substantially influence satisfaction with life quality in schizophrenia. Novelty seeking, reward dependence, and harm avoidance are associated with different domains of QOL.     

Treatment of patients with tardive dystonia with olanzapine

Tardive dystonia represents a complication of long-term use of neuroleptics and its treatment is often unsatisfactory. Atypical neuroleptics appear to improve tardive dystonia, and cases of tardive dystonia successfully managed with clozapine have been reported. The aim of this open-label video-blinded study was to evaluate the antidystonic efficacy of olanzapine, a new atypical neuroleptic with a low risk of agranulocytosis, in a group of four patients (one man and three women) with tardive cervical dystonia. They developed severe dystonia after several years of neuroleptic treatment. Extensive laboratory evaluations, as well as neurophysiologic and neuroradiologic investigations, were negative. Olanzapine was started at a dose of 5 mg/d and increased up to 7.5 mg/d. All patients were evaluated at baseline and after 2, 4, 8, and 12 weeks of treatment, using the Toronto Western Spasmodic Torticollis Rating Scale, and videotaped. At the end of the trial, the videotapes were reviewed and scored by a blind observer. A self-rating visual analog scale completed the disability evaluation.A moderate to marked improvement in dystonia was observed in all patients, and significant differences were observed in Toronto Western Spasmodic Torticollis Rating Scale scores and videotape ratings after 8 and 12 weeks of treatment compared with the basal values (p < 0.05). The average percentage of improvement in Toronto Western Spasmodic Torticollis Rating Scale score and visual analog scale was 26.4% and 42.6%, respectively. No serious side effects were reported at the maximum dosage reached (7.5 mg/d). This study warrants a larger controlled study to conclusively demonstrate the efficacy of olanzapine in tardive dystonia.     

Compliance with health regimens of adolescents with epilepsy

The purpose of this paper was to describe the compliance of adolescents with epilepsy and some factors connected to it. Altogether 300 individuals with epilepsy aged 13-17 years were randomly selected from the Finnish Social Insurance Institution's register. Every fifth person on the list was included in the sample. Seventy-seven per cent (n= 232) of the selected adolescents with epilepsy returned a questionnaire sent to them relating to compliance. The data were analysed using the SPSS software. Twenty-two per cent of the adolescents with epilepsy felt that they complied fully with their suggested health regimens, while 44% placed themselves in the category of "satisfactory compliance", and the remaining 34% reported poor compliance. Compliance with their recommended life-style was poorest, while the highest degree of compliance was recorded for medication. Background variables, such as the duration of the disease, exercise, smoking, alcohol-intake and the number of seizures, were statistically significantly related to compliance (P< 0.001). Good motivation, a strong sense of normality, experience of results, subjective outcome, energy and will-power, support from parents, physicians and nurses, and a positive attitude towards to the disease and its treatment, no threat to social and emotional well-being and no fears of complications and no fear of seizures explained good compliance (P< 0.001).     

血管内栓塞治疗未破裂脑动静脉畸形并发癫痫患者的预后分析

目的分析血管内栓塞治疗未破裂脑动静脉畸形(CAVM)并发癫痫患者的预后情况。方法选择2013年3月至2017年6月收治的符合诊断标准的CAVM并发癫痫发作患者49例为研究对象,分析血管内栓塞治疗后患者的临床症状、生活质量(QOLIE-31)改善情况。结果患者经血管内栓塞治疗后,QOLIE-31各项指标(除了药物影响)评分均明显提高,高于治疗前(P0.05);Spetzler-Martin分级与Engel分级的I~II级例数多于治疗前(P0.05),同时Spetzler-Martin分级I~II级生活质量评分(76.04±18.33)分明显高于III~V级的(65.65±16.76)分(P0.05);Engel分级I~II级的生活质量评分(75.25±17.78)分明显高于III~V级的(66.23±13.22)分(P0.05);血管内栓塞比例80%的生活质量总评分(78.37±18.87)分明显高于栓塞比例80%的(64.16±16.92)分(P0.05);术后患者的头疼症状中重度例数明显低于治疗前(P0.01);患者的NIHSS评分和MRS评分均明显低于治疗前,头疼症状的生活质量评分高于治疗前(均P0.05)。结论血管内栓塞能明显改善未破裂脑动静脉畸形并发癫痫患者的头疼症状、癫痫发作情况、神经功能缺损,提高血管内栓塞比例能够提高患者生活质量。