人参皂甙Rd对兔脊髓缺血性损伤保护作用的量效关系研究

目的探讨人参皂甙Rd对脊髓缺血性损伤保护作用的剂量效应关系。方法 40只雄性新西兰大白兔,随机分为5组（n=8）,采用肾下主动脉阻断法造成脊髓缺血（20min）。对照组：即单纯缺血再灌注组;保护组：即Rd-5组、Rd-10组、Rd-20组和Rd-40组,分别在缺血前1h从耳缘静脉注射人参皂甙Rd5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg;术后观察神经功能变化并记录再灌注4h、8h、12h、24h和48h神经功能学评分,再灌注48h处死动物后取脊髓（L5～7）标本行病理学观察。结果所有动物均存活,再灌注后48h,Rd-5组神经功能学评分和脊髓前角正常运动神经元计数与对照组相比均无显著性差异（P〉0.05）;Rd-10组神经功能学评分与对照组相比无显著性差异（P〉0.05）,但脊髓前角正常运动神经元计数明显高于对照组（P〈0.05）;Rd-20组、Rd-40组神经功能学评分和脊髓前角正常运动神经元计数均明显高于对照组（P〈0.01）,但这二组之间无显著性差异（P〉0.05）。且每组兔神经功能学评分与其对应脊髓前角正常神经元计数之间有显著相关性（r=0.769.P〈0.01）。结论人参皂甙Rd对脊髓缺血性损伤有保护作用,且呈一定的剂量效应关系。     

不同浓度人参皂甙Rd对次声性脑损害的保护

目的观察次声对大鼠记忆功能的影响及不同剂量人参皂甙Rd对其脑损害的治疗作用。方法通过Y型电迷宫训练将成绩相近的SD大鼠随机分为5个组，除正常对照组以外均接受16Hz 130dB的次声作用gh／d。3个药物组在次声作用前3d开始分别给予不同剂量（30mg／kg、10mg／kg、2mg／kg）的人参皂甙Rd。次声作用7d后再次评定每组大鼠的迷宫成绩，并用单链DNA（Single-stranded DNA，ssDNA）免疫标记法检测海马内ssDNA（凋亡细胞）数。结果与正常对照组相比单纯次声组大鼠学习记忆功能下降、标记的ssDNA阳细胞数明显增多（P〈0．05）；与单纯次声组相比人参皂甙（30mg/kg、10mg／kg组）有明显的保护作用，减轻了学习记忆功能下降，ssDNA阳性细胞数明显减少（P〈0．05）。结论16Hz 130dB次声可引发大鼠海马损伤、细胞凋亡、记忆功能减退，人参皂甙可明显减轻这些损害。     

人参皂甙单体Rb1对大鼠脑缺血损伤保护作用的实验研究

目的 观察人参皂甙单体Rb1 对大鼠实验性脑缺血的保护作用。方法 健康成年雄性清洁级SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、缺血对照组(Con)、干预组(Tre),干预组又分为Rb130 mg/kg、60 mg/kg及90 mg/kg三个不同剂量组。缺血对照组采用线栓法建立大脑中动脉闭塞模型,缺血2 h后拨出线栓再灌注; 各干预组用相应剂量Rb1 ip qd×7 d,末次给药后3 h内用同样方法建立大脑中动脉闭塞模型及再灌注; 假手术组不插入线栓,余操作相同。术后48 h取标本TTC染色测梗死体积、干湿重法脑组织含水量测定、Tunnel法测定调亡细胞数及NgR表达的免疫组化测定。结果 各干预组的梗死体积分别为30 mg/kg组(27.629±1.401)%,60 mg/kg组(24.164±1.710)%,90mg/kg组(21.955±2.556)%,缺血对照组为(29.846±1.153)%; 脑组织含水量为30 mg/kg组(80.079±0.726)%,60 mg/kg组(78.984±0.902)%,90 mg/kg组(77.855±0.258)%,假手术组与缺血对照组分别为(76.517±0.37)%、(81.799±1.065)%; 调亡细胞数分别为30 mg/kg组(89.000±10.296),60 mg/kg组(59.000±12.522),90 mg/kg组(36.667±19.054),假手术组与缺血对照组分别为(1.600±1.517)、(132.667±22.223); NgR表达阳性面积分别为30 mg/kg组(84.827±3.870),90 mg/kg组(66.040±5.541),60 mg/kg组(75.577±7.150),假手术组与缺血对照组分别为(48.355±9.720)、(91.485±5.822)。结论 人参皂甙单体Rb1对大鼠实验性脑缺血有保护作用,能减轻缺血再灌注损伤所致的脑水肿及梗塞面积,减少细胞调亡,并且该保护作用呈剂量依赖性。对NgR表达的干预提示Rb1可能在脑缺血死后神经可塑性中起促进作用。     

人参皂甙-Rd预先给药对大鼠脑的保护作用

目的探讨人参皂甙-Rd（Rd）预先给药对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法雄性SD大鼠70只,随机分为7组（n=10）,即缺血再灌注组（CON组）、Rd 5 mg组、Rd 10 mg组、Rd 20 mg组、Rd 40 mg组、Rd 80 mg组和丙二醇溶剂组（VEC组）。所有大鼠均采用右侧颈内动脉尼龙线栓法制作大脑中动脉阻塞（MCAO）模型,并于脑缺血前1 h分别经腹腔注射相应剂量Rd及丙二醇。于再灌注后24 h、48 h和72 h进行神经行为学评分（NBS）,并于72 h行2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色测量脑梗死容积百分比。结果与CON组和VEC组比较,Rd 5 mg组、Rd 10 mg组、Rd 20 mg组、Rd 40 mg组和Rd 80 mg组脑缺血再灌注后24 h、48 h、72 h神经行为学评分均较高,再灌注后72 h梗死容积均较低（P〈0.05）。Rd剂量小于40 mg/kg时,其保护效果随剂量的增加而增加。Rd 80 mg组与Rd 20 mg和Rd 40 mg组相比,NBS显著减小,脑梗死容积百分比明显升高（P〈0.05）;与Rd 5 mg组和Rd 10 mg组相比,NBS和脑梗死容积百分比均无明显差异（P〉0.05）。结论人参皂甙-Rd预先给药对大鼠短暂局灶性脑缺血再灌注损伤有保护作用,并在5-40 mg/kg之间存在剂量依赖性的保护作用。     

人参皂甙Rd对＋Gz暴露后大鼠运动和学习记忆能力的影响

目的探讨人参皂甙Rd对正加速度（＋Gz）暴露后大鼠运动和学习记忆能力的影响。方法 64只雄性SD大鼠,体质量200～250g,随机均分为假手术组（Sham组）、正加速度组（＋Gz组）、人参皂甙Rd处理组（Rd组）和溶剂对照组（Vehicle组）。Sham组大鼠静置于离心机上但不给予＋Gz暴露;＋Gz组大鼠给予＋10Gz,5min暴露;Rd组大鼠在＋10Gz,5min暴露前30min腹腔注射人参皂甙Rd30mg/kg;Vehicle组大鼠在＋10Gz,5min暴露前30min腹腔内给予等容量溶剂（20%丙二醇）。＋10Gz,5min暴露后不同时间点,通过旷场实验观察各组大鼠运动能力的变化;通过水迷宫实验观察各组大鼠学习记忆能力的变化。结果在旷场实验中,Rd组大鼠的站立次数较＋Gz组明显增多（P〈0.05）且在中央格的停留时间也明显减少（P〈0.05）。而Vehicle组大鼠的站立次数、中央格的停留时间与＋Gz组比较无显著性差异（P〉0.05）。在水迷宫实验中,与＋Gz组比较,Rd组的逃避潜伏期明显缩短（P〈0.05）;目标象限停留时间显著延长（P〈0.05）。而Vehicle组大鼠的逃避潜伏期、目标象限停留时间与＋Gz组比较无统计学差异（P〉0.05）。结论人参皂甙Rd能改善＋Gz导致的运动和学习记忆能力下降。     

人参皂甙Rd对颞叶癫大鼠学习记忆能力及海马5-HT表达的影响

目的研究人参皂甙Rd对氯化锂-匹罗卡品点燃颞叶癫(temporal lobe epilepsy,TLE)大鼠学习记忆能力及海马5-HT表达的干预作用。方法建立氯化锂-匹罗卡品点燃颞叶癫大鼠模型,将30只造模成功的颞叶癫大鼠随机分为TLE组(生理盐水10ml/kg腹腔注射,15只)及GSRd干预组(人参皂甙Rd2mg/kg腹腔注射,15只),另选15只大鼠作为正常对照组;采用Morris水迷宫及免疫组化染色分别检测各组大鼠学习记忆能力及海马5-HT表达水平。结果与正常对照组比较,TLE组大鼠学习记忆能力下降,海马5-HT表达明显减少(P0.05);与TLE组比较,GSRd干预组可显著提高大鼠学习记忆能力及海马5-HT的表达水平(P0.05)。结论人参皂甙Rd可能通过增加海马5-HT的表达来提高颞叶癫大鼠学习记忆能力。     

人参皂甙Rb1对脑缺血半影区葡萄糖转运体3表达的影响

人参皂甙是从植物根、茎、叶中提取出的主要有效成分，具有多种生物活性。除了有增强机体免疫力、抗肿瘤、抗衰老、降低血糖等作用外，对脑缺血损伤还有保护作用，可减小脑梗塞体积。我们用大鼠脑缺血再灌注模型，观察人参皂甙Rb1对脑缺血再灌注损伤后缺血半影区葡萄糖转运体3（GLUT3）mRNA、蛋白表达以及脑梗塞体积的影响，从能量代谢角度进一步探讨Rb1的神经保护机制。     

缺血再灌注对大鼠海马神经元淀粉样蛋白及其蛋白前体表达的影响及人参皂甙Rg2的干预

目的 探讨缺血再灌注对大鼠认知功能的损伤机制及人参皂甙RS2干预作用.方法 制备大鼠脑中动脉阻断法缺血再灌注模型,缺血60min后再灌注24h.用Morris水迷宫方法测定大鼠认知记忆能力变化;用免疫组织化学和图像分析方法检测脑组织β淀粉样蛋白(Aβ1-40)、其前体蛋白(APP)和NMDA受体蛋白(NR1)的表达.结果 人参皂甙Rg22.5～10ms/kg及尼莫地平50μg/kg,使逃避潜伏期明显缩短(P<0.01);Aβ1-40及APP、NR1表达减弱(P<0.05,0.01).结论 缺血再灌注可以通过上调β淀粉样蛋白(Aβ1-40)、其前体蛋白(APP)和NMDA受体蛋白(NR1)而引起认知功能障碍,人参皂甙Rg2对认知功能有保护作用.     

急性低氧条件下复氧后大鼠脑HIF—1α蛋白的表达与人参皂甙Rd干预研究

摘要：目的观察大鼠脑缺氧状态下缺氧诱导因子1α（HIF-1α）蛋白的表达及低氧状态下人参皂甙Rd干预对其影响。方法将成年Wistar大鼠90只随机分为急性低氧对照组、低氧预处理干预组、人参皂甙Rd预处理干预组,每组按缺氧后不同时间点（复氧后0h、4h、9h）再分为3亚组,每组10只大鼠。采用免疫组化法检测HIF-1α蛋白的表达。结果在缺氧后复氧即刻,HIF-1α蛋白少量表达,主要存在于海马细胞;随着时间的推移,在复氧后4h,HIF-1α表达逐渐达高峰,至9h时HIF-1α表达又明显减少。低氧预处理干预组及人参皂甙Rd干预组的实验结果发现HIF-1α表达较急性低氧对照组减少,与急性低氧对照组各时间点相比,差异均有显著性（P〈0．05）。两个干预组之间比较无统计学差异。结论急性低氧可以促使HIF-1α在大鼠海马神经细胞的表达,具有时间依赖性,低氧预处理干预及人参皂甙Rd干预均可促使大鼠脑组织HIF-1α表达减少。     

人参皂甙Rb_1对大鼠海马脑片缺血损伤的保护作用

目的　研究人参皂甙 Rb1 对脑缺血损的保护作用及其机制。方法　实验利用离体海马脑片模型 ,结合电生理学技术进行研究 :(1)观察大鼠海马脑片在缺血条件下顺向群峰电位 (orthodrom ic population spike,OPS)的变化及人参皂甙 Rb1 对它的影响。 (2 )观察谷氨酸对海马脑片 OPS的影响及人参皂甙 Rb1 抗谷氨酸毒性作用。结果　 (1)使用人参皂甙 Rb1 (6 0 0 μm ol/ L)后 ,可使缺氧损伤电位 (hypoxic injury potential,HIP)出现率明显减少 ,OPS恢复率和 OPS恢复程度与对照组比较有显著性差异。 (2 )使用人参皂甙 Rb1 (6 0 0 μm ol/ L)后 ,OPS恢复率和OPS恢复程度与对照组比较有显著性差异。结论　人参皂甙 Rb1 有明显的抗脑缺血损伤作用 ,其作用机制与抗谷氨酸的神经毒性作用有关。     

Ginsenoside Rd in Experimental Stroke: Superior Neuroprotective Efficacy with a Wide Therapeutic Window

Ginsenoside Rd (Rd), one of the main active ingredients in Panax ginseng, has been demonstrated to protect against ischemic cerebral damage in vitro and in vivo. In this study, we aimed to further define the preclinical characteristics of Rd. We show that Rd passes the intact blood-brain barrier and exerts protection in both transient and permanent middle cerebral artery occlusion (MCAO) in rats. In the dose-response study, Rd (10–50 mg/Kg) significantly reduced the infarct volume on postoperative days (PODs) 1, 3, and 7. This protection was associated with an improved neurological outcome for as many as 6 weeks after transient MCAO, as assessed by modified neurological severity score, modified sticky-tape test, and corner test. For comparison, Rd was significantly more effective than edaravone and slightly more effective than N-tert-butyl-alpha-phenylnitrone (PBN). In the therapeutic window study, Rd exhibited remarkable neuroprotection, even when administered for as many as 4 h after the recirculation of transient MCAO or after the onset of permanent MCAO. Furthermore, in female rats or 16-month-old male rats, the salutary effects of Rd were also observed. These findings suggest Rd is a promising neuroprotectant and provide support for future clinical studies to confirm whether Rd is beneficial in ischemic stroke.

Electronic supplementary material

The online version of this article (doi:10.1007/s13311-011-0051-3) contains supplementary material, which is available to authorized users.     

人参皂甙RD预处理对谷氨酸所致PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨人参皂甙RD预处理对谷氨酸所致PC12细胞损伤的影响。方法将PC12细胞分为对照组、谷氨酸损伤组和人参皂甙RD预处理组。对照组细胞正常培养;谷氨酸损伤组细胞置于含10 mmon/L谷氨酸的DMEM培养基中培养24 h;人参皂甙RD预处理组细胞经50μmol/L人参皂甙RD预处理30 min后,再加谷氨酸继续培养24 h。采用噻唑蓝比色法检测细胞活力;按试剂盒检测培养液乳酸脱氢酶（LDH）释放量;流式细胞仪检测胞内活性氧（ROS）水平;按试剂盒检测细胞内超氧化物歧化酶（SOD）含量。结果人参皂甙RD预处理最佳浓度为50μmol/L。与谷氨酸损伤组相比,人参皂甙RD预处理PC12细胞活力明显增高（P〈0.05）,培养液LDH释放量明显降低（P〈0.05）,胞内ROS含量明显降低（P〈0.05）,胞内SOD含量明显增高（P〈0.05）。结论人参皂甙RD预处理可减轻谷氨酸引起的PC12细胞损伤。     

Neuroprotective effect of Ro5-4864 following brain injury

The 18 kDa translocator protein (TSPO) is a protein complex located at the outer mitochondrial membrane and interacting with the mitochondrial permeability transition pore (mPTP), indicating its involvement in the control of mPTP opening. We intended to explore the effect of TSPO ligands, PK 11195 and Ro5-4864 on apoptosis in a rat model of cortical injury. Sprague–Dawley rats received a daily intraperitoneal injection of dimethylsulfoxide (vehicle), PK 11195, or Ro5-4864, starting 2 days prior the injury and a third injection after the injury. At 6 weeks, immunohistochemistry analysis showed that Ro5-4864 resulted in a significant increase in the number of surviving neurons and in the density of the neurofilament network in the perilesional cortex in comparison with animals of the vehicle and PK 11195 groups. In tissue samples dissected from the injured area, Ro5-4864 caused a significant reduction in activation of caspases 3 and 9 but not of caspase 8 in comparison with the vehicle and PK 11195 groups. In addition, measurements of transmembrane mitochondrial potential of mitochondria (Δψ_M) isolated from normal rat brain showed that loss of Δψ_M induced by recombinant Bax could be significantly reduced by Ro5-4864 in a concentration-dependent manner. Our findings indicate that the neuroprotective effect shown by Ro5-4864 in the present model of brain injury involves the mitochondrial pathway of apoptosis modulation of mPTP.     

白藜芦醇对小鼠脑缺血再灌注损伤后MMP-9蛋白的影响

目的探讨白藜芦醇预治疗对小鼠暂时性脑缺血的脑保护作用及其对基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达及活性的影响。方法采用插线法制作小鼠暂时性大脑中动脉栓塞（MCAO）模型。白藜芦醇溶于20％环糊精／0．9％NaCL，50mg／kg强饲，1／d，于第7d行MCAO。MCAO2h再灌注22h取完整端脑，切成2mm冠状厚片，2％红四氮唑（TFC）染色，计算脑梗死灶的大小。分别于MCAO2h再灌注4h、10h及22h取患侧或对照侧端脑，提取总蛋白，采用Western blot和明胶酶谱分析方法研究MMP-9的表达及活性。结果白藜芦醇预治疗组MCAO2h再灌注22h时的梗死灶明显小于对照组（P〈0．01）。Western blot和明胶酶谱分析结果证明，白藜芦醇预治疗可降低脑缺血再灌注损伤所诱导的MMP-9蛋白的表达及其活性水平。结论白藜芦醇预治疗对脑缺血再灌注损伤有一定的保护作用，这可能得益于其抑制了MMP-9蛋白的高表达及活性增高。     

法舒地尔对脊髓缺血再灌注损伤后自由基及caspase-3表达的影响

目的探讨法舒地尔对脊髓缺血再灌注损伤后血清自由基水平、受损脊髓组织中天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）表达以及下肢运动功能的影响。方法采用腹主动脉夹闭法将30只家兔制作成脊髓缺血再灌注损伤模型,并随机（掷硬币法）分为实验组和对照组。实验组腹腔内注射法舒地尔,对照组注射0．9％氯化钠溶液,共14d,建模后第1、3和5天,检测家兔血清丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）水平的变化;建模后第14天观察脊髓损伤的组织病理学变化,并用免疫组化染色检测受损脊髓中caspase-3的表达;建模后7、14d比较两组动物后肢运动功能。结果建模后第1、3和5天,法舒地尔组家兔血清MDA、SOD、NO水平均显著低于对照组,脊髓病理学也进一证实法舒地尔组脊髓损伤程度较对照组轻微,受损脊髓组织caspase-3的表达明显低于对照组（P〈0．01）;法舒地尔组家兔双下肢运动评分明显高于对照组（P〈0．01）。结论法舒地尔能明显降低脊髓损伤后血清自由基水平,抑制easpase-3的表达,对缺血再灌注损伤的脊髓有明显保护作用。