地佐辛通过上调miR-204-3p减轻LPS诱导的心肌细胞H9C2损伤北大核心CSCD

目的:探讨地佐辛对脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞损伤的影响及可能机制。方法:体外培养心肌细胞H9C2,分为Con组、LPS组、不同剂量(4、8、16μmol/L)地佐辛组、16μmol/L地佐辛+anti-miR-NC组和16μmol/L地佐辛+anti-miR-204-3p组,CCK-8检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测CyclinD1、p21、Bcl-2和Bax蛋白表达,试剂盒检测细胞培养上清中LDH水平及细胞中MDA、SOD和GSH-Px水平,RT-qPCR检测细胞miR-204-3p表达。结果:与Con组比较,LPS组H9C2细胞OD值、CyclinD1和Bcl-2蛋白表达、SOD和GSH-Px活性及miR-204-3p表达降低(P<0.05),细胞凋亡率、p21和Bax蛋白表达及MDA和LDH含量升高(P<0.05)。与LPS组比较,不同剂量(4、8、16μmol/L)地佐辛组H9C2细胞OD值、CyclinD1和Bcl-2蛋白表达、SOD和GSH-Px活性及miR-204-3p表达升高(P<0.05),细胞凋亡率、p21和Bax蛋白表达及MDA和LDH含量降低(P<0.05),且呈剂量依赖性。与16μmol/L地佐辛+anti-miR-NC组比较,16μmol/L地佐辛+anti-miR-204-3p组H9C2细胞OD值、CyclinD1和Bcl-2蛋白表达、SOD和GSH-Px活性及miR-204-3p表达降低(P<0.05),细胞凋亡率、p21和Bax蛋白表达及MDA和LDH含量升高(P<0.05)。结论:地佐辛可能通过上调miR-204-3p表达促进LPS诱导的心肌细胞H9C2增殖,并抑制H9C2细胞凋亡和氧化应激,减轻LPS诱导的H9C2细胞损伤。     

miR-125b对过敏原刺激后支气管上皮细胞凋亡和分泌炎症因子的作用北大核心CSCD

目的:探究miR-125b对过敏原刺激后支气管上皮细胞凋亡和分泌炎症因子的作用和机制。方法:支气管上皮细胞分为Control组、Model组(尘螨抗原提取物处理)、miR-NC组(转染mimics control,尘螨抗原提取物处理)、miR-125b组(转染miR-125b mimics,尘螨抗原提取物处理)、miR-125b+PMA组(转染miR-125b mimics,尘螨抗原提取物和NF-κB信号激活剂PMA处理)。qRT-PCR分析miR-125b表达,流式细胞术分析细胞凋亡,ELISA分析细胞培养液上清中IL-6、IL-29水平,Western blot分析Bax、Bcl-2、p65蛋白表达。结果:与Control组相比,Model组支气管上皮细胞中miR-125b水平降低,细胞凋亡率升高,细胞分泌IL-6、IL-29增多,细胞中Bax、p65蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低。与miR-NC组相比,miR-125b组支气管上皮细胞中miR-125b水平升高,细胞凋亡率降低,细胞分泌IL-6、IL-29减少,细胞中Bax、p65蛋白表达水平降低,Bcl-2蛋白表达水平升高。与miR-125b组相比,miR-125b+PMA组支气管上皮细胞凋亡率升高,细胞分泌IL-6、IL-29增多,细胞中Bax、p65蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低。结论:miR-125b抑制过敏原刺激后支气管上皮细胞凋亡和分泌炎症因子,其机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。     

过表达miR-122对异氟烷致PC12细胞损伤的保护作用

目的 探讨miR-122在异氟烷导致的PC12细胞损伤中的作用.方法 将PC12细胞分为对照组、异氟烷组、阴性对照组(NC组)和miR-122过表达组,除对照组外,其余组细胞均用2％异氟烷+21％O2+5％CO2处理6h,miR-122过表达组和NC组在用异氟烷处理前通过脂质体2000将miR-122 mimic和mimic-NC转染细胞.通过RT-qPCR检测各组细胞中miR-122表达水平;MTT检测各组细胞处理0、24、48、72h后的细胞活力;ELISA试剂盒检测各组细胞MDA、SOD、GSH-Px水平;通过流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况;Western-blot检测各组细胞Bax、Bcl-2、cleaved-Caspase-3蛋白表达.结果 与对照组相比,异氟烷组细胞中miR-122相对表达量、24、48、72h细胞吸光度值、Bcl-2蛋白表达、SOD和GSH-Px水平下降(均P<0.05),MDA水平、细胞凋亡率、Bax和cleaved-Caspase-3蛋白表达升高(均P<0.05).与异氟烷组相比,miR-122过表达组miR-122相对表达量、24、48、72h细胞吸光度值、Bcl-2蛋白表达、SOD和GSH-Px水平显著升高(P<0.05),MDA水平、细胞凋亡率、Bax和cleaved-Caspase-3蛋白表达下降(P<0.05).结论 过表达miR-122能够改善异氟烷诱导的PC12细胞活力降低和氧化应激水平,并抑制细胞凋亡.     

微小RNA-486靶向TRIM10抑制帕金森病细胞模型损伤

目的 探讨微小RNA（miR）-486对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的体外帕金森病（PD）PC12细胞模型凋亡的影响和机制。 方法 实验分成对照（control）组、PD组（MPP+诱导PC12细胞）、miR-NC组［MPP+诱导PC12细胞转染模拟（mimics）对照（mimics control）］、miR-486组（MPP+诱导PC12细胞转染miR-486 mimics）、miR-486+载体（vector）组（共转染miR-486 mimics和pcDNA3.1）、miR-486+TRIM10组（共转染miR-486 mimics和pcDNA3.1-TRIM10）,每组n=9。CCK-8法分析细胞增殖变化,流式细胞术分析细胞凋亡水平变化,Western blotting分析Bax和Bcl-2蛋白表达变化,硫代巴比妥酸法检测细胞中丙二醛（MDA）含量,荧光探针法检测细胞中活性氧簇（ROS）水平,二硝基苯肼分析培养液上清中乳酸脱氢酶（LDH）水平。用生物信息学软件预测miR-486的靶基因,双荧光素酶报告基因实验检测miR-486、TRIM10靶向关系。 结果 与control组比较,PD组细胞存活率、Bcl-2蛋白表达降低,细胞凋亡率、Bax蛋白表达、MDA、ROS和LDH水平升高。与miR-NC组比,miR-486组细胞存活率、Bcl-2蛋白表达升高,细胞凋亡率、Bax蛋白表达、MDA、ROS和LDH水平降低。MiR-486靶向下调TRIM10表达。与miR-486+vector组比较,miR-486+TRIM10组细胞存活率、Bcl-2蛋白水平降低,细胞凋亡率、Bax蛋白水平、MDA、ROS和LDH水平升高。 结论 上调miR-486可通过靶向抑制TRIM10减少MPP+诱导的体外帕金森病PC12细胞模型的凋亡。     

上调GDF-15 表达对H2O2 诱导的H9C2 心肌细胞生物学特性及PI3K/ AKT 信号通路的影响

目的：探讨上调生长分化因子-15（GDF-15）的表达对H₂O₂诱导的H9C2心肌细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响。方法：CCK8法检测不同浓度的H₂O₂处理H9C2心肌细胞后的细胞增殖情况；H9C2心肌细胞分为Control组、NC组、H₂O₂组、GDF-15+H₂O₂组，各组细胞处理24 h后收集细胞，RT-PCR及Western blot分别检测各组细胞中GDF-15的mRNA及蛋白表达；CCK8法及流式细胞术分别检测细胞的增殖和凋亡情况；2′,7′-二氯二氢荧光素黄二乙酸酯（DCFH-DA）探针检测细胞活性氧簇（ROS）水平；Western blot检测Ki67、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、PI3K、p-AKT蛋白表达。10 μmol/L的PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002处理H9C2心肌细胞，通过CCK8法及流式细胞术分别检测GDF-15+H₂O₂组及PI3K/AKT信号通路抑制剂组细胞活力及凋亡率，Western blot检测Ki67、Bcl-2、Bax、PI3K、p-AKT蛋白表达。结果：不同浓度H₂O₂处理H9C2心肌细胞后，细胞活力均受到抑制，且有浓度依赖性（P<0.05），由于200 μmol/L的H₂O₂处理H9C2心肌细胞后可抑制将近一半的细胞增殖，选择200 μmol/L的H₂O2作为研究对象；与Control组比较，H2O2组GDF-15的mRNA及蛋白表达均显著升高，细胞增殖显著降低，凋亡率增加，ROS水平升高，Ki67、Bcl-2、PI3K、p-AKT蛋白表达降低，Bax蛋白表达升高（P<0.05）；与H₂O₂组比较，GDF-15+H₂O₂组细胞GDF-15的mRNA及蛋白表达均显著升高，细胞增殖显著增加，凋亡率降低，ROS水平降低，Ki67、Bcl-2、PI3K、p-AKT蛋白表达升高，Bax蛋白表达降低（P<0.05）。PI3K/AKT信号抑制剂组细胞活力及Bcl-2、PI3K和p-AKT的蛋白表达均显著低于GDF-15+H₂O₂组，细胞凋亡率及Bax蛋白表达显著高于GDF-15+H₂O₂组（P<0.05）。结论：上调GDF-15表达可促进H₂O₂诱导的H9C2心肌细胞增殖，降低细胞凋亡，其机制可能与调节细胞中ROS水平，Ki67、Bcl-2、Bax表达及PI3K/AKT信号通路有关。     

丙泊酚减轻H2O2诱导的心肌细胞系H9C2损伤

目的研究丙泊酚对过氧化氢(H_2O_2)诱导的心肌细胞系H9C2损伤及活性氧(ROS)水平的影响。方法将心肌细胞分成对照组、H_2O_2处理组和15、30和60μmol/L丙泊酚干预组。MTT检测细胞活力;二硝基苯肼显色法检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出率;流式细胞计量术检测细胞凋亡;Western blot检测细胞中激活型caspase-3(cleaved caspase-3)、胞质和线粒体中细胞色素C(cytochrome C)蛋白水平;黄嘌呤氧化法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性;钼酸铵法检测过氧化氢酶(CAT)活性;二硫代二硝基苯甲酸法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)含量;二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯法检测ROS活性;JC-1法检测线粒体膜电位。结果与对照组比较,H_2O_2处理组细胞活力降低;LDH漏出率和凋亡率升高;cleaved caspase-3蛋白水平及胞质中cytochrome C水平升高;线粒体cytochrome C水平降低;SOD、CAT和GSH-Px活性降低;MDA及ROS含量升高;线粒体膜电位下降(P0.05)。与H_2O_2处理组比较,15、30和60μmol/L丙泊酚组细胞活性升高;LDH漏出率降低;凋亡率和cleaved caspase-3水平降低;胞质中cytochrome C蛋白水平减少;线粒体中cytochrome C水平升高;细胞SOD活性、CAT活性和GSH-Px活性升高;MDA含量和ROS含量降低;线粒体膜电位升高(P0.05)。结论丙泊酚可以减轻H_2O_2诱导的心肌细胞损伤,减少细胞凋亡并降低细胞ROS水平。     

连翘苷通过APPL1对缺氧/复氧诱导心肌细胞损伤的影响

目的:研究连翘苷通过转接蛋白APPL1对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞氧化应激和凋亡的影响。方法:将大鼠心肌细胞H9C2分为Con组、H/R组、H/R+连翘苷低剂量组、H/R+连翘苷中剂量组、H/R+连翘苷高剂量组、H/R+pcDNA组、H/R+pcDNA-APPL1组、H/R+连翘苷+si-NC组和H/R+连翘苷+si-APPL1组。ELISA检测丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;流式细胞术检测心肌细胞凋亡率;蛋白质印迹法(Western blot)检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及APPL1蛋白;实时荧光定量PCR(qPCR)检测APPL1 mRNA表达。采用单因素方差分析和多重两两比较t检验进行统计学分析。结果:与Con组比较,H/R组心肌细胞MDA含量、凋亡率和Bax蛋白表达明显增加,SOD、GSH-Px活性、Bcl-2蛋白水平、APPL1 mRNA和蛋白表达显著降低(均P<0.01)。与H/R组比较,H/R+连翘苷各剂量组心肌细胞MDA含量、凋亡率、Bax蛋白表达明显减少,SOD、GSH-Px活性、Bcl-2蛋白水平、APPL1 mRNA和蛋白表达显著升高(均P<0.01)。连翘苷各剂量组APPL1 mRNA和蛋白表达高于H/R组(P<0.01)。与H/R+pcDNA组比较,H/R+pcDNA-APPL1组心肌细胞SOD和GSH-Px活性、Bcl-2蛋白水平显著升高,MDA含量、凋亡率、Bax蛋白表达显著降低(均P<0.01)。H/R+连翘苷+si-APPL1组与H/R+连翘苷+si-NC组比较,心肌细胞中MDA含量、凋亡率、Bax蛋白显著升高,SOD和GSH-Px活性、Bcl-2蛋白水平明显降低(P<0.05)。结论:连翘苷可能通过提高H/R心肌细胞的APPL1表达实现对H/R心肌细胞损伤的治疗作用。     

青蒿琥酯通过增加活性氧簇生成诱导人肝癌HepG2细胞凋亡

目的:探讨青蒿琥酯诱导人肝癌Hep G2细胞凋亡的机制及活性氧簇(ROS)在青蒿琥酯诱导Hep G2细胞凋亡中的作用。方法:采用MTT法观查青蒿琥酯对人肝癌Hep G2细胞存活的影响,Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡形态的变化,流式细胞术检测Hep G2细胞的凋亡率,DCFH-DA检测细胞凋亡过程中ROS的变化。Western blot检测细胞内凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3和细胞色素C(Cyt C)蛋白水平的变化。采用NADPH氧化酶抑制剂夹竹桃麻素(apocynin)预处理Hep G2细胞,Western blot检测NADPH氧化酶亚基p47~(phox)和p22~(phox)蛋白表达水平,流式细胞术检测ROS变化。结果:与对照组相比,青蒿琥酯作用于Hep G2细胞24 h后,细胞存活率明显减少(P0.05);细胞核呈致密浓染色,细胞凋亡比例升高(P0.05);ROS明显升高(P0.05);Western blot结果显示,青蒿琥酯作用后细胞内Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调,Bax/Bcl-2蛋白表达比例升高,cleaved caspase-3和Cyt C蛋白水平升高。Apocynin预处理能降低青蒿琥酯给药组细胞内p47~(phox)和p22~(phox)蛋白表达及ROS的生成。结论:青蒿琥酯能诱导Hep G2细胞凋亡,其凋亡过程可能与ROS的生成增加相关。     

芍药苷减轻布比卡因诱导背根神经节细胞神经毒性的机制研究

目的 基于细胞凋亡和氧化应激途径探讨芍药苷减轻布比卡因（BV）麻醉诱导背根神经节（DRG）原代神经细胞神经毒性的作用。方法 将DRG原代神经细胞随机分成空白对照组、芍药苷组、BV组及芍药苷+BV组。MTT法检测细胞的增殖率;Annexin V-FITC/PI双染色检测细胞凋亡率;Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和活性caspase-3的表达水平;DCFH-DA法检测细胞内活性氧（ROS）水平;ELISA法检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）和丙二醛（MDA）水平。结果 与空白对照组比较,BV组、芍药苷+BV组中DRG原代神经细胞的增殖率、Bcl-2表达及SOD和GPx含量显著降低,而细胞凋亡率、Bax和活性caspase-3表达、平均荧光强度、MDA含量显著升高,差异均有统计学意义（P<0.05）;芍药苷组DRG原代神经细胞的增殖率、凋亡率、Bax、Bcl-2、活性caspase-3表达无显著变化（P>0.05）,但平均荧光强度、MDA含量显著降低,SOD、GPx含量显著升高,差异均有统计学意义（P<0.05）。与...     

红藻氨酸诱导PC12细胞凋亡及阿魏酸对神经元的保护作用

 目的： 探讨阿魏酸(ferulic acid, FA)对红藻氨酸(kainic acid, KA)诱导的PC12细胞凋亡的作用及其机制。方法：采用50 μmol/L KA诱导PC12细胞凋亡建立阿尔茨海默病神经细胞模型,然后将处理后的PC12细胞分为KA模型组和KA＋FA (25、50和100 μmol/L)处理的低、中、高剂量组,同时设立正常对照组。采用MTT比色法检测PC12细胞的存活率;采用免疫细胞化学法观察PC12细胞中凋亡蛋白Bcl-2、Bax和细胞色素C (Cyt C)的表达;annexin Ⅴ+PI双染流式细胞术检测PC12的细胞凋亡率;蛋白免疫印记技术检测PC12细胞中Bcl-2、Bax和Cyt C的表达水平。结果：MTT法和免疫细胞化学检测显示,与正常组相比,模型组PC12细胞的存活率明显下降,且细胞中Bcl-2表达减少(P<0.01),而Bax和Cyt C表达升高,Bcl-2/Bax比值下降(P<0.01),流式细胞术检测细胞的凋亡率显示,模型组细胞的凋亡率显著上升(P<0.01)。蛋白印迹术检测显示,模型组细胞中Bcl-2表达量减少,Bax和Cyt C表达量升高,与正常组比较差异显著(均P<0.01)。当采用FA干预后,与模型组相比,25、50和100 μmol/L组细胞的存活率明显上升,细胞凋亡率减少,而且能增加Bcl-2阳性百分率和表达水平,明显减少Bax和Cyt C阳性百分率和表达水平,使Bcl-2/Bax比值增加 (P<0.05或P<0.01)。结论：KA在50 μmol/L时可明显诱导PC12发生凋亡,FA在25～100 μmol/L时能显著抑制KA诱导的PC12细胞凋亡,其神经保护机制可能是通过抑制Bax和Cyt C的表达,升高Bcl-2表达和Bcl-2/Bax比值,从而阻断内源性细胞凋亡通路而提高神经细胞的存活率。     

脯氨酰异构酶1 沉默抑制缺氧/ 复氧H9c2 心肌细胞凋亡

目的:肽基脯氨酰顺反异构酶1(Pin1)在心血管疾病发病过程中发挥重要作用,本研究检测RNA 干扰沉默Pin1 对缺氧/ 复氧诱导的大鼠胚胎心肌细胞H9c2 凋亡的影响及机制。方法:体外培养大鼠H9c2 细胞,建立缺氧/ 复氧损伤模型,模拟体内缺血再灌注损伤;RT-qPCR 和Western blot 法检测Pin1 的表达;将细胞分为空白对照组、缺氧/ 复氧组、缺氧/ 复氧组+转染Pin1 siRNA 组、缺氧/ 复氧组+转染scramble siRNA 组;MTT 法测H9c2 细胞存活率;用流式细胞术Annexin V/ PI 双染法检测细胞凋亡率;用Western blot 法检测H9c2 细胞Bax 和Bcl-2 蛋白表达;生化法检测Caspase-3 的活性水平。结果:Pin1 在缺氧/ 复氧H9c2 细胞中呈现高表达;转染Pin1 siRNA 后,Pin1 的mRNA 和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);与缺氧/ 复氧组比较,Pin1 siRNA 组的细胞存活率增加,凋亡率降低,Bcl-2 蛋白表达升高,Bax 蛋白表达降低,Bcl-2/ Bax 升高,Caspase-3 活性降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:Pin1 下调可减少缺氧/ 复氧诱导的心肌细胞凋亡,可能是通过上调Bcl-2,下调Bax 蛋白表达,降低Caspase-3 活性而发挥作用。     

薯蓣皂苷元在口腔鳞癌中的抗癌作用研究

目的 探究薯蓣皂苷元对口腔鳞癌 HSC4 细胞生物学行为的影响。 方法 将 HSC4 细胞分为薯蓣 皂苷元 0、 0. 5、 1、 2 μmol / L 4 组, CCK-8、 5-溴-2′-脱氧尿苷 (BrdU) 染色、 克隆形成实验、 流式细胞术、 划痕实验和 Transwell 实验分别检测细胞增殖、 凋亡、 迁移和侵袭, 免疫印迹检测 Bcl-2、 Bax 和 cleaced caspase-3 蛋白表达水平; JC-1 检测线粒体膜电位; H2DCFDA 检测活性氧 (ROS) 产生; 试剂盒检测谷胱 甘肽 (GSH) 和丙二醛 (MDA) 水平。 结果 与薯蓣皂苷元 0 μmol / L 组比较, 薯蓣皂苷元 1 μmol / L 组和 2 μmol / L 组细胞活力、 集落形成能力、 BrdU 阳性细胞率、 迁移和侵袭能力、 线粒体膜电位降低, 细胞凋亡 率升高, Bax 和 cleaced caspase-3 蛋白表达上调, Bcl-2 蛋白表达下调, ROS 和 MDA 水平升高, GSH 水平降 低。 结论 薯蓣皂苷元可抑制 HSC4 细胞的增殖和运动能力, 通过线粒体途径和 ROS 的产生诱导细胞凋亡。     

依达拉奉通过microRNA-25抑制高糖诱导的SH-SY5Y细胞凋亡

目的:探讨依达拉奉通过微小RNA-25(microRNA-25,miR-25)对高糖诱导的人神经母细胞瘤SHSY5Y细胞凋亡的抑制作用及其机制。方法:将SH-SY5Y细胞用含高浓度葡萄糖的DMEM培养基和依达拉奉的联合培养液共同培养24 h。MTT比色法测定SH-SY5Y细胞存活率;DCFH-DA荧光探针法检测SH-SY5Y细胞中活性氧簇(ROS)的水平;采用流式细胞术检测SH-SY5Y细胞的凋亡率;Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达水平;实时定量PCR检测细胞中miR-25的表达水平。为进一步阐明依达拉奉抑制高糖诱导的神经细胞凋亡的作用靶点,我们将miR-25抑制剂应用于细胞,之后采用caspase-3凋亡试剂盒检测细胞的凋亡率。结果:与对照组相比,高糖诱导后细胞存活率明显降低,细胞中的ROS水平和细胞凋亡率明显升高,Bax的表达明显增加,Bcl-2的表达明显降低,miR-25的表达水平也明显降低。给予依达拉奉治疗之后,细胞存活率明显升高,ROS含量和细胞凋亡率明显降低,Bax的蛋白水平明显降低,Bcl-2蛋白水平明显升高,miR-25的表达水平亦明显升高。进一步给予miR-25抑制剂后,caspase-3的水平明显升高,此时同时给予依达拉奉后并不能抑制高糖引起的神经细胞的凋亡。结论:依达拉奉对高糖诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有抑制作用,其作用靶点可能是miR-25。     

紫草素减轻低氧-复氧致大鼠心肌细胞系H9c2损伤

目的探索紫草素对低氧-复氧(H/R)损害的H9c2心肌细胞的保护作用。方法将心肌细胞系H9c2分为对照组、H/R组、紫草素(0.1、1和10μmol/L)干预组,每组3个平行孔;MTT法检测紫草素对H9c2细胞毒性;流式细胞计量术检测细胞凋亡和周期;DCFH-DA检测细胞活性氧水平;生化检测细胞中MDA、8-OHdG和GSH含量;qPCR检测细胞γ-GCS、HO-1和NQO1 mRNA表达;Western blot检测细胞中Bax、Bcl-2、caspase-3、cleaved caspase-3、Keap1和Nrf2蛋白表达;免疫荧光检测细胞Nrf2蛋白进核情况。结果紫草素呈浓度-时间依赖性抑制H9c2细胞增殖(P<0.05);H/R诱导H9c2细胞凋亡、细胞周期阻滞及促进Bax及cleaved caspase-3蛋白表达,抑制Bcl-2蛋白表达(P<0.05),紫草素呈浓度依赖性抑制细胞凋亡、解除细胞周期阻滞及cleaved caspase-3和Bax蛋白表达,增加Bcl-2蛋白表达;紫草素可降低H/R所致活性氧水平、MDA及8-OHdG升高,增高H/R所致GSH含量以及γ-GCS、HO-1和NQO1 mRNA的表达下调,导致Nrf2蛋白的升高及Keap1下调,并促进Nrf2蛋白进核(P<0.05)。结论紫草素减轻低氧-复氧致H9c2心肌细胞的损伤。     

脑源性神经营养因子保护H_2O_2诱导的氧化损伤血管内皮细胞

目的:研究脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)对过氧化氢(H2O2)诱导的氧化损伤血管内皮细胞的保护作用及其作用机制。方法:离体培养人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),建立H2O2致HUVECs氧化损伤模型后,利用不同浓度(1、10和100μg/L)BDNF处理HUVECs,同时设置未损伤对照组、H2O2损伤后PBS处理组和Trk B inhibitor组(同时加入100μg/L BDNF和1∶1 000的Trk B inhibitor)。利用MTT方法检测各组细胞存活率;同时测定各组细胞中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和还原型谷胱甘肽(GSH)水平变化;ELISA方法检测各组细胞分泌一氧化氮(NO)、内皮素1(ET-1)及细胞间黏附分子1(ICAM-1)的浓度变化;流式细胞术检测各组细胞中活性氧簇(ROS)含量及细胞凋亡的变化;Western blot检测各组细胞中Trk B、p-Trk B、cleaved caspase-3、Bcl-2及Bax的蛋白水平。结果:与未损伤组相比,经H2O2氧化损伤后,PBS处理组的HUVECs存活率显著下降,LDH和MDA含量显著上升而SOD和GSH的活性显著下降,细胞中NO分泌功能显著降低而ET-1和ICAM-1的分泌浓度则显著增加,ROS的含量和细胞凋亡率均显著上升,cleaved caspase-3和Bax的蛋白水平显著上升,Bcl-2蛋白表达则显著下降;与PBS处理组相比,不同浓度BDNF处理组中HUVECs的存活率逐渐上升,LDH和MDA含量逐渐下降,而SOD和GSH活性逐渐上升,细胞中的NO分泌量显著上升而ET-1和ICAM-1分泌量逐渐下降;ROS含量和细胞凋亡率则逐渐下降,Trk B和p-Trk B水平均显著上升,cleaved caspase-3和Bax的蛋白水平逐渐下降而Bcl-2蛋白表达逐渐上升,但BDNF的作用均受到Trk B inhibitor的抑制。结论:BDNF能够通过提高HUVECs细胞存活率,增强细胞抗氧化损伤能力,降低ROS产生和细胞凋亡率而保护氧化损伤的血管内皮细胞,并通过其与Trk B结合后激活BDNF-Trk B信号通路发挥作用。     

KLF6基因对THP-1细胞诱导分化的巨噬细胞凋亡的影响

目的:探讨过表达Kruppel样因子6(KLF6)基因对THP-1细胞诱导分化的巨噬细胞活力、凋亡、活性氧簇(ROS)水平及AKT信号通路的影响。方法:使用佛波酯(PMA)将人单核细胞株THP-1诱导分化为巨噬细胞,将巨噬细胞随机分为pcDNA3.1组、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)组、ox-LDL+pcDNA3.1组和ox-LDL+pcDNA3.1-KLF6组,其中pcDNA3.1转染参照Lipofectamine~(TM) 2000试剂盒说明。细胞处理24 h,通过MTT实验、Annexin V-FITC/PI双标细胞凋亡试剂盒和H_2DCF-DA探针分别检测细胞活力、凋亡率和ROS水平的变化;Western blot检测Bcl-2、Bax和p-AKT的蛋白水平。结果:pcDNA3.1-KLF6转染巨噬细胞后,KLF6表达明显升高(P0.05)。ox-LDL可明显抑制巨噬细胞的活力,诱导细胞凋亡,诱导细胞ROS的产生,上调Bax表达,下调Bcl-2和p-AKT的蛋白水平;而过表达KLF6可明显减弱ox-LDL对细胞活力、凋亡、ROS水平及Bcl-2、Bax和p-AKT蛋白水平的影响(P0.05)。结论:KLF6基因可明显降低ox-LDL诱导的巨噬细胞凋亡,机制可能与降低细胞ROS水平及激活AKT信号通路有关。     

芒果苷对H_2O_2诱导的BRL细胞氧化损伤的保护作用

目的探讨芒果苷对过氧化氢诱导的正常大鼠肝BRL细胞氧化损伤的保护作用。方法选取正常大鼠肝细胞株BRL,通过过氧化氢诱导法制备细胞氧化损伤模型,实验设对照组、H_2O_2组、芒果苷组。HE染色、台盼蓝染色观察细胞形态变化和存活率变化;比色法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量;Western blot检测细胞中Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达变化。结果对照组BRL细胞贴壁生长良好,排列紧密。H_2O_2诱导后细胞形态不规则,胞膜皱缩,贴壁能力下降;细胞存活率降低;抗氧化酶SOD、GSH-Px活性降低,MDA含量升高(P0.05);Bax和Caspase-3蛋白表达升高(P0.05)、Bcl-2蛋白表达降低(P0.05)。与H_2O_2组相比,芒果苷可显著改善H_2O_2引起的细胞形态变化,提高细胞存活率;提高SOD、GSH-Px活性,降低MDA含量(P0.05);抑制Bax和Caspase-3蛋白表达(P0.05),上调Bcl-2蛋白表达(P0.05)。结论芒果苷对BRL细胞氧化损伤具有保护作用,其作用机制可能与其提高细胞清除氧自由基能力和抑制细胞凋亡有关。     

Ⅰ型星形胶质细胞条件培养液抑制H2O2诱导PC12细胞凋亡机制

目的: 探讨Ⅰ型星形胶质细胞条件培养液(ACM-1)对H2O2诱导PC12细胞凋亡的抑制作用与硫氧还蛋白(Trx)表达的关系.方法: 采用MTT法检测ACM-1预处理H2O2诱导PC12细胞的活力.流式细胞术,Real time-PCR法及免疫印迹法分别检测细胞凋亡率,Trx-1和Trx-2mRNA的变化及Trx和Bcl-2蛋白水平的变化.结果: 20%浓度的ACM-1能提高H2O2诱导PC12细胞的活力,细胞凋亡率下降,Trx-1的mRNA量升高,Trx和Bcl-2的蛋白量增加.结论: ACM-1对H2O2诱导PC12细胞凋亡的抑制作用可能是通过Trx上调介导的,而Trx的抗凋亡作用和Bcl-2的上调有关.     

lncRNA MALAT1调控miR-487a-3p抑制H_(2)O_(2)诱导的神经细胞凋亡和炎症反应及其机制研究北大核心CSCD

目的:研究lncRNA MALAT1(MALAT1)调控miR-487a-3p对H_(2)O_(2)刺激神经细胞凋亡和炎症反应的影响,并探讨其作用机制。方法:采用qRT-PCR检测H_(2)O_(2)处理PC12细胞后MALAT1和miR-487a-3p相对表达量,流式细胞术测定凋亡率,Western blot测定Bcl-2、Bax蛋白表达水平,ELISA检测TNF-α、IL-6和IL-1β表达水平,在线数据库和双荧光素酶报告实验验证MALAT1和miR-487a-3p靶向关系。结果:H_(2)O_(2)处理PC12细胞后,MALAT1表达水平升高,miR-487a-3p表达水平降低;H_(2)O_(2)处理PC12细胞明显增加细胞凋亡率、Bax蛋白表达、TNF-α、IL-6和IL-1β表达,降低Bcl-2蛋白表达;抑制MALAT1或过表达miR-487a-3p可抑制PC12神经细胞凋亡水平和炎症反应;在线数据库和双荧光素酶报告实验验证MALAT1可靶向调控miR-487a-3p的表达,抑制miR-487a-3p可逆转抑制MALAT1对抑制H_(2)O_(2)诱导PC12神经细胞的凋亡和炎症反应。结论:MALAT1通过靶向调控miR-487a-3p以减缓H_(2)O_(2)诱导的神经细胞凋亡和炎症反应。     

巨噬细胞迁移抑制因子对氧糖剥夺/复氧PC12细胞的作用

目的:研究巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)条件下PC12细胞的保护作用及其机制。方法:将PC12细胞分为对照组(control)、氧糖剥夺/复氧组(OGD/R)、MIF处理组(MIF)、ISO-1处理组(ISO-1)和MIF联合MIF抑制剂ISO-1处理组(ISO-1+MIF)。利用无糖无血清培养液及低氧处理PC12细胞建立OGD/R诱导的神经元损伤模型,利用CCK-8试剂盒检测细胞活力,利用DCFH-DA探针检测胞内ROS水平;利用乳酸测试盒检测细胞培养上清中的乳酸水平;real time RT-PCR检测细胞中Bax,Bcl-2和葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)mRNA的表达;Western Blot检测细胞中Bax,Bcl-2,GLUT1,乳酸脱氢酶A(LDHA)和M2型丙酮酸激酶(PKM2)蛋白的表达;免疫荧光染色检测细胞中凋亡相关蛋白caspase-3,Bax和Bcl-2的表达变化。结果:与control组相比,OGD/R组细胞活性降低,凋亡增加。同时,OGD/R降低了葡萄糖代谢相关蛋白GLUT1,PKM2和LDHA的表达,降低了乳酸的形成量并增加了ROS生成。MIF的给药促进了OGD/R下PC12细胞的活力并抑制其凋亡,增加了GLUT1,PKM2和LDHA蛋白表达以及乳酸含量,并且降低了ROS水平。相反,ISO-1可以抑制MIF对PC12细胞的保护作用。结论:MIF通过发挥抗凋亡、抗氧化应激和增加葡萄糖代谢对PC12细胞发挥保护作用。