核酸基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术在结核病和非结核分枝杆菌病诊断中的临床应用专家共识

核酸基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)技术在结核病与非结核分枝杆菌病病原学和耐药性诊断中的应用越来越多，为早期诊断、鉴别诊断和耐药鉴定提供了快速、准确的依据。然而，在实际应用中，临床医生对标本的选择、留取、送检时机及注意事项、报告结果的解读等的理解和掌握参差不齐，尚需规范化。本共识总结了核酸MALDI-TOF MS检测技术应用于结核病和非结核分枝杆菌病诊断的临床适应证和标本采集注意事项，介绍了如何正确解读核酸MALDI-TOF MS技术鉴定分枝杆菌菌种和耐药性的报告结果，以进一步规范核酸MALDI-TOF MS技术在结核病和非结核分枝杆菌病诊断中的临床应用，提高临床诊断水平，指导临床开展早期精准有效的治疗。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在结核病领域的应用进展

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)具有高通量、高速度、自动化等优点,成为生物大分子研究的重要工具。其在临床研究领域取得显著进展,在结核病研究领域的作用也日益凸显。作者主要介绍了MALDI-TOF MS在分枝杆菌菌种鉴定、结核病耐药性研究、结核病血清标志物的筛选、结核病易感基因多态性检测和抗结核药物代谢研究方面的应用进展,以加强对MALDI-TOF MS在结核病研究领域的认识。     

结核分枝杆菌Rv1048c基因异源表达菌株的构建及其对小鼠巨噬细胞存活率的影响研究

目的 对结核分枝杆菌H37Rv菌株中功能未知基因Rv1048c进行生物信息学分析，构建重组表达菌株MS＿Rv1048c,并研究其对小鼠巨噬细胞存活率的影响。方法 软件在线分析Rv1048c的氨基酸序列及其编码蛋白的基本性质，利用PCR扩增Rv1048c目的片段，构建重组质粒pMV261-Rv1048c,转入耻垢分枝杆菌，构建重组菌株MS＿Rv1048c与空载菌MS＿vec。分析该基因对菌株生长的影响；通过CCK-8、总胆固醇测定和油红(O)染色的方法，初步探究重组菌株感染巨噬细胞后对其活性的影响。结果 Rv1048c基因全长1 116 bp,蛋白由371个氨基酸构成，分子式是C₁₇₇₈H₂₈₂₁N₅₂₁O₅₂₅S₁₀,预测该蛋白是一种定位在细胞外的含有多个磷酸化位点的、不稳定的亲水性蛋白。本试验首次成功构建未知基因Rv1048c的异源表达载体，生长曲线测定发现该基因使菌株生长缓慢，细胞实验发现基因增强了重组菌株对细胞的侵袭能力。结论 Rv1048c可能具有结核分枝杆菌独有的生长...     

未分类分枝杆菌(文献綜述)

一、定义在人体內可能发現的各种分枝杆菌,除人型、牛型和鳥型分枝杆菌外,統称为未分类分枝杆菌(unclassified mycobacteria)。未分类分枝杆菌尚有很多其他名称,例如: 1.非典型分枝杆菌(atypical mycobacteria); 2.非典型抗酸性杆菌(atypical acid—fast     

对硝基苯甲酸鉴别结核分枝杆菌复合群与非结核分枝杆菌的机制研究

目的研究对硝基苯甲酸(PNB)鉴别结核分枝杆菌复合群(MTC)与非结核分枝杆菌(NTM)的机制。方法应用高压液相色谱(HPLC)和液相色谱串联质谱法(LC/MS/MS)鉴定5株MTC标准株和33株NTM标准株的PNB代谢产物。结果 33株NTM标准株均可将PNB还原为对氨基苯甲酸(PABA),而5株MTC标准株则不具备该能力。结论 PABA是PNB的代谢产物之一。NTM能将PNB还原为细菌可利用的PABA,因此能够耐受PNB;MTC不具备该能力,因而不能耐受PNB。这可能就是PNB选择性培养基用于鉴别MTC与NTM的机制。     

结核杆菌的微生物学

“结核杆菌”一词广义而言包括任何一种能在适宜宿主体内引起结核病的细菌。而本文只讨论四种:结核分枝杆菌(M.tuberculosis)、牛分枝杆菌(M.bovis)、微小分枝杆菌(M.microti)和非洲分枝杆菌(M.africanum)。许多证据提示这四种仅代表一个种的亚种即生物变种(Biovars)或病理变种(Pathovars)。有些兽医研究者认为鸟分枝杆菌(M.avium)是一种结核杆菌,但根据分类学和种系发生来看,它与“非典型”分枝杆菌,如细胞内分枝杆菌(M.intracellulare)和瘰疠分枝杆菌(M.scrofulaceum)关系更密切。为避免混淆,谈及本文讨论的那四种时,用“结核复合组”(Tuberculosis Complex)一词。     

RNA恒温扩增联合熔解曲线分析鉴定胞内分枝杆菌的应用研究

目的建立RNA恒温扩增联合熔解曲线分析技术（RIARD-MCA）鉴定胞内分枝杆菌的方法,评估其应用效果。方法以胞内分枝杆菌的16S rRNA的特异序列为检测靶标设计RNA探针和带有T7启动子的逆转录扩增引物,42℃恒温扩增实时检测后进行熔解曲线分析,对21种分枝杆菌标准株、5种非分枝杆菌和229株分枝杆菌临床分离株进行鉴别检测;同时以16S rRNA及hsp65基因PCR测序结果为金标准对照。结果RIARD-MCA在21种分枝杆菌标准株及5种非分枝杆菌检测中只有胞内分枝杆菌阳性,其他阴性,与测序结果一致;在分枝杆菌临床分离株检测中,鉴定胞内分枝杆菌63株,其余为非胞内分枝杆菌,PCR测序为胞内分枝杆菌63株,其余166株为非胞内分枝杆菌,其灵敏度为100%（63／63）,特异度为100％（166／166）。结论RIARD-MCA鉴定胞内分枝杆菌具有较高的灵敏度、特异度和准确性,且检测快速,有望作为一种新的胞内分枝杆菌临床分离株鉴定方法。     

巨噬细胞与结核分枝杆菌的免疫反应的研究进展

巨噬细胞是结核分枝杆菌在机体内的主要宿主细胞.细胞介导的免疫反应是机体抗结核分枝杆菌的主要免疫保护机制,巨噬细胞可通过吞噬、溶酶体融合,提呈结核分枝杆菌抗原,产生多种细胞因子、反应氧中间产物和反应氮中间产物,以及细胞凋亡等多种途径来杀灭结核分枝杆菌;同时,结核分枝杆菌也可采取各种方式来逃逸巨噬细胞的免疫作用.本文就巨噬细胞与结核分枝杆菌的免疫反应的研究进展作一综述.     

巨噬细胞与结核分枝杆菌的免疫反应的研究进展

巨噬细胞是结核分枝杆菌在机体内的主要宿主细胞.细胞介导的免疫反应是机体抗结核分枝杆菌的主要免疫保护机制,巨噬细胞可通过吞噬、溶酶体融合,提呈结核分枝杆菌抗原,产生多种细胞因子、反应氧中间产物和反应氮中间产物,以及细胞凋亡等多种途径来杀灭结核分枝杆菌;同时,结核分枝杆菌也可采取各种方式来逃逸巨噬细胞的免疫作用.本文就巨噬细胞与结核分枝杆菌的免疫反应的研究进展作一综述.     

巨噬细胞与结核分枝杆菌的免疫反应的研究进展

巨噬细胞是结核分枝杆菌在机体内的主要宿主细胞.细胞介导的免疫反应是机体抗结核分枝杆菌的主要免疫保护机制,巨噬细胞可通过吞噬、溶酶体融合,提呈结核分枝杆菌抗原,产生多种细胞因子、反应氧中间产物和反应氮中间产物,以及细胞凋亡等多种途径来杀灭结核分枝杆菌;同时,结核分枝杆菌也可采取各种方式来逃逸巨噬细胞的免疫作用.本文就巨噬细胞与结核分枝杆菌的免疫反应的研究进展作一综述.     

RNA恒温扩增实时检测技术快速鉴定偶发分枝杆菌的研究

目的建立RNA恒温扩增实时检测技术快速鉴定偶发分枝杆菌(RIARD-MF)的方法,评估其在鉴定分枝杆菌临床分离株中的应用效果。方法将偶发分枝杆菌的16SrRNA特异序列作为目的靶标进行检测,设计含T7启动子逆转录扩增引物和RNA探针,分别对5种非分枝杆菌细菌、20种分枝杆菌标准株和259株临床分枝杆菌分离株进行42℃恒温扩增实时检测,参考标准为PCR基因测序结果。结果RIARD-MF方法学检测灵敏度可达60CFU/mL。在25种细菌的RIARD-MF特异性检测中:只有偶发分枝杆菌检测结果为阳性,其余24种细菌均为阴性,与测序检测结果一致。在检测分枝杆菌临床分离菌株时,RIARD-MF鉴定偶发分枝杆菌5株,其余为非偶发分枝杆菌,与测序结果一致,检测灵敏度和特异度均为100%。结论 RIARD-MF鉴定偶发分枝杆菌具有较高的特异度、灵敏度和准确性,且检测快速,有望成为一种新的偶发分枝杆菌临床分离菌株鉴定方法。     

日内瓦分枝杆菌病

日内瓦分枝杆菌是一种新发现的致病性非结核分枝杆菌,可引起日内瓦分枝杆菌病,它有6个特点。 1 20世纪末代发现的最有致病性的非结核分枝杆菌(NTM) 日内瓦分枝杆菌M.genavense是由Hirschel于1990年首次报告,其命名如同1976年在美国莱姆镇首次发现一种由色柔螺旋体所致的病而命名为莱姆病一样,更为1993年在爱尔兰发现的NTM而命名为爱尔兰分枝杆菌毫无二致。 2 日内瓦分枝杆菌病总是合并于艾滋病 NTM主要引起机会性感染,它可寄殖于人体肺     

非典型分枝杆菌病诊断治疗的新进展

【发病率】非典一型分枝杆菌是与结核杆菌和麻风分枝杆菌不同的分枝杆菌,是指除引起结核病与麻风病以外的分枝杆菌。虽然其在自然界随处都有,只是偶而由那些非结核分枝杆菌所引起的类似结核病的疾病。本病在美国,澳大利亚和日本等国某些地区较常发生;在中欧则仍少见。由于本病除鸟型外为非法定报告病例,因此在西德的发病情况仍不清。从表1、2中可以看到,在西德1,000例结核病者中有4～24例非典型分枝杆菌     

应用rpoB基因PCR反向斑点杂交快速鉴定分枝杆菌菌种的研究

目的根据分枝杆菌rpoB基因序列建立一种准确、快速的分枝杆菌菌种鉴定方法。方法以分枝杆菌rpoB基因编码序列为靶基因,用聚合酶链反应(PCR)反向斑点杂交技术检测24种分枝杆菌标准株、8种非分枝杆菌标准株、37株分枝杆菌临床分离株。结果分枝杆菌与非分枝杆菌标准株经PCR扩增后,分枝杆菌标准株均扩增出360 bpDNA片段,非分枝杆菌除甲型溶血性链球菌和假白喉棒状杆菌出现同样片段外,其它菌种均未见扩增。敏感性试验可检测出1 pg结核分枝杆菌DNA。探针特异性试验表明,21种寡核苷酸探针除海分枝杆菌与偶然分枝杆菌的探针有交叉杂交,其余均为特异性杂交。应用该方法对37株分枝杆菌临床分离株进行鉴定,结果与常规方法鉴定结果相符。结论应用rpoB基因序列和PCR反向斑点杂交技术鉴定分枝杆菌菌种快速、准确,具有较高的应有价值。     

应用DNA微阵列技术快速鉴定分枝杆菌菌种

目的利用DNA微阵列的高通量、高效性,建立一种快速、简便的分枝杆菌分子菌种鉴定方法,为临床医师正确诊断提供依据。方法以DNA直接测序法为对照,通过PCR-SSCP和DNA微阵列技术分析28种分枝杆菌标准菌株、9种非分枝杆菌和465株分枝杆菌临床分离株的菌种。结果应用DNA微阵列技术分析28种分枝杆菌标准菌株和9种非分枝杆菌菌株,特异性100％。465株分枝杆菌临床分离株中,经16S rRNA PCR-SSCP初步菌种鉴定,256株为结核分枝杆菌复合群,应用DNA微阵列分析,显示与分枝杆菌属探针M和结核分枝杆菌复合群探针a杂交阳性,两种鉴定方法结果一致;209株PCR-SSCP初步鉴定为非结核分枝杆菌的分离株,经芯片分析,68株为龟分枝杆菌龟亚种和脓肿亚种,46株为胞内分枝杆菌,34株为堪萨斯、瘰疬、胃和猿猴分枝杆菌复合群,31株为偶然分枝杆菌,16株为戈登分枝杆菌,3株为鸟分枝杆菌,2株为海和溃疡分枝杆菌复合群,1株为土分枝杆菌, 1株为迪氏分枝杆菌,1株为草分枝杆菌;另6株只与探针M杂交,经测序显示5株为胞内分枝杆菌,但其基因序列与标准菌株不完全相同,1株为新金色分枝杆菌,芯片上无鉴定该菌种的探针。结论用DNA微阵列可简便、快速、灵敏、特异地将大多数分枝杆菌鉴定到种,提高分枝杆菌病的正确诊断率,指导临床合理治疗。     

非结核分枝杆菌肺病的影像学表现

非结核分枝杆菌(nontuberculous mycobacteria,NTM)也称非典型分枝杆菌,是一组可侵犯颈淋巴结、皮肤、软组织和肺的细菌。目前,由分枝杆菌属引起的肺部感染的发病率正在增加。NTM代表了分枝杆菌感染中的一个重要组成部     

牛型分枝杆菌卡介苗的独特抗原

MPB_(70)是由Nagai等从牛型分枝杆菌卡介苗(BCG)培养物滤液中提纯的一种不含任何糖类的蛋白质,在皮肤试验中它是BCG特异性抗原,即加热致死的结核分枝杆菌H_(37)Rv,堪萨斯分枝杆菌、胞内分枝杆菌、草分枝杆菌和BCG致敏的豚鼠中,MPB_(70)只在BCG致敏的豚鼠,才引起迟发型皮肤反应。 MPB_(70)是由东京株卡介苗活菌产生并释放至苏     

结核分枝杆菌基因编辑的研究进展

结核分枝杆菌是结核病的病原菌,利用基因编辑技术研究结核分枝杆菌未知基因功能,对于发现新的抗结核药物靶标、改进卡介苗或开发新疫苗具有重要的研究意义。本文就基因编辑技术在结核分枝杆菌研究中的应用作一综述。     

应用rpoB基因PCR反向斑点杂交快速鉴定分枝杆菌菌种的研究

目的 根据分枝杆菌rpoB基因序列建立一种准确、快速的分枝杆菌菌种鉴定方法.方法以分枝杆菌rpoB基因编码序列为靶基因,用聚合酶链反应(PCR)反向斑点杂交技术检测24种分枝杆菌标准株、8种非分枝杆菌标准株、37株分枝杆菌临床分离株.结果 分枝杆菌与非分枝杆菌标准株经PCR扩增后,分枝杆菌标准株均扩增出360 bpDNA片段,非分枝杆菌除甲型溶血性链球菌和假白喉棒状杆菌出现同样片段外,其它菌种均未见扩增.敏感性试验可检测出1 pg结核分枝杆菌DNA.探针特异性试验表明,21种寡核苷酸探针除海分枝杆菌与偶然分枝杆菌的探针有交叉杂交,其余均为特异性杂交.应用该方法对37株分枝杆菌临床分离株进行鉴定,结果与常规方法鉴定结果相符.结论 应用rpoB基因序列和PCR反向斑点杂交技术鉴定分枝杆菌菌种快速、准确,具有较高的应有价值.     

非结核分枝杆菌与疾病

根据可靠的报导至少有40种分枝杆菌(其中17种能传染人。除去结核菌(结核分枝杆菌,牛型分枝杆菌,非洲人分枝杆菌)和麻疯分枝杆菌外还有13种过去称为不知名的,非典型的,结核菌外的(MOTT)或投机者的分枝杆菌。这些名称都不太合适,因而非结核分枝杆菌这一名称逐渐得到了承认。这些微生物大多存在于周围环境之中。堪萨斯分枝杆菌(My co.Kansii)已从家庭和医院供水中分离出来。牛型分枝杆菌,细胞内分枝杆菌和淋巴结核分枝杆菌(MAIS复合体)就象偶然分枝杆菌和其它迅速生长类型的分枝杆菌一样存在于土城和水中。蛙型分枝杆菌(Myco.xenopi)是化验室