单侧隐睾大鼠对侧睾丸的损害与Bcl-2和Bax基因表达

目的:探讨单侧隐睾大鼠对侧睾丸生精细胞凋亡与Bcl-2/Bax基因表达的关系。方法:20只健康SD雄性大鼠(22日龄)随机分成隐睾组和对照组,每组10只。通过手术建立单侧隐睾动物模型。术后90 d取对侧睾丸,采用原位缺口末端标记(TUNEL)法检测生精细胞凋亡,免疫组化SP法检测Bcl-2/Bax基因表达。结果:与对照组相比,隐睾组对侧睾丸生精细胞凋亡显著增多(P<0.01),重量显著减轻(P<0.01),Bax表达显著升高(P<0.01),Bcl-2表达显著降低(P<0.01)。凋亡细胞主要是初级精母细胞和圆形精子细胞。结论:单侧隐睾大鼠对侧睾丸的生精细胞凋亡增多与Bcl-2基因表达降低、Bax基因表达升高密切相关。细胞内Bc l-2/Bax比值是影响生精细胞凋亡的重要因素之一。     

腹股沟区皮下埋藏睾丸对生精细胞凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响

目的:通过观察腹股沟区皮下埋藏睾丸生精细胞的凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达,探讨二者的关系。方法:以健康育龄期36只雄性新西兰大白兔为实验动物,随机分成实验组18只、对照组18只。实验组动物将双侧睾丸分别移位埋藏至双侧腹股沟区皮下,以制备睾丸埋藏修复阴囊皮肤缺损模型;对照组未作处理。动物模型建立后第8周末,每组随机取6只大白兔测量睾丸表面温度后进行睾丸活检。睾丸组织行原位末端标记(TUNEL)法检测生精细胞凋亡、免疫组化法结合图像分析仪检测睾丸生精细胞Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果:对照组的睾丸表面温度为(36.15±0.64)℃,实验组为(38.02±0.36)℃,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。模型建立后第8周末实验组睾丸生精小管中生精细胞的凋亡指数(AI)为(89.69士3.76)%,对照组为(7.73±4.95)%,两者比较有显著差异(P<0.05)。实验组Bax表达显著升高(P<0.05),Bcl-2表达显著降低(P<0.05),凋亡细胞主要为初级精母细胞和圆形精子细胞。结论:腹股沟区皮下埋藏睾丸局部温度升高诱导睾丸的生精细胞凋亡增加,生精细胞凋亡增加与Bcl-2蛋白表达降低、Bax蛋白表达升高密切相关。Bcl-2/Bax的改变是高温引起生精细胞凋亡的机制之一。     

己烯雌酚摄入对大鼠生精细胞凋亡及Bax和Bcl-2蛋白表达的影响

目的研究青春期己烯雌酚(diethylstilbestrol,DES)摄入对SD(Sprague-Dawley)大鼠性成熟后睾丸生精细胞凋亡的影响,并初步探讨其机制。方法30只35d龄雄性SD大鼠,随机分为DES 0.01、0.1、1.0、10.0μg/kg·d~(-1)4个实验组和1个对照组(编码为BDa、BDb、BDc、BDd和BC组,每组n=6)。于青春期[出生后第36天(postnatal day 36,PND 36)至49d(PND 49)],实验组每日皮下注射相应剂量的DES,对照组仅注射溶媒。于大鼠性成熟后(PND 64)处死各组大鼠切取双侧睾丸,采用TUNEL法检测大鼠睾丸生精细胞凋亡,用免疫组化方法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax在生精细胞中的表达。结果与对照组相比,BDa组大鼠性成熟后生精细胞凋亡无明显变化,BDb、BDc和BDd 3组生精细胞凋亡增加,且随DES摄入剂量增加而有增加趋势。BC、BDa组生精细胞Bax相对弱表达而Bcl-2强表达,伴随DES摄入剂量增加,Bax表达逐渐增强而Bcl-2表达逐渐减弱,BDd组Bax强表达而Bcl-2弱表达。结论青春期较大剂量DES摄入可使大鼠性成熟后睾丸生精细胞凋亡增加,且随DES摄入剂量增加而有加强趋势。凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2参与青春期DES摄入所致的生精细胞凋亡过程。     

低氧对大鼠睾丸生殖细胞凋亡的影响

目的:研究低氧对大鼠睾丸生殖细胞凋亡和Bax、Bcl-2表达的影响。方法:雄性成年Wistar大鼠随机分为4组:常氧对照组、低氧5 d组、低氧15 d组和低氧30 d组(各组n=6)。常氧对照组在平原喂养;低氧5 d组、15 d组和30 d组分别在低压舱内模拟5 000 m高原喂养5、15、30 d。采用流式细胞术和TUNEL法检测低氧对睾丸生殖细胞凋亡的影响。运用Western印迹技术检测低氧对大鼠睾丸内凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达的影响。结果:低氧5 d组、15 d组和30 d组睾丸内发生生殖细胞凋亡的生精小管数量[每100个生精小管中,含有凋亡生殖细胞的生精小管数分别为(20.50±5.07)、(21.25±7.85)、(14.00±2.45)个]均非常显著地高于常氧对照组[(6.00±2.16)个,P<0.01]。凋亡的生殖细胞以精原和精母细胞为主。低氧15 d组睾丸组织亚单倍体细胞百分率[(2.18±0.82)%]显著高于常氧对照组[(1.30±0.33)%,P<0.05],低氧30 d组[(3.08±0.93)%]极显著高于常氧对照组(P<0.01)。低氧30 d组睾丸组织Bax表达显著高于常氧对照组(P<0.05),其灰度值分别为17.34±4.54和10.50±2.82。低氧30 d组睾丸组织Bax/Bcl-2比值显著高于常氧对照组(P<0.01),比值分别为0.40±0.10和0.27±0.04。结论:低氧诱导大鼠睾丸生殖细胞凋亡增多,慢性低氧引起的睾丸生殖细胞凋亡增多与Bax表达增加有关。     

五子衍宗丸对实验性少弱精子症大鼠的保护作用与机制研究

目的:观察五子衍宗丸对实验性少弱精子症大鼠的保护作用与机制研究。方法:取60只雄性SD大鼠,随机分成正常组、模型组、阳性药组(生精胶囊1.6 g/kg),五子衍宗丸低、中、高剂量组(1、2、4 g/kg),除正常组外,其他各组灌服雷公藤多苷30 mg/(kg·d),连续6周,建立少弱精子症模型。从造模的第3周开始,各组按剂量灌胃给药,连续给药4周后计算睾丸和附睾脏器指数,检测附睾精子质量、精子凋亡率、精子线粒体通透性转换孔(MPTP)开放情况,HE染色观察大鼠睾丸病理组织学改变,Hochest染色观察大鼠睾丸细胞凋亡情况。结果:五子衍宗丸能提高少弱精子症大鼠睾丸和附睾脏器指数,增加附睾精子浓度、精子活力和精子活率,降低精子凋亡率,抑制MPTP异常开放;HE染色显示五子衍宗丸能增加少弱精子症大鼠睾丸生精小管内各级生精细胞层次和数量,Hochest染色显示五子衍宗丸明显抑制睾丸生精小管内生精细胞凋亡。结论:五子衍宗丸能明显提高少弱精子症大鼠精子质量,降低少弱精子症模型大鼠的各级生精细胞(包括精子)凋亡率,其机制可能与抑制大鼠精子线粒体MPTP开放有关。     

铅致大鼠睾丸细胞凋亡的实验研究及临床意义

目的探讨铅致大鼠睾丸生精细胞凋亡及其机制。方法40只成年雄性Wistar大鼠随机均分为4组:对照组,低、中、高剂量实验组。实验组分别腹腔注射醋酸铅5、10、20mg/kg体重,对照组注射等体积生理盐水,3周后手术取睾丸,用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记(Tunel法)及免疫组化技术检测睾丸组织生精细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果3周后,中、高剂量组细胞凋亡及Bax基因表达较对照组差异有显著性(P<0.01),低剂量组较对照组无显著性。3个实验组的Bcl-2基因表达较对照组差异有显著性,且各组间亦有显著性(P<0.01)。结论铅负荷至一定程度时可致大鼠生精细胞凋亡,且呈一定量效关系,这种作用可能与Bcl-2基因低表达和Bax基因高表达有关。     

抗肿瘤药物环磷酰胺对大鼠睾丸和精原干细胞相关因子表达的影响分析

目的 探讨抗肿瘤药物环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)对雄性大鼠睾丸、精原干细胞及相关因子八聚体结核转录因子4(OCT-4)、胶质细胞源神经营养因子(glial cell line derived neurotrophic factor,GDNF)表达的影响.方法 选取16只8周龄Wister雄性大鼠采用随机数字表法分为CTX组和对照组各8只,CTX组采取连续3d腹腔注射CTX(50 mg/kg),对照组采取等量生理盐水,对比两组大鼠给药后1、2、4周的精子细胞凋亡数及S期细胞所占比例的变化;对比两组大鼠给药4周后的睾丸、附睾重量、生精小管直径差异;采用免疫组化染色检测两组睾丸OCT-4、GDNF蛋白的表达情况.结果 CTX组大鼠在给药后1、2、4周的生精细胞凋亡数均显著的高于同期的对照组(P＜0.05);CTX组大鼠在给药后1、2、4周的生精细胞S期所占细胞比例均显著的低于同期的对照组(P＜0.05);CTX组大鼠在给药4周的睾丸、附睾重量显著地低于同期的对照组(P＜0.05);两组大鼠的生精小管直径差异无统计学意义(P＞0.05);CTX组大鼠睾丸组织中GDNF蛋白阳性表达显著地低于对照组大鼠(P＜0.05);两组大鼠的OCT-4蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 CTX具有诱导精原细胞凋亡的作用,干扰精原细胞增殖分化功能,可能与下调睾丸组织中GDNF有关.     

多菌灵对大鼠睾丸发育和生精功能影响的研究

目的:探讨多菌灵对雄性大鼠睾丸发育和生精功能的影响及其作用机制。方法:40只清洁级未成年Wistar雄性大鼠随机分为4组(对照组,低、中、高剂量组,每组10只),低、中、高剂量组经口灌胃不同浓度的多菌灵溶液(分别为20、100、200mg/kg体重),对照组给予吐温80溶液,1次/d,连续80d。染毒结束后,立即取睾丸和附睾,观察其形态。测定各组大鼠体重及右侧睾丸和附睾重量;取左侧附睾尾测定精子活率和精子数量;采用HE染色法、原位末端标记法(TUNEL)及免疫组化SABC法观察大鼠睾丸组织的病理学变化、细胞凋亡和Bcl-2/Bax表达情况。结果:中、高剂量组大鼠睾丸和附睾均明显萎缩、右侧睾丸和附睾重量减轻,左侧附睾尾精子活率和精子数量均低于对照组(P<0.01);中、高剂量组睾丸组织病理学检查可见明显异常;随多菌灵染毒浓度的增加,各剂量组生精细胞凋亡率逐渐升高,Bcl-2表达下降,Bax表达升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:多菌灵可影响雄性大鼠的睾丸发育和生精功能,可能与下调Bcl-2和上调Bax致细胞凋亡增加有关。     

LM23基因沉默引起大鼠睾丸生精细胞凋亡

目的 研究LM23基因敲低后生精细胞的凋亡状况及与凋亡相关基因表达改变.方法 用TUNEL方法检测睾丸细胞的凋亡情况,用大鼠全基因组表达谱芯片检测LM23基因敲低后凋亡相关基因的表达改变.结果 TUNEL结果显示,LM23基因敲低侧大鼠睾丸生精小管内大量生精细胞发生凋亡.大鼠全基因组表达谱芯片分析结果显示,许多促凋亡基因如Bcl-2家族的促凋亡基因表达上调,而抗凋亡基因如Faf1和Zfp91基因的表达明显下调.结论 敲低大鼠的LM23基因,启动了Bcl-2家族介导的线粒体凋亡途径,引发了生精细胞发生大量凋亡.     

补肾生精方促进少弱精症大鼠精子发生的作用机制研究

目的：研究补肾生精方对腺嘌呤诱导的少弱精症大鼠精子发生的作用机制。方法：采用腺嘌呤灌胃诱导SD大鼠制备少弱精症大鼠模型,将48只SD大鼠随机分为空白组、模型组、五子衍宗丸组（1 g/kg）和补肾生精方高、中、低剂量组（2.8 g/kg、1.4 g/kg、0.7 g/kg）,给药3周。干预结束后采用放射免疫法测定血清睾酮水平;利用计算机辅助精子分析系统评估精子密度、活动力;苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠睾丸组织病理形态学改变;免疫组织化学（IHC）检测大鼠睾丸组织支持细胞中波形蛋白表达水平。结果：与模型组相比,给药组的大鼠睾丸病理损伤有所改善,睾丸组织部分生精小管增厚,细胞排列紧密,部分管腔缩小,生精细胞和精子数量增加。与模型组相比,五子衍宗丸组及补肾生精方各剂量组血清睾酮水平均上调（P<0.05）,其中,五子衍宗丸组、补肾生精方高剂量组上升明显（P<0.05）,差异有统计学意义。与模型组相比,给药后大鼠精子质量有所改善,精子活动力差异有统计学意义（P<0.05）,同时,补肾生精方高剂量组在改善精子密度方面优于模型组（P<0.05）;补肾生精方高剂量组在改善精子...     

益肾饮合雷公藤多苷对系膜增生性肾小球肾炎大鼠TNF-α和IL-6蛋白表达的影响

目的：探讨益肾饮合雷公藤多苷对大鼠系膜增生性肾小球肾炎中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6）蛋白表达的影响。方法：实验大鼠随机分为空白对照组、模型组、雷公藤多苷组、益肾饮组、雷公藤多苷加益肾饮组。制备大鼠系膜增生性肾小球肾炎模型;以雷公藤多苷和益肾饮灌胃;观察各组肾脏病理变化;免疫组织化学检测各组大鼠肾脏组织中TNF-α和IL-6蛋白表达。结果：模型组大鼠肾脏系膜细胞增生明显,系膜组织中TNF-α和IL-6蛋白表达明显升高。用益肾饮和雷公藤多苷各自治疗和合用治疗大鼠系膜增生性肾小球肾炎后肾脏系膜细胞增生均减轻,系膜组织中TNF-α和IL-6的蛋白表达均下降,合用后效果更为明显。结论：益肾饮联合雷公藤多苷能有效地降低系膜组织中TNF-α和IL-6的蛋白表达,减轻系膜细胞的增生。     

大鼠肾炎灵片长期毒性试验及对雄性性腺功能的影响

目的:中药益肾清利复方肾炎灵片是雷公藤、生黄芪等复方配伍剂,既对肾小球疾病有确切临床疗效,又减轻了雷公藤的不良反应。按照《新药(西药)临床前毒理学研究指导原则》的规范,研究中药肾炎灵片对大鼠长期毒性,及对雄性性腺功能的影响。方法:根据临床治疗剂量和急性毒性试验结果,设定了肾炎灵低剂量(1.25g/kg体重)、中剂量(2.50g/kg体重)、高剂量(5.00g/kg体重)和对照组,每组20只,雌雄各半,给予大鼠连续灌服肾炎灵干粉3个月,进行规范化的长期毒性试验,同时观察肾炎灵对血清性激素和附睾精子计数的影响。结果:连续给药3个月,动物无死亡,一般情况良好。血液学和生物化学检查的各项指标绝大部分在正常范围内波动,与对照组比较,试验组个别指标有统计学意义的变化(如RBC、WBC、HGB、AST、TBIL,P<0.05),但没有临床意义。主要脏器质量系数与对照组无显著性差异,组织学检查发现,高剂量组部分大鼠肝、肺有轻度病理改变。血清激素水平变化不显著(P>0.05),高剂量组附睾管腔内精子数量减少(P<0.05)。结论:该剂量范围(1.25～5.00g/kg体重)肾炎灵灌喂大鼠3个月,不产生明显的积蓄性毒性反应;较大剂量(≥5.00g/kg体重)对雄性性腺产生负性影响。     

激素联合雷公藤多苷治疗成人特发性膜性肾病疗效与血清抗PLA2R抗体水平的关系

目的:探讨在激素联合雷公藤多苷治疗成人特发性膜性肾病(IMN)疗效与血清抗PLA2R抗体水平的关系。方法:61例成人IMN患者,采用间接免疫荧光法(IIFT)检测血清抗PLA2R抗体,根据血清抗PLA2R抗体检测结果分为血清抗PLA2R抗体阳性组(n=40)和血清抗PLA2R抗体阴性组(n=21),两组均予激素联合小剂量雷公藤多苷治疗,观察其疗效与血清抗PLA2R抗体的关系。结果:两组第1、3、6个月完全缓解率均呈升高趋势,与血清抗PLA2R抗体阳性组相比,血清抗PLA2R抗体阴性组第3个月完全缓解率(26.1%vs 5.8%)及第6个月总有效率(82.60%vs 55.80%)显著高于血清抗PLA2R抗体阳性组,差异具有统计学意义(P<0.05)。上呼吸道感染及肝功能异常是其主要的不良事件,但发生率两组无差异。结论:激素联合雷公藤多苷治疗IMN的疗效与血清血清抗PLA2R抗体水平有关,对血清抗PLA2R抗体阴性者疗效较好。     

雷公藤抗雄性生育成分的研究

卫矛科植物雷公藤的粗提物雷公藤多甙可致雄大鼠可逆性不育。采用系统分级分离与生物活性测定结合的方法，通过制备高效液相色谱从雷公藤多甙中分离出雷公藤甲素、雷公藤乙素和雷公藤氯丙酯醇三个具有抗生育活性的成分。     

雷公藤多甙预处理亲缘皮修复烧伤创面的实验观察

目的　观察经雷公藤多甙预处理的亲缘皮移植烧伤创面后的效果。　方法　用新西兰大白兔 ,切取亲代厚中厚皮肤 ,分别用 2 0 0g/L雷公藤多甙、5 0 g/L地塞米松、9g/L等渗盐水浸泡 15～ 3 0min后 ,移植到子代小兔皮肤全层缺损处 ,同时设非亲缘皮对照组 ,观察创面移植物的存活时间及排斥情况。　结果　亲缘皮经雷公藤多甙预处理 ,移植到创面后排斥反应明显减轻 ,皮片存活时间明显延长 (P <0 .0 5 ) ,时间为 (4 3± 3 .5 )d。地塞米松组为 (3 0± 2 .5 )d。等渗盐水组和非亲缘皮组的皮片移植后排斥较快 ,平均为 (11± 1.6)d。　结论　亲缘皮的组织细胞有半同一性抗原 ,利用这一特点事先进行移植预处理 ,可以延长皮片排斥时间 ,并有望获得长期存活     

雷公藤多甙及其单体T_4对仔鼠运动反射的影响

雷公藤多甙(GTW)在雄性大鼠及男子均可导致不育作用,而无明显的毒副作用,从雷公藤多甙中提取的单体T_4在雄性大鼠也有明确的抗生育作用,其最小有效抗生育剂量只有GTW的1/200,但它们是否有生殖细胞遗传效应迄今未见报道,作者进行了GTW、T_4对大鼠在停药后生下的仔鼠的运动反射试验及大鼠附睾精子和睾丸切片的形态学检查,结果表明GTW、T_4对仔鼠运动反射没有明显影响,大鼠停药后附睾精子和睾丸曲精细管细胞组合均恢复正常。     

雷藤氯内酯醇与棉酚雄性抗生育作用的比较研究

雷藤氯内酯醇(T_4)系从雷公藤中分离出来的具雄性抗生育作用的单体。棉酚为我国首创男用节育药,但存在少数服药者出现低血钾及停药后精子产生不可恢复现象,影响推广使用。本研究对T_4和棉酚的雄性抗生育作用及毒性进行比较,结果表明T_4作用环节较理想,主要作用在附睾精子,引起精子头尾大量分离,对睾丸曲细精管影响较小。因此在停药后能迅速恢复生育能力,而棉酚主要作用于曲精细管精母细胞阶段,所以恢复生育较慢,动物增重受阻,毒性较T_4显著。因此对T_4深入研究,可望发展成男用节育药。     

Posttesticular antifertility action of triptolide in the male rat: evidence for severe impairment of cauda epididymal sperm ultrastructure

A variety of active diterpene epoxides, including the triptolide (isolated from Tripterygium wilfordii) have been reported to cause infertility in male rats. Previously, we showed that oral administration of triptolide at a dosage of 100 microg/kg per body weight for 70 days completely inhibited fertility in male rats, with little or no demonstrable detrimental effect on spermatogenesis and Leydig cell function as determined by testicular light microscopic appearance and serum and intratesticular testosterone levels. Despite the apparent absence of effects on the testes, cauda epididymal sperm were abnormal, with complete cessation of sperm motility and some reduction in sperm numbers. This study was undertaken to provide additional insight into the subcellular sites and possible mechanisms of action of this compound using ultrastructural analysis of the testes and epididymidis. The most striking effect of triptolide treatment was observed in sperm in the epididymis. In rats rendered infertile with 100 microg/kg per body weight of triptolide daily for 70 days, virtually all cauda epididymal sperm exhibited complete absence of plasma membrane over the entire middle and principal piece, premature decondensation of the nuclei, and disorganization of the mitochondrial sheath with many vacuolated mitochondria. No ultrastructural differences in the epididymal epithelium were observed between control and triptolide-treated rats. The testes appeared to be mildly affected after triptolide treatment but exhibited only subtle ultrastructural defects in the germ cells. The findings of severe impairment of cauda epididymal sperm ultrastructure, along with minimal discernible abnormalities in the fine structural cytology of the testes, further suggest that the site of action of this compound is posttesticular and may be confined to the cauda epididymal sperm. However, we cannot rule out an effect of triptolide that occurs during germ cell maturation but is delayed in its manifestation or triggered at the rete testis and epididymal level.     

Radix Tripterygium wilfordii--a Chinese herbal medicine with potent immunosuppressive properties

Radix Tripterygium wilfordii Hook-F (TW) is a Chinese herbal medicine that has been reported to be effective in the treatment of various autoimmune disorders in experimental animals and man. Little is known about the immunosuppressive mechanism of action of this medicine. We demonstrate herein that TW is capable of inhibiting several afferent immune functions including the in vitro response of human peripheral blood mononuclear cells to both mitogen and alloantigen, and the generation of cytotoxic T cells. This inhibition is likely mediated through a reduction in both IL-2 production and IL-2 responsiveness. TW evidenced little capability of impairing IL-2 receptor expression, or efferent immune mechanisms such as cell-mediated cytotoxicity or natural killer cell-mediated cytotoxicity. The immunosuppressive effects of TW were reversible except at the highest concentration tested, 2.4 micrograms/ml, and there was no evidence of TW-mediated cell-well damage as evidenced by trypan-blue exclusion. TW, or some of its constituents, may be important new agents to be studied for immunosuppression in organ transplantation.     

雷公藤在免疫性疾病治疗中副作用的观察

目的：调查雷公藤多甙的副作用,以指导临床用药。方法：收集雷公藤多甙治疗免疫性疾病111例,分析副作用的发生情况及可能机制,并提出防治措施。结果：雷公藤多甙可引起程度不同的头痛头晕、白细胞减少和性腺抑制等作用。经调整方案和相应处理,多能恢复。结论：雷公藤多甙应用中应注意药物副作用及易发生因素,调节剂量、疗程以提高疗效和减少副作用。