介绍一种细菌鞭毛快速染色法

细菌鞭毛染色方法甚多,然而效果并非完全理想.笔者通过实践,参考有关文献,改良成一种快速、简便的鞭毛染色法,现介绍如下.1.染色剂配制取200g/L 饱和硫酸铝钾〔KAl(SO_4)_2·12H_2O〕溶液2ml,240g/L 饱和鞣酸〔C_(14)H(10)O_9〕溶液2ml,50g/L 苯酚〔C_6H_5OH〕溶     

细菌鞭毛染色方法及其应用

细菌鞭毛纤细 ,直径只有 10～ 30nm ,远低于光学显微镜的分辨率 ,只有采用特殊的染色方法才能在普通光学显微镜下观察其形态。由于细菌鞭毛染色在细菌鉴定中起着很重要的作用 ,故以下将对其方法及其应用进展作一论述。一、细菌鞭毛染色方法目前 ,细菌鞭毛染色方法根据染色剂的不同 ,可分为碱性复红法、副品红法、结晶紫法、维多利亚蓝B法、镀银染色法和荧光蛋白染色法 6类 ,前 5类方法的媒染剂成分中均含有单宁酸 ,染色原理通常是采用不稳定的胶体溶液做媒染剂 ,并使其沉淀于鞭毛上而使“鞭毛肿胀 (tarandfeather)” ,鞭毛直径加粗 ,进一步…     

介绍一种新的阴道毛滴虫鞭毛染色法

本文参考John AA Med.Lab Sci 45:273,1988使用一种新的简单有效的毛滴虫鞭毛染色法,比以往的方法有不少优点,值得推广应用。染色液,①三氯化铁10g/L 4份,无水甲醇2份和伊红水溶液20g/L 4份混合而成,以新鲜配制为好。②甲基紫水溶液5g/L。染色步骤:取阴道分泌物作涂片,待干后把它浸入甲醇或乙醇中固定30秒。取出吹干,用①液     

革兰氏染色液的改进

一、染色液配方1.结晶紫液:称取结晶紫0.5g,加95%酒精50ml 使溶解,再加入1g/dl 草酸铵液450ml 混勺.2.革兰氏碘液:20g 碘化钾溶于30ml 蒸馏水中加碘片10g,全部溶解后加蒸馏水至300ml,混匀.     

室温保存过氧乙酸稀溶液浓度下降的观察

在2000ml 烧杯中,用浓度为119.4g/L 过氧乙酸加自来水稀释,使浓度为2g/L.取稀释后的过氧乙酸20ml 于预先加有15ml 浓度为2mol/L 硫酸的碘量瓶中,     

血细胞糖原染色方法的改进

血细胞糖原染色(PAS)是常用的血细胞化学染色方法之一,对于某些血液病的诊断、鉴别诊断及疗效的观察有着重要作用。近年来,我们经过探索找出了一种简便的Schiff试剂配制方法,并用亚甲蓝水溶液为复染剂,效果理想。一、材料和方法1.试剂(1)高碘酸水溶液:取高碘酸1g加入蒸馏水100ml溶解后,4℃保存备用;(2)Schiff试剂配制:A液:取1g碱性品红加入1.18mol/L盐酸100ml(10ml浓盐酸+90ml蒸馏水)中混匀,室温保存备用;B液:取10g偏重亚硫酸钠溶于100ml蒸馏水,4℃保存备用;工作液:用时按需取A液1份+B液1～2份,充分混匀,数分钟后颜色由紫褐色变成浅褐色…     

快速、低背景凝胶染色和脱色方法

科研及临床工作中,经常需要用电泳法纯化或分离蛋白质,电泳后其胶染色方法有多种,常见的如考马斯亮蓝(G250、R250)、氨基黑及印度墨水染色法等。这些方法,各具特点,但均存在一些缺点：如需大量价格较贵且有毒性的甲醇及乙酸等溶液进行染色,染色后为降低背景,脱色十分困难,耗时长,过浓的染料溶液用后弃之,容易污染环境。我们参考国外文献及有关实验室经验,改进总结出一种应用考马斯亮蓝G250快速、低背景的二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)胶等蛋白染色、脱色方法。 一、试剂及仪器 1.试剂：1 mol/L HCL,1 g/L考马斯亮蓝G250储存液,5 mmol/L HCL胶平衡液,15 mg G250/L胶染色液(1 ml 1 mol/L HCL及15 ml考马斯亮蓝G250储存液/L),1 mmol/L HCL胶脱色液。 2.仪器：微型胶电泳仪(Miniprotein 3 System,BlO-RAD),多功能电泳仪系统(Multiphorll,Phamaca),普通摇床(上海),荧光成像系统(Fluor-S,BlO-RAD),电泳图像扫描仪：(Bio-Scanner Bio-Med lnstruments lns)。 二、电泳：SDS-PAGE,按文献常规操作。 三、染色、脱色 1.平衡：将电泳胶移至塑料盒中,按每块大胶16cm×20cm 300～500 ml,小胶9cm×10cm 100 ml,加入平衡液,平稳摇动30 min,换新鲜平衡液,重复上述步骤1～2次。 2.染色：弃平衡液,按每块大胶300～500 ml,小胶100 ml,加入染色液,平稳摇动,直至染色程度适合成像检测,通常大于4 h,最好放置过夜。 3.脱色：弃染色液,按每块大胶300～500 ml,小胶100 ml,加入脱色液,平稳摇动2～4 h,直至背景降至合适水平。 4.成像、扫描：上述脱色胶可贮存于1 mmol/L HCL中,待成像处理、密度扫描半定量测定蛋白浓度或干胶后备用。 四、结果 1.背景低; 2. 蛋白条带染色清晰; 3. 脱色快;4. 最低蛋白染色(条带目视清楚)100 ng; 5. 染色蛋白条带或双向电泳斑点于2.0～40 μg蛋白浓度范围,成像扫描分析可呈线性。 五、讨论 本法染料G250用量远远低于其他方法染料用量,减少污染。无需使用浓磷酸、乙醇或甲醇等试剂配制染色液,成本降低。本法染色脱色,背景极低,十分有利于成像扫描分析。     

双氧水外用致过敏性休克1例

临床使用注射用头孢菌素类药物先做皮肤过敏试验已有定论 ,但配制方法和皮试液浓度尚无明确统一规定 ,现将我们的配制方法与应用体会介绍如下。1　方法取拟用药物 1支 (0 .5g或 1.0g) ,加生理盐水 (2 .5ml或 5ml)稀释 ,即含 2 0 0g/L ;取上液 0 .1ml加生理盐水至 1ml,含 2 .0g/L ;取上液 0 .1ml加生理盐水至1ml,含 2 .0g/L ;再取上液 0 .15ml加生理盐水至 1ml,含 0 .3g/L(即含 30 0mg/L)。取上液 0 .1ml做皮内注射 ,2 0min后观察反应。判断标准与青霉素皮试相同。2　结果我院自 1999年 1月应用拟用药物做皮试 2 6 3例 ,男 15 6例 ,女 10 7…     

介绍一种新的鞭毛染色法

细菌鞭毛染色的传统方法存在着以下缺点:玻片着酸处理,染液要新鲜配制;细菌需洗涤及福尔马林(?)定,鞭毛染色不完整,往往着色的细菌鞭毛少,且多数鞭毛与菌体分开,成功率低又不稳定.Heimbrook 等(J.Clin Microbiol 1989.27:2612)推荐Ryu 染液,这种染液可以克服目前鞭毛染色的缺点.现简介如下.     

检查阴道毛滴虫的一种简易鞭毛染色法

现在用于诊断感染阴道毛滴虫虽有几个鞭毛染色的方法,但大多数染色方法不能证明鞭毛,且麻烦、费时和昂贵,不适合于常规检查。著者报告一种简易、可靠的染色法。贮存染色液:1.氯化铁溶液:10克/升(分析级),在暗色瓶中保存。2.无水乙醇。3.伊红水溶液:20克/升.4.甲基紫或结晶紫水溶液:5克/升。应用染色液:氯化铁溶液4份、无水乙醇2份,伊红溶液4份,按次序混合。成砖红色的胶样溶液。使用时每天新鲜配制效果更好。应用染色液(乙醇氯化铁伊红复合物)大约可维持2周,颜色略退但敏感度不丧失。甲基紫溶液制备后需要过滤,在室温下可无限期保存。     

细菌鞭毛染色方法的探讨

临床山非发酵菌引起的感染性疾病有增多的趋势,为明确诊断,必须借助于鞭毛染色。现介绍一种简便、快速、易学的细菌鞭毛染色方法,并与传统简法作比较。     

用偶氮氨基比林作隐血试验

我们用盐酸苯胺和氨基比林合成的偶氮氨基比林作粪便、尿隐血试验,试验结果满意,现予介绍。一、试剂1.0.1mol/L pH6.8的磷酸盐缓冲液.2.偶氮氨基比林贮存液:盐酸苯胺5g,氨基比林20g,溶于95%乙醇中,并加至100ml,贮存于棕     

MTT—半固体培养基测定细菌动力的研究

目的 制成一种容易测定细菌动力的半固体培养基。方法 根据Difco动力试验培养基配方，降低琼脂浓度，加入MTT代替TTC。培养基组成为10.0g Tryptose,5.0g NaCl,3.5g agar,1000.0ml蒸馏水，高压灭菌后，冷却至50℃-60℃。无菌加入1.5ml滤器除菌的10g/L MTT水溶液。分装无菌管。结果 有动力菌株沿着穿刺线扩散，形成蓝色云雾状，而无动力菌株在穿刺线上生长只形成蓝线，蓝线周围培养基保持澄清。检测了123株菌，鞭毛染色证实94株有鞭毛、29株无鞭毛；有鞭毛的菌株中，90株菌培养10－18h动力阳性，其余4株大肠埃希菌培养24h动力阳性，但这4株菌应用Difco动力试验培养基需诱导传代才获得阳性结果。除此4株外，还有9株用Difco动力培养基需培养48h才阳性。结论 MTT半固体培养基为测定细菌动力最适培养基。     

用紫外分光光度法测定维生素A:关于维生素快速破坏的实验

实验表明,通过照射及游离基(过氧化苯甲酰)生成的联合作用可使维生素A快速破坏。[试剂]乙酸维生素A(1000IU/ml)、过氧化苯甲醛(16μmol/L)及间氯苯甲酸(16μmol/L)均用二甲苯和无水乙醇配制,并置-20℃避光保存。乙醇须先加KOH回流和重蒸馏。[方法]向盛有1.0ml过氧化苯甲酰或间氯苯甲酸(0～16μmol/L)的试管中,加入0.01ml乙酸维生素A(10IU),并置于距离带有紫色罩的汞灯9cm外,照射前开灯预热10分钟,再按不同时间进行照射。于照射前、后,在328nm波长处测其吸光度。另一实验是,向0.5ml人血浆中分别加入含0.5、1.0及2.0IU乙酸维生素A的乙醇溶液0.01ml,旋转混匀5分钟。加入11mol/L KOH水溶液和无水乙醇混合液(1:10V/V)0.5ml,旋转混匀,置60℃15分钟,冷后加1.0ml(16μmol/L)     

尿胆红素定性过碘酸钠法

用钡盐浓缩过碘酸钠氧化作尿胆红素定性,敏感度高,且无假阳性,结果易于判定,优于碘环法。现介绍于下。试剂100g/L氯化钡、20g/L过碘酸钠(溶于250g/L三氯醋酸中):棕色瓶中暗处保存可用数月。方法取新鲜尿4～5ml,滴加100g/L氯化钡     

介绍一种改良的革兰氏染色方法

革兰氏染色是细菌形态学染色检查法中最基本、应用最广泛的染色方法，它将细菌分为两大类即革兰氏阳性白和革兰氏阴性首。其染色机制有等电点学说、物理吸附等作用，但其实质至今尚不完全清楚，在拉个染色过程中，由于受各种因素的影响，其结果常常不尽人意，甚至得出完全相反的结论．为此，笔者现介绍一种改良的革兰氏染色方法：1试剂①固定液：甲醇。②Hucker's染色剂：A液：结晶紫2．0g，95％乙醇20．0ml；B液：草酸接0．8g，蒸馏水80.0ml。临用前，A、B波混合，混合液于室温可存放一月。③PW煤染剂：碘1．3g，碘化钾2．og，聚乙烯毗…     

尿蛋白的溴酚蓝测定法

常用考马斯高蓝法(CBG-250法),测定尿蛋白,此法显色稳定,精密度高,但线性范国窄(0～1g/L)且不同蛋白质呈色不同。我们根据国外有关资料,设计了溴酚蓝法。一、试剂(1)1mmol/L溴酚蓝液:溴酚蓝0.67g溶解于10ml的0.1mol/L NaOH液中,加蒸馏水至1000ml。(2)缓冲液:在0.1mol/L柠檬酸液1000ml中,加入0.2mol/L Na_2HPO_4液20ml,调整     

细菌鞭毛染色的改进

细菌鞭毛染色的改进郭恒彬，李先富，吴光华细菌鞭毛是从形态学上鉴别细菌种类的手段之一，而鞭毛染色是难度较大的染色方法。通常以结晶紫乙醇饱和溶液配制染色液用于细菌鞭毛染色，但难以成功。为此，我们在常法的基础上对鞭毛染色进行了研究，现报道如下。一、材料和方...     

介绍一种快速细菌鞭毛染色法

鞭毛染色是细菌鉴定的一种重要方法,尤其在非发酵菌的鉴定中很重要。笔者在长期工作中摸索出一种快速细菌鞭毛染色法,非常简便实用,现介绍给大家。鞭毛染色液配制同改良Ryu法(见全国临床检验操作规程第二版第442页)。染色方法:1玻片用处理过的新载玻片(95%酒精浸泡24h以上);2在玻片上滴蒸馏水两滴,一张玻片上可同时制2个涂片;3用接种环挑取血平板上的菌落少许,将细菌轻轻点在玻片上的蒸馏水滴的顶部,不可搅动;4接着直接滴加染液于玻片上染色,约10～15min后,用蒸馏水缓慢冲去染液;5玻片自然干燥后镜检。　　本方法与改良Ryu法的最大不同就是…     

血清尿素测定中如何消除脂血混浊

二乙酰一肟(DAM)法测定尿素遇到脂血标本常因混浊使结果偏高。我们在酸试剂中加Brij 35,可消除混浊,以保证结果的准确性。一、试剂1.酸试剂:每升试剂含磷酸35ml和硫酸80ml,外加Brij 35 0.25mol/L 10ml。2.DAM试剂:100ml试剂中含DAM 0.6g和硫氨脲30mg。二、操作酸试剂5ml中加血清20μl及DAM试剂0.5ml,混匀,置沸水浴12分钟,冷却5分钟,