姜黄素对非小细胞肺癌细胞A549和H460放射敏感性的影响

目的 探讨姜黄素对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞A549和H460放射敏感性的影响,并探索长链非编码RNA（lncRNA）同源异型盒基因转录的反义基因间RNA（HOTAIR）在其中的调节机制。 方法 将培养的NSCLC细胞A549和H460根据处理方法的不同,采用4种方式进行分组。（1）分别将NSCLC细胞A549和H460分为6组:0、15、30、60、120和240 μmol/L姜黄素组,采用细胞计数试剂盒8（CCK-8）实验检测各组细胞的增殖活力;（2）分别将NSCLC细胞A549和H460分为8组:0、2、4、6 Gy γ射线照射组及其与30 μmol/L姜黄素联合组,采用CCK-8实验和平板克隆形成实验检测各组细胞的增殖活力;（3）将NSCLC细胞A549分为4组:空白对照组、30 μmol/L姜黄素组、4 Gy γ射线照射组和30 μmol/L姜黄素+4 Gy γ射线照射联合组,采用实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）实验检测各组细胞中5种促癌lncRNA和5种抑癌lncRNA的表达情况;（4）将NSCLC细胞A549分为6组:空白对照组、30 μmol/L姜黄素组、30 μmol/L姜黄素+lncRNA HOTAIR过表达组、4 Gy γ射线照射组、4 Gy γ射线照射+30 μmol/L姜黄素联合组和4 Gy γ射线照射+30 μmol/L姜黄素+lncRNA HOTAIR过表达组,采用CCK-8实验和平板克隆形成实验检测各组细胞的增殖活力。采用学生t检验进行统计学分析。 结果 （1）CCK-8实验结果显示,不同浓度的姜黄素处理可以剂量和时间依赖的方式降低NSCLC细胞A549和H460的增殖活力,且除了15 μmol/L姜黄素作用24 h之外,其余浓度和时间的姜黄素组与对照组相比,差异有统计学意义（t=3.884~5.731,P=0.000~0.043）。（2）CCK-8实验和克隆形成实验结果显示,30 μmol/L姜黄素+不同剂量的γ射线照射联合处理可使γ射线照射单独处理下的NSCLC细胞A549和H460的增殖活力和克隆形成能力进一步降低,差异有统计学意义（t=2.503~12.418,P=0.000~0.044）。（3）qRT-PCR实验结果显示,与空白对照组相比,lncRNA HOTAIR在γ射线单独处理后表达升高（t=3.317,P=0.040）,而30 μmol/L姜黄素单独处理和30 μmol/L姜黄素+4 Gy γ射线联合处理均可下调A549细胞中促癌lncRNA HOTAIR的表达（t=3.205、5.916,P=0.038、0.000）。（4）对HOTAIR进行过表达处理,可消除姜黄素对NSCLC细胞A549增殖的抑制并增强其放射敏感性（t=3.584~5.802,P=0.000~0.004）。 结论 姜黄素可以通过下调促癌lncRNA HOTAIR的表达从而抑制NSCLC细胞的增殖活力,并增强其放射敏感性。     

X射线诱导非小细胞肺癌A549细胞凋亡的适应性反应及相关miRNA筛选的研究

目的 研究X射线辐射诱导非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞凋亡的适应性反应,并筛选适应性反应相关的微RNA（miRNA）。 方法 将NSCLC A549细胞分为6组,包括 50 mGy+20 Gy、200 mGy+20 Gy、20 Gy、50 mGy、200 mGy照射组及对照组（0 Gy）,前2组细胞分别用50、200 mGy初始剂量进行照射,培养6 h后用20 Gy的效应剂量进行照射,20 Gy、50 mGy、200 mGy照射组同时进行照射。培养24 h后使用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。利用小RNA测序技术筛选差异表达miRNA,并对其靶基因进行基因本体（GO）及京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路的功能富集分析。采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）对部分差异表达miRNA进行验证。2组间数据的比较采用Welch t检验。 结果 50 mGy+20 Gy照射组和200 mGy+20 Gy照射组的A549细胞早期凋亡率分别为（1.81±0.11）%和（2.17±0.19）%,低于20 Gy照射组的（4.54±0.23）%,且差异均有统计学意义（t=10.680、8.006,均P<0.01）。与20 Gy照射组相比,50 mGy+20 Gy照射组和200 mGy+20 Gy照射组共同差异表达趋势miRNA有1个上调（miR-3662）、15个下调（miR-185-3p、miR-1908-5p、miR-1307-5p、miR-182-3p、miR-92a-3p、miR-582-5p、miR-501-3p、miR-138-5P、miR-1260b、miR-484、miR-378d、miR-193b-3P、miR-127-3p、miR-1303及miR-654-5p）。GO富集分析结果显示,差异表达miRNA调控靶基因功能显著富集于细胞通讯调节、代谢过程的正向调节、代谢信号的调节、酶结合及催化活性等过程。KEGG富集分析结果显示,靶基因相关信号通路显著富集于溶酶体、丝裂原活化蛋白激酶、Ras和内吞作用等信号通路。qRT-PCR检测结果显示,miRNA表达情况与基因芯片结果趋势一致（10个miRNA表达水平得到验证）。 结论 X射线50、200 mGy照射剂量均能诱导NSCLC A549细胞凋亡的适应性反应,并筛选到一组共同差异表达的miRNA,可能在X射线辐射诱导细胞凋亡的适应性反应中发挥了重要作用,有可能成为调节电离辐射生物效应的潜在靶点。     

miR-182调控RECK信号通路在非小细胞肺癌进展中的作用

目的探讨miR-182在非小细胞肺癌(NSCLC)发展中的作用及其相关机制。方法采用实时定量PCR检测NSCLC细胞系以及30组配对的NSCLC患者癌组织和癌旁组织样本中miR-182的表达水平。在NSCLC细胞株A549和H1299中过表达miR-182后,测定细胞增殖活性及侵袭转移能力。利用荧光素酶活性实验鉴定miR-182的预测靶基因(RECK)。采用qRT-PCR和Western blotting分别检测转染miR-182类似物和miR-182抑制物后RECK mRNA和蛋白的表达水平。结果miR-182在NSCLC细胞系和癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织,在伴淋巴结转移的肺癌患者癌组织中的表达水平明显高于不伴淋巴结转移者,差异有统计学意义(P<0.01)。过表达miR-182可增强NSCLC细胞株A549和H1299的增殖、侵袭和迁移能力。双荧光素酶实验结果表明,RECK的翻译水平受miR-182直接调控。qRT-PCR和Western blotting 检测结果表明,转染miR-182类似物后,RECK表达水平降低,转染miR-182抑制物后,RECK表达水平升高。结论miR-182可调控RECK的表达,促进NSCLC的进展。     

MiR-148a对肺癌细胞放射敏感性的影响

目的探讨miR-148a对肺癌A549、H460以及H1299细胞放射敏感性的影响。方法根据不同的处理方法,分别按以下方式将肺癌A549、H460和H1299细胞进行分组。（1）将肺癌A549和H460细胞分为3组:空白对照组、4 Gy γ射线照射组和8 Gy γ射线照射组。采用实时定量PCR检测miR-148a的表达水平;（2）将肺癌A549细胞分为2组:空白对照组、miR-148a转染组;同时,将肺癌H460细胞分为2组:空白对照组、anti-miR-148a转染组。分别对转染2组细胞进行不同剂量的γ射线照射,并采用克隆形成实验方法来检测细胞增殖;（3）将肺癌A549和H1299细胞分为3组:空白对照组、miR-148a单独处理组、miR-148a和雌激素受体（ER）共转染组。分别对3组细胞进行不同剂量的γ射线照射,并采用克隆形成实验方法检测细胞生长情况。采用Student t-test对数据进行统计学分析,P < 0.05表示差异有统计学意义。结果实时定量PCR实验结果显示,γ射线照射能够显著下调肺癌A549和H460细胞中miR-148a的表达水平。克隆形成实验结果显示,与空白对照组相比,miR-148a转染能够显著增强肺癌A549细胞的放射敏感性,差异有统计学意义（t=12.16,P < 0.01）,而anti-miR-148a转染能够显著降低肺癌H460细胞的放射敏感性,差异有统计学意义（t=11.93,P < 0.01）。同时,miR-148a过表达可以明显下调肺癌A549细胞中ER的mRNA及蛋白表达水平;而anti-miR-148a能够显著上调肺癌H460细胞中ER的mRNA及蛋白表达水平。另外,与miR-148a单独处理组相比,miR-148a和ER共转染组中miR-148a对肺癌A549和H1299细胞增殖的影响显著降低,差异有统计学意义（t=11.34、12.68,均P < 0.01）。结论照射可以诱导miR-148a的表达水平降低,人为过表达miR-148a能够抑制ER的蛋白表达水平,进而降低肺癌A549和H1299细胞的增殖能力,同时增强其放射敏感性。     

缺氧诱导的UCHL5增强宫颈癌Hela细胞辐射抗性

目的 研究缺氧诱导的泛素羧基末端水解酶L5（UCHL5）在调节宫颈癌Hela细胞辐射敏感性中的作用。 方法 以宫颈癌Hela细胞为研究对象,1% O₂条件下培养观察UCHL5表达水平的变化。采用Western blot和实时定量聚合酶链反应（PCR）检测慢病毒载体感染Hela细胞后稳定调变UCHL5的效率,转录本分为空白对照组、过表达对照组、过表达UCHL5组转录本1~4和沉默对照组、沉默UCHL5组转录本1~2。将实验所用的细胞分为过表达对照组、过表达UCHL5组、沉默对照组和沉默UCHL5组。采用流式细胞术检测8 Gy γ射线照射48 h后细胞的凋亡率;采用细胞克隆形成实验检测0、2、4、6 Gy γ射线单次照射培养2周后4组细胞的克隆形成率;采用3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）实验检测4组细胞培养1周后的增殖率以及联合0、2、4、6、8、10 Gy γ射线照射后的增殖率。使用基因表达谱数据动态分析癌症基因组图谱数据库宫颈癌组织和正常组织中抗缺氧诱导因子1α（HIF-1α）与UCHL5表达的相关性。采用双荧光素酶报告基因实验观察HIF-1α对UCHL5的激活作用。组间比较采用单样本t检验,采用Pearson检验进行相关性分析。 结果 缺氧可诱导宫颈癌Hela细胞UCHL5的表达。Western blot和实时定量PCR结果显示,感染后的Hela细胞可显著上调或下调UCHL5的表达,其中,过表达UCHL5组转录本2和沉默UCHL5组转录本2的表达均较高,所以选择此2种转录本进行后续实验。克隆形成实验结果显示,与接受相同剂量照射的过表达对照组相比,上调UCHL5增加了Hela细胞的克隆形成率,在0 、2、4、6 Gy剂量照射后克隆形成率的差异均有统计学意义（t=14.16、19.22、8.76、6.79,均 P<0.05）。 流式细胞术结果显示,与沉默对照组相比,沉默 UCHL5 促进了 Hela 细胞的凋亡（t=10.29,P<0.05）,增加了 γ 射线诱导的细胞凋亡率 (t=52.01, P<0.05)。MTT 实验结果显示,与过表达对照组相比,上调 UCHL5 可升高宫颈癌 Hela 细胞的增殖率,增殖率在第3天时差异有统计学意义 (t=3.905,P<0.05);与过表达对照组相比,等剂量照射 UCHL5 上调组升高了受照细胞的增殖率,在剂量为6、8、10 Gy时,细胞的增殖率差异均有统计学意义（t=3.40、4.06、3.68,均P<0.05）。宫颈癌组织中 HIF-1α 表达水平和UCHL5 表达水平呈正相关（R=0.31,P<0.01）,双荧光素酶报告基因结果显示 HIF-1α 结合并激活 UCHL5 启动子的活性,其活性增加了2.5倍（t=30.47,P<0.05）。 结论 缺氧条件下,宫颈癌Hela细胞中UHCL5的诱导表达降低了细胞的辐射敏感性,其潜在的机制可能与HIF-1α转录激活UCHL5的表达有关。     

肺癌细胞A549和H460对137Cs γ射线辐射敏感性差异的研究

目的研究肺癌细胞A549和H460对137Cs γ射线的辐射敏感性差异及核因子E2相关因子2（Nrf2）蛋白含量的差异。方法使用2、4、6 Gy 137Cs γ射线照射A549和H460细胞;1、2、4、6 Gy 137Cs γ射线照射H460细胞,用克隆形成法检测细胞增殖能力,单细胞凝胶电泳检测细胞DNA损伤修复情况,casp_1.2.3b1彗星分析软件分析olive尾距值和尾部DNA含量,蛋白质印迹法检测Nrf2蛋白表达量。克隆形成率、olive尾距值和尾部DNA含量采用独立样本t检验进行比较。结果经2、4、6 Gy 137Cs γ射线照射后,肺癌A549细胞的克隆形成率分别为（73.78±14.69）%、（42.26±3.19）%、（17.50±2.18）%;H460细胞的克隆形成率分别为（56.38±6.28）%、（23.82±8.25）%、（4.66±0.87）%,肺癌A549细胞克隆形成率高于H460细胞,且差异均有统计学意义（t=7.99,P=0.015;t=6.75,P=0.019;t=12.03,P=0.005）。4 Gy照射后2 h,肺癌H460细胞的olive尾距值（1.27±0.05）和尾部DNA含量（4.51±0.19）%明显高于A549细胞[0.68±0.04、（2.12±0.14）%],且差异均有统计学意义（t=8.69、10.30,均P < 0.05）。蛋白质印迹实验结果显示,肺癌A549比H460细胞系的Nrf2蛋白丰度高,照射后两种细胞中的Nrf2蛋白水平均升高,但肺癌A549细胞明显高于H460细胞。结论肺癌A549细胞系对137Cs γ射线的辐射抗性强于H460细胞系,这种辐射抗性差异可能与两种细胞系内Nrf2蛋白的含量相关。     

LyGDI在非小细胞肺癌细胞A549中的辐射抗性机制研究

目的 探讨LyGDI的表达在非小细胞肺癌细胞A549中的辐射抗性机制。方法 A549和作为对照的H460细胞分别受到0、2、4和6 Gy X射线照射后,克隆形成试验分析辐射抗性差异,Western blot分析LyGDI和辐射敏感性关键基因环氧合酶COX-2的表达。实时荧光定量PCR分析miR-34a以及miR-34b/c在A549和H460细胞中的表达。A549细胞中转染50 nmol/L的miR-34c成熟序列,观察其对A549细胞辐射抗性以及LyGDI和COX-2基因表达的影响。结果 LyGDI和COX-2在辐射抗性的A549细胞中的表达水平高于H460细胞,miR-34a以及miR-34b/c在两种非小细胞肺癌中低表达。转染miR-34c可抑制LyGDI、COX-2和Bcl-2以及激活p21的表达,增强A549细胞细胞的辐射敏感性（t=3.85、5.89、5.12,P<0.05）。结论 LyGDI诱导的COX-2的上调表达以及电离辐射效应miR-34家族的下调表达,是A549细胞辐射抗性的一个主要原因。     

电离辐射对肺癌A549细胞miR-21体内外表达的影响及意义

目的 研究miR-21在肺癌组织及血清中的表达与肺癌预后及放疗因素的关系,进而探讨电离辐射对人肺癌A549细胞体内外表达miR-21的影响。方法 收集肺癌患者病理组织及血清样本,检测不同病理类型肺癌组织及血清中的miR-21的表达水平,同时检测是否接受放疗的非小细胞肺癌患者血清中miR-21的表达水平,并进行生存分析;以2、4 Gy X射线照射体外培养的A549细胞,并以A549细胞制备裸鼠肺转移癌模型,分别检测A549细胞与裸鼠血清及肺中miR-21的表达水平。结果 肺癌组织中miR-21高表达占60.0%;肺癌血清中miR-21高表达占50.5%,腺癌与鳞癌检出率差异有统计学意义（χ²=5.766,P<0.05）;87例非小细胞肺癌中放疗患者miR-21检出率66.7%显著高于非放疗患者39.6%（χ²=6.321,P<0.05）;Kaplan-Meier法生存分析显示,miR-21高表达患者预后明显低于低表达患者,差异有统计学意义（P<0.05）;Cox回归模型分析显示,miR-21高表达、区域淋巴结转移及放疗均为影响患者预后的独立危险因素。2、4 Gy X射线照射A549细胞后不同时间点miR-21表达显著升高（t=-7.552~-1.206,P<0.05）,miR-21在裸鼠血清及肺组织中的表达水平显著升高（t=-47.845~-2.356,P<0.05）。结论 电离辐射可上调A549细胞体内外miR-21的表达水平,可能与增强A549细胞侵袭转移能力相关。     

不同非小细胞肺癌细胞对碳离子放射敏感性的影响

目的 分析不同非小细胞肺癌（NSCLC）细胞对碳离子照射放射敏感性的影响,并探讨其相关的分子机制。方法 采用¹²C⁶⁺对肺腺癌A549细胞、鳞癌H520细胞和大细胞癌PGCL3细胞进行照射,吸收剂量分别为0、2、4和6 Gy。通过克隆实验检测3种细胞系的存活率,流式细胞术检测细胞的周期分布,利用Hoechst 33258染色检测细胞的凋亡率,实时RT-PCR方法检测细胞内DNA-PKcs基因的表达。结果 2、4、6 Gy照射后,A549、H520和PGCL3细胞的存活率明显下降,其中A549细胞辐射敏感性最低,其次是PGCL3细胞,H520细胞辐射敏感性最高。受照射后细胞均出现G₂/M期阻滞与凋亡,且随剂量的升高呈现上升的趋势。受照射H520与PGCL3细胞的阻滞率（t=4.813、20.738、25.654和t=2.790、2.977,P<0.05）和凋亡率（t=8.579、14.289、15.244和t=3.785、5.098、8.105,P<0.05）明显高于A549细胞。受照射细胞DNA-PKcs表达明显上调,A549细胞最高,其次是PGCL3细胞,H520细胞最低;并且随着剂量的升高,DNA-PKcs的表达呈现下降趋势。2、4 Gy照射后H520和PGCL3细胞DNA-PKcs的表达明显低于A549细胞（t=7.782、3.689和t=3.889、2.814,P<0.05）。结论 不同NSCLC细胞对¹²C⁶⁺离子的放射敏感性不同,H520鳞癌细胞最高,A549腺癌细胞最低。肺腺癌A549细胞放射敏感性较低可能与高表达的DNA-PKcs参与NHEJ途径修复DNA双链断裂有关。     

miR-9对神经纤毛蛋白-1的靶向调控及其在辐射效应中的作用

目的：构建has-miR-9表达质粒和NRP1-3’UTR荧光素酶报告质粒,探讨miR-9对 NRP1的靶向调控作用及其在A549 细胞中的辐射效应。方法：利用生物信息学方法预测has-miR-9与NRP1-3’UTR的结合位点;将miR-9序列插入载体pcDNA-DEST47中构建真核表达质粒,同时构建NRP1-3’UTR的野生型和突变型荧光素酶报告质粒,并与pcDNA-DEST-miR-9质粒共转染至A549细胞,分析miR-9对其调控作用;miR-29b作为阴性对照,观察miR-9对NRP1的靶向作用。采用Western blot方法,验证miR-9对NRP1蛋白表达的抑制作用及照射后A549细胞NRP1蛋白表达变化;采用实时定量PCR方法检测10 Gy电离辐射照射后A549细胞miR-9表达量。结果：荧光素酶活性实验结果显示,miR-9可以显著下调野生型NRP1-3’UTR质粒的荧光素酶活性（t=3.906,P<0.05）,而不影响突变型质粒的荧光素酶活性,同时证实miR-9以外的miRNA（miR-29b）不能抑制野生型NRP1-3’UTR质粒的荧光素酶活性。转染miR-9 mimic后,在A549细胞中,靶基因NRP1蛋白的表达受抑制。10 Gy照射后,A549细胞中miR-9表达量下调（t=37.319,P<0.05）,而NRP1蛋白表达升高。结论：在A549辐射效应中miR-9通过靶向结合NRP1基因3’UTR,特异性调控NRP1蛋白表达。     

长链非编码RNA ZFAS1在食管癌中的表达及作用机制研究

目的探讨长链非编码RNA锌指结构反义转录本1（zinc finger antisense 1,ZFAS1）在食管癌中的表达及作用机制。方法采用实时荧光定量PCR法分别检测癌旁组织和食管癌组织、正常食管上皮细胞和食管癌细胞的ZFAS1表达水平,通过细胞增殖活性检测、细胞划痕实验及流式细胞仪检测细胞凋亡技术,评价干扰食管癌细胞表达ZFAS1对细胞增殖、迁移及凋亡的影响,采用荧光素酶报告基因验证微小RNA（microRNA,miRNA）miR-302b-3p是ZFAS1的作用靶点,Western蛋白印迹法检测ZFAS1及miR-302b-3p作用下c-Jun氨基末端激酶2（c-Jun N-terminal kinase 2,JNK2）、胰岛素样生长因子1受体（insulin-like growth factor-1 receptor,IGF-1R）、白细胞介素-1受体相关激酶4（interleukin-1 receptor-associated kinase 4,IRAK-4）和上皮细胞激酶（epithelial cell kinase 2,EphA2）蛋白的表达变化。结果与癌旁组织相比,食管癌组织表达ZFAS1水平升高（t=19.40,P<0.001）,与正常食管上皮细胞相比,食管癌细胞表达ZFAS1水平增加（t=13.80,P<0.001）,通过抑制细胞表达ZFAS1发现,与NC干扰组相比,显著降低ZFAS1干扰组细胞增殖活性（t值分别=2.933,8.568,10.04,均P<0.05,）及迁移能力（t=13.96,P<0.001）,且细胞凋亡率升高（t=10.68,P<0.001）。ZFAS1可通过靶向miR-302b-3p调节JNK2、IGF-1R、IRAK4和EphA2蛋白的表达。结论ZFAS1在食管癌组织中表达显著增加,具有促进食管癌细胞增殖、迁移,抑制凋亡的能力,且ZFAS1可通过靶向miR-302b-3p激活JNK2、IGF-1R、IRAK4和EphA2,有望成为治疗食管癌的潜在靶点。     

异紫堇碱对宫颈癌SiHa细胞增殖和辐射敏感性的影响

目的 探讨异紫堇碱（ICD）对宫颈癌SiHa细胞增殖和辐射敏感性的影响及其作用机制。 方法 采用不同浓度（25、50、100、200 μmol/L）ICD处理宫颈癌SiHa细胞（简称ICD处理组）,同时将正常培养未经ICD处理的SiHa细胞设为对照（NC）组。采用3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）实验检测细胞的增殖抑制率,细胞克隆形成实验检测ICD对细胞辐射敏感性的影响,Western blot检测磷酸化组蛋白H2AX（γ-H2AX）、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶（p-PI3K）和磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）的相对表达量,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测微小RNA-129-5p（miR-129-5p）的表达。在SiHa细胞中分别转染miR-NC和miR-129-5p,观察转染miR-129-5p对细胞增殖、辐射敏感性、细胞周期蛋白D1（cyclinD1）、γ-H2AX蛋白表达的影响。在SiHa细胞中分别转染anti-miR-NC和anti-miR-129-5p并使用ICD处理,分析其对ICD诱导的细胞增殖、辐射敏感性、PI3K/Akt信号通路的影响。2组间数据的比较采用独立样本t检验。 结果 MTT实验结果显示,与NC组SiHa细胞的增殖抑制率[（0.05±0.01）%]相比,25、50、100、200 μmol/L ICD处理组能够明显提高SiHa细胞的增殖抑制率[（10.26±1.03）%、（22.16±2.21）%、（44.09±4.41）%、（70.88±7.09）%],且差异均有统计学意义（t=29.736~30.013,均P<0.05）。细胞克隆形成实验、Western blot和qRT-PCR结果显示,与NC组相比,100 μmol/L ICD处理组能够明显提高SiHa细胞对不同剂量X射线的辐射敏感性（t=19.135~44.478,均P<0.05）,提高γ-H2AX蛋白和miR-129-5p的相对表达量（t=15.041、19.682,均P<0.05）,降低p-PI3K和p-Akt蛋白的相对表达量（t=14.897、15.429,均P<0.05）。与转染miR-NC组相比,转染（高表达）miR-129-5p组能够明显提高SiHa细胞的增殖抑制率[（75.06±7.51）%对（1.04±0.10）%,t=29.566,P<0.05]、对不同剂量X射线的辐射敏感性（t=13.239~37.015,均P<0.05）和γ-H2AX蛋白的相对表达量（t=17.076,P<0.05）,能够降低cyclinD1蛋白的相对表达量（t=17.393,P<0.05）。与转染anti-miR-NC+ICD处理组相比,转染anti-miR-129-5p（低表达miR-129-5p）+ICD处理组可以反转ICD抑制SiHa细胞增殖、抑制PI3K/Akt信号通路的活性和增强细胞辐射敏感性的作用,且差异均有统计学意义（t=13.370~28.252,均P<0.05）。 结论 ICD能够通过上调miR-129-5p表达及抑制PI3K/Akt信号通路的活性来抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖以及增强其辐射敏感性。     

miR-124靶向STAT3改善脑恶性胶质瘤细胞辐射敏感性

目的 研究miR-124在放射敏感及耐受的脑恶性胶质瘤细胞LN229和LN229R中的表达以及miR-124对细胞放射敏感性的影响,并深入探讨miR-124调控LN229R细胞放射敏感性的作用机制。方法 将miR-124模拟物（miR-124）及阴性对照（miR-NC）,STAT3过表达质粒（STAT3）及pcDNA3.1质粒（pcDNA）单独或共转染到放射抵抗的胶质瘤细胞LN229R中。qRT-PCR检测LN229和LN229R细胞中miR-124的表达;克隆形成实验分析不同放射剂量下LN229R细胞的生存率以及敏感性相关参数值;流式细胞术分析LN229R细胞的凋亡情况;生物信息学预测miR-124和STAT3的靶向关系,并利用双荧光素酶报告分析加以验证;Western blot分析STAT3的蛋白表达水平。结果 与LN229组（1.02±0.09）相比,miR-124在LN229R细胞中的表达水平（0.32±0.03）显著降低,差异有统计学意义（t=12.780,P<0.05）;与miR-NC组（0.95±0.06）相比,转染miR-124模拟物可促进LN229R细胞中miR-124的表达（4.02±0.39）（t=13.476,P<0.05）;8 Gy照射条件下,miR-124过表达组癌细胞的生存率（0.003±0.000 4）显著低于miR-NC组（0.033±0.005 0）（t=5.655,P<0.05）,细胞凋亡率（22.34±2.42）%显著高于miR-NC组（4.69±0.51）%（t=12.361,P<0.05）;STAT3是miR-124的靶基因;外源回补STAT3可逆转miR-124对LN229R细胞生存的抑制作用。结论 miR-124通过靶向STAT3改善LN229R细胞的放射敏感性。     

miR-30a-5p和NUAK1在非小细胞肺癌中的表达及对A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

 目的 研究miR-30a-5p和靶基因NUAK1在非小细胞肺癌中的表达及对A549细胞增殖、迁移侵袭的影响。方法 收集2016-09至2019-03在保定市第一医院行手术切除治疗的非小细胞肺癌患者癌组织和癌旁组织标本64例,QPCR和Western blot分别检测非小细胞肺癌组织样本和细胞中miR-30a-5p和NUAK1的表达;TargetScan网站预测miR-30a-5p与NUAK1间的靶向关系,双荧光素酶报告基因实验和Western blot进行验证;MTT和Transwell实验检测miR-30a-5p及联合过表达NUAK1对A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果 非小细胞肺癌组织中miR-30a-5p的相对表达量(0.33±0.14)低于癌旁组织(1.00±0.21),差异有统计学意义(t=21.237,P＜0.05);非小细胞肺癌组织中NUAK1 mRNA表达(4.13±1.87)和蛋白表达(3.41±1.62)均高于癌旁组织(1.00±0.17、1.00±0.16),差异有统计学意义(t=13.335、11.844,P＜0.05)。非小细胞肺癌细胞系H460、H1299、A549中miR-30a-5p表达量(0.35±0.03、0.51±0.05、0.28±0.03)低于人正常肺上皮细胞BEAS-2B(1.00±0.11),差异有统计学意义(F=77.100,P＜0.05);H460、H1299、A549细胞中NUAK1 mRNA相对表达量(2.98±0.30、2.39±0.24、3.42±0.36)和蛋白相对表达量(3.06±0.31、2.27±0.23、4.12±0.41)均显著高于BEAS-2B细胞(1.00±0.09、1.00±0.11),差异有统计学意义(F=46.660、63.070,P＜0.05)。结论 miR-30a-5p可通过靶向NUAK1抑制非小细胞肺癌细胞A549增殖、迁移和侵袭,提示miR-30a-5p和NUAK1可能成为一种新的临床诊断和治疗非小细胞肺癌的靶点。     

miR-27b-3p通过靶向PLK2促进乳腺癌细胞的辐射抵抗

目的 研究miR-27b-3p对乳腺癌细胞辐射抵抗的影响。方法 通过检索基因表达（GEO）数据库，筛选分析miR-27b-3p在正常乳腺组织和乳腺癌组织中的表达水平。利用实时荧光定量PCR技术分析其在不同乳腺癌细胞系中的表达水平。通过细胞克隆形成、免疫荧光和5-乙炔基-2''-脱氧尿苷（EDU）检测技术评价miR-27b-3p对乳腺癌细胞辐射抵抗作用。采用荧光素酶报告基因技术确定miR-27b-3p的靶基因PLK2，并在乳腺癌细胞中进一步验证miR-27b-3p的辐射抵抗作用。结果 与正常乳腺组织和细胞相比，miR-27b-3p在乳腺癌组织（t=2.99，P<0.01）和乳腺癌细胞中表达水平显著上调（t=21.21、32.88，P<0.05）。尤其在抗辐射细胞MCF-7R中升高更加明显（t=25.63，P<0.05）。过表达miR-27b-3p增强了MCF-7细胞的克隆形成能力（t=10.32，P<0.05），且随着辐照剂量的增加，miR-27b-3p对MCF-7增殖能力的保护效应逐渐凸显（t=8.77、8.26、8.03，P<0.05）；干扰miR-27b-3p则抑制MCF-7R细胞克隆形成数（t=40.00，P<0.05），且随着辐照剂量的增加，进一步削弱了MCF-7R细胞的增殖能力（t=8.54、8.32、8.23，P<0.05）。报告基因实验结果表明，PLK2是miR-27b-3p的直接靶标。过表达PLK2抑制了miR-27b-3p介导的乳腺癌细胞辐射抵抗（MCF-7：t=9.66，P<0.05；MCF-7R：t=6.42，P<0.05）。结论 miR-27b-3p可通过靶向PLK2提高乳腺癌细胞的辐射抗性。