SO_2衍生物通过NLRP3炎症小体促进气道上皮细胞炎症发生

目的:观察二氧化硫(SO_2)衍生物亚硫酸钠和亚硫酸氢钠对支气管上皮细胞NLRP3炎症小体活化的影响。方法:使用不同浓度的SO_2衍生物作用于支气管上皮细胞16HBE,通过流式细胞术检测细胞内活性氧簇(ROS)的生成,Western blot检测细胞内NLRP3和caspase-1 p20蛋白水平,ELISA检测细胞上清中白细胞介素1β(IL-1β)的分泌水平,结合细胞毒性实验(MTT)确定2 mmol/L为SO_2衍生物的实验浓度。采用RNA干扰技术沉默16HEB细胞NLRP3基因及ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理16HBE细胞,通过流式细胞术检测细胞内ROS, Western blot和ELISA分别检测NLRP3和caspase-1 p20蛋白表达及IL-1β分泌水平。结果:与对照组比较, 2 mmol/L和4 mmol/L SO_2衍生物组细胞内ROS水平、 NLRP3和caspase-1 p20蛋白表达及细胞上清液中IL-1β水平明显升高(P0.05)。与2 mmol/L SO_2衍生物组比较,NLRP3 siRNA组细胞内的NLRP3和caspase-1 p20蛋白水平明显降低(P0.05),且细胞上清液中IL-1β的浓度明显下降(P0.05),ROS无明显变化;NAC组NLRP3和caspase-1 p20蛋白水平及IL-1β浓度均明显下降(P0.05)。结论:SO_2衍生物激活支气管上皮细胞NLRP3炎症小体,促进IL-1β生成。     

皮质酮抑制LPS诱导的小鼠巨噬细胞NLRP3表达及与XO的关系

目的:探讨皮质酮(CORT)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)表达的抑制作用及与黄嘌呤氧化酶(XO)的关系。方法:用LPS构建小鼠巨噬细胞RAW 264.7的炎症模型。运用不同浓度(0~900μg/L)的CORT处理巨噬细胞后提取细胞总蛋白,Western blot法检测细胞NLRP3和caspase-1的蛋白水平;按处理因素分组为:对照组、LPS组、LPS+CORT组和LPS+别嘌呤醇(allopurinol)组,分别于0、0.5、1、1.5和2 h提取细胞成分,运用real-time PCR和Western blot法检测细胞NLRP3和XO的m RNA和蛋白水平。结果:高于700μg/L的CORT可显著抑制LPS诱导的巨噬细胞中NLRP3的表达及caspase-1的活化(P0.05);与LPS组相比,LPS+CORT在下调LPS诱导的巨噬细胞NLRP3表达的同时抑制XO的表达(P0.05),LPS+allopurinol组巨噬细胞NLRP3的表达减少(P0.05)。结论:较高浓度的CORT能抑制LPS诱导的小鼠巨噬细胞NLRP3的表达,而CORT的抑制作用可能与其下调XO的表达水平有关。     

肝细胞内NLRP3炎症体的表达与炎症应答初步研究

目的探讨炎症体(inflammasome)在肝细胞内的表达,明确肝细胞内炎症体是否具有正常的炎症应答功能。方法以肝细胞株L02、HepG2为研究模型,RT-PCR、Real-time PCR检测LPS刺激及未刺激组caspase-1、IL-1β的mRNA的表达水平;Western blot检测NLRP3的表达和各刺激组胞内caspase-1活化;ELISA检测各刺激组上清中IL-1β和IL-18的分泌。结果 L02、HepG2细胞均表达NLRP3炎症体,LPS刺激促进肝细胞内caspase-1、IL-1β表达上调;内源性危险信号ATP能有效活化肝细胞内caspase-1酶原,促进IL-1β和IL-18分泌增加,caspase-1特异性抑制剂能特异性的抑制IL-1β、IL-18的分泌。结论肝实质细胞的NLRP3炎症体对内源性危险信号具有炎症应答功能,在肝内无菌性炎症的启动和维持中可能具有重要促进作用。     

TRIM31 过表达改善脂多糖诱导下神经细胞的炎症损伤

目的:探讨E3泛素连接酶31(TRIM31)对LPS诱导PC12细胞炎症性损伤的保护作用和机制。方法:用不同浓度LPS处理PC12细胞24 h,MTT法检测细胞增殖活性,Western blot检测LPS最佳浓度处理后PC12细胞TRIM蛋白表达水平。将TRIM31过表达质粒(pcDNA3.1-TRIM31)及其阴性对照质粒(pcDNA3.1-NC)转染至PC12细胞,qRT-PCR和Western blot检测细胞TRIM31 mRNA和蛋白表达水平。PC12细胞分为对照组(Control)、LPS组、LPS+NC组和LPS+TRIM31组,分组干预后,ELISA检测细胞上清IL-6、TNF-α、IL-1β和IL-18含量,流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫荧光检测NLRP3蛋白表达,qRT-PCR检测NLRP3、caspase-1 mRNA表达,Western blot检测NLRP3、caspase-1、Cleaved-caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:LPS剂量增加,PC12细胞增殖活性逐渐降低(P0.05),LPS处理可降低PC12细胞TRIM31蛋白表达水平(P0.01),TRIM31过表达,PC12细胞TRIM31 mRNA和蛋白表达水平显著提高(P0.05)。与Control组相比,LPS组细胞上清中IL-6、TNF-α、IL-1β和IL-18含量、细胞凋亡率及细胞Cleaved-caspase-3和Bax蛋白水平显著提高(P0.05),Bcl-2和TRIM31蛋白水平显著降低(P0.05),NLRP3蛋白荧光强度及NLRP3、caspase-1 mRNA和蛋白表达水平显著提高(P0.05);与LPS组相比,LPS+TRIM31组细胞上清中IL-6、TNF-α、IL-1β和IL-18含量、细胞凋亡率及细胞Cleaved-caspase-3和Bax蛋白水平显著降低(P0.05),Bcl-2蛋白水平显著提高(P0.05),NLRP3荧光强度及NLRP3、caspase-1 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P0.05)。结论:过表达TRIM31能通过抑制NLRP3炎症小体活化,改善LPS诱导的PC12细胞炎症损伤。     

外源性硫化氢对小鼠原代肝细胞内脂质自噬分解的影响

目的:研究硫化氢(H2S)供体GYY4137释放的外源性H2S对小鼠原代肝细胞内脂质自噬分解的影响。方法:采用2步原位灌流法分离C57BL/6小鼠原代肝细胞并分为4组:用正常培养基培养正常组细胞;模型组用含1.2 mmol/L油酸(溶于10%的BSA)的培养基培养48 h;H2S组和炔丙基甘氨酸(PAG)组则用1.2 mmol/L油酸(溶于10%的BSA)的培养液培养48 h,然后换无血清无酚红的RPMI-1640培养液(同时分别给予1 mmol/L GYY4137和200μmol/L PAG)处理6 h。收集各组细胞做LC3免疫荧光染色,拍摄荧光和相差图片;Western blot检测肝细胞中LC3-Ⅰ/Ⅱ的蛋白表达量;透射电镜观察肝细胞超微结构。结果:和模型组相比,H2S组肝细胞内LC3荧光颗粒和蛋白表达量增加,自噬溶酶体数量增加,细胞内空泡增多。结论:外源性H2S可促进脂肪变性肝细胞内脂质自噬分解。     

木香烃内酯通过抑制NLRP3 缓解LPS 诱导小鼠巨噬细胞的炎症反应

目的:探讨木香烃内酯(Cos)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠原代巨噬细胞炎性小体激活和炎症反应的影响。方法:提取并培养小鼠腹腔原代巨噬细胞,用不同浓度Cos预处理巨噬细胞1 h后,1 mg/L LPS处理,分为空白对照组、模型组(单用LPS)、不同浓度(5、10和20μmol/L) Cos+LPS组; ELISA法检测培养液上清中TNF-α/IL-6的含量,q PCR法检测TNF-α/IL-6 mRNA表达;为明确Cos对LPS诱发的炎症反应的保护机制,增加NLRP3抑制剂MCC950组(10μmol/L),LPS刺激4h、6 h,Western blot检测NLRP3、ERK及IκB的激活,细胞免疫荧光实验观察NLRP3的蛋白水平。结果:与LPS组比较,LPS+Cos组TNF-α/IL-6的mRNA表达及细胞培养液上清TNF-α/IL-6分泌均显著降低(P 0. 05); Western blot和细胞免疫荧光实验结果表明,与LPS组比较,LPS+Cos组的NLRP3蛋白水平显著降低,其抑制效果与NLRP3抑制剂MCC950相当(P 0. 05); Western blot结果表明,与LPS组比较,LPS+MCC950组和LPS+Cos组的ERK及IκB的激活均显著降低(P 0. 01)。结论:Cos能有效抑制LPS诱导的巨噬细胞炎性小体和NF-κB的激活而缓解炎症反应。     

犀角地黄汤合银翘散通过干预mtROS-NLRP3通路抑制流感病毒感染的巨噬细胞焦亡

目的:探究犀角地黄汤合银翘散(XDY)对流感病毒引起的炎症反应中巨噬细胞焦亡的作用及其机制。方法:将巨噬细胞J774A.1分为正常对照组(正常培养)、模型组(流感病毒PR8感染24 h)、XDY组(PR8感染+XDY作用24 h)、H_2O_2对照组(H_2O_2作用24 h)和H_2O_2+XDY组(H_2O_2+XDY作用24 h)。用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测各组细胞LDH的释放量,流式细胞术检测由caspase-1介导的细胞焦亡率,Western blot检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)和gasdermin D N端片段(GSDMD-N)蛋白表达量,ELISA检测白细胞介素1β(IL-1β)分泌水平,激光共聚焦显微镜观察活性氧簇(ROS)与线粒体的共定位和释放情况。结果:流感病毒感染及H_2O_2作用后,巨噬细胞LDH释放和GSDMD-N蛋白表达增多,caspase-1介导的细胞焦亡率升高,同时NLRP3蛋白表达、IL-1β分泌和线粒体ROS(mtROS)生成亦增多;与模型组和H_2O_2对照组相比,XDY可显著减少mtROS生成、NLRP3和GSDMD-N蛋白表达及IL-1β和LDH分泌,降低caspase-1介导的细胞焦亡率。结论:犀角地黄汤合银翘散通过干预mtROS-NLRP3炎症小体通路抑制巨噬细胞焦亡,这可能是其抗流感病毒引起的过度炎症反应的机制之一。     

小檗碱通过mtROS-NLRP3通路抑制H_(2)O_(2)诱导的巨噬细胞焦亡北大核心CSCD

目的:探究小檗碱(BBR)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的巨噬细胞焦亡的影响及mtROS-NLRP3通路在其中的调控作用。方法:以巨噬细胞J774A.1为研究对象,设置正常对照组(control组)、模型组(H_(2)O_(2)作用24 h)、BBR干预组(H_(2)O_(2)+BBR作用24 h)和ROS清除剂NAC干预组(H_(2)O_(2)+NAC作用24 h)。流式细胞术检测各组细胞活性氧簇(ROS)的生成,免疫荧光检测ROS与线粒体的共定位情况,实时荧光定量PCR检测各组细胞NLRP3、IL-1β的基因转录水平,Western blot检测NLRP3蛋白表达量,流式细胞术检测caspase-1的活化及其介导的细胞焦亡率,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测各组细胞LDH的释放量,ELISA检测IL-1β分泌水平。结果:与模型组相比,BBR干预后显著减少了H_(2)O_(2)诱导的巨噬细胞线粒体ROS(mtROS)的生成,下调了NLRP3和IL-1β的基因表达水平,减少了NLRP3蛋白的表达,降低了caspase-1活化水平及其介导的细胞焦亡率,同时减少了细胞上清液中LDH和IL-1β的释放。结论:小檗碱可能通过下调mtROS水平进而抑制NLRP3炎症体介导的细胞焦亡以减轻炎症反应。     

柯里拉京抑制LPS和ATP激活的NLRP3炎症小体和巨噬细胞焦亡

目的 探讨柯里拉京对细菌脂多糖(LPS)联合腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)诱导的巨噬细胞内NLRP3炎症小体活化和细胞焦亡的调控作用和机制。方法 采用CCK8试剂检测不同浓度柯里拉京对J774A.1细胞活力的影响;碘化丙啶(PI)染色和乳酸脱氢酶(LDH)释放检测柯里拉京对LPS+ATP诱导的细胞死亡的影响。Western blot法检测细胞上清液中炎症小体活化标志物caspase-1 p20(M_r20 000)和成熟IL-1β(M_r17 000)的表达水平,以及检测细胞内NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β前体(pro-IL-1β)和焦亡执行蛋白GSDMD的表达。ELISA检测细胞培养上清液中IL-1β的水平。活性氧(ROS)荧光探针H2DCFDA染色观察柯里拉京对ROS产生的影响。结果 柯里拉京浓度小于40μmol·L^-1时对细胞活性影响较小。柯里拉京减少LPS+ATP刺激的细胞内PI阳性细胞的比例和LDH的释放。柯里拉京抑制LPS+ATP刺激的巨噬细胞内GSDMD蛋白N末端(GSDMD-NT)的表达,以及...     

脂多糖通过NLRP3诱导并促进慢性鼻窦炎人鼻黏膜上皮细胞焦亡北大核心CSCD

目的革兰氏阴性菌能够诱发并加重慢性鼻窦炎(CRS)炎症反应,但病理机制有待进一步证实,而细胞焦亡被证实与细菌性炎症反应密切相关,因此本研究重点探讨来源于革兰氏阴性菌的关键成分脂多糖(LPS)是否能够通过诱导并加剧CRS患者鼻黏膜上皮细胞焦亡来促进CRS的炎症进展。方法利用临床上对照组和CRS组患者的鼻黏膜组织,采用IHC检测焦亡相关蛋白的表达。提取并培养正常原代人鼻黏膜上皮细胞(N-HNEpCs)和CRS原代人鼻黏膜上皮细胞(CRS-HNEpCs)。随后将2种细胞分为4组(对照组、LPS 1 mg/L组、LPS 5 mg/L组和LPS 25 mg/L组);CCK-8检测细胞存活率,EthD-I荧光染色结合GSDMD检测细胞焦亡,免疫荧光技术、Western blot、RT-qPCR检测炎性介质IL-18、IL-1β和NLRP3炎症小体(NLRP3、ASC、cleaved Caspase-1)的表达。结果IHC显示CRS患者鼻黏膜组织中NLRP3、cleaved Caspase-1、IL-18和IL-1β蛋白表达相较对照组显著增加(P<0.01)。体外实验结果表明,不同浓度的LPS刺激均可降低N-HNEpCs和CRS-HNEpCs的存活率(P<0.05),并可增加EthD-I荧光染色阳性细胞数和焦亡关键蛋白GSDMD的表达(P<0.05),且呈现出剂量依赖关系;免疫荧光技术、Western blot和RT-qPCR结果均显示5 mg/L LPS刺激后,N-HNEpCs和CRS-HNEpCs内炎性介质IL-18、IL-1β和NLRP3炎症小体的表达显著上调(P<0.05)。结论LPS可通过激活NLRP3炎症小体从而触发正常原代人鼻黏膜上皮细胞焦亡,并可进一步促进CRS原代人鼻黏膜上皮细胞焦亡进展,提示革兰氏阴性菌可能通过诱发鼻黏膜上皮细胞焦亡从而引起并加剧CRS病变。     

GYY4137对小鼠原代肝细胞胞质内脂质分解的影响

目的:探讨新合成的硫化氢(H2S)供体GYY4137对小鼠原代肝脂肪变性细胞胞质内脂质分解的影响。方法:体外用油酸诱导肝细胞脂肪变性模型。采用两步原位灌流法分离C57BL/6小鼠原代肝细胞并分为4组:对照组用正常培养液培养54 h;模型组用含1.2 mmol/L油酸(溶于10%BSA)的培养液培养48 h,再用RPMI-1640培养液培养6 h;H2S组和DL-炔丙基甘氨酸(PAG;胱硫醚γ-裂解酶抑制剂,抑制H2S合成)组则用含有1.2mmol/L油酸的培养液培养48 h,再用无血清无酚红的RPMI-1640培养液(分别给予含有1 mmol/L GYY4137和200μmol/L PAG)培养6 h。测量细胞甘油释放量及胞内激素敏感性脂肪酶(HSL)的蛋白表达量。结果:和模型组相比,H_2S组培养液中甘油释放量和磷酸化HSL(p-HSL)蛋白表达水平明显降低,而PAG组又明显升高。结论:在小鼠原代脂肪变性肝细胞中,GYY4137可能通过抑制HSL的磷酸化水平而减少胞质内脂质分解。     

阿托伐他汀通过下调NLRP1炎性体表达抑制IL-1β和IL-18的释放

 目的:探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白1(NLRP1)炎性体在阿托伐他汀抑制THP-1巨噬细胞白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)分泌中的作用。方法:用10 μg/L脂多糖诱导THP-1巨噬细胞分泌IL-1β和IL-18,以不同浓度阿托伐他汀(1、10和20 μmol/L)孵育细胞24 h,或以10 μmol/L阿托伐他汀处理细胞不同时间(12、24和48 h),或转染NLRP1 siRNA以沉默细胞内NLRP1的表达。采用RT-PCR检测细胞内NLRP1炎性体mRNA的表达,Western blot检测细胞内NLRP1炎性体蛋白的表达,ELISA检测细胞上清液中IL-1β和IL-18的含量。结果:阿托伐他汀可抑制THP-1巨噬细胞NLRP1炎性体mRNA和蛋白的表达,且这种效应呈浓度和时间依赖性。转染NLRP1 siRNA后,THP-1巨噬细胞NLRP1的蛋白表达明显下降,且阿托伐他汀对IL-1β和IL-18分泌的抑制作用明显增强。结论:阿托伐他汀通过抑制NLRP1炎性体表达减少巨噬细胞IL-1β和IL-18的释放,发挥抗炎作用,进而延缓动脉粥样硬化进展。     

四硫代钼酸铵作为新型硫化氢供体的鉴定及其对皮肤细胞的保护作用

 目的: 本研究旨在检测金属络合物四硫代钼酸铵(ATTM)的硫化氢(H₂S)释放能力并进一步观察其减轻氧化应激诱导的皮肤细胞损伤的作用。方法:反应瓶法检测ATTM在细胞培养基中释放的H₂S,二氯二氢荧光素二乙酸酯或罗丹明123染色结合荧光显微镜照相术分别检测细胞内活性氧簇(ROS)的含量和线粒体膜电位(ΔΨ_m),用试剂盒检测细胞存活率和乳酸脱氢酶(LDH)的释放。结果:与H₂S供体GYY4137类似,ATTM在细胞培养基中可剂量依赖性地释放H₂S。在25~400 μmol/L 的浓度范围内,ATTM处理对人皮肤细胞(HaCaT细胞)的存活率无明显影响(P>0.05)。紫外线照射或外源性给予ROS供体(过氧化氢,H₂O₂)处理均可增加HaCaT细胞内ROS的含量。400 μmol/L H₂O₂处理可明显降低HaCaT细胞的存活率(P<0.01),而在H₂O₂处理前给予ATTM预处理,细胞存活率明显提高,其中在100和200 μmol/L浓度时ATTM具有最好的细胞保护作用(P<0.01)。400 μmol/L H₂O₂处理还可损害细胞的ΔΨ_m和细胞膜并使LDH释放增加(P<0.01)。而在细胞遭受损伤前给予200 μmol/L ATTM预处理可明显改善ΔΨ_m的水平(P<0.05)并抑制LDH从细胞内释放(P<0.01)。结论:ATTM具有释放H₂S的能力并可保护人皮肤细胞对抗氧化应激诱导的损伤效应。     

硫化氢通过抑制坏死性凋亡对抗高糖引起的H9c2心肌细胞损伤

 目的: 探讨硫化氢(hydrogen sulfide,H₂S)能否通过调控坏死性凋亡(necroptosis)对抗高糖(HG)引起的H9c2心肌细胞损伤。方法: 应用Western blot法检测心肌细胞内能反映坏死性凋亡的RIP3蛋白和cleaved caspase-3蛋白的水平;细胞计数盒测定心肌细胞存活率;双氯荧光素染色荧光显微镜照相法检测细胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平;罗丹明123染色荧光显微镜照相法测定线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP);Hoechst 33258核染色荧光显微镜照相法测定凋亡细胞的数量。结果: 应用HG(35 mmol/L葡萄糖)处理H9c2心肌细胞3 h、6 h、9 h、12 h和24 h均能明显地上调RIP3蛋白的表达水平,其中24 h时RIP3蛋白水平增加最明显。400μmol/L硫氢化钠(NaHS;为H₂S的供体)预处理或坏死性凋亡的特异性阻断剂necrostatin-1(Nec-1;100μmol/L)共处理心肌细胞均能明显地抑制HG对RIP3蛋白表达的上调作用。此外,NaHS预处理或Nec-1共处理心肌细胞均显著地抑制HG引起的心肌细胞损伤,使细胞存活率升高,ROS生成及MMP丢失减少。另一方面,400μmol/L NaHS预处理心肌细胞能使凋亡细胞数量及cleaved caspase-3表达明显减少。结论: H₂S可通过抑制坏死性凋亡保护心肌细胞,对抗高糖引起的损伤。     

ATP敏感性钾通道在硫化氢抑制坏死性凋亡介导的高糖致H9c2心肌细胞炎症中的作用

目的:探讨ATP敏感性钾通道(K_ATP通道)在硫化氢(H2S)抑制坏死性凋亡介导的高糖(HG)致H9c2心肌细胞炎症中的作用。方法:应用Western blot法测定受体相互作用蛋白3(RIP3)和环氧化酶-2(COX-2)的表达水平;ELISA检测细胞培养液中白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平。结果:H9c2心肌细胞经HG(35 mmol/L葡萄糖)处理24 h,其RIP3的表达水平明显升高,100μmol/L K_ATP通道开放剂二氮嗪(DZ)和400μmol/L H_2S的供体硫氢化钠(Na HS)预处理心肌细胞30 min均可抑制HG对RIP3表达的上调;100μmol/L K_ATP通道阻断剂5-羟基癸酸(5-HD)预处理心肌细胞30 min可阻断Na HS对HG上调RIP3表达的抑制作用。另一方面,100μmol/L坏死性凋亡的特异性抑制剂necrostatin-1共处理或100μmol/L DZ、400μmol/L Na HS预处理心肌细胞均能抑制高糖引起的心肌细胞炎症,使COX-2表达及IL-1β和TNF-α的分泌水平均减少;而100μmol/L 5-HD能明显拮抗Na HS的上述抗炎症反应作用。结论:K_ATP通道在H_2S抑制坏死性凋亡介导的高糖致心肌细胞炎症反应中发挥重要的作用。     

外源性硫化氢通过抑制JAK/STAT通路对抗高糖引起的人脐静脉内皮细胞损伤

目的:研究外源性硫化氢(H_2S)能否通过调控Janus激酶/信号转导及转录激活因子(JAK/STAT)通路对抗高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤。方法:Western blot法测定JAK2、STAT3、cleaved caspase-3的蛋白水平;CCK-8法检测细胞存活率;罗丹明123染色荧光显微镜照相法检测线粒体膜电位(MMP);双氯荧光素(DCFH-DA)染色荧光显微镜照相法测定胞内活性氧(ROS)水平;超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒检测SOD活性。结果:应用400μmol/L硫氢化钠(NaHS,为H_2S的供体)预处理HUVECs 30 min能明显地抑制高糖(40mmol/L葡萄糖,HG)对p-JAK2和p-STAT3蛋白水平的上调作用。400μmol/L NaHS预处理30 min或20μmol/L JAK/STAT通路抑制剂AG490预处理30 min均能抑制高糖对HUVECs引起的损伤,使细胞存活率和SOD活性升高,cleaved caspase-3蛋白水平、ROS生成量及MMP丢失均减少。结论:外源性的H_2S通过抑制JAK/STAT通路保护HUVECs对抗高糖引起的损伤。     

硫化氢对肠缺血再灌注损伤大鼠回肠上皮细胞凋亡的影响

 目的: 探讨硫化氢(H₂S)对大鼠缺血再灌注(I/R)损伤回肠上皮细胞线粒体形态和功能及凋亡的影响。方法: 24只雄性Wistar大鼠随机分为假手术(sham)组、I/R组和I/R+NaHS组。建立大鼠肠I/R损伤模型。在灌注前10 min时经I/R+NaHS组大鼠尾静脉注入100 μmol/kg NaHS后按1 mg·kg^-1·h^-1输注直到再灌注2 h,实验结束后取回肠标本测定回肠上皮细胞形态和呼吸功能指标。敏感硫电极法测定血浆H₂S含量。RT-PCR检测回肠组织Bcl-2和Bax mRNA表达,Western blot 检测总caspase-3、活化型caspase-3、细胞色素C(Cyt C)、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果: I/R组线粒体的面积、体积密度、最大直径、最小直径、等效直径以及活化型caspase-3、Cyt C和Bax表达均显著大于I/R+NaHS和sham组(P<0.01)。I/R组线粒体数量、周长、比表面、面积密度和粒子数密度、血浆H₂S、R₃、R₄、RCR、P/O和Bcl-2表达均显著小于I/R+NaHS和sham组(P<0.01)。结论: 硫化氢下调活化型caspase-3、Cyt C和Bax的蛋白水平,上调Bcl-2表达,对I/R损伤大鼠回肠上皮细胞线粒体形态和功能均有保护作用。