Smad1与糖尿病肾病

糖尿病肾病（DN）是最常见的糖尿病微血管并发症之一,目前,它已成为发达国家终末期肾衰的首位原因。代谢紊乱如高血糖、异常的血流动力学改变及遗传易感性等都可能导致DN的发生发展，但其具体发病机制尚未完全阐明。DN的基本病理特征是细胞外基质合成增多，肾小球基底膜增厚，     

Smad3 WT、Smad3 EPSM、Smad3 3S-A 3种质粒稳转HepG2细胞株的建立与功能研究

目的建立Smad3 WT、Smad3 EPSM及Smad3 3S-A 3种质粒稳转HepG2细胞株,探究单纯转染3种质粒及选择性上调p Smad3C、p Smad3L对HepG2细胞功能的影响。方法采用脂质体转染试剂盒将Smad3 WT(野生型Smad3基因)、Smad3 EPSM(Smad3L区磷酸化位点突变)、Smad3 3S-A(Smad3C区磷酸化位点突变)3种质粒转染至HepG2细胞中,经G418筛选阳性细胞,Western blot法鉴定3种质粒稳转细胞株的转染效率。MTT法检测细胞增殖情况。流式细胞术检测细胞周期及凋亡。结果 Western blot结果显示,转染相应质粒的HepG2细胞高表达目的蛋白,提示稳转细胞株构建成功。MTT结果显示,在缺乏TGF-β_1刺激情况下,转染3种质粒后对HepG2细胞增殖几乎没有影响,TGF-β_1能够诱导稳转细胞株的细胞增殖,且转染Smad3 EPSM质粒的HepG2细胞,较未转染、转染Smad3 WT或Smad3 3S-A质粒的HepG2细胞对TGF-β_1诱导的细胞增殖反应减弱。细胞周期分析显示,TGF-β_1刺激下,转染Smad3 EPSM质粒组G_0/G_1期细胞数明显增多,而转染Smad3 3S-A质粒组G_2/M期细胞数增加明显。细胞凋亡检测显示,TGF-β_1刺激下,较未转染和转染Smad3 WT质粒组,转染Smad3 EPSM质粒组细胞凋亡率明显增加,而转染Smad3 3S-A质粒组细胞凋亡率明显降低。结论成功建立Smad3 WT、Smad3 EPSM及Smad3 3S-A 3种质粒稳转HepG2细胞株,为进一步探讨开发能够经由调控p Smad3C、p Smad3L的药物提供一定的基础。     

积雪草甙对瘢痕成纤维细胞增殖与磷酸化Smad2和Smad7表达的影响

目的 研究积雪草甙对瘢痕成纤维细胞增殖与磷酸化Smad2和Smad7的影响。方法 用组织块法培养人瘢痕成纤维细胞,采用流式细胞术、免疫细胞化学检测其在正常状况和应用积雪草甙后细胞周期的改变与磷酸化Smad2和Smad7的改变。结果 积雪草甙可抑制瘢痕的成纤维细胞从S期进入M期,减少成纤维细胞中磷酸化Smad2的含量,增加细胞中Smad7的含量。结论 积雪草甙抑制瘢痕的作用可通过Smad通路。     

人肝癌及癌旁组织中Smad 4、Smad 7 mRNA和蛋白表达研究

目的 :分析Smad 4、Smad 7mRNA和蛋白在人肝癌组织中的表达并与癌旁组织比较 ,了解Smad 4mRNA和蛋白与肝癌临床病理特征之间的关系。方法 :用原位杂交和免疫组化方法检测 36例肝癌存档病理标本和其中的 2 8例癌旁组织病理标本Smad 4、Smad 7mRNA和相应的蛋白。结果 :Smad 4mRNA和其蛋白在肝癌组织中的表达低于肝癌癌旁组织 ,癌组织表达率分别为 2 8%和 19% ,癌旁组织表达率分别为 86 %和 75 % ,两者之间差别有统计学意义(P <0 .0 1)。Smad 7mRNA和其蛋白表达则相反 ,癌组织表达强 ,表达率分别为 6 6 %和 6 4 % ,癌旁组织表达率分别为14 %和 36 % ,两者之间差别有统计学意义 (P <0 .0 1和P <0 .0 5 )。Smad 4mRNA和蛋白与肝癌患者年龄、性别和肿瘤大小无关 ,但与肿瘤细胞类型、是否转移存在相关性。结论 :Smad 4和Smad 7蛋白作为转化生长因子 - β(TGF β)信号转导途径的下游分子 ,在肝癌组织中表达发生了改变 ,参与肝癌的发生、发展。     

TGF-β1、Smad4、Smad7在口腔鳞癌组织中的表达及临床意义

目的 分析转化生长因子(TGF-β 1)、Smad4、Smad7在口腔鳞癌(OSCC)组织中的表达情况及其与OSCC临床特征的关系,进一步探讨TGF-β 1/Smad4或Smad7信号途径在OSCC形成和发展中的作用,为OSCC的诊断及治疗提供理论依据.方法 收集2013年3月至2016年2月在本院住院治疗的62例OSCC患者,采集OSCC标本及癌旁正常黏膜组织标本,采用免疫组化法测定TGF-β1、Smad4、Smad7在标本中的表达,分析他们与OSCC临床特征的关系.结果 OSCC组织中TGF-β 1、Smad7阳性表达率明显高于癌旁正常黏膜组织,Smad4阳性表达率明显低于癌旁正常黏膜组织(均P＜0.05).TGF-β 1、Smad7阳性表达率随OSCC病理分级增加而升高,随OSCC分化程度降低而升高,有淋巴结转移者TGF-β 1、Smad7阳性表达率明显高于无淋巴结转移者(P＜0.05);Smad4阳性表达率随OSCC病理分级增加而降低,随OSCC分化程度降低丽降低,有淋巴结转移者明显低于无淋巴结转移者(P＜0.05).经Spearman相关分析显示,在OSCC组织中,TGF-β 1表达与Smad4表达呈负相关(P＜0.05),与Smad7表达呈正相关(P＜0.05).结论 OSCC组织中存在TGF-β 1、Smad7过表达及Smad4低表达,因此,三者联合检测更利于OSCC的诊断和治疗.     

Ubiquitination and regulation of Smad7 in the TGF-β1/Smad signaling of aristolochic acid nephropathy

Abstract

Aristolochic acid I (AAI) affects TGF-β1/Smad signaling, which causes AA nephropathy (AAN), but the mechanisms are not fully understood. We aimed to clarify whether Arkadia and UCH37 participate in TGF-β1/Smad signaling via Smad7, and the regulatory mechanisms of Smad7. One side, mice and cultured mouse renal tubular epithelial cells (RTECs) were treated with various AAI doses and concentrations, respectively; on the other side, RTECs were transfected with small interfering RNA (siRNA) expression vectors against Arkadia and UCH37 and then treated with 10?µg/ml AAI. And then detect the mRNA and protein levels of Smad7, UCH37, Arkadia and any other relative factors by RT-PCR and Western blotting. In kidney tissues and RTECs, the mRNA and protein levels of Smad7 decreased with increasing AAI doses concentrations by real-time PCR and Western blotting, whereas those of Arkadia, UCH37, Smad2, Smad3 and TβRI increased. Cells transfected with the Arkadia siRNA expression vector showed reduced mRNA and protein levels of vimentin, α-SMA, Smad2, Smad3 and TβRI after AAI treatment, while those of CK18 and Smad7 increased compared with those of untransfected RTECs. Conversely, cells transfected with the UCH37 siRNA expression vector showed the opposite effect on analyzed signaling molecules after AAI treatment. Arkadia and UCH37 participate in TGF-β1/Smad signaling-mediated renal fibrosis, and Smad7 blocks TGF-β1 signaling by inhibiting Smad2/Smad3 phosphorylation and enhancing the degradation of TβRI.     

缬沙坦对肝纤维化大鼠TGF-β_1/Smad3,Smad7表达的影响

目的探讨缬沙坦对肝纤维化大鼠TGF-β1/Smad3,Smad7表达的影响。方法复合因素法制作大鼠肝纤维化模型,在制模的不同阶段(2、4、6、8周)采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)法检测大鼠血清中TGF-β1含量的变化,免疫组化法测定肝组织Smad3及Smad7表达的变化;并将雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、8周模型组及缬沙坦治疗组。缬沙坦治疗组在造模8周后予以缬沙坦(20mg/Kg,1次/日,共2周)灌胃,正常对照组和8周模型对照组予以等量蒸馏水(1次/日,共2周)灌胃,治疗结束,2周后处死各组大鼠,免疫组化法检测Smad3及Smad7在大鼠肝组织中的表达。结果与正常对照组相比,2、4、6、8周模型组大鼠血清TGF-β1的含量及肝组织Smad3的表达进行性升高,而肝组织Smad7的表达进行性减少(P<0.01);给予缬沙坦干预后,血清TGF-β1的含量及肝组织Smad3的表达较模型明显减少,而Smad7的表达明显增加(P<0.01)。结论缬沙坦可通过降低肝纤维化大鼠TGF-β1/Smad3的表达,增加Smad7的表达,发挥其抗肝纤维化的作用。     

Smad6信号干扰对MSCs骨向分化中Smad5及Smurf1基因表达的影响

目的研究在骨形态发生蛋白2(BMP-2)诱导的骨髓间充质干细胞(MSCs)骨向分化中Smad6信号干扰对Smad5、Smurf1基因表达的影响。方法培养小鼠骨髓MSCs,并分为3组:A组为对照细胞;B组细胞用携带绿色荧光蛋白(GFP)的空白载体病毒转染+BMP-2骨向诱导;C组细胞用Smad6重组RNA干扰载体转染+BMP-2诱导。结果病毒转染后GFP在MSCs中有效表达,病毒转染效率接近100%。与A组比较,BMP-2诱导24h显著提高了B组Smurf1 mRNA水平(P<0.01);而Smad6信号干扰在两个时间点则进一步提高了C组Smurf1 mRNA水平,并显著高于B组(P<0.01)。C组磷酸化的Smad5(pSmad5)和Smurf1水平在两个时间点也显著高于B组(P<0.01),而Smad5蛋白水平则未受影响。结论在BMP-2诱导的MSCs骨向分化中,Smad6 RNA干扰可促进Smad5磷酸化,并引起Smurf1基因表达代偿性增高。     

转化生长因子-β1对绒毛膜癌JEG-3细胞增殖及Smad3、Smad7表达的影响

目的:观察转化生长因子(TGF)-β1对绒毛膜癌JEG-3细胞增殖能力及其Smad3、Smad7蛋白表达的影响.方法:体外培养人绒毛膜癌JEG-3细胞,分别给予不同剂量及不同作用时间的TGF-β1进行诱导,四甲基氮唑比色法检测细胞增殖能力变化,蛋白印迹法检测Smad3、Smad7蛋白的表达变化.结果:JEG-3细胞对TGF-β1的诱导作用表现为良好的浓度效应和时间效应.100、200μg/L TGF-β1作用后,细胞增殖率显著增加(P＜0.01),Smad3蛋白的相对表达量增加(P＜0.05或P＜0.01),Smad7蛋白无明显改变(P＞0.05);同时100μg/L TGF-β1作用12 h后,细胞增殖率显著增加,Smad3蛋白相对表达量增加(P＜0.05或P＜0.01),Smad7蛋白表达无改变(P＞0.05).结论:外源性TGF-β1能够促进绒毛膜癌JEG-3细胞的增殖,具有良好的浓度效应和时间效应;绒毛膜癌JEG-3细胞逃逸TGF-β1介导的生长抑制作用,可能是由于TGF-β1/Smads信号通路中的Smad3、Smad7蛋白发生异常而致.     

骨形态发生蛋白介导的Smad依赖途径和Smad非依赖途径对骨质疏松症的潜在调节作用研究进展

糖皮质激素长期使用、雌激素减少、继发性甲状旁腺功能亢进、骨组织微环境改变等多种因素均可诱发骨质疏松症。骨代谢失衡(成骨-成脂失衡)是骨质疏松症发病的关键机制,而骨髓间充质干细胞分化为脂肪细胞增加和成骨细胞减少是导致骨质疏松症成骨-成脂失衡的核心。骨形态发生蛋白(bone morphogenesis protein,BMP)则是调控骨质疏松症成骨-成脂平衡的关键蛋白,而这一调控作用又是通过Smad依赖途径和Smad非依赖途径来实现的。本文重点介绍了BMP介导的Smad依赖途径和Smad非依赖途径,并详细介绍了BMP-2、BMP-4、BMP-6、BMP-7、BMP-9通过上述途径参与骨质疏松症成骨、成脂代谢调控的可能机制,以期为临床抗骨质疏松症药物有效靶点的筛选提供新思路。     

Smad2／3和Smad7蛋白在血中性粒细胞中的表达与哮喘发病关系的实验性研究

目的：观察Smad2／3和Smad7蛋白在大鼠哮喘血中性粒细胞（PMN）中的表达,探讨PMN能否通过Smads体系参与哮喘气道炎症的发病过程。方法：卵白蛋白（OVA）诱导大鼠哮喘模型,20只SD大鼠随机分成哮喘组和正常对照组,分离纯化血PMN,免疫细胞化学法检测PMNSmad2／3和Smad7蛋白的表达水平。结果：哮喘组（0．142±0．021,OD值）Smad2／3蛋白的表达水平显著高于正常对照组（0．081±0．011,OD值）（P〈0．01）,而哮喘组（0．125±0．024,OD值）Smad7蛋白的表达水平显著低于正常对照组（0．257±0．047,OD值）（P〈0．01）。两者的表达呈显著负井目关（n=19,r=-0．891,P〈0．01）。结论：Smads体系在哮喘时处于失衡状态,受体调节型Smad占优势。哮喘时PMN合成Sinad2／3和Smad7蛋白的功能增加,PMN可能部分通过Smads体系参与哮喘的气道炎症过程。     

转化生长因子-β及其Smad信号转导的研究进展

<正>转化生长因子-β(TGF-β)是具有多种生物学活性的多肽类细胞因子,在细胞的增殖、分化、凋亡等过程中起重要的调节作用,与炎症、纤维化、肿瘤等关系密切。Smads蛋白作为TGF-β下游的信号蛋白分子,是将TGF-β信号从细胞外转导到细胞核内的关键因子,在细胞水平介导TGF-β的生物学效应。本文就近年来国内外在TGF-β及其Smad跨膜信号转导、主要生物学作用及与风湿性疾病关系的研究进展作一综述如下。     

TGF-β／Smad信号通路与糖尿病肾病

糖尿病肾病 (DN) 是糖尿病的主要并发症之一, 严重影响着糖尿病患者的生存质量和生存率。近年来,糖尿病肾病研究最多的是TGF-β,因为它通过TGF-β/ Smad信号网络通路不仅能抑制细胞增生, 更重要的是它能促进细胞外基质的积聚,抑制其降解, 并诱导肾细胞凋亡, 而促进细胞外基质的     

Smad4在结肠癌组织中的表达及其临床意义

目的：探讨Smad4 mRNA的表达在结肠癌组织与癌旁正常组织之间的表达差异,及与结肠癌临床病理参数与预后的关系。 方法：选择78例结肠癌手术切除的标本,选取结肠癌组织和相应的癌旁正常组织;采用荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测两组Smad4 mRNA表达水平,Kaplan-Meier法和Cox比例回归模型分析Smad4 mRNA表达与结肠癌临床病理参数与预后之间的关系。 结果：结肠癌组织中Smad4 mRNA表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05)。淋巴结转移、血管淋巴管浸润、肿瘤TNM分期与Smad4-mRNA负相关(P<0.05)。Kaplan-meier生存分析显示Smad4高表达的结肠癌患者有更长的生存期。多因素分析结果显示Smad4 mRNA表达水平是影响结肠癌预后的独立影响因子。 结论：Smad4表达在结肠癌的发生、发展发挥着抑制因子的作用,是影响结肠癌预后的独立影响因子。     

Smad2蛋白在宫颈癌组织中的表达及意义

目的 探讨Smad2蛋白在宫颈癌组织中的表达情况以及意义.方法 免疫组化法检测正常子宫组(NE组,n=61)和宫颈癌组(CC组,n=53)组织中Smad2蛋白的表达情况.结果 Smad2蛋白在NE组的表达阳性率是39.3％,在CC组的表达阳性率是77.4％,两组阳性率差异有统计学意义(P＜0.01).宫颈癌高分化和中低分化者的阳性率分别为52.6％和91.2％,差异有统计学意义(P＜0.01);癌细胞浸润程度的越高≤1/2和＞1/2者阳性率分别是66.7％和91.3％,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Smad2蛋白在宫颈癌组织中表达减少,与宫颈癌浸润程度、癌细胞分化程度密切相关,通过检测Smad2蛋白提供临床诊断和预后的指标.     

TGF-β/Smad信号转导通路与肝纤维化研究进展

肝纤维化是慢性肝病向肝硬化发展的中间过程,以胶原蛋白为主的细胞外基质（extracellular matrix,ECM）合成与降解失衡,导致过多的胶原在肝内沉积,是多条细胞信号转导通路和一系列细胞信息分子网络共同控制的结果。转化生长因子β（TGF-β）是肝纤维化病变过程中最关键的细胞因子之一。其中TGF-β/Smad信号转导通路是TGF-β信号转导调节肝星状细胞（HSC）活化促进ECM生成的主要途径。本文就TGF-β/Smad信号转导通路在肝纤维化过程中的作用及其研究进展予以综述。     

Transforming growth factor-β/Smad signalling in diabetic nephropathy

Diabetic nephropathy (DN) is a major diabetic complication that is mediated by transforming growth factor (TGF)-β1 via Smad-dependent and -independent signalling pathways. Under diabetic conditions, many profibrotic factors, such as advanced glycation end-products and angiotensin II, can also activate the Smad signalling pathway via the extracellular signal-regulated kinase/p38 mitogen-activated protein kinase-Smad signalling cross-talk pathway. Thus, Smads act as signal integrators and interact with other signalling pathways to mediate DN. In the context of renal fibrosis, Smad3 is pathogenic, but Smad2 is protective. Deletion of Smad3 inhibits, whereas disruption of Smad2 upregulates, connective tissue growth factor and vascular endothelial growth factor expression and promotes both epithelial-myofibroblast and endothelial-myofibroblast transition. Smad7 plays a protective role in DN because deletion of Smad7 enhances, whereas overexpression of Smad7 inhibits, Smad3-mediated renal fibrosis and nuclear factor-κB-driven renal inflammation. Transforming growth factor-β1 activates Smad3 to regulate microRNAs that mediate renal fibrosis. Of these, miR-21 and miR-192 are upregulated, whereas the miR-29 and miR-200 families are downregulated. Targeting downstream TGF-β/Smad signalling by overexpressing Smad7- or Smad3-dependent microRNA related to fibrosis may represent a novel and effective strategy for the treatment of DN.     

DPC4/Smad4在胰腺癌组织中的表达

目的 检测胰腺癌组织和正常胰腺组织中DPC4/Smad4基因的表达差异,探讨其在胰腺癌发病机制中的作用.方法 分别运用RT-PCR和免疫组化技术检测40例胰腺癌和36正常胰腺组织中的DPC4 mRNA及蛋白的表达.结果 胰腺癌组织中DPC4阳性16例(40%);正常胰腺组织的DPC4的阳性表达率100%(36/36).免疫组化显示癌组织中的弥漫阳性数为4例,局灶阳性数为10例,阳性表达率35%(14/40);正常胰腺组织的弥漫阳性数为16例,局灶阳性数为20例,阳性表达率100%(36/36).两者比较有显著性差异(P＜0.05).结论 DPC4基因在胰腺癌组织中有明显的表达异常,可能与胰腺癌的发病有一定的关系,可考虑作为胰腺癌患者一个临床诊断或预后的指标.     

Smad6信号干扰对MSCs骨向分化的影响

目的研究Smad6信号干扰对骨形态发生蛋白2（BMP-2）诱导的骨髓间充质干细胞（MSCs）骨向分化的促进效应。方法培养小鼠MSCs,用BMP-2诱导骨向分化。细胞分为3组：A组细胞用携带绿色荧光蛋白（GFP）的Smad6重组RNA干扰载体转染;B组细胞用空白载体转染;C组细胞作为对照。结果病毒转染后GFP在MSCs中有效表达,病毒转染效率达98．5％。与B组比较,Smad6RNA干扰显著提高了A组细胞AIP活性和骨钙素水平（P〈0．01）,而C组ALP活性和骨钙素水平均显著低于其他2组（P〈0．01）。茜素红染色显示,A组矿化结节数目显著多于B组（P〈0．05）,而c组无矿化结节形成。结论Smad6RNA干扰可有效促进BMP-2诱导的MSCs骨向分化,该研究为骨组织工程中骨缺损修复提供了一个极具价值的手段。     

Smad3基因调控食管鳞癌发生及 EGCG 干预研究

目的：探讨 Smad3基因与食管鳞癌发生及发展关系,表没食子儿茶素没食子酸酯（ epigallocatechin-3-gallate,EGCG）抑制食管癌细胞 Ec9706增殖作用及调控 Smad3基因表达水平。方法 RT-PCR 方法检测44例食管鳞癌及正常食管组织中 Smad3基因表达水平,流式细胞术方法检测38例原发性食管鳞癌和20例正常食管组织的细胞周期,不同浓度 EGCG（0、100、200、300 mg/ L）作用 Ec9706细胞24、48 h 后流式细胞术检测细胞增殖及 Smad3蛋白表达水平。结果食管鳞癌组织中 Smad3 mRNA 表达水平显著低于正常食管组织中的表达水平,差异有统计学意义（P <0.05）。食管鳞癌组织增殖指数显著高于正常食管组织（ P <0.05）。不同浓度 EGCG 作用 Ec9706细胞24 h后,细胞增殖指数显著降低（ P <0.05）,而 Smad3蛋白表达水平显著增高（ P <0.05）。结论 Smad3在食管鳞癌中的异常表达参与了食管鳞癌发生及发展,EGCG 具有抑制食管鳞癌生长作用与调控 Smad3蛋白表达有关。