机械牵张应力刺激成骨细胞的差异蛋白质组学研究

目的应用蛋白质组学方法分析人成骨样细胞Saos-2在牵张应力作用下蛋白质表达的差异,为更全面地阐明成骨细胞对牵张应力的反应机制提供分子基础。方法将Saos-2分为加力组与对照组,采用Flexcell牵张应力加载系统,用12%大小的应力值进行力学刺激24 h后,应用蛋白质双向凝胶电泳分离蛋白样品,质谱技术鉴定差异表达蛋白点,并用生物信息学分析差异蛋白参与的生物学过程和主要功能。结果对照组和加力组分别得到(1031±41)和(928±25)个蛋白质点,质谱鉴定出肽酰脯氨酰异构酶A样3、线粒体ATP合成酶、抗氧化蛋白1、丝切蛋白1、蛋白磷酸酶1、延伸因子2等17个表达增高的差异蛋白质,涉及应激反应、能量代谢、细胞增殖、细胞骨架重建、信号转导及成骨分化等生物学功能。结论成骨细胞在机械牵张应力作用下蛋白表达发生显著变化,这些差异蛋白参与了成骨细胞力学反应机制的不同过程。     

缺血后处理通过抑制线粒体途径减轻缺血/再灌注诱导的肠黏膜细胞凋亡

目的：探讨缺血后处理减轻缺血/再灌注损伤肠黏膜细胞凋亡的机制。方法:SD大鼠随机分为4组（n=8）：假手术（sham）组、缺血/再灌注（I/R）组、缺血预处理（IPreC）组、缺血后处理（IPostC）组;应用透射电子显微镜和激光共聚焦扫描显微镜分别观测各组大鼠肠黏膜细胞线粒体形态结构改变和线粒体跨膜电位的变化。应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法和免疫组织化学方法分别检测各组大鼠肠黏膜细胞凋亡发生情况以及肠黏膜细胞bcl-2、bax mRNA及Bcl-2、Bax蛋白表达的变化。结果:与I/R组相比,IPostC组和IPreC组大鼠肠黏膜细胞线粒体形态结构改变明显减轻,线粒体跨膜电位显著升高（均P<0.05）,肠黏膜细胞凋亡率明显降低（均P<0.05）,肠黏膜细胞bcl-2 mRNA和Bcl-2蛋白表达水平显著上升,bax mRNA和Bax蛋白表达水平明显下降（均P<0.05）,IPostC组和IPreC组相比各项指标差异无显著差异（均P>0.05）。结论:缺血后处理可能通过抑制线粒体途径减轻缺血/再灌注诱导肠黏膜细胞的凋亡。     

老年大鼠心肌线粒体的比较蛋白质组学研究

目的:筛查心肌线粒体中与衰老相关的蛋白质。 方法：分离成年组（10周）和老年组（12月）雄性SD大鼠心肌线粒体，抽提心肌线粒体蛋白质行双向凝胶电泳，应用MALDI-TOF-MS和数据库搜索鉴定图像分析出的差异蛋白点，同时进行了心肌组织ATP含量的检测。 结果:图像分析示84个心肌线粒体蛋白表达发生改变，质谱鉴定了15个差异点。老年组肌酸激酶、硫氧还原蛋白过氧化物酶2、Tu翻译延长因子、异柠檬酸脱氢酶4个蛋白表达上调，琥珀酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶、乌头酸水合酶、NADH脱氢酶、ATP合酶H+转运装置、ATP合酶β链、热休克蛋白60、葡萄糖调节蛋白78、prohibitin、乙醛脱氢酶2、电压依赖型阴离子通道11个蛋白表达下调。老年组心肌组织ATP含量下降(P<0.01)。 结论:通过具有高度分辨率和高度重复性的双向凝胶电泳图谱鉴定了SD大鼠心肌线粒体中在老年组差异表达的蛋白质，这些差异蛋白为深入理解衰老的分子机制提供了有益的线索，差异蛋白的功能留待以后进一步研究。     

复方双黄溶液对重度烧伤大鼠肠黏膜损伤超微结构的影响

目的探讨复方双黄（主要成份大黄和黄芪）溶液对重度烧伤后大鼠肠黏膜超微结构和作用机制。方法以大鼠为实验动物分为正常对照组不烫伤、自由进食水；烧伤对照组烧伤前1h胃饲1ml生理盐水，烧伤后6h第2次胃饲，4d；烧伤胃饲大黄组，烧伤胃饲双黄组在同等时间胃饲等量大黄溶液，复方双黄溶液。通过透射电镜、扫描电镜观察肠黏膜病理形态。结果烧伤胃饲双黄组肠黏膜病理形态改变较烧伤胃饲大黄明显减轻。结论复方双黄溶液可改善烧伤后肠黏膜病理形态改变，且优于烧伤胃饲大黄组。     

缺氧后处理诱导大鼠心肌细胞蛋白质差异表达

目的研究缺氧后处理（hypoxic postconditioning,H-postC）与缺氧／复氧（hypoxia／reoxygenation,H／R）诱导的大鼠心肌细胞蛋白质差异表达,旨在从内源性蛋白表达变化的角度阐明后处理保护的分子机制。方法原代培养Sprague-Dawley（SD）乳鼠心肌细胞随机分为3组（均n=4）：（1）缺氧／复氧（H／R）组：将细胞置于缺氧仓内,通入95％N2-5％CO2混合气2h后,37℃常氧孵育24h;（2）缺氧后处理（H-postC）组：细胞置于缺氧仓内2h,复氧10mitt／缺氧20rain,反复2次,37℃常氧孵育24h;（3）对照组（control）：细胞置于CO2孵箱37℃常氧孵育至实验结束。提取各组心肌细胞蛋白质,经双向电泳分离、考马斯亮蓝染色后扫描分析蛋白质表达变化,选取9个差异显著的蛋白点进行胶内酶切、肽质量指纹图谱分析和NCBInr数据库检索。结果双向电泳可分离（553±31）个蛋白质,点匹配率为80．1％±1．5％。与对照组相比,6种蛋白质在H-postC组表达升高,而在H／R组表达降低;1种蛋白质在H-postC组和H／R组表达均降低,而H-postC组降低更为明显;1种蛋白质在H-postC组和H／R组表达均升高,而H-postC组升高更为明显;1种蛋白质仅在H-postC组表达升高。质谱鉴定的9种蛋白质可分为5类：①保护性伴侣分子：DJ-1蛋白、αB-晶体蛋白、热休克蛋白27;②细胞凋亡调节分子：星型胶质细胞磷蛋白15。非受体6型蛋白酪氨酸磷酸酶;③核糖核蛋白复合体组分：不均质核内核糖核蛋白K;④线粒体能量代谓十相关分子：线粒体ATP合酶D链、细胞色素C氧化酶亚单位VIa;⑤细胞骨架蛋白：β-肌动蛋白。结论H-postC可能通过上调保护性分子伴侣、调节细胞凋亡相关的信号分子、稳定核糖核蛋白复合体结构、维持线粒体功能活性、稳定细胞骨架而发挥心肌保护作用。     

IGF-1通过BTEB调控CYPs途径保护心肌细胞免于凋亡

目的：探讨胰岛素样生长因子1对大鼠心肌细胞凋亡保护作用的基因调控机制。方法体外培养新生大鼠心肌细胞,通过RT-PCR及Werstern-blot观察IGF-1调节BTEB及其下游细胞色素C家族成员CYP1A1、2E1、3A11和11A1的基因表达情况。过氧化氢处理诱导心肌细胞凋亡,通过Annexin V-FITC/PI双染色法、Caspase 3活性测定、Hoechest33258染色法和Tunel法观察下调CYPs的基因表达对心肌细胞凋亡的影响;JC-1线粒体膜电位检测法和透射电镜观察心肌细胞线粒体膜电位和形态的改变。结果大鼠心肌细胞经IGF-1刺激60 min后,BTEB mRNA和蛋白表达均明显下降;IGF-1刺激48 h后, CYP1A1、2E1、3A11和11A1的mRNA和蛋白表达均明显下降（均P<0.01）;用BTEB特异性的siRNA人为下调BTEB基因表达后,CYP1A1、3A1 mRNA和蛋白表达明显下降（均P<0.01）,CYP2E1、11A1 mRNA和蛋白表达变化不明显。与对照组相比,H2O2诱导的大鼠心肌细胞用CYP1A1、2E1、3A11和11A1特异性的siRNA人为下调上述基因表达后,Annexin V-FITC/PI双染法显示心肌细胞凋亡率下降（均P<0.05）、Caspase 3活性测定显示酶活性降低（均P<0.05）、Hoechest33258染色和Tunel法检测结果显示凋亡小体和凋亡细胞数目减少,与IGF-1的抗心肌细胞凋亡效果相似;且细胞线粒体膜电位下降率明显降低（均P<0.05）,线粒体形态明显改善。结论 IGF-1可以通过下调细胞色素C家族成员CYP1A1、2E1、3A11和11A1的表达改善线粒体功能,其中CYP1A1、3A11受BTEB调控途径发挥抗心肌细胞凋亡作用。     

脑缺血再灌后大鼠脑线粒体呼吸功能和呼吸酶活性的变化

本文通过对大鼠全脑缺血ZOmin及缺血后再灌1h、6h、48h、4d、7d（每组10／只）脑线粒体呼吸控制率变化的研究和对各组大鼠（每组5只）脑线粒体呼吸链的标志酶琥珀酸脱氧酶、细胞色素氧化酶的酶组织化学的观察，从亚细胞结构来探讨脑缺血再灌流损伤的规律和机制。用丙酿酸钠和苹果酸钠作底物测得各组脑线粒体在有ADP刺激（呼吸三态）和无ADP刺激（呼吸四态）下的氧气消耗及呼吸控制率（呼吸三态／呼吸四态）的数据见表1。用图象分析仪测得各组酶染颗粒面积见表2。线粒体的内膜是细胞呼吸和产能的主要场所。在脑缺血和再灌期，线粒体的损…     

胰高血糖素样肽-2对脓毒症大鼠肠黏膜通透性的影响

目的探讨胰高血糖素样肽-2（GLP-2）对脓毒症大鼠肠黏膜通透性的影响。方法采用腹腔注射内毒素（5mg／kg）的方法制作脓毒症模型,根据预实验结果选取病理变化最严重的注射后6h作为实验时间点。成年雄性SD大鼠60只,按数字表法随机分为生理盐水对照组（A组）、脓毒症组（B组）、治疗组（C组）3组,每组20只。A、B、C组分别以生理盐水、脂多糖（LPS）、GLP-2＋LPS腹腔注射于大鼠模型;于注射后6h摘眼球取血,紫外分光光度法检测D-乳酸含量,留取末端回肠组织用免疫组化法检测紧密连接蛋白occludin表达,同时观察肠黏膜病理（HE染色）改变。结果光镜下A组肠黏膜未见明显病理改变;B组肠黏膜明显充血水肿,上皮细胞部分变性、坏死脱落,并有大量炎细胞浸润;C组肠黏膜病理改变较B组明显减轻。A组occludin蛋白沿着细胞膜的顶端呈线状连续分布,B组occludin蛋白分布不均,染色变淡,C组occludin蛋白表达连续性部分恢复,染色变深。B组血液中D-乳酸含量（8．14±0．91）mg／L,高于A组的（3．98±0．68）mg／L和C组的（6．46±0．73）mg／L,差异均有统计学意义（F=144．12,P值均〈0．01）。结论脓毒症大鼠肠黏膜屏障受损,通透性增加;GLP-2可以减轻脓毒症大鼠肠道屏障功能损伤的程度,对脓毒症的肠道损伤有一定治疗作用。     

大鼠肠缺血再灌注损伤后肠黏膜差异表达蛋白质组的分离与鉴定

3、醛脱氢酶和醛糖还原酶,前3种酶与改善能量代谢相关,后3种酶与抗氧化应激、抑制凋亡相关.结论 建立了重复性较好的正常与II/R损伤后大鼠肠黏膜组织的双向凝胶电泳图谱.II/R的损伤机制可能与顺乌头酸酶、丙酮酸激酶、细胞色素C还原酶、蛋白二硫化物异构酶A3、醛脱氧酶和醛糖还原酶的下调有关.     

胆固醇代谢调控的研究进展

胆固醇的合成、分解及逆向转运与动脉粥样硬化密切相关。又头转录因子的0亚型3（forkheadbox03,Fox03）／去乙酰化酶6复合物（Sirt6complex）、3β-脱氢胆固醇-A24还原酶（3p—hydroxysterolA（24）．reductase,DHCR24,Seladin．1）和死亡结构域相关蛋白（deathdomainassociatedprotein,Daxx）可以通过调控核转录激活因子一甾醇调节元件结合蛋白（sterolregulatoryelement—bindingproteins,SREBPs）的表达和活化来调节胆固醇合成限速酶[如3-羟基3．甲基戊二酰辅酶A还原酶β-hydroxy-3。methvlggutaryl—coenzymeAreductase,HMGCR）]等的转录,最终调控胆固醇的合成;外周组织的胆固醇逆向转运至肝脏后在细胞色素P450超家族（cytochromeP450proteins,CYP）的作用下分解成胆汁酸或类固醇激素。胆固醇的分解代谢则受精脒／精胺-N1-乙酰基转移酶、Prospero相关同源蛋白1和Daxx等的严密调控;胆固醇逆向转运是防止动脉粥样硬化斑块和坏死中心形成的关键因素。肿瘤坏死因子α和红细胞很可能在巨噬细胞介导的胆固醇逆向转运中起着非常重要的作用。     

Modes of Inheritance of Errors of Refraction

Eighteen families in which both parents had refractions within the range of +4·0 D to −4·0 D and axial lengths seen in emmetropia (22·3-26·0 mm) showed coefficients of correlation of the order 0·5 indicative of polygenic inheritance. Such coefficients were seen for axial length (0·407) and for the cornea (0·487), but not for the lens (which is known to be yoked to the axial length). No such coefficients were seen in 19 families in which one of the parents had axial length outside the emmetropic range (nine families with long axes and 10 with short axes).

The pattern of polygenic inheritance for emmetropia (completely correlated optical components) and errors of refraction up to 4·0 D (inadequately correlated components: correlation ametropia) follows that seen in stature and other measurable characters. In contrast the high refractive errors with their abnormal axial lengths (component ametropia) are—like the extremes in stature—pathological anomalies with monofactorial inheritance.

     

Level of functioning of siblings and parents of probands of varying degrees of retardation

A further analysis of already published data supports the position that retardates of low ability level less frequently have retarded siblings, retarded parents, and parents low in occupational level than do retardates higher in ability level. The analysis supports the position that there are two types of retarded individuals, persons retarded as a result of gene or chromosomal anomalies, brain injury, etc., who more frequently occur in the lower-level retardate group, and persons whose retardation represents polygenic segregation, who more frequently occur in the higher-level group.     

局部注射辛伐他汀对骨质疏松大鼠股骨髁骨小梁的改建效应

背景：局部注射具有成骨作用的辛伐他汀,可显著增加骨质疏松大鼠股骨颈及股骨髁部的骨密度及力学强度,分析局部注射辛伐他汀对股骨髁骨小梁的影响。 目的：进一步研究骨质疏松大鼠股骨内局部注射辛伐他汀对股骨髁骨小梁的影响。为将辛伐他汀应用于临床骨质疏松局部治疗提供实验基础。 方法：18只雌性SD大鼠双侧卵巢切除后3个月,制备大鼠骨质疏松模型。实验大鼠随机数字表法均分为3组,分别在实验大鼠的右侧股骨髓腔内单次注射辛伐他汀溶液5 mg、10 mg,对照组单纯注射空白载体。分别在注射后1个月处死大鼠并取材。Micro-CT扫描并定量分析骨组织形态变化。 结果与结论：给药后1个月,Micro-CT扫描结果显示,辛伐他汀治疗组的骨微结构参数如骨皮质厚度、骨小梁密度及连接率明显优于对照组。说明疏松骨骼单次注射小剂量辛伐他汀可显著促进股骨髁部骨小梁改建,改善骨骼微结构,可为强化局部、防治骨质疏松骨折的新选择进一步提供实验基础。     

Clinical perspectives of xenotransplantation of islets of Langerhans

This paper describes the rationale and different approaches for developing islets of Langerhans xenotransplantation. Implementing this therapeutic strategy in the treatment of human diabetes mellitus requires careful consideration of its potential risks and benefits, taking into account the current status of the treatment of this disease.