生肌液-明胶-壳聚糖载药皮肤支架的细胞相容性

背景：组织工程皮肤对于大面积皮肤缺损的修复与重建具有重要作用,含有中药的组织工程皮肤支架对于细胞黏附及创面感染控制的作用研究并不多见。 目的：利用角质形成细胞与成纤维细胞筛选生肌液应用浓度,观察生肌液-明胶-壳聚糖载药皮肤支架对细胞黏附及生物相容性影响。 设计、时间及地点：以角质形成细胞与成纤维细胞为观察对象,随机对照实验,于2005-02/08在天津市天津医院骨科研究所细胞工程室完成。 材料：健康大耳白兔1只,用于获取皮肤种子细胞;生肌液、当归提取液及生地提取液(自行提取,1.5 g/mL),明胶-壳聚糖支架及生肌液-明胶-壳聚糖支架由天津大学提供。 方法：①以dispaseⅡ-胰蛋白酶-EDTA消化法获取第3代角质形成细胞与成纤维细胞。②实验分为5组,对照组为普通培养液(含体积分数为0.1胎牛血清的基础培养基);生肌液组为含有生肌液质量浓度分别为5,6,8,12 g/L 的培养液;当归组为含有当归提取液质量浓度为8 g/L 的培养液;生地组为含有生地提取液质量浓度为8 g/L 的培养液;表皮生长因子组为含有10 μg/L 表皮生长因子的培养液;分别用于培养第3代角质形成细胞和成纤维细胞,于1,3,5,7 d 用MTT法检测细胞的增殖情况。③制备基质中生肌液质量浓度分别为50,60,80,120 g/L 的载药支架组,将上述细胞在支架上培养,分别于7,14 d 用半定量方法观察细胞与支架的黏附情况。④60,80 g/L 载药支架组种植角质形成细胞,分别于4,7,14 d 取材,进行苏木精-伊红染色和扫描电镜观察。 主要观察指标：①生肌液对皮肤种子细胞增殖的影响。②载药支架对细胞黏附的影响。③细胞与载体的相容性。 结果：①MTT检测结果表明,5、6、8 g/L 的生肌液组细胞增殖较快,与对照组相比,差异有显著性意义(P < 0.05)。②第3代角质形成细胞与成纤维细胞在60、80 g/L 的载药支架上可获得较多增殖。③支架上的角质形成细胞形态良好,与支架紧密贴附,药物对细胞无明显毒性作用。 结论：生肌液质量浓度为60,80 g/L的明 胶-壳聚糖载药支架可有效促进角质形成细胞和成纤维细胞的黏附和增殖。     

组织工程皮肤移植过程中白细胞介素10和肿瘤坏死因子α的表达

背景：白细胞介素10和肿瘤坏死因子α在异体异种皮肤移植局部免疫与排斥反应中发挥了重要作用。但在组织工程人工皮肤移植过程中局部皮肤组织内白细胞介素10和肿瘤坏死因子α的表达情况目前尚不清楚。 目的：采用表皮干细胞联合脱细胞真皮构建人工皮肤并移植修复兔全层皮肤缺损创面,观察创面修复效果和局部皮肤组织白介素10与肿瘤坏死因子α的表达变化。 方法：将体外培养的人表皮干细胞或角质细胞接种到脱细胞真皮支架中,构建组织工程人工皮肤;取新西兰白兔常规制作背部全层皮肤缺损创面随机分为4组,表皮干细胞组、角质细胞组用含表皮干细胞或角质细胞的组织工程皮肤移植于皮肤缺损创面;脱细胞真皮组移植单纯脱细胞真皮;对照组创面空置。观察创面修复情况,局部炎症反应,创面愈合时间。各组分别于术后7d在部分创面取材观察组织形态和白细胞介素10与肿瘤坏死因子α表达。 结果与结论：含表皮干细胞的人工皮肤移植后创面愈合良好,局部炎症反应轻微,无出血、积脓、坏死,创面愈合时间较角质细胞组明显缩短。白细胞介素10在各组均有表达,其中表皮干细胞组表达最强,角质细胞组次之,脱细胞真皮组和对照组最弱。肿瘤坏死因子α在各组也均有表达,其中角质细胞组表达最强,表皮干细胞组次之,脱细胞真皮组和对照组较弱。说明以表皮干细胞作为种子细胞联合脱细胞真皮构建人工皮肤可用有效促进皮肤缺损创面的修复治疗,创面修复过程中局部皮肤组织内白细胞介素10和肿瘤坏死因子的表达变化可能是其取得较好效果的主要机制之一。     

皮肤全层缺损真皮修复不同阶段对表皮再生的影响

背景：当前组织工程研究多着重表皮干细胞和真皮支架材料的研究,而少有真皮新生速度和真皮修复不同时期组织结构对表皮新生和重建影响的报道。 目的：观察真皮修复过程中对表皮修复和重建的影响以及是否有促进表皮修复速度的最佳阶段。 方法：新西兰大耳白兔10只分别于第0,7,14天在背部制成3个直径约为3 cm的创面,随机分为0,7,14 d组,每组计10个创面,3组创面分别于皮肤全层损伤修复后21,14,7 d植入自体表皮细胞羊膜载体复合膜。7 d后取材,采用大体观察、常规组织学观察(苏木精-伊红染色,Mallory PTAH染色)、Ⅰ型胶原免疫组织化学观察等化学染色动态观察创面愈合情况。 结果与结论：0 d组创面与周边正常有毛皮肤齐平,与周边组织连接明显较7 d组及14 d组紧密,7 d组尚有凹面,而14 d组创面凹陷明显较7 d组大而深,与周边组织分界明显,这表明0 d组皮肤缺损的修复效果明显优于其他2组(P < 0.05)。 0 d组Ⅰ型胶原阳性的成纤维细胞、血管及胶原纤维等组成的真皮网状层和乳头层较其他2组明显(P < 0.05),创面愈合率高(P < 0.05)。真皮修复的不同时期,对表皮再生的促进作用存在不同,全层皮肤缺损处于真皮修复的增生晚期与重建初期是促进表皮新生的最佳阶段。 关键词：表皮再生;羊膜;碱性成纤维生长因子;维生素C;皮肤缺损;皮肤组织工程     

应用人工真皮联合自体薄层皮片移植修复深度皮肤软组织缺损11例

背景：深度皮肤软组织缺损创面积极的治疗方法往往以皮瓣修复为主，但对患者身体状况要求较高，且代价较大。人工真皮是最早开发和成功应用于临床的组织工程化皮肤替代物，主要用于皮肤软组织缺损的修复。 目的：拟观察人工真皮联合自体薄层皮片移植对深度皮肤软组织缺损创面的修复效果。 设计、时间及地点：病例分析，于2006-01/2008-03在北京大学第三医院成形科、北京积水潭医院烧伤整形科完成。 对象：11例患者均存在由于手术或外伤导致不同程度和部位的皮肤软组织缺损创面，部分病例伴有骨质外露、骨膜缺损。 方法：手术中一期扩创，需要时凿骨，移植人工真皮，经2~4周创面被类真皮组织覆盖后，二期进行自体薄层皮片移植。 主要观察指标：观察创面愈合及植皮存活情况，供皮区有无明显瘢痕。 结果：11例创面均得到良好覆盖。创面愈合后1个月复查，植皮后愈合良好，供皮区均没有明显瘢痕。 结论：人工真皮联合自体薄层皮片移植对深度皮肤软组织缺损创面具有良好的修复效果，供区损伤小。人工真皮的应用为修复包含骨外露创面在内的深度皮肤软组织创面提供了一种新方法。     

自制羊膜载体复合物植入表皮细胞修复全层皮肤缺损

摘要 背景：利用组织工程和细胞培养技术研制的复合皮肤距理想的人工皮肤尚有一定的差距,如局部皮肤薄弱、抗拉及抗摩擦能力差、无皮肤附属器等。 目的：观察含碱性成纤维细胞生长因子和维生素C的羊膜载体复合物对皮肤缺损局部真皮组织的修复作用,寻找真皮组织修复重建促进表皮生长的最佳时期。 方法：取新西兰大耳白兔36只,在每只背部建立皮肤全层缺损模型3处,分别植入含有缓释碱性成纤维细胞生长因子和维生素C羊膜载体复合物、单纯羊膜载体复合物及油纱覆盖。随机分为3组,分别于术后21,14,7 d植入自体表皮细胞混合液,1周后行大体、组织学、免疫组织化学、墨汁灌注等观察。 结果与结论：术后21 d植入表皮细胞组皮肤缺损局部新生皮肤瘢痕轻、形态结构较满意,创面愈合速度和质量均优于术后14,7 d 植入表皮细胞组,并且植入含碱性成纤维细胞生长因子和维生素C羊膜载体复合物组创面皮肤新生真皮组织完全被新生的表皮覆盖,而且表皮几乎均变为复层,其生长速度及质量优于单纯羊膜载体复合物移植组和油纱覆盖组。说明含有碱性成纤维细胞生长因子和维生素C的羊膜载体复合物植入皮肤全层缺损后,能加速真皮的修复和重建;真皮组织修复增生晚期和重建初期为促进表皮生长的最佳时期。 关键词：羊膜载体复合物;表皮细胞;碱性成纤维细胞生长因子;皮肤创伤愈合;真皮 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2011.16.003     

人工真皮修复急性创伤后足背皮肤软组织缺损14例

背景：人工真皮具有硅胶膜和胶原海绵双层结构,是最早开发和应用于临床的组织工程化皮肤替代物,主要应用于皮肤软组织缺损修复。 目的：评价人工真皮在足背严重皮肤软组织缺损中的应用。 方法：选择北京积水潭医院烧伤科于2009-06/2010-12收治的14例急性外伤后足背严重皮肤软组织缺损患者,均有肌腱或骨外露。所有患者经清创后,以人工真皮移植,待人工真皮成活后以自体断层皮片移植,观察人工真皮和自体皮的成活情况。 结果与结论：所有植皮成活,创面愈合良好,供区未见明显瘢痕增生。提示人工真皮联合自体断层皮片移植可以有效修复足背严重皮肤缺损创面,减少供区损伤。     

人工皮肤替代物的材料种类及其特征

目的：评价组织工程人工皮肤替代物各种生物材料的性能和应用，寻找适合人体的替代物。 方法：以“组织工程，人工皮肤，支架材料”为中文关键词，“tissue engineering， Artificial skin，intravascular stent” 为英文关键词，采用计算机检索1993-01/2009-10相关文章。纳入与有关生物材料与人工皮肤修复相关的文章；排除重复研究或Meta分析类文章。以26篇文献为主重点进行了讨论组织工程人工皮肤替代物及其性能。 结果：组织工程人工皮肤是应用组织工程技术将体外培养的上皮细胞和成纤维细胞扩增后，接种于具有良好生物相容性的材料上，经体外培养，形成含有与正常皮肤相似的表皮和真皮结构的皮肤替代物。然后将其移植于皮肤创面处，以实现创伤的修复和重建。将两种或两种以上的材料复合在一起，或对生物材料表面进行各种各样的修饰，促进细胞与材料之间的黏附、提高细胞的生物活性、维持生物功能成为目前组织工程生物材料研究的热点。 结论：目前还没有一种人工材料能完全符合组织工程的要求。进一步提高支架材料的微观渗透性和生物活性，促进毛细血管的长入；制备结构仿生支架材料及高活性复合支架材料是今后的研究方向。 关键词：组织工程皮肤材料；人工皮肤；支架材料；皮肤替代物；生物相容性 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.29.037     

转基因骨髓间充质干细胞移植与组织工程皮肤的血管化

背景：组织工程化皮肤移植后常因缺乏足够的血管化而导致低灌注和缺血损伤。利用转基因技术,可将血管生成调控因子基因导入目的细胞,使其表达某些调控因子,进而利于血管生成。 目的：观察转基因骨髓间充质干细胞移植促进组织工程皮肤血管化基因治疗的可行性。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2008-03/11在江西省南昌大学第一附属医院烧伤研究所完成。 材料：人骨髓间充质干细胞由试验者取自临床骨髓穿刺检查骨髓正常的患者。pShuttle-CMV/VEGF165 质粒转化大肠杆菌菌种由武汉协和医院郜勇博士惠赠。16只新西兰大白兔用于皮肤缺损模型的制作,分为基因转染骨髓间充质干细胞组、骨髓间充质干细胞组、真皮支架材料组进行移植。 方法: 采用密度梯度离心结合贴壁法分离培养人骨髓间充质干细胞,以pShuttle-CMV/VEGF165质粒转染骨髓间充质干细胞。于兔背部两侧制备2 cm×2 cm 的正方形全层皮肤缺损3个,并分别以人血管内皮细胞生长因子165转染骨髓间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、不含细胞的真皮支架材料植入全层皮肤缺损创面。 主要观察指标：观察局部组织微血管密度变化及移植物成活率。 结果：术后7 d,3组创口周围皮肤均无明显红肿及炎症反应,移植物与创面接触紧密,基因转染骨髓间充质干细胞组、骨髓间充质干细胞组可见部分真皮泛红, 真皮支架材料组不明显,术后3周创面基本愈合,基因转染骨髓间充质干细胞组创面的毛细血管密度较骨髓间充质干细胞组、真皮支架材料组明显增高(P < 0.01),14 d时3组中基因转染骨髓间充质干细胞组血管密度仍最高,但3组数据无统计学差异。术后二三周基因转染骨髓间充质干细胞组移植物成活率最高(P < 0.01)。 结论：血管内皮细胞生长因子转染骨髓间充质干细胞移植可改善和促进局部血管再生,促使新的毛细血管从创面长入移植的组织工程皮肤,从而促进组织工程皮肤的早期血管化及创面愈合。     

组织工程皮肤的生物学特性及其临床应用评价

背景：尽管组织工程皮肤已应用于皮肤缺损的修复治疗,但远未达到完全代替永久性皮肤的程度。 目的：探讨不同类型组织工程皮肤的生物学特性及其临床应用评价。 方法：应用计算机检索Pubmed数据库(1990-01/2005-12),检索词为“tissue-engineered skin”;应用计算机检索CNKI数据库(2002-01/2007-12),检索词为“组织工程皮肤”。 结果与结论：计算机初检得到226篇文献,阅读标题和摘要进行初筛,排除因研究目的与此文无关或内容重复性的研究,共保留11篇文献进行分析。皮肤组织工程学目的是创建出组织学及功能特性上最接近人类皮肤组织的皮肤替代物,尽管目前已经有多种较为成熟的组织工程皮肤产品应用于临床,并且又研制了多种人工皮肤类型,但是它们大多数只是在结构上与人体皮肤类似,只具有皮肤的屏障功能,由于缺乏皮肤附件,所以它们并不具备完整的皮肤功能,并没有达到真正的皮肤重建。理想的皮肤替代物应具有表皮层和真皮层,真皮层可以快速的血管化和神经再分布,可促进快速的生理性的伤口修复;表皮层可以快速地获得充分的屏障和保护功能,与伤口创面充分一体化。一种良好的真皮载体除了应具备较好的组织相容性外,还必须具有一定的理化性能,如强度、柔软度、弹性、透气、透湿性能,才能保证真皮和创面贴附良好,为细胞生长提供理想的纤维支架,从而促进自体皮生长。组织工程皮肤应用前景良好,但目前在生物相容性、皮肤功能重建等方面仍存在各种问题需要解决。 关键词：组织工程皮肤;生物相容性;移植;生物材料;综述文献     

人工真皮复合自体薄皮移植治疗皮肤软组织缺损

背景：修复皮肤软组织缺损自体或异体植皮治疗,往往需要多次植皮。而国内临床上应用人工真皮较少,应用经验亦不足。 目的：评价人工真皮治疗皮肤软组织缺损的疗效。 方法：收集因皮肤软组织缺损,行人工真皮结合自体薄皮移植修复创面的22例患者,其中骨外露6例,肌腱外露2例,表皮肿瘤切除3例,其他11例。一期清创移植人工真皮,2~4周后局部肉芽组织生长良好,外露肌腱、骨组织被类真皮组织覆盖,二期移植自体薄层皮片。观察取皮部位、损伤部位、操作性能、密封性、不良反应情况,结合评价临床效果及综合评价。 结果与结论：20例患者人工真皮结合二期自体薄皮移植全部存活,至二期植皮所需时间(18.50±4.27) d,其中1例患者因感染再次手术,2例患者行人工真皮后未行二期植皮,而自动上皮化;随访至3个月,21例损伤部位表皮生长性、外观性均良好、无瘢痕增生,1例因感染而致瘢痕增生严重、外观不良,但生长性良好;20例患者取皮部位无明显的色素沉着及色素脱出,无严重增生性瘢痕,上皮形成时间为(15.35±4.67) d。说明人工真皮结合自体薄皮移植修复皮肤软组织缺损,操作简便,创面愈合质量高,供皮区损伤轻微,至二期植皮时间较长,总体临床效果良好。     

Sympathetic skin response evoked by laser skin stimulation

The objective of this study was to evoke sympathetic skin responses (SSRs) in healthy subjects using laser stimulation and to compare these responses with those induced by conventional electrical stimuli. Twenty healthy subjects were investigated. SSRs were obtained using electrical and laser stimuli delivered to the wrist controlateral to the recording site. The sympathetic sudomotor conduction velocity (SSFCV) was measured in 8 subjects by simultaneously recording the SSR from the hand and the axilla. The latency (L) of the laser-induced SSR (ISSR) was significantly longer than that of the electrically-evoked SSR (eSSR) (mean ISSRL= 1.7 +/- 0.145 ms, mean eSSRL= 1.56 +/- 0.14 ms, p<0.05). The amplitude (A) of the ISSR was lower than the eSSR amplitude (mean ISSRA = 1.31 +/- 0.26 mV, mean eSSRA = 2.59 +/- 0.49 mV, p<0.05). No significant difference between the ISSR and eSSR was observed in either the SSFCV or the variability and reproducibility parameters. Our findings show that SSRs can easily be induced by laser stimuli and that this method shares the technical limitations of conventional eSSRs.     

Sympathetic skin response

Sympathetic skin response (SSR), defined as the momentary change of the electrical potential of the skin, may be spontaneous or reflexively evoked by a variety of internal or by externally applied arousal stimuli. Although the suprasegmental structures influencing the SSR in humans are not well known, SSR has been proposed as a non-invasive approach to investigate the function of the sympathetic system. SSR is easy to apply but current procedures are not sufficiently reliable for diagnostic purposes, and show imperfect correlations both with clinical features and other measurements of autonomic, in particular, sudomotor dysfunction.     

The sensory innervation of primate facial skin. I. Hairy skin

The present study analyzes the variety of sensory nerve terminals present in the hairy skin of the monkey face. In addition to vellus hairs, guard hairs and sinus hairs, a unique type of sinus hair has been identified in the skin of the lip designated a hemisinus hair. Hemisinus hairs have a smaller blood sinus as contrasted to sinus hairs in that the sinus does not extend to the bulb of the hair follicle.Each type of hair of the face and the lip has its own distinctive pattern of innervation utilizing 5 identifiable unique nerve terminals: free nerve endings, Merkel, lanceolate, Ruffini, and finally, scattered corpuscular receptors at least in some sinus hairs. Hemisinus and guard hairs lack corpuscular receptors and thus can have 4 different terminals, although Merkel terminals are not consistently present in guard hairs. Vellus hairs have only 3 types of receptors: lanceolate, Ruffini and free nerve endings.Free nerve endings (FNE's) have been found in the connective tissue capsule of primate sinus and hemisinus hairs in the angle between the hair shaft and sebaceous gland and in the same site in guard and vellus hairs. Small diameter myelinated fibers branch and end blindly in the connective tissue or can be intimately associated with the sebaceous gland. FNE's are characterized by the presence of numerous mitochondria, occasional electron opaque lipoidal inclusions, granules of glycogen, a variable population of small vesicles, a tendency to a 1:1 relationship between Schwann cell and enveloped axon. The Schwann cell investment is often deficient with the axolemma directly abutting its basal lamina.Merkel cells and associated axons are present in rete ridge collars surrounding sinus and hemisinus hairs and in the external root sheath of these two types of sinus hairs. Hemisinus hairs have scant Merkel cells as compared to sinus hairs.Lanceolate terminals are arranged longitudinally with respect to the axis of the hair and abut the basal lamina of the external root sheath. Guard hairs have a complete palisade of 2–3 dozen lanceolate terminals; however, vellus hairs may have scant or no lanceolate terminals.Ruffini terminals can be identified on all 4 hair types. Some vellus hairs lack Ruffini terminals, whereas all sinus and hemisinus hairs and most guard hairs have Ruffini terminals. The ultrastructural as well as light microscopic criteria for the identification of each of these receptors has been described and discussed.     

Parkinson's disease and skin

Parkinson's disease is associated with a variety of dermatologic disorders and the study of skin may provide insights into pathophysiological mechanisms underlying this common neurodegenerative disorder. Skin disorders in patients with Parkinson's disease can be divided into two major groups: 1) non-iatrogenic disorders, including melanoma, seborrheic dermatitis, sweating disorders, bullous pemphigoid, and rosacea, and 2) iatrogenic disorders related either to systemic side effects of antiparkinsonian medications or to the delivery system of antiparkinsonian therapy, including primarily carbidopa/levodopa, rotigotine and other dopamine agonists, amantadine, catechol-O-methyl transferase inhibitors, subcutaneous apomorphine, levodopa/carbidopa intestinal gel, and deep brain stimulation. Recent advances in our understanding of the role of α-synuclein in peripheral tissues, including the skin, and research based on induced pluripotent stem cells derived from skin fibroblasts have made skin an important target for the study of Parkinson's disease pathogenesis, drug discovery, novel stem cell therapies, and diagnostics.     

Neurology and the skin

As knowledge of pathophysiology grows, so does the refinement of diagnoses. Sometimes increased knowledge permits consolidation and unification. Unfortunately, at our present level of understanding, it usually demands proliferation of diagnostic categories. As tedious as this diagnostic splintering may seem, such is the price currently exacted of both the investigator and the clinician who seek to optimise management. Increased diagnostic refinement often requires inquiry into matters outside the bounds of one's specialty. Most often we turn to the radiologist or to the laboratory to narrow the differential diagnosis generated from the history and neurological examination. As we have shown, a useful intermediate step is extension of the physical examination to organs such as the skin, which are not the traditional preserve of the neurologist. That any text could confer the sophistication required for expert dermatological diagnosis is an unrealistic expectation. However, we hope that this review will encourage careful examination of the skin, hair, and nails by the neurological practitioner, with consideration of referral to a dermatologist when greater expertise is required.