LPS通过TLR4/MyD88/NF-κB途径促进人肝癌细胞增殖及转移能力

目的研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对人肝癌细胞HepG2增殖、粘附、侵袭、迁移能力的影响,并阐明相关机制。方法 (1)细胞增殖及粘附能力采用MTT法检测;(2)细胞侵袭和迁移能力采用Transwell小室模型检测;(3) Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor,MyD88)及核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)的蛋白和mRNA表达水平分别采用Western blot和RT-PCR测定。结果 (1) LPS(浓度分别为10、100、1 000 ng/m L)刺激Hep G224、48、72 h,与对照组相比,细胞增殖能力均增高,差异有统计学意义(均P 0. 05),且呈浓度和时间依赖性。(2)经100 ng/m L的LPS干预HepG2 48 h后,干预组细胞粘附能力明显高于对照组(P 0. 01);侵袭和迁移实验中穿膜细胞数比较,干预组均显著多于对照组(P 0. 01)。(3) LPS可明显上调TLR4、MyD88及NF-κB蛋白及mRNA表达水平(P 0. 05)。结论 LPS可能通过TLR4/MyD88/NF-κB途径促进人肝癌细胞增殖及转移能力。     

Hp感染性胃癌患者外周血单核细胞TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的变化及其临床意义

背景幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H. pylori)与胃癌的相关性已经得到了世界范围内的普遍认可,而TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关因子在胃癌患者中明显存在异常表达,因此与胃癌的发生及发展存在密切关系,但其是否与胃癌患者H. pylori感染之间也存在相关性,临床相关研究较少,值得进一步研究.目的探究H. pylori感染性胃癌患者外周血单核细胞TLR4/MyD 88/NF-κB信号通路的变化及其临床意义.方法选取2017-10/2020-10于湖州市第三人民医院收治的80例胃癌患者作为研究组,另外选择同期来我院进行体检且体检结果合格的50例健康者作为对照组.比较两组受试者、不同病理特征胃癌患者以及胃癌H.pylori感染患者外周血单核细胞中TLR-4、核因子κB (NF-κB)和髓样分化因子(MyD88)蛋白表达水平,并分析胃癌患者TLR-4、NF-κB和MyD88蛋白水平与H. pylori感染的相关性.结果与对照组相比较,研究组TLR-4、NF-κB、MyD88表达均明显偏高,差异均有统计学意义(P0.05);胃癌患者不同临床分期、是否出现淋巴结转移和不同浸润深度的TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关分子表达比较,差异均有统计学意义(P0.05);而不同性别、年龄的TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关分子表达比较,差异无统计学意义(P0.05);与H. pylori感染阴性相比较, H. pylori感染阳性TLR-4、NF-κB、MyD88表达均明显偏高,差异均有统计学意义(P 0.05);Pearson检验发现, H.pylori感染与TLR-4、NF-κB、MyD88表达之间有正相关(r=0.726、0.684、0.631,P 0.01).结论胃癌患者外周血单核细胞中的TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关分子表达水平均显著升高,且不同病理特征及参数分组下的TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关分子表达水平存在显著差异,推测H. pylori感染可能通过诱发TLR4/MyD88/NF-κB信号通路异常表达参与了胃癌的发生及发展.     

姜黄素抑制肝星状细胞MyD88及信号通路细胞因子表达的研究

目的探讨姜黄素在肝星状细胞MyD88依赖性途径中的作用机制。方法体外培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6,将HSCT6分为空白对照组、Control siRNA组、MyD88 siRNA干扰组、姜黄素组、姜黄素+Control siRNA组、姜黄素+MyD88 siRNA干扰组,siRNA处理组给予siRNA干扰48 h后,姜黄素组加入姜黄素作用24 h,各组均在收集细胞前12 h给予LPS诱导,收集各组细胞,Western blotting法检测MyD88蛋白表达;RT-PCR术检测细胞因子mRNA的表达。结果 MyD88 siRNA干扰、姜黄素均可降低MyD88蛋白的表达(P0.05),同时给予MyD88 siRNA干扰和姜黄素作用时,MyD88蛋白下降更明显(P0.05)。MyD88 siRNA干扰后TLR2、TLR4 mRNA表达差异无统计学意义(P0.05),姜黄素作用后TLR2、TLR4的mRNA表达降低,二者同时作用其下降更显著(P0.05);MyD88 siRNA干扰、姜黄素处理后NF-κB、TNF-α、IL-1βmRNA表达均降低,二者同时作用后其下降更明显(P0.05)。结论姜黄素可能通过抑制MyD88蛋白表达和MyD88依赖途径上的多种细胞因子的mRNA表达而阻断MyD88依赖性信号通路的转导,促进活化的HSCs凋亡,从而发挥其抗肝纤维化的作用。     

化瘀祛痰方药及其拆方对内皮细胞TLR4/NF-κB炎症信号通路干预的研究

目的探讨化瘀祛痰方药及其拆方含药血清对脂多糖(LPS)诱导人脐静脉内皮细胞EA.hy926 TLR4/NF-κB信号通路活化的干预作用。方法 40只SD大鼠随机分为5组,即空白对照组、全方组、补气组、化瘀组、祛痰组,各组大鼠分别以生理盐水和相应中药煎剂连续灌胃9 d,末次灌胃给药2 h后,腹主动脉采血,离心后分离血清。体外培养EA.hy926细胞,随机分为7组,即①正常对照组、②LPS刺激组、③全方组、④补气组、⑤化瘀组、⑥祛痰组、⑦空白血清对照组。其中②组加入终浓度为10μg/ml的LPS,③～⑦组用各组含药血清(浓度为10%)预处理24 h后加入终浓度为10μg/ml的LPS,各组细胞培养24 h后进行各项指标测定。采用实时定量反转录-聚合酶链反应(Real-time PCR)定量分析TLR4、NF-κB和TNF-αmRNA表达;ELISA法检测TNF-α含量;Western印迹检测TLR4、NF-κB蛋白表达。结果与正常对照组相比,LPS刺激后TLR4、NF-κB和TNF-α表达显著增加(P<0.01),全方组TLR4、NF-κB和TNF-α的表达与刺激组相比显著减少(P<0.01);拆方各组中,化瘀组TLR4、NF-κB和TNF-α水平均显著减少(P<0.01),而补气组和祛痰组TLR4、NF-κB和TNF-α水平降低不明显。结论化瘀祛痰方药及化瘀拆方可显著抑制内皮细胞TLR4/NF-κB炎症信号通路的活化,这可能是其抗AS的作用机制之一。     

肠炎清对免疫复合溃疡型结肠炎模型大鼠结肠组织NF-κB蛋白表达和TLR4、MyD88基因表达的影响

[目的]观察肠炎清对免疫复合溃疡型结肠炎模型(ICUC)大鼠结肠组织核因子-κB(NF-κB)蛋白表达及Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)基因表达的影响,探讨其治疗IBD的作用机制。[方法]采用三硝基苯磺酸(TNBS)加免疫复合法造模。将大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、肠炎清低、中、高剂量组(8.33、16.67、33.33ml/kg)、柳氮磺吡啶(SASP)组(0.5g/kg)。造模后第2天,用药组分别给予相应药物灌胃,7d后,麻醉处死大鼠,取新鲜结肠标本。采用免疫组化法检测NF-κBp65的蛋白表达,实时定量PCR法(qRT-PCR)检测TLR4mRNA、MyD88mRNA的表达。[结果]免疫组化结果 NF-κBp65在各组各只动物均可见阳性表达,其中肠炎清高剂量组及SASP组可显著下调NF-κBp65的表达,差异有统计学意义(P0.05)。PCR结果:造模后动物结肠组织TLR4mRNA、MyD88mRNA的表达量均有升高。与模型对照组比较,各给药组TLR4 mRNA、MyD88mRNA表达均有不同程度的下调,但差异无统计学意义。[结论]肠炎清能下调NF-κBp65蛋白表达、TLR4、MyD88基因表达,其作用机制可能与调控TLR4/MyD88/NF-κB信号转导通路有关。     

TLR4介导小鼠小胶质细胞自噬在脑出血后炎症反应的作用机制研究

目的研究TLR4介导小胶质细胞自噬在脑出血后炎症反应的作用机制。方法从C57BL/6J小鼠中提取分离原代小胶质细胞,分组1中,A组:小胶质细胞;B组:小胶质细胞+阴性siRNA转染;应用C组:小胶质细胞+TLR4-siRNA转染。应用Q-PCR和Western Blot检测分组1中TLR4的表达。分组2中,D组:小胶质细胞+等量的对照溶剂(0.9%NaCl);E组:小胶质细胞+自噬抑制剂(3-MA);F组:小胶质细胞+control-siRNA+3-MA;G组:小胶质细胞+TLR4-siRNA+等量的对照溶剂(0.9%NaCl);H组:小胶质细胞+TLR4-siRNA+3-MA。Western Blot检测LC3-Ⅱ/Ⅰ比值、TLR4、MyD88和核转录因子(NF-κB)蛋白表达。ELISA检测细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)水平。结果 (1)A组和B组TLR4 mRNA和蛋白表达水平无明显变化(P>0.05);与B组相比,C组TLR4 mRNA和蛋白表达水平下调(P <0.05)。(2)D组、E组和F组TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白水平无明显变化(P>0.05);与D组相比,G组TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白水平下调(P <0.05);与F组相比,H组TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白水平下调(P <0.05)。E组和F组LC3-Ⅱ/Ⅰ比值、TNF-α、IL-1β、IL-6水平无明显变化(P>0.05);与F组相比,H组LC3-Ⅱ/Ⅰ比值、TNF-α、IL-1β、IL-6水平下降(P <0.05);与G组相比,H组LC3-Ⅱ/Ⅰ比值、TNF-α、IL-1β、IL-6水平下降(P <0.05)。结论 TLR4-siRNA可抑制TLR4介导的小胶质细胞自噬,从而减轻自噬引起的脑出血炎症损伤。     

肾衰饮对CRF大鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路及炎症状态的影响

目的基于toll样受体(TLR)4/髓样细胞分化因子(MyD)88/核转录因子(NF)-κB信号通路探讨肾衰饮对慢性肾衰竭(CRF)大鼠炎症状态的干预机制。方法将60只SD大鼠,随机分成四组,分别为正常组、模型组、尿毒清组和肾衰饮组。进行4 w的干预治疗后,苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠肾脏组织病理形态改变,检测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN),酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,分别采用免疫组化法和Western印迹检测大鼠肾脏组织TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达。结果与正常组比较,模型组HE染色显示大鼠肾脏组织发生明显病理改变,血Scr、BUN、IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著升高(P<0.01),肾脏组织中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达均显著升高(P<0.01);与模型组比较,尿毒清组和肾衰饮组肾脏组织病理改变明显改善,血清Scr、BUN、IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著降低(P<0.01),肾脏组织中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达均显著降低(P<0.01)。结论肾衰饮能有效改善CRF大鼠的肾功能,其机制可能是抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路从而抑制炎症反应发生,达到治疗CRF的目的。     

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨大蒜素对大鼠冠状动脉微栓塞的影响及作用机制

目的基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨大蒜素对大鼠冠状动脉微栓塞(CME)的影响及作用机制。方法将60只SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、阳性对照组、大蒜素低、中、高剂量组,每组10只,其中空白对照组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,阳性对照组给予瑞舒伐他汀[3.0 mg/(kg·d)]灌胃,大蒜素低、中、高剂量组分别给予大蒜素[10、20、40 mg/(kg·d)]灌胃,预处理14天后,模型组、阳性对照组及大蒜素低、中、高剂量组采用左心室注射42μm微栓塞球造模,空白对照组采用左心室注射等体积生理盐水。检测大鼠心功能变化; HBFP染色法检测心肌微梗死面积; TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况; ELISA法检测白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;电化学法检测肌钙蛋白I(c Tn I)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平; RT-PCR法检测大鼠心肌组织中Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)和核因子κB p65(NF-κB p65) m RNA水平;Western blot法检测大鼠心肌组织中TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白表达。结果大蒜素可显著改善CME大鼠心功能,明显降低心肌微梗死面积和心肌细胞凋亡率,有效抑制炎症因子IL-1β、TNF-α和心肌损伤指标c Tn I、CK-MB表达,明显下调TLR4、MyD88和NF-κB p65 m RNA和蛋白相对表达量。结论大蒜素可抑制CME大鼠心脏功能障碍和心肌损伤,其作用机制可能与TLR4/MyD88/NF-κB信号通路密切相关。     

TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的研究进展

TLR4/MyD88/NF-κB信号通路主要包括toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)和核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB),在免疫及炎症机制中发挥作用。现已证实该通路的激活可导致多种疾病,其中肠易激综合征(IBS)在消化系统中发病率逐年升高,在分子机制的研究中,TLR4/MyD88/NF-κB信号通路在IBS尤其是IBS-D肠道低度炎症中的作用逐渐被人们重视。本文将对TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的研究进展作一概述。     

局部外敷刺山柑总生物碱乳膏的系统性硬皮病小鼠皮肤胶原沉积情况观察

目的 观察刺山柑总生物碱乳膏局部外敷系统性硬皮病（SSc）小鼠皮肤胶原沉积情况。方法 48只小鼠随机分为刺山柑组、青霉胺组、模型组、正常组各12只,正常组皮下注射生理盐水,其余各组小鼠背部皮下注射盐酸博来霉素（30 mg/d）制备SSc模型,制模成功后,刺山柑组背部注射部位外敷500 mg/kg刺山柑总生物碱乳膏,青霉胺组灌胃给予125 mg/kg青霉胺,模型组及正常组外敷不含药物乳膏基质。采用Masson染色法观察各组小鼠胶原蛋白沉积情况,并计算胶原容积分数;采用蛋白印迹法检测小鼠皮肤组织Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、细胞核因子（NF-κB）蛋白,免疫组化检测小鼠皮肤组织TLR4、MyD88蛋白。结果 与正常组比较,模型组小鼠胶原蛋白沉积显著增加（P<0.05）;与模型组比较,刺山柑组及青霉胺组胶原蛋白沉积明显减少（P均<0.05）。与正常组比较,模型组小鼠TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达增高（P均<0.05）;与模型组比较,刺山柑组及青霉胺组TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达降低（P均<0.05）。结论 刺山柑总...     

旋毛虫ES抗原对DC2.4细胞TLR4、NF-κB和AP-1 mRNA表达的影响

目的 探讨旋毛虫ES抗原对小鼠DC2.4细胞TLR4、NF-κB和AP-1表达的影响.方法 以实时荧光定量PCR（Real-time FQ-PCR）技术对空白对照组、LPS组、ES抗原组、ES抗原＋LPS/ES抗原组和LPS＋ LPS/ES抗原组,检测TLR4、NF-κB和AP-1基因mRNA表达水平变化.结果 ES抗原和LPS单作用组的TLR4、NF-κB和AP-1 mRNA相对表达量分别是6.14/4.09/3.63和4.68/4.71/4.11,是ES抗原和LPS预作用组的各基因相对表达量的2倍以上,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 实验证实,DC2.4细胞受ES抗原和LPS持续作用或者双重作用均可诱导小鼠DC2.4细胞TLR4、NF-κB和AP-1表达的降低,可能诱致DC2.4细胞免疫耐受.     

间充质干细胞对内毒素诱导急性肺损伤大鼠NF-κB的影响

目的探索NF-κB在内毒素诱导急性肺损伤的发病机理及间充质干细胞治疗机理中的作用。方法 90只SD大鼠随机分为5组:A组:正常对照组(n=18)尾静脉注射等量生理盐水;B组:内毒素组(LPS)(n=18):经尾静脉注射LPS 5 mg/kg;C组:高剂量干细胞组(BMSCH组)(n=18):经尾静脉注射LPS 5 mg/kg+BMSC 2×106/ml 0.5 ml;D组:低剂量干细胞组(BMSCL组)(n=18):LPS 5 mg/kg+BMSC 1×106/ml 0.5 ml;干细胞对照组(BMSC组)(n=18):骨髓间充质干细胞2×106/ml 0.5 ml。分别于造模后6、24、72 h,处死动物收取标本,每个时间点6只(LPS的24 h组因1只死亡固只处死5只)。取肺组织于生理盐水中迅速漂洗干净后,立即放入液氮中冷冻,后转入-70℃冰箱中保存备用,分别测定肺组织TNF-α、IL-1β及肺组织细胞核内的NF-κB表达。结果 TNF-ɑ、IL-1β及NF-κB不同组之间存在显著差异,各组同一时间点的比较:B组均较A组显著性升高,P<0.05;C、D组低于B组,差异有统计学意义;E组与A组差异无统计学意义。结论 NF-κB在尾静脉注射内毒素诱导急性肺损伤大鼠的肺组织中表达升高。注射内毒素后立即经尾静脉注射小鼠骨髓间充质干细胞显著降低急性肺损伤大鼠的肺组织中的NF-κB的活性。     

Lipopolysaccharide-Induced Toll-Like Receptor 4 Signaling in Cancer Cells Promotes Cell Survival and Proliferation in Hepatocellular Carcinoma

Background

Recent studies have shown that toll-like receptor 4 (TLR4) is involved in hepatocarcinogenesis. However, the significance of TLR4 signaling in cancer development and progression remains unclear.

Aim

The purpose of this study was to investigate the role of TLR4 in cancer cell survival and proliferation in hepatocellular carcinoma (HCC).

Methods

Fifty-three HCC and ten normal liver specimens were analyzed by immunohistochemistry, and three cell lines (HL-7702, PLC/PRF/5 and HepG2) were used for in vitro studies. Lipopolysaccharide (LPS), a specific ligand of TLR4, was used to activate TLR4 signaling. The effects of LPS-TLR4 signaling on cell survival, proliferation and invasion were examined. Specific inhibitors of NF-κB and MAPK (JNK, ERK and p38) signaling pathways were used to explore the role of each pathway in LPS-TLR4 signaling.

Results

TLR4 was overexpressed in HCC cell lines and in human HCC tissues, where it correlated with Ki-67 expression. LPS-induced activation of TLR4 signaling promoted cancer cell survival and proliferation. LPS-TLR4 signaling was associated with regulation on the activation of NF-κB and MAPK signaling pathways. LPS-TLR4-induced activation of ERK and JNK signaling promotes cell proliferation through regulating Bax translocation to mitochondria. Activation of NF-κB and p38 mediates cytotoxicity of LPS, and inhibition on these two pathways promotes cell proliferation in HCC cells.

Conclusion

Our results indicate that TLR4 signaling in cancer cells promotes cell survival and proliferation in HCC.     

肝复康药物血清对肝星状细胞核因子-κB及I、Ⅲ型胶原表达的影响

目的:通过观察中药肝复康中剂量浓度含药血清对肝星状细胞T6(hepatic stellate cell-T6,HSC-T6)细胞株中核因子-κB(NF-κB)、Ⅰ型胶原(TypeⅠCollagen,ColⅠ)及Ⅲ型胶原(TypeⅢCollagen,ColⅢ)基因表达的影响,探讨其抗纤维化的作用及分子机制。方法:常规方法制备肝复康中剂量浓度含药血清,并用肝复康含药血清干预,以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western-Blot方法观察分析NF-κB、ColⅠ和ColⅢ表达的变化并探讨其相关性。结果:经乙醛刺激后的HSC-T6细胞株NF-κB、ColⅠ和ColⅢ表达均上调,肝复康中剂量浓度含药血清处理后可明显下调上述基因的表达。结论:中药肝复康抗纤维化的机制可能与其抑制NF-κB及ColⅠ、ColⅢ的表达有关。     

高糖通过激活人脐静脉内皮细胞ⅠκB-α/NF-κB途径诱导MCP-1的表达

目的观察高糖诱导人脐静脉内皮细胞NF-κB的活性和单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）的表达,探讨糖尿病并发动脉粥样硬化的发病机制。方法在培养的人脐静脉内皮细胞中加入不同浓度葡萄糖,检测内皮细胞中MCP-1mRNA、MCP-1蛋白的表达,NF-κB的活性及IκB-α的磷酸化水平。结果高糖明显地诱导了血管内皮细胞NF-κB的活性、MCP-1的表达及IκB-α的磷酸化;NF-κB活性抑制剂明显地降低了高糖所诱导的MCP-1的表达。结论高糖通过诱导血管内皮细胞IκB-α的磷酸化激活NF-κB,从而诱导了MCP-1的表达。提示在糖尿病并发动脉粥样硬化的发病过程中,高血糖通过激活血管内皮细胞IκB-α/NF-κB途径诱导MCP-1的表达,进而发挥了重要的作用。     

1,25-二羟维生素D3调节NF-κB通路对减轻海水吸入型急性肺损伤的作用

目的 探讨海水吸入型肺损伤大鼠肺组织中核因子-κB（NF-κB）通路的变化以及1,25-二羟维生素D3对其干预作用.方法 32只大鼠完全随机分为空白对照组、海水处理组、VitD3预处理组和地塞米松处理组,每组8只.采用气管内滴注海水（3 ml/kg）的方法制作海水吸入型急性肺损伤大鼠模型,观察肺部病理变化,用ELISA法检测肺组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白介素-1β（IL-1β）的含量,Western blot检测磷酸化NF-κB的表达变化,免疫荧光观察A549细胞NF-κB核转移情况.结果 海水吸入4h后,大鼠肺部损伤明显,TNF-α和IL-1β的含量增高,NF-κB磷酸化以及核转移增多;1,25-二羟维生素D3预处理显著减轻了海水吸入导致的急性肺损伤,减少了炎症因子的释放,并且抑制了NF-κB磷酸化以及核转移.结论 NF-κB通路参与了海水吸入型肺损伤的发生发展,1,25-二.羟维生素D3能够通过抑制NF-κB信号通路减轻肺损伤.     

内毒素急性肺损伤 TLR4-LPS 信号传导对 NF-κB 活性的影响黄继义简

目的 本文旨通过检测肺组织TLR4、NF-κB表达及支气管肺泡灌洗液炎症因子含量,探讨TLR4/NF-Kb信号在ALI发病中的作用.方法 30只大鼠随机分为对照组、ALI组和干预组.静脉注射LPS构建肺损伤模型,实时定量PCR及western blot检测肺组织TLR4、NF-κB表达,ELISA法检测TNF-α、IL-1β浓度.结果 肺损伤评分：ALI组〉TLR4拮抗剂干预组〉对照组,肺泡灌洗液TNF-α、IL-1β浓度较对照组分别增加了7倍和3.5倍.ALI组肺组织中TLR4和NF-κB表达明显增加,TLR4拮抗剂能抑制二者表达.结论 TLR4/NF-κB信号通路在脂多糖大鼠急性肺损伤模型的发展过程中起重要作用,TLR-4受体过表达诱导NF-κB活化及其下游炎症因子释放,加重急性肺损伤.     

双歧杆菌分泌型粘附素对肠上皮细胞应激反应的影响

目的 观察双歧杆菌分泌型粘附素对肠上皮细胞应激反应后核因子(NF)-κB DNA结合活性、细胞胞质核因子抑制蛋白κB(IκB)、细胞胞核NF-κB p65的表达和肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-8等细胞因子表达的影响.方法 经培养的肠上皮Lovo细胞分为5组,分别经LPS( 100 ng/ml)、H2O2( 200 μmol/L)直接刺激3h以及经双歧杆菌分泌型粘附素(30 μg/ml)预孵30 min后再予LPS( 100 ng/ml)、H2O2刺激(200 μmol/L)刺激3h,正常对照组未作任何处理.采用凝胶电泳迁移率试验(EMSA)方法检测NF-κB DNA结合活性;Western印迹法分别检测细胞胞质IκB和细胞胞核NF-κBp65的表达;RT- PCR方法检测TNF-α、IL-1β、IL-8等细胞因子mRNA的表达情况.结果LPS和H2O2刺激后,细胞表现出较高的NF-κB DNA结合活性[分别为正常对照组的(6.20±0.35)倍和(4.16±0.52)倍]和细胞胞核NF-κB p65的表达[分别为(0.64±0.05)和(0.67±0.06)],而细胞胞质IxB的表达则较弱[分别为(0.28±0.10)和(0.39±0.12)];以双歧杆菌分泌型粘附素预孵后,前二者活性明显降低,而后者的表达明显增强;LPS和H2O2处理后,TNF-α、IL-1β、IL-8等细胞因子mRNA的表达水平均明显增高[LPS处理组分别为(0.92±0.10)、(0.38±0.03)、(1.44±0.25),H2O2处理组分别为(0.89±0.13)、(0.36±0.06)、(1.42±0.18)],而粘附素预孵后则可显著降低它们的表达水平.NF-κB DNA结合活性与TNF-α、IL-1β、IL-8三种细胞因子的mRNA表达水平均呈显著正相关.结论 双歧杆菌分泌型粘附素对LPS和H2O2诱导的肠上皮细胞NF-κB DNA结合活性有显著抑制作用,NF-κB的活化可能与TNF-α、IL-1β和IL-8等炎性细胞因子的表达调控有关.     

Abnormal Expression of Toll-Like Receptor 4 Is Associated with Susceptibility to Ethanol-Induced Gastric Mucosal Injury in Mice

Background and Aims

Toll-like receptor 4 (TLR4) contributes to ethanol-induced gastric mucosal injury. This study aimed to determine its precise role in this pathogenic state and the related signaling pathway.

Methods

Ethanol-induced gastric mucosal injury models were generated in TLR4^?/? mice (C3H/HeJ: point mutation; C57BL/10ScNJ: gene deletion), their respective TLR4^+/+ wild-type counterparts, and heterozygous TLR4^+/? mice. Lipopolysaccharide (LPS) or pyrrolidine dithiocarbamate (PDTC) was injected intraperitoneally 1 h or 30 min before ethanol administration. At 1 h post-ethanol treatment, gastric or serum specimens were evaluated.

Results

Ethanol intra-gastric administration induced significant gastric mucosal injury in all mice, but the damaged area was larger in TLR4^?/? mice. LPS preconditioning and up-regulated TLR4 expression led to significantly larger areas of gastric mucosal damage. Upon ethanol administration, TLR4^+/+, and not TLR4^?/?, mice showed significant increases in TLR4, myeloid differentiation factor 88 (MyD88), cytoplasmic high mobility group box 1 (HMGB1), and nuclear factor-kappa B p65 (NF-κB p65). PDTC pretreatment significantly attenuated the ethanol-induced gastric mucosal damaged areas, inhibited nuclear NF-κB p65 expression, and suppressed HMGB1 translocation out of the nucleus. In addition, PDTC pretreatment reduced ethanol-stimulated expression of the inflammatory modulators, interleukin-1β (IL-1β) and tumor necrosis factor-alpha (TNF-α), in serum.

Conclusions

Both deficient and excessive expression of TLR4 promotes ethanol-induced gastric mucosal injury. The underlying mechanism involves the MyD88/NF-κB signaling pathway and the HMGB1, TLR4 activator ligand. The increased expression of HMGB1 may lead to increased secretion and binding to TLR4, further stimulating the TLR4/MyD88/NF-κB signaling pathway and aggravating the ethanol-induced gastric mucosal injury.