miR-92b 通过调控EZH2 基因的表达抑制食管癌细胞Eca109 的增殖和侵袭

目的：探讨食管癌（esophageal carcinoma,EC）细胞中miR-92b 对组蛋白甲基转移酶zeste 同源物增强子2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)基因表达的调控作用,以及对EC细胞增殖和侵袭能力的影响。方法：选取河北医科大学第四医院科研中心保存的2016 年1 月至2017 年1 月15 例EC患者手术癌组织标本,通过生物信息学软件预测分析对EZH2 可能调控的miRNAs,将预测的miRNAs mimic 分别转染人EC细胞Eca109 后,采用实时荧光定量PCR、Western blotting 和双荧光素酶报告基因实验验证miRNAs对EZH2 基因的靶向调控作用。同时将EZH2 过表达质粒共转染至Eca109,然后采用CCK-8 法、流式细胞术和Transwell 细胞侵袭及迁移实验分别检测miRNAs 和EZH2 表达变化对EC 细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。结果：转染miR-92b 的Eca109 细胞中EZH2 mRNA与mimic-NC相比明显降低(P<0.01),转染miR-92b 的Eca109 细胞中EZH2 蛋白表达水平明显低于转染mimic-NC组(0.525±0.052 vs 0.689±0.026,P<0.01）。生物信息学软件分析显示,miR-92b、let-7a 及miR-25 可与EZH2 基因3’端非翻译区的结合位点相结合,但仅有miR-92b 可以调控EZH2 基因的表达,且miR-92b 表达与EZH2 mRNA表达成负相关(P<0.01)。miR-92b mimic 转染后EZH2 mRNA、蛋白及荧光素酶报告基因活性均明显下调（均P<0.01）,对Eca109 细胞凋亡无明显影响(P>0.05);miR-92b mimic 转染能抑制ECa109 细胞的增殖和侵袭及迁移能力(P<0.01)。而EC细胞转染EZH2 过表达质粒后,miR-92b mimic 对ECa109 细胞增殖和侵袭及迁移能力的抑制作用明显减弱(P<0.01)。结论：miR-92b 可抑制ECa109细胞的增殖和侵袭及迁移能力,其作用机制可能与靶向调控抑癌基因EZH2 的表达有关。     

miR-155在非小细胞肺癌组织和细胞中的表达及对细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的:探讨miR-155在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及其对NSCLC细胞增殖、迁移、侵袭的影响机制。方法:通过生物信息学网站预测miR-155的可能靶基因,双荧光素酶报告基因实验进行验证;采用qRT-PCR测定NSCLC组织及细胞中miR-155和ZIC3的表达;通过LipofectamineTM2000试剂盒向A549细胞中分别转染miR-155 mimic和mimic NC,共转染miR-155 mimic+pMIR-ZIC3;Western blot检测转染miR-155 mimic对ZIC3蛋白表达的影响;MTT法、划痕实验及Transwell侵袭实验分别检测miR-155对A549细胞增殖、迁移及侵袭的影响。结果:生物信息学网站预测显示ZIC3-3' UTR与miR-155存在结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证ZIC3是miR-155的靶基因,ZIC3表达受miR-155的负向调控。NSCLC组织及细胞中miR-155显著低表达,ZIC3显著高表达（P＜0.05）;过表达miR-155抑制了ZIC3蛋白的表达水平（P＜0.05）。转染miR-155 mimic显著抑制NSCLC细胞的增殖、迁移及侵袭能力（P＜0.01）;共转染miR-155 mimic+pMIR-ZIC3逆转了miR-155 mimic对NSCLC细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用（P＜0.05）。结论:NSCLC中miR-155显著低表达,其过表达可抑制NSCLC细胞的增殖、迁移及侵袭;miR-155可能通过靶向负调控ZIC3影响NSCLC细胞的生物学行为。     

miR-1243通过靶向hnRNPA2B1调控肝癌HepG2细胞增殖和迁移

目的：探讨miR-1243通过靶向调控核不均一核糖核蛋白A2/B1（hnRNPA2B1）表达对肝癌HepG2细胞增殖、迁移的影响及其分子机制。方法：用qPCR和WB法检测40例肝癌组织及其癌旁组织（2019年1月至2021年8月在武汉市第三医院首义院区手术切除标本）和正常人肝细胞 QSG-7701 与肝癌细胞 HepG2、Hep3b、HuH-7 中 miR-1243、hnRNPA2B1 mRNA 水平及hnRNPA2B1、cyclin D1、MMP-2蛋白水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-1243和hnRNPA2B1的靶向关系。HepG2细胞分为对照组（不转染）、miR-NC 组（转染 miR-NC）、miR-1243 mimic 组（转染 miR-1243 mimic）、miR-1243 mimic+pcDNA3.1 组（转染miR-1243 mimic 和 pcDNA3.1）、miR-1243 mimic+pc-hnRNPA2B1 组（转染 miR-1243 mimic 和 pc-hnRNPA2B1）后进行相应转染;WB 法检测肝癌组织及细胞和转染后各组细胞的 hnRNPA2B1、cyclin D1、MMP-2 蛋白表达水平;CCK-8 法检测转染后各组HepG2细胞的增殖能力;划痕愈合实验检测转染后各组HepG2细胞的迁移能力。结果：与癌旁组织或正常人肝细胞QSG-7701相比,肝癌组织和肝癌细胞中miR-1243呈低表达、hnRNPA2B1 mRNA及其蛋白呈高表达（均P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验结果证实miR-1243与hnRNPA2B1间存在靶向关系,且miR-1243通过靶向hnRNPA2B1负调控其表达。转染miR-1243 mimic后HepG2细胞中hnRNPA2B1蛋白表达、细胞增殖能力、划痕愈合率及cyclin D1、MMP-2蛋白表达均显著降低（均P<0.05）;而同时过表达 hnRNPA2B1 和 miR-1243 可逆转过表达 miR-1243 对 HepG2 细胞增殖、迁移的抑制作用。结论：miR-1243 通过靶向hnRNPA2B1表达调控肝癌HepG2细胞的增殖和迁移。     

微小RNA?224对口腔鳞状细胞癌细胞侵袭迁移和KLLN表达的影响

目的探讨微小RNA-224(miR-224)对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞侵袭迁移和KLLN表达的影响。方法采用实时定量PCR(QPCR)检测正常口腔上皮细胞HOK和OSCC细胞(CAL-27、TSCCa和Tca8113)的miR-224水平,脂质体法向CAL-27细胞转染miR-224模拟物(Mimics组)或阴性对照序列(NC组),另以仅脂质体处理的细胞为对照组,活细胞计数(CCK-8)法、Transwell小室实验和划痕实验评估细胞增殖、侵袭和迁移能力,Western blotting检测KLLN、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-224对KLLN的靶向调控作用。结果QPCR结果显示,OSCC细胞的miR-224水平较HOK细胞下调(P<0.05),其中CAL-27细胞的miR-224水平最低。Mimics组的miR-224水平为12.325±1.250,高于对照组的1.003±0.058和NC组的1.029±0.072(P<0.05);Mimics组转染24、48 h后的增殖活力低于对照组和NC组(P<0.05);Mimics组的划痕愈合率和穿膜细胞数分别为(23.161±3.609)%和(187.977±19.644)个,低于对照组的(47.372±4.717)%和(352.429±28.372)个及NC组的(45.094±5.651)%和(187.977±19.644)个,差异有统计学意义(P<0.05);Mimics组的KLLN、MMP-2和MMP-9水平低于对照组和NC组(P<0.05)。对照组和NC组上述指标的差异无统计学意义(P>0.05)。MiR-224模拟物对载有突变型KLLN细胞的荧光素酶活性不产生影响,而抑制了野生型KLLN细胞的荧光素酶活性(P<0.05)。结论OSCC细胞的miR-224水平降低且上调miR-224可能通过靶向KLLN来抑制OSCC细胞的迁移侵袭,该miRNA有望成为OSCC的预后生物标志物和治疗靶点。     

lncRNA SNHG14通过靶向miR-433-3p调控甲状腺癌SW579细胞的恶 性生物学行为

目的：探讨 lncRNA SNHG14 对甲状腺癌 SW579细胞恶性生物学行为的影响及其分子机制。方法：收集2017年10月至2018年12月青海省人民医院收治的20例甲状腺癌患者的癌组织及癌旁组织标本,用qPCR检测甲状腺癌组织和对应癌旁组织中SNHG14与miR-433-3p 的表达;根据转染物的不同,将 SW579 细胞分为 si-NC 组（转染si-NC）、si-SNHG14组（转染si-SNHG14）、miR-NC组（转染 miR-NC）、miR-433-3p mimic 组（转染 miR-433-3p mimic）、si-SNHG14+anti-miR-NC 组（共转染si-SNHG14与anti-miR-NC）和si-SNHG14+anti-miR-433-3p组（共转染si-SNHG14与anti-miR-433-3p）。MTT法、FCM、Transwell 实验分别检测转染后SW579细胞的增殖能力、细胞周期、细胞凋亡率、迁移及侵袭能力的改变;利用双荧光素酶报告基因实验检测SNHG14是否可结合miR-433-3p,qPCR法检测SNHG14与miR-433-3p之间的相互调控关系。结果：SNHG14在甲状腺癌组织中的表达高于癌旁组织（P<0.05）,而miR-433-3p的表达水平低于癌旁组织（P<0.05）。抑制SNHG14的表达或过表达miR-433-3p 可使SW579细胞增殖能力降低（P<0.05）、迁移与侵袭细胞数减少（均 P<0.05）、细胞凋亡率升高（P<0.05）、G1期细胞比例升高（P<0.05）且S期细胞比例降低（P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验证明SNHG14可结合miR-433-3p,抑制SNHG14的表达可提高SW579细胞中miR-433-3p水平（均P<0.05）。同时抑制miR-433-3p 和SNHG14的表达可部分逆转后者对SW579细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用（均P<0.05）。结论：甲状腺癌组织中lncRNA SNHG14呈高表达、miR-433-3p呈低表达,lncRNA SNHG14可通过靶向结合miR-433-3p促进甲状腺癌SW579细胞的增殖、迁移、侵袭而抑制细胞凋亡。     

miR-124 通过靶向BECN1 基因调控细胞自噬抑制食管癌KYSE170 细胞的侵袭和迁移

目的：探讨miR-124 通过调控细胞自噬对食管癌KYSE170 细胞侵袭和迁移能力的影响。方法：食管癌KYSE170 细胞转染miR-124 mimic,Transwell 实验检测细胞侵袭和迁移能力的变化,双荧光素酶报告基因验证miR-124 对BECN1(Beclin1)基因的靶向调控作用,Western blotting 分析对BECN1、P62 及LC3 蛋白表达水平的影响。向KYSE170 细胞中转染BECN1 siRNA沉默BECN1 的表达,Transwell 法检测细胞侵袭及迁移能力的变化,Western blotting 检测BECN1、P62 及LC3 蛋白的表达。将miR-124 mimic 与BECN1 过表达质粒共转染至KYSE170 细胞,Transwell 实验检测细胞侵袭及迁移能力的变化,Western blotting 检测自噬相关基因表达的变化。结果：转染miR-124 mimic 后,KYSE170 细胞的侵袭和迁移能力下降(P<0.05),BECN1 蛋白及荧光素酶报告基因活性均明显下调(均P<0.01),自噬相关蛋白P62 表达增高,LC3 表达水平明显降低(均P<0.01)。沉默BECN1 表达抑制食管癌细胞侵袭及迁移(P<0.01),而过表达BECN1 使miR-124 mimic 对KYSE170 细胞自噬、侵袭和迁移能力的抑制作用明显减弱(P<0.01),自噬相关蛋白P62 表达降低、LC3 蛋白表达水平明显升高(均P<0.01)。结论：miR-124 能够抑制食管癌细胞侵袭及迁移能力,其机制可能与靶向调控自噬相关基因BECN1 的表达影响细胞自噬有关。     

miR-145靶向KLF5抑制膀胱癌BIU-87细胞增殖、侵袭、迁移的机制研究

目的研究miR-145靶向调控锌指蛋白转录因子5(KLF5)抑制膀胱癌BIU-87细胞增殖、侵袭、迁移的机制。方法miR-145 mimics对BIU-87细胞进行转染,实验分为对照组、miR-145阴性对照组、miR-145 mimics组,SV-HUC-1细胞作为SV-HUC-1组。实时荧光定量法(RT-qPCR)测定转染后BIU-87细胞中miR-145表达水平,蛋白印迹法(WB)测定KLF5、PI3K、AKT、p-AKT、PCNA、MMP-9、MMP-2、E-cadherin表达水平,MTT法测定转染后BIU-87细胞活性,Transwell小室实验测定转染后BIU-87细胞侵袭能力,划痕实验测定转染后BIU-87细胞体外迁移能力。TargetScan数据库预测miR-145的靶基因并采用荧光素酶报告实验进行验证。结果与SV-HUC-1细胞组相比,BIU-87细胞对照组miR-145表达水平明显降低(P<0.05),KLF5、PI3K表达水平和AKT磷酸化水平显著升高(P<0.05);与对照组、miR-145阴性对照组相比,miR-145 mimic组BIU-87细胞活性、侵袭能力、迁移能力明显降低(P<0.05),miR-145、E-cadherin表达水平显著升高(P<0.05),KLF5、PI3K、PCNA、MMP-9、MMP-2表达水平和AKT磷酸化水平明显降低(P<0.05)。TargetScan数据库预测显示KLF5是miR-145靶基因,双荧光素酶实验证实KLF5是miR-145作用靶点。结论miR-145靶向下调KLF5表达水平,阻断PI3K/AKT通路激活从而抑制膀胱癌BIU-87细胞增殖、侵袭、迁移。     

miR-21靶向Atg5对非小细胞肺癌A549细胞自噬调控促进细胞增殖、迁移和侵袭的实验研究

目的  探讨miR-21通过靶向作用自噬相关靶基因5（Atg5）调控非小细胞肺癌（NSCLC）自噬的作用机制及其在A549细胞增殖、迁移及侵袭中的作用。方法  无义核酸序列NC（NC组）、miR-21 模拟物（miR-21 mimics组）、miR-21抑制物（miR-21 抑制组）分别转染A549细胞, CCK-8检测细胞增殖情况;划痕实验检测细胞迁移能力; Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。双荧光素酶报告实验验证miR-21和Atg5之间的靶向关系。Western blotting检测LC3B-II、p62和Atg5蛋白的表达。结果  与NC组比较,miR-21 mimics组细胞增殖、迁移、侵袭能力均上调,miR-21 抑制组细胞增殖、迁移、侵袭能力均下调（P＜0.05）。双荧光素酶报告实验结果显示,miR-21显著抑制野生型Atg5 3’-UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性（P＜0.05）,但对突变型Atg5 3’-UTR的基因报告质粒与miR-21 mimics共转染之后,并未对荧光素酶活性产生影响。NC组LC3B-II蛋白表达量为1.24±0.059,低于miR-21 mimics组的1.98±0.077,高于miR-21抑制组的0.52±0.021（P＜0.05）;NC组p62蛋白表达量为0.62±0.021,高于miR-21 mimics组的0.45±0.020,低于miR-21抑制组的0.79±0.031（P＜0.05）;NC组Atg5蛋白表达量为1.17±0.025,高于miR-21 mimics组的0.38±0.014,低于miR-21抑制组的1.40±0.039（P＜0.05）。与NC组比较, 3-MA处理降低miR-21 mimics转染诱导的A549细胞增殖能力（P＜0.05）;划痕实验和Transwell实验表明,3-MA处理抑制了miR-21mimics转染诱导的A549细胞的迁移和侵袭,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论  miR-21靶向Atg5调控NSCLC自噬促进细胞增殖、迁移和侵袭。     

miR-149-3p 通过靶向FOXP3 抑制宫颈癌HeLa细胞的恶性生物学行为

目的：探索miR-149-3p 对宫颈癌HeLa 细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响及其机制。方法: HeLa 细胞随机分为5组：未转染(HeLa)组、mimic-scramble 组、miR-149 mimic 组、FOXP3 过表达(pc-FOXP3)组、共转染(mimic+pc-FOXP3)组,Mimicscramble为miR-149 mimic 的阴性对照随机序列。荧光素酶实验验证miR-149-3p 与FOXP3 的靶向结合关系。实时定量PCR(qRT-PCR)检测HeLa 细胞中miR-149-3p 表达及FOXP3 的mRNA水平,Western blotting 检测FOXP3 的蛋白水平。CCK-8 检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞凋亡,Transwell 实验检测细胞侵袭,划痕实验分析细胞迁移。结果: 荧光素酶实验显示miR-149-3p可靶向结合FOXP3。与未转染组相比miR-149 mimic 组miR-149-3p 表达升高、FOXP3 mRNA水平下降(P<0.01),而且miR-149mimic 组FOXP3 蛋白水平低于未转染组(P<0.01)、pc-FOXP3 组FOXP3 蛋白水平高于未转染组(P<0.01),与pc-FOXP3 组相比mimic+pc-FOXP3 组FOXP3 蛋白水平降低(P<0.01)。miR-149 mimic 组细HeLa 胞增殖倍数低于未转染组(P<0.01),pc-FOXP3 组细胞增殖倍数高于未转染组(P<0.01),与pc-FOXP3 组相比mimic+pc-FOXP3 组细胞增殖倍数下降(P<0.01);miR-149 mimic 组HeLa 细胞凋亡率高于未转染组(P<0.01),pc-FOXP3 组细胞凋亡率低于未转染组(P<0.01),与pc-FOXP3 组相比mimic+pc-FOXP3组细胞凋亡率上升(P<0.01);miR-149 mimic 组每个视野下的侵袭细胞数和划痕愈合率低于未转染组(P<0.01),pc-FOXP3 组每个视野下的侵袭细胞数和划痕愈合率高于未转染组(P<0.01),与pc-FOXP3 组相比mimic+pc-FOXP3 组每个视野下的侵袭细胞数和划痕愈合率下降(P<0.01)。结论：miR-149-3p 通过靶向FOXP3 抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭和迁移,同时促进细胞凋亡。     

lncRNA SBF2-AS1 通过调控miR-140-5p/VEGFA 分子轴促进宫颈癌HeLa细胞上皮间质转化

目的：探讨lncRNA SBF2-AS1 通过调控miR-140-5p/血管内皮生长因子A（VEGFA）分子轴对宫颈癌HeLa 细胞上皮间质转化（EMT）的影响。方法：细胞培养和转染后分为NC、miR-140-5p mimic、miR-140-5p mimic+pcDNA-VEGFA、si-lncRNASBF2-AS1+pcDNA-VEGFA及si-lncRNA SBF2-AS1+miR-140-5p mimic组5 组。采用qPCR检测lncRNA SBF2-AS1 在宫颈癌组织及细胞系中的表达水平,双荧光素酶报告基因验让lncRNA SBF2-AS1、miR-140-5p 与VEGFA的靶向关系,WB检测HeLa细胞中VEGFA及EMT标志物N-cadherin、Vimentin 和E-cadherin 的表达水平,Transwell 实验检测HeLa细胞侵袭和迁移能力。结果：lncRNASBF2-AS1 在宫颈癌组织及细胞系中高表达（P<0.05 或P<0.01）,lncRNA SBF2-AS1 靶向结合miR-140-5p,且VEGFA 是miR-140-5p 的靶基因（P<0.05）。敲降lncRNA SBF2-AS1 抑制HeLa细胞侵袭、迁移及EMT。进一步实验证实,lncRNA SBF2-AS1通过miR-140-5p 上调VEGFA的表达水平,从而促进HeLa 细胞侵袭、迁移及EMT（P<0.05 或P<0.01）。结论：lncRNA SBF2-AS1通过miR-140-5p/VEGFA分子轴促进HeLa细胞EMT。     

miR-140-5p靶向HDAC7抑制非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制探讨

目的:探讨miR-140-5p靶向组蛋白去乙酰化酶7(histone deacetylase 7,HDAC7)调控非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞增殖、迁移和侵袭的机制。方法:采用qRT-PCR检测人NSCLC组织及癌旁组织中miR-140-5p的表达水平。用miR-140-5p mimic（模拟物）及miR-140-5p NC（阴性对照）转染A549细胞,CCK8法及克隆形成实验检测细胞增殖能力,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告基因实验验证miR-140-5p与HDAC7的靶向关系,Western blot检测各组细胞HDAC7及PI3K、p-PI3K、AKT、和p-AKT表达水平。结果:与癌旁组织相比,miR-140-5p在NSCLC组织中的表达水平明显减低,差异有统计学意义（P＜0.01）。与miR-140-5p NC组相比,过表达miR-140-5p后A549细胞在48和72 h的增殖能力明显降低（P＜0.05）;且细胞克隆形成、细胞迁移和侵袭能力均降低（均P＜0.05）,PI3K/AKT信号通路中关键分子p-PI3K和p-AKT蛋白水平明显降低（均P＜0.05)。生物信息学预测HDAC7可能是miR-140-5p的一个靶基因,且双荧光素酶报告结果证实miR-140-5p直接靶向调节HDAC7表达。结论:miR-140-5p通过靶向HDAC7表达进而抑制NSCLC A549细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与通过抑制PI3K/AKT信号通路的激活有关。     

miR-138-5p通过靶向TCF3实现对胃癌细胞SGC-7901侵袭和迁移的调控

目的:探讨miR-138-5p 与T细胞因子3 基因（T cell factor 3, TCF3）的靶向关系及其对人胃癌细胞SGC-7901 侵袭和迁移能力的影响。方法：miR-138-5p 模拟物转染SGC-7901 细胞后,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测miR-138-5p 和TCF3 mRNA的相对表达;生物信息学方法预测miR-138-5p 与TCF3 基因的靶向匹配关系,采用荧光素酶报告基因系统鉴定该关系。miR-138-5p 转染正常胃癌细胞和TCF3 高表达胃癌细胞后,Western blotting 检测TCF3、神经钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、锌指转录因子（Slug）和上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）的表达,Transwell 小室检测胃癌细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力。结果：miR-138-5p 过表达抑制TCF3 mRNA的表达;生物信息学软件预测显示miR-138-5p 与TCF3 mRNA有靶向结合区域,miR-138-5p mimic 降低TCF3 野生型质粒的荧光素酶活性,不影响TCF3 突变型质粒的荧光素酶活性。miR-138-5p 抑制TCF3 蛋白表达,miR-138-5p 减弱TCF3 过表达对SGC-7901 细胞侵袭和迁移能力的促进作用,同时其下调N-cadherin、Vimentin 和Slug 蛋白表达、上调E-cadherin 蛋白表达。结论：miR-138-5p 抑制胃癌细胞SGC-7901 的侵袭和迁移,与直接靶向调控TCF3 的表达有关。     

TWIST调控miR-145表达促进胶质瘤干细胞侵袭、迁移的实验研究

目的:探究转录因子TWIST对胶质瘤干细胞侵袭、迁移的影响,并探讨与微小RNA（microRNA,miR）-145之间的关系。方法:以人神经胶质瘤细胞U251为研究对象,提取干细胞并经免疫荧光染色CD133、胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）鉴定。实验分组:对照组、过表达对照组、TWIST过表达组、沉默对照组、TWIST沉默组,分别用pcDNA3、pcDNA3-TWIST、pGPH1-shNC、pGP-TWIST-shRNA转染提取并鉴定后的干细胞。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各细胞中TWIST mRNA和miR-145水平;蛋白质免疫印迹实验检测细胞中TWIST、基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）-2、MMP-9蛋白水平;Transwell检测细胞侵袭和迁移情况;划痕实验检测细胞迁移情况;双荧光素酶鉴定miR-145与TWIST的靶向关系。结果:干细胞分选与鉴定:CD133阳性干细胞约占5.6%左右;分选后细胞用CD133和GFAP染色显示双阳性。与对照组相比,TWIST过表达组细胞中TWIST mRNA和蛋白水平,细胞侵袭、迁移数量,愈合率,细胞中MMP-2、MMP-9蛋白水平升高（P＜0.05）,miR-145水平降低（P＜0.05）;TWIST沉默组细胞中TWIST mRNA和蛋白水平,细胞侵袭、迁移数量,愈合率,细胞中MMP-2、MMP-9蛋白水平降低（P＜0.05）,miR-145水平升高（P＜0.05）;过表达对照组、沉默对照组上述指标差异均无统计学意义（P＞0.05）。miR-145与TWIST存在结合位点并经双荧光素酶靶向关系验证。结论:升高TWIST能够促进胶质瘤干细胞侵袭、迁移,且能靶向miR-145发挥作用。     

lncRNA NEAT1调控miR-4262表达影响甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的:研究长链非编码RNA NEAT1（lncRNA NEAT1）对甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法:qPCR检测NEAT1和miR-4262在人正常甲状腺滤泡上皮细胞株Nthy-ori 3-1与甲状腺癌细胞株FTC-133、ML-1、SW579中的表达。用si-NEAT1或miR-4262 mimic转染SW579细胞，考察其在细胞增殖、迁移和侵袭中的作用。生物学信息预测结合双荧光素酶报告实验分析NEAT1和miR-4262之间的靶向关系。MTT法检测细胞增殖抑制率；Western blot检测细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、p21、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达；Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭。共转染si-NEAT1和anti-miR-4262，观察抑制miR-4262表达对抑制NEAT1表达诱导的SW579细胞增殖、迁移及侵袭的影响。结果:NEAT1在甲状腺癌细胞中的表达显著上调（P＜0.05），miR-4262表达下调（P＜0.05）。抑制NEAT1表达或过表达miR-4262显著增加SW579细胞增殖抑制率和p21蛋白表达量（P＜0.05），显著降低迁移细胞数、侵袭细胞数及CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白表达量（P＜0.05）。miR-4262是NEAT1的靶基因。上调或下调NEAT1表达明显调控miR-4262表达（P＜0.05）。抑制miR-4262表达能逆转抑制NEAT1表达对SW579细胞增殖抑制率和p21蛋白表达的促进作用，以及对细胞迁移、侵袭及CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白表达的抑制作用。结论:lncRNA NEAT1通过靶向miR-4262影响甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

长链非编码RNA TUG1调控miR-138-5p对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响

目的:探讨长链非编码RNA(LncRNA)牛磺酸调节基因1(TUG1)调控miR-138-5p对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。方法:在骨肉瘤细胞U-2OS中转染TUG1 siRNA和siRNA control，qRT-PCR测定干扰效果，MTT测定增殖，流式细胞术测定凋亡，Transwell小室测定细胞侵袭和迁移。starBase预测TUG1与miR-138-5p有结合位点，双荧光素酶报告载体鉴定靶向调控关系。将miR-138-5p抑制物和TUG1 siRNA共转染至骨肉瘤细胞中，测定干扰miR-138-5p对下调TUG1的骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。结果:转染TUG1 siRNA后的骨肉瘤细胞中TUG1表达水平明显低于转染siRNA control后的细胞（P<0.05）。下调TUG1后的骨肉瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力降低，细胞凋亡率升高（P<0.05）。野生型TUG1荧光素酶报告载体与miR-138-5p共转染后细胞荧光素酶活性降低（P<0.05）。与转染TUG1 siRNA的细胞比较，miR-138-5p抑制物和TUG1 siRNA共转染后的细胞增殖、侵袭和迁移能力升高，细胞凋亡率降低（P<0.05）。结论:下调LncRNA TUG1表达通过调控miR-138-5p表达抑制骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移能力并诱导细胞凋亡。     

miR-145通过靶向AP4对非小细胞肺癌A549细胞迁移侵袭的影响

 目的 探讨miR-145对非小细胞肺癌迁移与侵袭能力的影响及其可能的作用机制。方法 qRTPCR法检测非小细胞肺癌组织中miR-145和激活增强子结合蛋白4（activating enhancer binding protein4, AP4）mRNA的表达。A549细胞转染miR-145 mimic或者AP4 siRNA后，划痕实验与Transwell小室法分别检测A549细胞的迁移与侵袭能力，qRT-PCR法与免疫印迹法（Western blot）检测A549细胞中AP4 mRNA与蛋白表达水平；双荧光素酶报告基因法检测AP4 mRNA与miR-145的关系。结果 与癌旁正常组织相比，非小细胞肺癌组织中miR-145表达明显降低（P<0.05），而AP4 mRNA和蛋白表达均明显升高（均P<0.05）；与对照组相比，转染miR-145 mimic后，A549细胞中miR-145表达明显升高（P<0.05），AP4 mRNA和蛋白水平明显降低（P<0.05）；A549细胞的迁移数与侵袭能力均显著下降（均P<0.05）；双荧光素酶报告基因法验证AP4 mRNA是miR-145的靶基因。A549细胞转染AP4siRNA后，A549细胞的迁移数与侵袭数显著下降（均P<0.05）。结论 上调miR-145能抑制A549细胞的迁移与侵袭能力，可能与其抑制靶基因AP4表达有关。     

miR-601靶向调控MMP-17抑制非小细胞肺癌的迁移和侵袭CSCD

目的探讨miR-601对非小细胞肺癌(NSCLC)迁移和侵袭能力的影响并探讨其可能的作用机制。方法RT-qPCR检测NSCLC组织中miR-601的表达,并分析表达水平与癌细胞侵袭和淋巴结转移的相关性。将miR-601 mimics瞬时转染A549细胞或H1299细胞,Transwell实验检测其对两种细胞迁移和侵袭能力的影响。生物信息学预测miR-601相关靶基因,采用双荧光素酶实验进行靶基因验证。检测miR-601的靶基因对A549细胞或H1299细胞迁移及侵袭能力的影响。结果miR-601在NSCLC组织中表达明显降低(P<0.001),且降低水平与癌细胞的浸润(P<0.007)及淋巴结转移(P<0.011)密切相关。瞬时转染miR-601 mimics能明显抑制A549细胞或H1299细胞的迁移及侵袭能力。生物信息学及荧光素酶报告实验提示MMP-17是miR-601的靶基因。MMP-17能促进A549细胞或H1299细胞的迁移和侵袭,但其促进迁移侵袭的能力可被miR-601抑制。结论miR-601通过靶向调控MMP-17而抑制非小细胞肺癌的迁移和侵袭。