携带内皮抑素基因腺病毒对卵巢癌HO-8910细胞作用研究

[目的]探讨携带内皮抑素基因腺病毒对卵巢癌HO-8910细胞的抑制作用.[方法]采用细胞培养、光镜、电镜、MTT法、RT-PCR、Western blot、TUNEI,法分析检测结果.[结果]重组腺病毒pLP-Ad-ES能够引起HO-8910细胞凋亡细胞形态结构改变:pLP-Ad-ES能够抑制卵巢癌细胞HO-8910的增殖(P<0.01),并且能够促进细胞凋亡,存在时间一剂量依赖关系;在基因蛋白水平上,随着滴度的增加,内皮抑素的表达增加.[结论]pLP-Ad-ES对卵巢癌HO-8910细胞有明显的抑制作用,能够诱导细胞凋亡.     

RNA干扰靶向沉默poIβ基因对人卵巢癌细胞增殖活性及对化疗药物敏感性的影响

目的:探讨RNA干扰(RNA interference,RNAi)沉默DNA聚合酶β(polβ)基因的表达后,人卵巢癌细胞HO-8910的增殖活性变化及对化疗药物顺铂敏感性的改变.方法:利用已构建成功的针对polβ基因的siRNA(small interfering RNA,siRNA)重组质粒,转染人卵巢癌细胞HO-8910,通过荧光倒置显微镜观察转染效率;荧光定量PCR检测转染后HO-8910细胞中polβmRNA的表达水平;用MTT法观察检测基因沉默后HO-8910细胞增殖能力变化;台盼蓝染色细胞计数法了解细胞对顺铂敏感性的变化.结果:已构建的靶向polβ基因的siRNA转染人卵巢癌细胞HO-8910后,荧光倒置显微镜下可见大量绿色荧光颗粒表达;荧光定量PCR检测发现,转染后细胞中polβ的mRNA水平表达显著降低(P<0.01);转染后的HO-8910细胞生长速度减慢、增殖活性下降;对顺铂的敏感性提高(P<0.05).结论:RNAi有效沉默细胞中polβ基因表达,提高了肿瘤细胞对化疗药物顺铂的敏感性、降低了细胞的增殖活性.从而改善卵巢癌患者的预后,为肿瘤的有效干预和治疗开拓新的领域.     

紫杉醇对浆液性卵巢癌细胞HO-8910细胞凋亡的诱导作用

目的:探讨紫杉醇对体外培养的浆液性卵巢癌细胞HO-8910细胞凋亡的诱导作用。方法:体外培养卵巢癌细胞HO-8910,用浓度1×10-9 mol/L、1×10-8 mol/L、1×10-7 mol/L和1×10-6 mol/L的紫杉醇作用细胞12 h,24 h,48 h后,提取细胞DNA片段进行2.0 mg/L 琼脂糖凝胶电泳;消化HO-8910细胞并经碘化丙锭(IP)染色后,流式细胞仪(FCM)对细胞进行细胞周期分析;电子显微镜对紫杉醇作用后的HO-8910细胞进行形态学分析。结果:体外培养的卵巢癌HO-8910细胞经不同浓度的紫杉醇处理后,细胞生长明显受到抑制;于1×10-7 mol/L 紫杉醇作用48 h后可观察到细胞凋亡特异的DNA梯状电泳;流式细胞仪分析证实,细胞凋亡率达19.7 %;且电镜下可观察到典型的凋亡早期形态学改变。结论:卵巢癌HO-8910细胞对紫杉醇具有药物敏感性,紫杉醇对卵巢癌细胞的杀伤作用,是通过诱导细胞凋亡途径实现的。     

顺铂对五种肿瘤细胞系Survivin基因表达的影响

目的 探讨顺铂在抑制肿瘤细胞生长的过程中对Survivin基因的影响及其可能的作用机制.方法 选取五种肿瘤细胞系:人胃腺癌细胞株(SGC-7910)、人卵巢癌细胞系(HO-8910)、高转移卵巢癌细胞(HO-8910pm)、人喉癌细胞(Hep-2)、人胰腺癌细胞(PC-2),应用RT-PCR方法检测顺铂作用后Survivin基因表达的变化.结果 五种肿瘤细胞系中Survivin基因均有较高的表达,顺铂对SGC-7910、HO-8910、HO-8910pm细胞系中Survivin基因有显著的抑制作用,Hep-2、PC-2细胞系在顺铂作用后Survivin基因的表达与正常组没有显著差异.结论 顺铂可能是通过抑制Survivin基因诱导SGC-7910、HO-8910、HO-8910PM细胞凋亡而发挥其抗肿瘤功效,而对Hep-2、PC-2细胞系Survivin基因的表达没有明显作用.     

错配修复基因hMLH1和hMSH2的表达与人卵巢癌顺铂耐药的关系

目的:探讨DNA错配修复基因hMLH1和hMSH2的表达在人卵巢癌细胞顺铂耐药现象中的作用.方法:MTT法检测卵巢癌细胞对顺铂的敏感性,Hoechst免疫荧光染色检测顺铂作用下敏感及耐药细胞的凋亡情况,并使用RT-PCR技术及West-ern blotting技术分别检测顺铂敏感性人卵巢癌细胞及耐药顺铂人卵巢癌细胞中错配修复基因hMLH1及hMSH2的转录与翻译表达变化.结果:同一顺铂浓度作用下,耐药顺铂人卵巢癌细胞的凋亡率明显低于顺铂敏感性人卵巢癌细胞,且后者的错配修复基因hMLH1和hMSH2的mRNA及蛋白表达水平均显著高于前者.结论:顺铂可诱导卵巢癌细胞凋亡.在耐药顺铂人卵巢癌细胞中,错配修复基因hMLH1和hMSH2低表达可能是导致顺铂耐药发生的重要原因.     

顺铂对宫颈癌HeLa细胞端粒酶活性和凋亡及p53和bcl-2 表达的影响

目的观察顺铂对 HeLa 细胞端粒酶活性、凋亡及其 p53、bcl-2 表达的影响,以揭示顺铂抗宫颈癌的机理.方法运用体外细胞培养技术,以不同浓度的顺铂作用于培养的 HeLa 细胞 72 h,通过端粒酶重复序列扩增-酶联免疫吸附法(TRAP-ELISA)检测细胞端粒酶活性,以及流式细胞术观察细胞凋亡及 p53、bcl-2 的表达.结果顺铂能以浓度依赖方式下调端粒酶活性并诱导细胞凋亡,使其 bcl-2 基因的表达显著降低,而 p53 基因的表达则增强.端粒酶活性下调与细胞凋亡及其 p53、bcl-2 基因表达紧密相关,P＜0.01.结论顺铂能下调端粒酶活性,诱导细胞凋亡,使 bcl-2 表达降低和 p53 表达增强,这可能是顺铂抗癌作用的重要机制之一.     

顺铂、得力生对胰腺癌细胞株生长和凋亡的作用

目的:体外研究胰腺癌细胞株p1,p2,p3,p4,p7的Survivin、Bc l-2和p53蛋白的表达情况,顺铂、中药得力生对胰腺癌细胞株的细胞增殖和凋亡的作用,研究细胞毒性药物与中药对胰腺癌细胞的联合作用,以及相关蛋白表达对上述作用的影响。方法:免疫组化检测上述蛋白在细胞中的表达;MTT方法检测细胞的增殖;TUNEL原位检测细胞的凋亡。结果:5种细胞株中均有不同程度Survivin和p53蛋白的表达,均无Bc l-2的表达。Survivin在p1、p3表达最强,在p2表达最弱;p3主要表达在细胞浆,其余4种细胞均表达在细胞核及细胞浆;p53在p2和p4细胞中表达率最高,为60%,但是在p2细胞中表达较弱。顺铂、中药得力生对胰腺癌细胞株的细胞增殖均具有抑制作用,且有协同趋势;Survivin和p53的表达程度与顺铂对胰腺癌细胞增殖的作用呈一定的反向关系;顺铂和中药得力生诱导下均检测到凋亡细胞。结论:Survivin和p53的表达可能调节胰腺癌细胞对顺铂的药物敏感性;中西医结合治疗胰腺癌可能具有很好的应用前景。     

p73基因过量表达对人肺癌细胞A549凋亡及其化疗敏感性的作用

背景与目的：部分非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）表达野生型p53基因（wild-type p53,wt-p53）,因此在基因治疗中克服这些NSCLC对wt-p53的抵抗机制就非常重要。P53基因家族的新成员p73是p53的同源体,本研究旨在探讨对wt-p53基因治疗抵抗的人肺腺癌细胞A549在外源p73基因转染或联用化疗药后凋亡程度和对化疗药物敏感性的变化。方法：将真核表达重组质粒pcDNA3-HA-p53或pcDNA3-HA-p73α转染入A549细胞,G418筛选,Western blot检测P53或P73α的表达。MTT法分析转染细胞对顺铂和阿霉素的敏感性,用流式细胞术、TUNEL法和DNA片段法分析化疗药作用下转染细胞的凋亡变化,克隆形成实验观察细胞生物学性状的改变。结果：转染p53或p73α基因的A549细胞可以稳定高表达p53或p73α蛋白。转染p73α的A549细胞在原本没有明显抑制和杀伤作用的药物浓度（6．25μmol／L的顺铂或0．25μmol／L的阿霉素）作用下生长明显受到抑制。顺铂的IC50值从22．65μmol／L降至3．75μmol／L,阿霉素的IC50值从4．20μmol／L降至0．06μmol／L。p73能使A549细胞受顺铂和阿霉素诱导的细胞凋亡增加。而p53没有明显作用。流式细胞术显示p73α基因转染后,顺铂诱导的细胞凋亡率从10．6％升高到36．8％（P〈0．01）,阿霉素诱导的细胞凋亡率从13．0％升高到41．1％（P〈0．01）。克隆形成实验显示．p73α基因转染能明显降低顺铂和阿霉素作用后A549细胞的克隆形成数（P〈0．01）。对顺铂和阿霉素的化疗增效倍数分别为2．0和2．4倍。结论：外源性p73基因的导入增加了wt-p53型A549细胞对顺铂和阿霉素等化疗药的敏感性。该作用可能与p73基因能不依赖于p53基因诱导细胞凋亡有关。p73基因可用于治疗wt-p53不能发挥作用的恶性肿瘤。     

溶血磷脂酸抑制顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡

目的：探讨溶血磷脂酸（lysophosphatidic acid,LPA）对顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡的抑制作用及其作用机制。方法：体外培养卵巢癌细胞株SKOV3,采用MTT法检测LPA对顺铂（cisplatin,DDP）作用后卵巢癌细胞株SKOV3增殖活性的影响,Hoechst33258荧光染色观察凋亡细胞,用FCM法分析细胞周期变化和细胞凋亡率,DNA片段凝胶电泳观察凋亡细胞的DNA“梯状”条带,免疫细胞化学法及RT-PCR法分别检测细胞凋亡相关蛋白及其mRNA的表达。结果：LPA能降低DDP对SKOV3细胞生长的抑制作用,同时增加G0/G1期细胞比例,降低S期细胞比例和凋亡率。Hoechst33258染色检测示LPA作用后凋亡小体明显减少。DNA片段凝胶电泳示LPA作用后不产生明显的凋亡片段。10μmol/L的LPA作用SKOV3细胞48h后,bcl-2基因及其蛋白表达水平升高,而bax基因及其蛋白表达水平降低（P〈0.01）。结论：LPA可通过上调bcl-2基因及蛋白表达,下调bax基因及蛋白表达,抑制DDP诱导的卵巢癌细胞凋亡。因此,针对LPA的治疗有望提高DDP疗效,改善卵巢癌患者的预后。     

精子蛋白17异常表达与卵巢癌细胞对铂类药物耐药的相关性研究

目的:观察精子蛋白17(Sp17)的异常表达对体外培养的卵巢癌细胞顺铂和卡铂耐药性的影响.方法:将Sp17基因转染卵巢癌细胞系HO8910,采用流式细胞术测定目的蛋白的表达,获得稳定高表达Sp17的卵巢癌细胞系HO8910/Sp17.MTT法检测铂类药物对转染细胞HO8910/Sp17的生长抑制作用并与未转染的亲代细胞进行比较.结果:在有效剂量范围内,顺铂和卡铂对HO8910/Sp17细胞的抑制率明显低于亲本细胞HO8910,P<0.05.耐药指教顺铂1.4,卡铂1.38.结论:Sp17明显增加卵巢癌细胞对铂类化疗药物的耐药性.