脾气虚证患者基因差异表达研究

目的：研究慢性胃炎脾气虚证的特征性基因差异表达谱。方法:慢性胃炎脾气虚证患者及健康志愿者各选4例，镜下取胃黏膜组织，提取总RNA，一一配对制作基因芯片，采用荧光比值、生物信息学、双侧t检验等方法比较分析；实时荧光定量PCR检测相关基因。结果:差异表达基因54条，72.2%下调；其中与营养物质代谢和免疫调节相关差异表达基因45条， 71.1%下调；差异基因中有4条基因P＜0.05，为显著差异表达基因；实时定量PCR检测差异基因5条，4条与芯片结果一致。结论:慢性胃炎脾气虚证具有特征性的基因差异表达图谱，主要表现为与营养物质代谢及免疫调节相关基因呈下调趋势。     

慢性粒细胞白血病病人TCRζ链表达特点

目的： 建立实时定量PCR方法检测TCRζ链表达水平的方法，了解慢性粒细胞白血病（CML）外周血TCRζ链表达水平。方法: 采用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR，相对定量检测30例CML患者和30例正常人外周血的单个核细胞的TCRζ链表达情况，以β2微球蛋白基因（β2M）作为内参，根据相对定量公式：2-△△Ct计算CML病人与正常人TCRζ链表达差异倍数。结果: 成功建立SYBR GreenⅠ荧光实时定量PCR检测TCRζ链表达检测技术。18例CML患者TCRζ链出现表达低于正常人，而12例CML患者TCRζ链出现表达高于正常人。结论: CML病人中TCRζ链表达水平可分为表达下调（60%）和表达上调(40%)2组，提示部分CML病人的细胞免疫缺陷可能与其TCRζ链表达下调有关。     

实时荧光定量PCR检测淋巴细胞中NKG2D、穿孔素和颗粒酶B基因的表达

目的:建立可用于测定淋巴细胞免疫功能的SYBRGreen I实时荧光定量PCR技术。方法:根据NCBI基因库中4种基因(NKG2D、穿孔素、颗粒酶B和内参照GAPDH)的序列,设计合成相应的引物,扩增上述基因。建立SYBRGreen I实时荧光定量PCR方法,检测肿瘤患者外周血淋巴细胞和诱导培养的患者CIK细胞(cytokine induced killer,CIK)中NKG2D、穿孔素和颗粒酶B mRNA的含量。结果:应用设计的引物扩增NKG2D、穿孔素和颗粒酶B基因后,经琼脂糖凝胶电泳和溶解曲线分析表明具有特异性。SYBR Green I实时荧光定量PCR检测结果表明,肿瘤患者的淋巴细胞中颗粒酶B基因的表达降低,而经细胞因子和单克隆抗体诱导培养的肿瘤患者CIK细胞与其淋巴细胞相比,细胞中穿孔素和颗粒酶B基因的表达明显增加(P0.01)。结论:该SYBRGreen I实时荧光定量PCR方法可用于检测淋巴细胞中NKG2D、穿孔素和颗粒酶B的mRNA的表达、作为研究淋巴细胞免疫功能的有力手段。     

慢性粒细胞白血病病人TCRζ链表达特点

目的:建立实时定量PCR方法检测TCRζ链表达水平的方法,了解慢性粒细胞白血病(CML)外周血TCRζ链表达水平.方法:采用SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR,相对定量检测30例CML患者和30例正常人外周血的单个核细胞的TCRζ链表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,根据相对定量公式:2-ΔΔCt计算CML病人与正常人TCRζ链表达差异倍数.结果:成功建立SYBR Green荧光实时定量PCR检测TCRζ链表达检测技术.18例CML患者TCRζ链出现表达低于正常人,而12例CML患者TCRζ链出现表达高于正常人.结论:CML病人中TCRζ链表达水平可分为表达下调(60%)和表达上调(40%)2组,提示部分CML病人的细胞免疫缺陷可能与其TCRζ链表达下调有关.     

化学发光法和实时荧光定量PCR法检验EB病毒的临床效果对比

目的 分析化学发光法和实时荧光定量PCR法检测肝癌患者血清中的EB病毒载量,探讨EB病毒在肝癌检测中的意义.方法 以化学发光法和实时荧光定量PCR对正常对照组、乙肝组、丙肝组及肝癌组患者血清中的EB病毒载量进行检测,并将两种检测结果进行对比分析.结果 化学发光检测肝癌组患者EB表达水平为1.99,均显著高于乙肝(1.25,u=5.129,P＜0.05)、丙肝(1.31,u =4.497,P＜0.05)、正常组(0.03,u=10.927,P＜0.05).实时荧光定量PCR方法检测肝癌组患者的EB表达水平为1.89,高于乙肝(1.26,u=5.295,P＜0.05)、丙肝(1.32,u=4.983,P＜0.05)及正常组(0.04,u=11.394,P＜0.05),差异具有统计学意义;肝癌患者术前EB表达水平(化学发光:1.87;实时荧光定量PCR:1.85)明显高于术后(化学发光:0.03,u=12.873,P＜0.05);实时荧光定量PCR:0.04,u =11.936,P＜0.05),差异具有统计学意义.两种检测方法结果无统计学差异(P＞0.05).结论 化学发光法和荧光定量PCR具有特异性强、灵敏度高等优点,可以用于检测肝癌的早期诊断和分期.     

实时荧光定量PCR法筛查唐氏综合征的实验研究

目的建立一种无创性、高特异性的快速筛查唐氏综合征（Down’s syndrome，DS）的检测方法。方法采用实时荧光定量PCR技术对正常人和DS患者外周血样本的有核细胞进行检测，根据△Ct值的差异建立检测方法。结果正常组和唐氏组△Ct值有显著性差异（P〈0．001），初步建立了实时荧光定量PCR筛查唐氏综合征的快速检测方法。结论实时荧光定量PCR具有无创性、特异性高且简单、快速等优点，适用于唐氏综合征产前筛查。     

荧光定量 PCR与半定量PCR检测HBV DNA的对比分析

目的：对照分析荧光定量PCR与半定量PCR检测血清HBV DNA的载量，为临床基因检测实验室提供方法学选择依据。 方法： 取164份临床检测标本各用荧光定量PCR与半定量PCR检测，结果作统计学分析。 结果: 两种检测方法的灵敏度和特异度没有显著差异（χ2 =1.75，P>0.05）。 结论: 临床基因检测实验室可用半定量PCR法替代荧光定量 PCR法检测血清HBV DNA的载量。     

职业性三氯乙烯药疹样皮炎CXCR2和CXCR3基因的表达

目的: 建立荧光定量PCR检测三氯乙烯药疹样皮炎(DMLT)患者外周血淋巴细胞CXCR2和CXCR3 mRNA表达的方法.方法: 利用SYBR Green荧光定量PCR分别检测24例DMLT患者、 26例正常人外周血淋巴细胞CXCR2和CXCR3基因mRNA表达情况,以β2微球蛋白基因作为内参,根据相对定量公式 (2-△△CT)计算DMLT患者与正常人CXCR2和CXCR3基因表达差异倍数.结果: 24例患者外周血淋巴细胞荧光定量PCR均检出CXCR2和CXCR3 mRNA表达,其中CXCR2表达情况有两种: 表达上升14例(58.3%)和表达下降10例(41.7%),与正常人CXCR2 mRNA相比表达倍数分别为16.76±7.01、 0.54±0.30;CXCR3表达显著升高(△CT=6.3±2.8,11.4±1.9;P<0.01),与正常人CXCR3 mRNA相比表达倍数为33.37±31.61.结论: 成功建立了DMLT患者外周血淋巴细胞CXCR2和CXCR3mRNA表达的荧光定量PCR方法.     

实时荧光定量PCR在检测人ANP基因表达的应用

目的建立心房钠尿肽（ANP）基因mRNA表达水平的实时荧光定量PCR检测方法,并对该方法进行初步评价。方法以基因表达产物为模板,建立实时荧光定量PCR检测方法,对样本中的心房钠尿肽含量进行相对定量,比较不同样本组的基因表达水平。结果所建立的实时荧光定量PCR方法熔解曲线中熔解峰单一。肺癌患者胸腔样本的ANP含量为对照样本的4.68倍,血清样本为对照样本的16.03倍。结论所建立的ANP实时荧光定量PCR检测方法具有较高的特异性。肺癌患者胸腔液和血清中ANP的含量明显增高。     

癌-睾丸抗原基因在神经胶质瘤干细胞中的表达

背景：癌-睾丸抗原基因在胶质瘤干细胞表达还不甚清楚。 目的：检测癌-睾丸抗原基因在神经胶质瘤干细胞中的表达。 方法：通过神经球培养的方法而分离干细胞。以半定量PCR及实时荧光定量PCR检测癌-睾丸抗原基因在母细胞、干细胞与分化细胞中的表达。 结果与结论：以神经球培养方式从胶质瘤细胞系中可分离出肿瘤球,将肿瘤球培养在含血清的培养基中,它的形态呈贴壁分化,且与母细胞没有区别。半定量PCR及实时荧光定量PCR检测发现与母细胞和分化细胞相比,癌-睾丸抗原基因在干细胞中的表达最高。提示癌-睾丸抗原基因可能为肿瘤干细胞的表面抗原。     

克氏综合征基因表达谱分析

目的 对克氏综合征（Klinefelter syndrome）患者进行基因表达谱分析,探讨其基因差异表达与临床表型之间的关系.方法 采用第二代高通量测序方法对7例克氏综合征患者和7例对照男性外周血全基因组mRNA进行深度测序,运用定量RT-PCR方法对30例克氏综合征患者及30例对照男性进行验证.结果 测序结果根据FDR≤0.001和｜ log2 Ratio≥1 ｜的标准,两组比较存在差异表达基因216个,差异具有统计学意义.其中X染色体基因9个,占4％,与X染色体失活相关的XIST差异表达最明显;常染色体基因207个,占96％,其中NR4A3、ZKSCAN4、HBEGF、EREG、AREG、NR4A2、CCR5差异表达明显.NR4A3主要.与2型糖尿病有关,HBEGF主要参与促性腺激素分泌过程.Y染色体不存在显著差异表达基因.结论 克氏综合征患者不仅多余X染色体基因差异表达,还有大量常染色体基因差异表达,这可能是克氏综合征临床表型多样化的原因.     

基因芯片筛选Bardct-Bicdl综合征患者外周血差异表达基因

目的 采用基因表达谱芯片研究Bardet-Biedl综合征(Bardet-Biedl syndrome,BBS)患者外周血单个核细胞差异基因表达谱.方法 抽取3例BBS先证者及4名年龄、性别匹配的健康对照者静脉血,分离外周血单个核细胞,用Trizol一步法提取总RNA并进行扩增和标记,然后与Affymetrix U133 Plus 2.0芯片进行杂交,扫描芯片并将图像信号转化为数字信号,GCOS1.4软件读取、处理数据.将患者与正常对照基因表达谱进行比较,最后以表达差异≥2倍(P＜0.05)为标准来确定差异表达基因.结果 BBS患者与正常对照相比,有30个基因表达有显著差异,包括15个上调基因及15个下调基因.通过GO分析,有12个基因与信号传导及细胞周期有关.结论 筛选到的差异基因与纤毛的功能或结构相关性及在BBS发生及发展中的作用有待研究.     

原发性高血压患者中医辨证分型与ACE基因I/D多态性的相关性研究

目的:探讨原发性高血压不同中医证型与血管紧张素转换酶(ACE)基因多态性分布的相关性。方法:选择原发性高血压患者120例,中医辨证分型为肝火旺盛型、阴虚阳亢型、阴阳两虚型、痰湿壅盛型,选取正常对照组30例,并采用PCR方法检测ACE基因的多态性。结果:ACE基因DD型在阴虚阳亢组与正常对照组之间显著差异(P0.05),而ACE基因Ⅱ、ID型及等位基因与正常对照组比较无显著差异(P0.05)。各证型组之间两两比较ACE基因型和等位基因之间都无显著差异(P0.05)。结论:原发性高血压阴虚阳亢型可能与ACE基因DD型有关联。     

放射治疗后宫颈癌组织内差异表达基因鉴定

目的 研究放射治疗对宫颈癌组织基因表达的影响,探讨差异表达基因对放射治疗敏感及在抗拒中的作用.方法 患者接受相同的放疗模式:全盆腔外照射总剂量45戈瑞(Gy),共25次(45 Gy/25 f),腔内近距离内照射每次剂量5～6 Gy,共治疗5～6次.分别在近距离放射治疗前、近距离放射治疗中、近距离放射治疗结束时留取标本....     

Gene expression and chromosomal location for susceptibility to Sjögren's syndrome

Primary Sjögren's syndrome (SS) is a chronic inflammatory autoimmune disease affecting mainly the exocrine glands. Its physio-pathology is poorly understood and most of the knowledge has been related to the inflammatory component. The aim of this work was to evaluate gene expression profiling in fractions enriched in epithelial cells from labial salivary glands (LSGs) of patients with primary SS and identify chromosomal regions harboring susceptibility genes expressed in epithelial cells. A combined approach of gene expression and genome-wide association study was used. Enriched epithelial cell fractions were obtained from LSGs of patients and controls. Amplified total RNA was labeled and hybridized to 10K cDNA microarrays. Results were normalized and subjected to statistical and functional analysis. A genome-wide microsatellite screen at 10 cM resolution (393 markers) was performed. In salivary gland-epithelial cells from patients 528 genes were expressed differentially in comparison to controls. Pathways not previously linked to disease were found to be altered. Twenty-eight and 15 genes associated with apoptosis were up-regulated and down regulated, respectively. Interferon-related genes, most of which participated in interferon signaling, were also found to be up-regulated. From the genome-wide screen, 6 markers showed evidence of highly significant association with the disease. Of these, five loci harbor genes differentially expressed in patients LSG-epithelial cells. Our results show that in enriched gland-epithelial cells of pSS, both pro-apoptotic/anti-apoptotic and interferon signaling inhibition/stimulation balances may occur. Genes found over-expressed in epithelial cells are candidates for disease susceptibility.     

慢性肾小球肾炎肾阴虚证血浆蛋白质双向凝胶电泳分析

目的初步观察慢性肾小球肾炎肾阴虚证患者血浆蛋白质组的变化与表达差异,为进一步探讨肾阴虚证的发生机制奠定基础。方法采用双向凝胶电泳（2-DE）技术分离慢性肾小球肾炎肾阴虚证患者、肾阳虚证患者和正常人的血浆总蛋白,银染显色;PDQest软件对凝胶图像进行定性定量差异表达分析;从中选取差异表达蛋白质斑点,通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）分析,获取肽质量指纹图谱（PMF）;通过Mscot-Wizard软件进行数据库搜索,鉴定蛋白质。结果与正常人和慢性肾小球肾炎肾阳虚证患者相比,在慢性肾小球肾炎肾阴虚证患者血浆蛋白质双向凝胶电泳图谱中绝对高表达的蛋白质斑点有80个,绝对低表达的蛋白质斑点有42个;定性差异表达分析发现,在慢性肾小球肾炎肾阴虚证患者血浆蛋白质双向凝胶电泳图谱中特异出现的蛋白质斑点有2个,缺失的蛋白质斑点有13个。结论同病异证患者血浆中存在差异表达蛋白质,利用蛋白质组学技术有望对中医证候的发生机制进行阐释。     

力生长因子E肽与应力刺激对成骨细胞基因表达的影响

目的应用基因芯片技术分析在力生长因子E肽(MGF-Ct24E)和应力作用下成骨细胞基因表达的差异。方法体外培养原代成骨细胞,分别对细胞施加周期性拉伸刺激(应变12%,频率0.5 Hz)和MGF-Ct24E(50 mg/L)直接作用,基因芯片技术分析力学刺激和MGF-Ct24E作用对原代成骨细胞基因表达谱的影响,并用定量PCR验证基因芯片实验结果。结果与对照组相比,力学加载组共发现差异表达基因1 866个,其中上调基因1 113个,下调基因753个;MGF-Ct24E处理组共发现差异表达基因1 178个,其中上调基因796个,下调基因382个。GO分析发现两者的差异基因表达谱具有一致性,并且差异表达基因主要涉及细胞增殖与分化调节、细胞对应力刺激的响应和力学转导通路等。定量PCR实验结果验证的差异表达基因与芯片实验结果一致。结论基因表达谱分析显示应力刺激和MGF-Ct24E作用对成骨细胞的基因表达具有类似的调控效应,为后续使用MGF-Ct24E治疗骨修复以弥补应力刺激不足的研究提供了新的思路。