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目的:提供简便有效的骨髓细胞(BMC)保存方法,以便进一步提高骨髓移植效果。方法 以昆明种小鼠急性放射病为模型,进行了-80℃冷冻保存BMC及其程序移植的研究。结果 -80℃保存的BMC其有核细胞回收率为(89.0±3.5)%,锥虫蓝拒染率为(85.0±3.6)%;产率(每10^5个BMC);单巨噬细胞克隆形成单位(CFU-GM)为108±10,脾细胞克隆形成单位(CFU-S)为12±3。昆明种小 相似文献
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观察红细胞(RBC)冷冻保存后形态、结构和功能的变化.采用慢速冷冻法.冷冻前后分别检测红细胞平均体积(MCV)、红细胞脆性(RFT)、全血粘度(WBV)、红细胞变形性(RBCD)、膜的流动性(LFU)、血氧饱和度(SO2at)、红细胞压积(HCT)、红细胞回收率(RBCRR)和红细胞免疫功能.结果发现红细胞解冻复苏后仍然对低渗盐溶液有较强的抵抗力;MCV、RBCD和LFU无显著性差异(P>0.05);WBV和HCT下降,RBCRR达84.1%(P<0.01);SO2at2由30.5%上升到98.2%;免疫功能各项指标检测均无显著性差异(P>0.05).提示红细胞冷冻保存后其质量不变并可长期进行冷冻保存. 相似文献
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红细胞—80℃冷冻保存的实验观察 总被引:4,自引:1,他引:4
观察红细胞(RBC)冷冻保存后形态,结构和功能的变化,采用慢速冷冻法,冷冻前后分别检测红细胞平均体积(MCV),红细胞脆性(RFT0,全血粘度(WBV),红细胞变形性(RBCD),膜的流动性(LFU),箅氧饱和度(SO2at),红细胞压积(HCT),红细胞回收率(RBCRR)和红细胞免疫功能,结是要发现;红细胞解冻复苏后仍然对低渗盐溶液有较强的抵抗力,MCV,RBCD和LFU无显著性差异(P>0.05),WBV和HCT下降,RBCRR达84.4%(P<0.01),SO2at2由30.5%下升到98.2%,免疫功能各项指标检测均无显著性差异(P>0.05),提示:红细胞冷冻保存后其质量不变并可长期进行冷冻保存。 相似文献
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低温-18℃冷冻保存人肝癌细胞的实验研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:了解低温-18℃保存人肝癌细胞Bel7402回收率,并观察其复苏后培养的形态。方法:采用不同浓度的二甲基亚砜(DMSO)为冻冻保护剂,直接于-18℃冰箱中冻存人肝癌细胞株Bel7402,于冻存后1周、1个月、2个月和3个月分别取样观察分析。结果:冻存3个月后,台盼蓝拒染存活率〉70%,置瓶培养后第4天细胞均可贴壁生长、形成克隆。结论:用-18℃普通冰箱冻存肿瘤细胞效果好,方法简单易行。 相似文献
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-80℃条件下不同细胞浓度外周血干细胞冻存效果的实验观察 总被引:4,自引:0,他引:4
目的 观察不同细胞浓度外周血干细胞在 - 80℃条件下的冻存效果。方法 采用一种简便的 - 80℃干细胞冻存方法 ,其干细胞保护剂终浓度为 5 %二甲基亚砜 (DMSO) ,3%羟乙基淀粉 (HES)和 4 %人血白蛋白 (HSA) ,不经程序降温 ,直接 -80℃冰箱冻存外周血干细胞 ,并在不同时相点 (冻存后 1、3、6、9、1 2个月 )对推荐细胞浓度组 (1 .3~ 3.9)× 1 0 7/ml、调整细胞浓度组 (8.0~ 2 9.9)× 1 0 7/ml和高细胞浓度组 (30 .1~ 70 .1 )× 1 0 7/ml的外周血干细胞的细胞活性进行检测 ,观察台盼蓝拒染率和MNC、CFU GM、CD34+ 细胞的回收率。结果 3组干细胞活性在 1 2个月内无明显下降 ;干细胞冻存后 9个月期间 ,3组冻存细胞的台盼蓝拒染率 ,MNC回收率、CFU GM回收率、CD34+ 细胞回收率都在 80 %以上。冻存 1 2个月中 ,3组在冻存后同一时间相互比较无统计学差异 (P >0 .0 5 ) ,说明该 - 80℃干细胞冻存方法适用于不同浓度的细胞液 ,短期内具有良好的冻存效果。结论 5 %DMSO、3%HES和 4 %HAS作为干细胞冷冻保护剂直接 - 80℃冰箱冻存外周血干细胞的方法能有效地保护不同浓度细胞液的外周血干细胞活性 ,适当地提高细胞保存时的浓度 ,减少回输量 ,可避免因干细胞冻存而引起的副作用 相似文献
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目的探讨半相合基因骨髓细胞移植的嵌合体水平对移植物抗肿瘤效应(Graft-Versus-Tumor effect,GVT)、移植物抗宿主病(Graft-Versus-Host Disease,GVHD)的影响及其机理。方法 25只8-12周龄BALB/C小鼠随机分为3组:混合型嵌合体组(A组10只)、完全型嵌合体组(B组10只)、对照组(C组5只)。A、B组小鼠行直线加速器全身照射,剂量分别为4Gy、8Gy,照射后4-6h内经尾静脉注射入CB6F1代小鼠的骨髓细胞(5×106/只),C组无处理。A、B、C三组均给予Renca肾癌细胞腋窝下注射,每只2.6×106个肾癌细胞。观察肿瘤生长速率,流式细胞仪测定A、B组小鼠移植后不同时间的嵌合体水平。荷瘤32d时断颈处死小鼠,剥离肿瘤称重;留取血浆,ELISA(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)方法测定血浆白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2),干扰素-γ(Interferon Gamma,IFN-γ)浓度;取肿瘤组织做成石蜡切片后行HE染色,测定肿瘤坏死面积比;留取小鼠的皮肤、肝脏及小肠用于制备石蜡切片,并行HE染色,观察GVHD。结果血液白细胞中供者源细胞比例:A组移植2周后形成混合嵌合体并达高峰,3-4周时下降至10%以下。B组小鼠移植后14d形成完全供者型嵌合体(供体细胞〉90%),28d后仍达90%以上。与C组和A组相比,B组的肿瘤生长速度明显减慢,肿瘤重量显著减小(P〈0.01),抑瘤率高达52%,IL-2、IFN-γ水平显著升高(P〈0.01),肿瘤组织坏死面积比显著升高(P〈0.01)。病理学检查未见肝、小肠及皮肤出现GVHD明显变化。结论完全型嵌合体水平的半相合基因骨髓细胞移植能够激发小鼠系统性的抗肿瘤免疫反应,抑制肿瘤生长,其机理可能是肿瘤坏死增加。 相似文献
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22℃和-80℃保存血小板磷脂的改变 总被引:1,自引:1,他引:1
采用HPLC UV分析在 2 2℃和 -80℃保存条件下血小板的 4种主要磷脂PC、PE、PS、PI的变化情况 ,并就血小板磷脂改变对血小板聚集功能的影响和在血小板贮存损伤 (Plateletstoragelesion ,PSL)发展过程中的作用进行探讨。1 材料与方法1 1 浓缩血小板的制备2 0位健康献血者 ,按血库操作规程采血 ,每人捐献 40 0ml全血 ;经二次离心制成浓缩血小板悬液 2 0单位 (从 40 0ml全血中提取的血小板为 1单位 )。血袋为ACD B三联袋 (上海血液中心产品 )。1 2 分组将每单位浓缩血小板分装成两份 ,分别… 相似文献
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目的:分析冰冻血小板-80℃保存一年内质量指标动态变化,为冰冻血小板有效保存提供可靠依据.检测方法:用二甲基亚砜(DMSO)为冰冻保护剂,-80℃冰冻保存血小板一年内,于30、90、180、270、360天进行计数,分别检测pH值、聚集率、粘附功能、Ⅲ因子活性质量指标,与冰冻前新鲜血小板进行比较,并随机抽取不同保存时期每样中任1份冰冻血小板进行无菌试验.结果:-80℃保存一年内各时期冰冻血小板pH值、Ⅲ因子活性与新鲜血小板相比差异无显著性(P>0.05);冰冻血小板计数、粘附功能、聚集率与新鲜血小板相比差异有统计学意义(P<0.05),但保存一年内的各时期回收率平均为84.1%,均大于70%.无菌试验均无细菌生长.结论:血小板-80℃冰冻保存一年内质量是可靠的. 相似文献
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冷冻保存软骨移植的实验研究 总被引:2,自引:1,他引:1
本实验采用低温冷冻异体兔胎软骨移植,实验组和新鲜软骨移植对照组。每组各移植软骨120块,于植入后15、30、60、90、120d取出软骨标本,进行肉眼观察,光镜和电镜检查,免疫组化检查,结果冻存软骨无吸收和再生,亦无坏死,排异反应轻,对照组有不同程度的增长,部分出现钙化,边缘灶性坏死,本实验对软骨的冻存在临床应用上有着重要的意义。 相似文献
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非程控降温-80℃冷冻保存外周血干细胞的活性观察 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 :观察非程控降温 - 80℃冷冻保存外周血造血干 /祖细胞的活性 ,为临床自体外周血造血干细胞移植提供方便、有效的冻存方法。方法 :常规方法动员外周血干细胞 ,CS - 30 0 0PLUS血细胞分离机采集干细胞 ,以 10 %二甲亚砜、10 %人AB型血清、RPM116 4 0培养基为冷冻保护剂 ,2ml/管冻存干细胞 ,按第 1、2、4周和第 2、3月顺序复苏细胞并测定GM -CFU集落数、台盼兰拒染率和CD34 细胞百分率。结果 :用该方法冷冻保存的外周血干细胞 ,在 4周内其细胞活性与采集时的细胞活性无明显差别 (P >0 .0 5 ) ,冻存至 2~ 3个月时细胞活性则明显降低 (P <0 .0 5 )。结论 :应用血清和DMSO等作为冷冻保护剂、- 80℃直接冻存的外周血干细胞 ,在 4周内复苏后其细胞活性无明显降低。 相似文献
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【立论依据】 I型糖尿病又称自身免疫性糖尿病,是由于自身免疫耐受机制打破、自身反应性T细胞攻击胰岛β细胞所致的自身免疫性疾病。迄今对自身免疫病的治疗方案多不理想,目前常规采用的免疫抑制手段不但降低患者免疫力,也使疾病容易复发。理想的治疗自身免疫病的策略是特异性清除自身反应性T细胞,重建对自身组织抗原的免疫耐受。而自身免疫调节因子(AIRE)恰在胸腺阴性选择中具有调控组织限制性抗原(TRAs)表达、促进自身反应T细胞的清除、参与免疫耐受诱导的功能。因此,我们设想利用基因转导手段操纵骨髓细胞中AIRE的表达,通过模拟胸腺的阴性选择,诱导免疫耐受,为I型糖尿病的防治提供新策略。 【设计思路】 本实验拟通过以自身免疫糖尿病小鼠(NOD鼠)为模型,移植表达AIRE的骨髓细胞,使其在NOD鼠体内通过调控TRAs的表达清除自身反应性T细胞,观察其诱导特异性清除对胰腺组织特异性T细胞的作用及对NOD鼠糖尿病发生的影响,探索I型糖尿病防治新方法。 【实验内容】 (1)构建编码小鼠AIRE的逆转录病毒载体,将其转导入骨髓DCs细胞。(2)将转导AIRE的骨髓DCs细胞移植至经放射线照射的NOD小鼠,获得NOD嵌合鼠。(3)采用流式细胞术检测NOD嵌合鼠胸腺和脾脏中GFP+细胞数量,检测NOD鼠嵌合程度。(4)采用real-time PCR法、流式细胞术检测Ins2 mRNA水平和蛋白水平表达变化,检测AIRE对TRAs的调控作用。(5)检测NOD鼠糖尿病发生时间和程度以及其病理学和胰岛素自身抗体的改变。 【材料】 NOD鼠、编码AIRE的逆转录病毒载体、real-time PCR仪、流式细胞仪、葡萄糖检测试剂盒、尿糖试纸、ELISA试剂盒等。 【可行性】 前期工作中,以胸腺阴性选择为理论依据,对AIRE的表达、分布及其在自身耐受中的作用进行了系统、深入的研究,现以基因转导和骨髓细胞移植为技术手段,切实可行。 【创新性】 本研究首次将基因操纵和骨髓细胞移植两大先进技术相结合,利用AIRE能特异性清除自身反应性T细胞的功能,探究治疗I型糖尿病的方法,为自身免疫疾病的防治提供新思路。 相似文献
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环磷酰胺预处理脐血移植小鼠模型的建立及其对骨髓龛位的影响 总被引:7,自引:1,他引:6
目的:建立环磷酰胺(CTX)预处理脐血移植(UCBT)小鼠模型,并探讨预处理后骨髓龛位腾出的特点和机制。方法:分别以100,200,380mg/kg3种剂量CTX腹腔注射BALB/c小鼠,检测注射后1周内外周血象、髓髓及外周血CD34^ 细胞含量、骨髓细胞凋亡及病理学改变。用C57BL/6鼠脐血(FNPB)作供体移植经“致死量“CTX预处理的BALB/c鼠,动态观察移植后受鼠存活状况、植入水平、造血与免疫功能恢复及移植物抗宿主病(CVHD)情况。结果:在CTX处理后3-4d内,骨髓造血细胞损伤渐加重,血窦结构紊乱,细胞碎屑弥漫分布,外周血与骨髓CD34^ 细胞水平进行性降低至最低值,下降的速度和程度与CTX剂量呈正比。骨髓细胞凋亡发生率的峰值出现在第1天,第3天恢复正常。FNPB移植能明显提高受鼠存活率,重建部分造血与免疫功能,未见明显GVHD表现,并在受体内检出供体细胞的植入。结论:成功建立CTX化疗预处理小鼠脐血移植模型。干细胞占据的龛位是要化疗预处理后4d逐渐完成腾空,凋亡是参与此过程的机制之一。 相似文献
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骨髓细胞低温(4℃)保存的实验研究和临床初步应用 总被引:1,自引:0,他引:1
本文通过10只兔和13例人骨髓细胞4℃保存,证明TC199对骨髓细胞4℃保存是有效的。EDTA·Na_2对骨髓细胞的抗凝能力比枸橼酸钠强,肝素抗凝维持时间短,容易产生凝结。TC199-EDTA·Ha_2(TCE)保存液与等量骨髓细胞混悬后,在4℃保存3天,骨髓细胞的台盼蓝和伊红拒染细胞的百分率和有核细胞回收率均在70%以上,骨髓粒系祖细胞(Granulocyte-Macrophage Colony-Forming Unit In Culture,简称CFU-C)的回收率为80%,保存5天时骨髓细胞中的粒细胞将出现固缩等退行性变化。临床资料初步表明,4℃保存3天的TCE骨髓细胞的输注是安全的,未见异常反应,可以加速放疗和化疗后骨髓及血液学的恢复。 相似文献
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目的 观察-80℃一步法冻存法对成人骨髓间充质干细胞成骨分化能力的影响.方法 体外分离、培养正常成人骨髓MSCs,于-80℃分别冻存6个月和9个月,通过检测碱性磷酸酶和I型胶原等指标比较两组冻存细胞与非冻存组MSCs成骨分化能力.结果 三组细胞成骨指标相比较无显著性差异.结论 在一定的冻存时间内,-80℃一步法冻存对成人骨髓间充质干细胞成骨分化能力没有明显影响. 相似文献
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林峰 《福建医科大学学报》2002,36(4):411-411
应用骨髓细胞进行心肌细胞移植代替损伤的心肌及瘢痕组织的研究已受到广泛的关注 ,为心肌疾病的治疗提供了新的途径。 目的 研究急性心肌梗死后梗死心肌内移植骨髓细胞的心肌再生、血管再生作用 ,探讨移植骨髓细胞对细胞因子分泌、梗死心肌基本结构、心肌细胞结蛋白及心功能的影响。 方法 体外提取、纯化 F344大鼠骨髓细胞 ,应用化学试剂 CFSE[5 (6 ) - carboxyfuorescein diacetate succin-im idyl ester]荧光标记。结扎 F344大鼠左冠状动脉前降支 ,建立急性心肌梗死模型。骨髓细胞经局部注射移植入急性心肌梗死区域 ,饲养动物 1,2 ,4 ,8周后分批处死。取心肌标本行组织形态学及细胞学检查 ,应用免疫组织化学方法和放射免疫测定法检测梗死区心肌血管密度、心肌组织结蛋白表达及细胞因子表达或含量。应用 TTC染色测定梗死心肌面积。通过微机生物信号记录分析系统 ,测定左心室功能指标。 结果 (1)提取纯化后即刻骨髓细胞活性约 85 % ,其中部分为骨髓祖细胞。 CFSE标记效果良好 ,细胞膜为黄绿色荧光。(2 )梗死区心肌标本观察到带荧光的骨髓细胞 ,部分已分化成肌源性细胞 ,电镜观察到不同分化阶段的新生心肌细胞 ,并与成熟心肌细胞以闰盘相连接。(3)骨髓细胞移植组梗死心肌面积明显小于对照组。 (4) 相似文献
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-80℃条件下自体造血干细胞保存时间的探讨 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 观察在-80℃条件下长期保存自体造血干细胞,对细胞数量及活性的影响,确定一个合适的保存期限。方法 采用常规计数法计数单个核细胞,台盼蓝拒染法计数存活细胞,甲基纤维素法观察CFU—GM集落生长情况。结果 -80℃低温冰箱中保存造血干细胞1—4年,单个核细胞的回收率分别为85%、79%、64%、58%。台盼蓝拒染细胞的回收率分别为89%、78%、71%、35%。CFU—GM集落生长的回收率分别为65%、50%、0%、0%。结论 -80℃条件下保存自体造血干细胞的时间最好不超过2年。 相似文献
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目的 对研制的-20℃不结冰的抗冻液-20℃保存人体皮的效果进行探讨。方法 测定皮肤琥珀酸脱氢酶(SDH)、皮肤组织块培养生长年、人-鼠皮肤移植成活率及成活期、表皮细胞与淋巴细胞混合培养、HLA-DR及CD86抗原测定等方法,对该抗冻液保存人体皮的保存效果、抗原性变化进行研究。结果 该抗冻液保存人体皮(-20℃条件下)2月内皮肤质量仍较好。冷冻皮肤免疫原性下降,但HLA-DR表达没有显著变化,而CD86表达显著降低。结论 ①该方法可保存人体皮2月。②冻存皮肤的抗原性下降的原因与CD86抗原分子减少有关。 相似文献