缺氧复氧致神经细胞凋亡中Bcl—2、Bax基因蛋白的表达

目的 探讨缺氧复氧致原代培养的大鼠大脑皮层神经细胞凋亡中Bcl-2、Bax基因蛋白的表达及其与凋亡的关系。方法 用胎龄17－18d Wistar大鼠的大脑皮层神经细胞进行原代分离培养。采用TUNEL染色方法、流式细胞术确立缺氧复氧神经细胞凋亡病理模型,并用免疫组织化学方法显示缺氧复氧不同时间Bcl-2、Bax基因的动态表达。结果 1.缺氧复氧可以使大鼠大脑皮层神经细胞发生凋亡,在分别缺氧2、4、6、8h,复氧0h和18h组中,缺氧4h开始出现凋亡细胞,随缺氧时间的延长,凋亡细胞数逐渐升高,两者呈显著负相关,而凋亡的发生也与Bax基因、Bcl-2基因表达呈显著正、负相关性。在缺氧复氧组中,未发现相关性。结论 缺氧复氧可致胎鼠大脑皮层神经细胞发生凋亡;缺氧复氧所引起Bcl-2基因表达增高,Bax基因表达降低,可能是胎鼠大脑皮层神经细胞发生凋亡的机制之一。     

一氧化氮合酶与缺氧复氧所致神经细胞凋亡及银杏叶提取物的保护作用

目的　探讨一氧化氮 (NO)在缺氧复氧诱导神经细胞凋亡中的作用及中药银杏叶提取物的保护机制。方法　实验使用胎龄 16～ 17日Wistar大鼠的大脑皮层神经细胞进行原代分离培养 ;采用Wright Giemsa染色 ,光镜、透射电子显微镜观察 ;原位末端标记法确立缺氧复氧神经细胞凋亡病理模型 ;应用NADPH d组织化学方法检测神经细胞一氧化氮合酶 (NOS)的表达并用计算机图像分析系统进行定量检测。　结果　缺氧复氧可以使大鼠大脑皮层神经细胞发生凋亡 ,随缺氧时间的延长 ,凋亡细胞数渐多 ,至缺氧 8h复氧 18h达高峰 ;在缺氧 2h(H2 R0 组 )和缺氧 8h复氧 18h(R8R1 8)组中神经细胞NOS表达均显著增高 ,与正常对照组比有显著性差异 (P <0 0 1;P <0 0 5 )。EGB能显著抑制此双时相NOS活性的增强 ,并明显降低神经细胞凋亡率。　结论　缺氧复氧损伤可诱导培养的大鼠大脑皮层神经细胞发生凋亡。NOS表达增强从而使NO产生增加可能是缺氧复氧诱导神经细胞凋亡的机制之一。银杏叶提取物 (EGB)经下调NOS表达活性 ,抑制NO的产生保护培养的大鼠大脑皮层神经细胞免于凋亡。     

银杏叶提取物对缺氧复氧诱导大鼠大脑皮层神经细胞凋亡的保护作用

应用原代分离培养的Wistar胎鼠大脑皮层神经细胞缺氧复氧模型。研究银杏叶提取物对神经细胞凋亡的抑制作用。方法：采用流式细胞术检测DNA含量及凋亡细胞百分率。原位末端标记法检测DNA断裂;光镜及透射电镜观察细胞形态学变化。结果：银杏叶提取物能改善神经细胞亚微结构的变化。减少凋亡细胞数,使缺氧复氧诱导神经细胞凋亡百分率明显下降。结论：银杏叶提取物对缺氧复氧所引起的胎鼠大脑皮层神经细胞凋亡有明显抑制作用。     

缺氧复氧时体外培养的神经细胞一氧化氮合酶的动态表达及银杏叶提取物的调节作用

本文研究了缺氧复氧时原代培养的大鼠神经细胞 NOS的动态表达及银杏叶提取物的调节作用 ,藉以探讨 NO在缺血缺氧导致神经细胞损伤时的作用以及银杏叶提取物的保护机制。实验使用胎龄 15～ 17d大鼠的大脑皮层神经细胞进行原代分离培养 ,建立缺氧复氧神经元损伤模型。实验分为正常对照组、单纯缺氧组、缺氧复氧组和银杏叶提取物处理组。应用 NADPH-d组织化学方法观察神经细胞 NOS的动态表达 ,并用图象分析仪进行定量检测。结果 :缺氧复氧可以使神经细胞的 NOS呈双时相的升高 :在单纯缺氧 2、4、6、8h组及缺氧加复氧 18h组中 ,缺氧 2 h组及缺氧 8h复氧 18h组与对照组相比 NOS阳性细胞数量增多 ,染色加深 ,酶活性增强 ,经统计差异具有显著性 (P<0 .0 1)。其它组与对照组比较无明显差异。中药银杏叶提取物可以抑制上述两组的NOS活性增强。本文结果提示 :缺氧及缺氧复氧可以使神经细胞 NOS活性呈双时相增强 ,NO的升高可能是缺氧复氧导致神经细胞损伤的原因之一 ;银杏叶提取物对缺氧复氧导致的神经细胞损伤的保护作用可能是通过下调 NOS活性而实现的     

缺氧复氧诱导大鼠大脑皮层神经细胞凋亡的形态学研究

目的　　应用原代分离培养的Ｗｉｓｔａｒ胎鼠大脑皮层神经细胞缺氧复氧模型,探讨缺氧复氧诱导神经细胞凋亡的形态学变化。方法　　采用光镜、透射电镜观察并用原位末端标记法（ＴＵＮＥＬ）检测ＤＮＡ断裂。结果　　缺氧复氧可使胎鼠大脑皮层神经细胞发生凋亡,凋亡的细胞皱缩,细胞核染色质凝集、边聚呈半月形等多种形式形成核碎块,内质网扩张,线粒体肿长,其它细胞器未见明显变化。结论　　凋亡参与了缺氧复氧诱导大脑皮层神经细胞死亡过程。     

缺氧复氧时培养的大脑皮质神经细胞一氧化氮动态变化及银杏叶提取物的调节作用

本研究用原代混合培养的 Wistar胎鼠大脑皮质神经细胞 ,给予不同时间的缺氧复氧 ,观察其一氧化氮的代谢中间产物亚硝酸盐的动态变化以及诱导型一氧化氮合酶抑制剂氨基胍和银杏叶提取物对一氧化氮的调节作用。结果表明 :缺氧复氧可造成培养大鼠的大脑皮质神经细胞一氧化氮双相升高。即 :在缺氧早期 (缺氧 2 h)可见一氧化氮一过性升高 ,然后很快恢复至正常水平 ;在缺氧 8h、复氧 18h后可见第二次一氧化氮升高。于缺氧前 1h在细胞培养上清液中分别加入氨基胍 (0 .5 m mol/L)和银杏叶提取物 (5 0 μg/ml) ,发现氨基胍可有效地抑制缺氧复氧晚期培养的大鼠大脑皮质神经细胞一氧化氮升高 ,但不能抑制缺氧早期一氧化氮的产生 ;而银杏叶提取物可有效地抑制缺氧复氧诱导的一氧化氮双相升高。提示 :在混合培养的胎鼠大脑皮质神经细胞缺氧复氧损伤模型中 ,一氧化氮的双相升高是由不同亚型的一氧化氮合酶所介导 ,其早期升高可能为神经元型一氧化氮合酶活性上调所致 ,而其晚期升高则是诱导型一氧化氮合酶活性增强的结果 ;银杏叶提取物可抑制缺氧复氧时神经元型和诱导型一氧化氮合酶的活性从而降低一氧化氮的产生而完成其神经保护作用     

复方丹参对大鼠脑缺血再灌注后大脑皮层神经细胞凋亡和Bcl-2 mRNA表达的影响

为了探讨中药复方丹参对大鼠局灶性脑缺血再灌注后大脑皮层神经细胞凋亡及Bcl-2mRNA表达的影响和保护作用,本研究采用大脑中动脉内栓线阻断法(MCAO)造成局灶性脑缺血再灌注模型,应用原位末端标记(TUNEL)和原位杂交技术检测大鼠大脑皮层神经细胞凋亡和神经细胞Bcl-2mRNA的表达,并进行图像分析。结果显示:缺血再灌注组凋亡神经细胞主要位于缺血侧大脑皮层缺血边缘区(半暗区);缺血侧大脑皮层缺血边缘区神经细胞Bcl-2mRNA的表达在缺血再灌注2h后升高,随着缺血再灌注时间的延长逐渐增强;复方丹参保护组神经细胞Bcl-2mRNA的表达明显强于缺血再灌组(P<0.01),凋亡神经细胞数明显低于缺血再灌组(P<0.01)。上述结果说明复方丹参可通过上调神经细胞Bcl-2mRNA的表达,抑制神经细胞凋亡,减轻缺血再灌注对大鼠大脑皮层神经细胞的损伤。     

Urocortin调控Bcl-2家族与大鼠缺氧/复氧心肌细胞凋亡

目的观察神经肽Urocortin对大鼠缺氧/复氧心肌细胞Bcl-2及相关基因mRNA表达和细胞凋亡的影响。方法培养新生大鼠的心肌细胞并缺氧/复氧处理,用RT-PCR检测Bcl-2、Bax、Bcl-xL、Bad mRNA表达,TUNEL法检测细胞凋亡。结果Urocortin治疗组Bcl-2的mRNA表达与缺氧/复氧组比较明显增加(P<0.05),Bax的表达明显下降(P<0.05),Bcl-xL、Bad mRNA表达无明显改变(P>0.05)。Urocortin治疗组凋亡细胞率与缺氧/复氧组比较减少(P<0.05)。结论Urocortin调节心肌细胞Bcl-2家族基因转录下凋促凋亡基因Bax表达,上调抑凋亡基因Bcl-2使Bcl-2/Bax比值增加。这可能是Urocortin抗大鼠缺氧/复氧心肌细胞凋亡的机制之一。     

白藜芦醇诱导胃癌原代细胞凋亡(英文)

目的：探讨白藜芦醇诱导胃癌原代细胞发生凋亡的可能性，揭示该凋亡发生与Bcl-2和Bax之间的关系。 方法： 在体外实验中，采用MTT比色法测定白藜芦醇对胃癌原代细胞的生长抑制率；以透射电镜和TUNEL 染色法，定性、定量地研究白藜芦醇与胃癌原代细胞凋亡的关系；通过免疫组织化学法和RT-PCR检测凋亡相关基因bcl-2和bax的表达。 结果： 白藜芦醇对胃癌原代细胞生长有明显抑制作用，随白藜芦醇浓度增加和培养时间的延长而增强；白藜芦醇诱导胃癌原代细胞出现典型的凋亡细胞形态；TUNEL 染色法可见，经白藜芦醇处理24 h、48 h、72 h、96 h后，胃癌原代细胞凋亡数明显随时间增加。免疫组化发现经白藜芦醇处理24 h、48 h、72 h、96 h后，胃癌原代细胞的Bcl-2蛋白阳性率减少，Bax蛋白阳性率增加。经白藜芦醇处理24、48、72、96 h后，RT-PCR检测发现胃癌原代细胞bcl-2和bax的mRNA表达阳性，并显示bcl-2 mRNA条带密度随时间的延长而递减，bax mRNA条带密度随时间的延长而增强。 结论： 白藜芦醇可能通过下调bcl-2的表达和上调bax的表达而诱导胃癌原代细胞发生凋亡。     

Bcl-2抑制剂对黄芪注射液降低缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元caspase-3表达的影响

目的:观察Bcl-2抑制剂对黄芪注射液降低缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元caspase-3表达的影响。方法:取体外原代培养8 d的海马神经元,随机分为6组:正常对照组、模型组(缺氧缺糖/复氧复糖组)、黄芪注射液组、黄芪注射液溶剂(无菌去离子水)对照组、Bcl-2抑制剂组和Bcl-2抑制剂+黄芪注射液组。除正常对照组外均进行缺氧缺糖0.5 h再复氧复糖,各组均于复氧复糖后24 h进行指标检测:采用细胞免疫化学染色法观察细胞形态和caspase-3阳性细胞率,Western blotting法检测海马神经元Bcl-2和cleaved caspase-3蛋白的表达,RTPCR法检测海马神经元caspase-3 mRNA的表达。结果:与正常对照组相比,模型组细胞caspase-3阳性率、Bcl-2、cleaved caspase-3蛋白及caspase-3 mRNA表达均明显增强(P0.05);与模型组相比,黄芪注射液组Bcl-2表达明显增加,细胞caspase-3阳性率、cleaved caspase-3蛋白及caspase-3 mRNA表达均明显降低(P0.05);而黄芪注射液溶剂对照组、Bcl-2抑制剂组及Bcl-2抑制剂+黄芪注射液组则无明显差异;黄芪注射液溶剂对照组Bcl-2表达较正常对照组无明显变化,而Bcl-2抑制剂组及Bcl-2抑制剂+黄芪注射液组显著下降(P0.05)。结论:Bcl-2抑制剂可对抗黄芪注射液降低缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元caspase-3表达的作用,黄芪注射液通过Bcl-2发挥对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡的抑制作用。     

远志皂苷元抗H/R诱导皮层神经元凋亡的机制初探

 目的：初步探讨远志皂苷元（senegenin, Sen）对抗缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation, H/R）诱导大鼠原代皮层神经元凋亡的作用及机制。方法：提取原代大脑皮层神经元,培养至第6 d,进行相应的实验处理,分为正常对照组（control组）、模型组(H/R组)、Sen保护处理组（Sen+H/R组）和Sen处理组（Sen组）。流式细胞术检测各组凋亡率。采用Western blotting检测JNK、p-JNK、c-Jun、p-c-Jun、Bcl-2和Bax的表达变化。结果：H/R组与control组比较,细胞凋亡率显著升高（P<0.05）;而H/R+Sen组细胞凋亡率显著低于H/R组（P<0.05）,提示Sen可对抗H/R诱导的皮层神经元凋亡,模型构建成功;Western blotting结果显示Sen可显著增强H/R模型中JNK和c-Jun蛋白表达,抑制其磷酸化（P<0.05）,上调Bcl-2蛋白表达并抑制Bax蛋白表达（P<0.05）。结论：Sen抗H/R诱导神经细胞凋亡,发挥保护作用的可能机制是通过上调JNK和c-Jun蛋白表达,并抑制其磷酸化,进而上调Bcl-2表达并抑制Bax表达等来实现的。     

低分子肝素抗新生大鼠大脑皮层神经细胞缺氧性凋亡

目的：探讨低分子肝素对体外培养的新生大鼠大脑皮层神经细胞缺氧性凋亡的作用机制。方法： 应用“neurobasal 加 B27 supplement”体外培养大鼠大脑皮层神经细胞，并在缺氧条件下使用Hoechst 33342荧光染色法、免疫细胞化学染色法观察低分子肝素对原代神经细胞的抗凋亡作用。结果： 在250-500 U/L的浓度范围內，低分子肝素能降低缺氧诱导的神经细胞凋亡率（P<0.05），并且较BDNF（50 μg/L）抗凋亡阳性对照组的凋亡率更低（P<0.05）。低分子肝素（500 U/L）增加缺氧的神经细胞Bcl-2蛋白的表达（P<0.05），减少Bax蛋白的表达（P<0.01），提高Bcl-2/Bax比值（P<0.01）。低分子肝素500 U/L组的Bcl-2/Bax比值比正常对照组、BDNF抗凋亡阳性对照组和凋亡阳性组都高（P<0.05）。结论： 低分子肝素通过上调缺氧神经细胞Bcl-2表达和下调Bax表达，提高Bcl-2/Bax比值减少缺氧的神经细胞凋亡。     

缓激肽受体在神经元缺氧复氧损伤中的作用

为了解缓激肽B1和B2受体(B1R和B2R)在神经元缺氧复氧(H/R)损伤中的作用,本研究用细胞免疫荧光方法首先对原代培养的SD大鼠皮质神经元中缓激肽B1R和B2R的表达进行了检测;在此基础上,建立了模拟在体缺血/再灌注的原代培养神经元H/R模型,用MTT和TUNEL染色分别检测神经元存活和细胞凋亡率;利用B1R和B2R特异性激动剂与抑制剂,观察了B1R和B2R被激活或抑制后H/R神经元的生存状况。结果显示:体外正常培养的原代神经元中有明显的B2R表达;H/R可诱导B2R和BIR的表达增加,并可加剧神经元的凋亡。此外,激活B1R可使H/R导致的神经元损伤加重,而激活B2R则对神经元有明显的保护作用。B1R和B2R对神经元损伤的影响可以被各自特异性的拮抗剂所抑制。上述结果表明,缓激肽B1R和B2R在H/R造成的神经元损伤中发挥了完全不同的作用,抑制B1R表达和增强B2R的表达有助于对缺血性脑梗死等疾病的治疗。     

Rp-cAMP与缺氧神经元Bcl-2表达和细胞凋亡关系的研究

目的探讨培养神经元缺氧后蛋白激酶A(PKA)活性变化及其与神经元缺氧凋亡的关系。方法建立体外培养W istar大鼠胎鼠皮层神经元模型及培养神经元缺氧模型,用不同浓度的PKA抑制剂(Rp-cAMP),在不同的缺氧时相点观察神经元细胞膜和细胞质中PKA的活性、Bc l-2和TUNEL表达的规律。结果随着缺氧时间的延长,培养神经元细胞膜PKA的活性显著增加,Bc l-2表达降低,TUNEL荧光染色阳性率及平均荧光强度显著升高。而应用Rp-cAMP后细胞凋亡情况显著减轻。结论PKA和Bc l-2均参与了缺氧神经元凋亡;PKA抑制剂Rp-cAMP可减轻缺氧神经元凋亡,且该作用与Bc l-2表达降低有关;PKA的激活在缺氧神经元凋亡中起促发作用。     

环加氧酶-2在大鼠原代皮质神经细胞缺氧损伤中的作用

目的:观察环加氧酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)在原代培养的大鼠皮质神经细胞缺氧-再给氧损伤中的作用以及COX-2特异性抑制剂NS398的保护作用。方法: 原代培养大鼠皮质神经细胞,随机分为对照组(未处理组)、缺氧再给氧组、COX-2特异性抑制剂NS398+缺氧再给氧组。用噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞生存率,用Western印迹法检测COX-2蛋白质的表达,用DNA凝胶电泳法检测细胞凋亡情况。结果: 培养的大鼠原代皮质神经细胞经缺氧再给氧处理后,COX-2蛋白质表达水平明显高于对照组及缺氧再给氧+NS398组(P＜0.05);缺氧再给氧+NS398予处理组神经细胞生存率明显高于单独缺氧再给氧组(P＜0.05和P＜0.01),DNA凝胶电泳显示DNA断裂显著减轻。结论:COX-2参与缺氧再给氧后神经细胞凋亡的病理过程,COX-2特异性抑制剂明显减轻缺氧再给氧后神经细胞的损伤,保护神经细胞免遭缺氧诱导的细胞凋亡。