慢性乙型肝炎患者外周血及肝组织中T淋巴细胞受体β链互补决定区3谱系分析

目的 分析慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血及肝组织T淋巴细胞受体(TCR)β链各家族互补决定区3(CDR3)谱系的变化,了解CHB患者T淋巴细胞克隆增生的情况.方法 采用荧光定量PCR(FQ-PCR)溶解曲线法分析4例健康对照者及11例CHB患者外周血单个核细胞(PBMC)及肝组织T淋巴细胞受体β链可变区(TRBV)基因各家族CDR3谱系漂移情况,比较11例CHB患者TCR β链可变区各家族外周血及肝组织CDR3谱系漂移异常率.率的比较采用卡方检验.结果 11例CHB患者PBMC及肝组织TRBV各家族CDR3溶解曲线谱型图出现数量不等、形态不一的单峰、寡峰、偏峰及极低水平或缺失等现象,肝组织TRBV家族CDR3的谱系漂移异常率明显高于外周血的异常率(x2=23.246,P＜0.01),在同一患者的外周血及肝组织中发现部分相同的TRBV亚家族表达,TRBV13.1、BV17和BV22同时被多例CHB患者的外周血及肝组织限制性取用.结论 CHB患者PBMC及肝组织中的T淋巴细胞均存在不同程度的克隆增生,部分TRBV亚家族被多例CHB患者外周血及肝组织同时限制性取用.     

基因扫描分析维持性血液透析患者外周血T细胞克隆性分布的特点

目的:了解慢性肾功能衰竭进行维持性血液透析(MHD)患者的外周血T细胞克隆性增殖的特性和意义. 方法:通过RT-PCR方法扩增11例膜性肾病(MGN)3例、膜增殖性肾炎(MPGN)3例、IgA肾病(IgAN)4例、局灶节段性肾小球硬化症(FSGS)1例.MHD患者外周血单核细胞T细胞受体(TCR)Vβ24个亚家族基因的CDR3,阳性的PCR产物进一步经荧光素标记和基因扫描的方法分析产物CDR3的长度及序列,了解T细胞的克隆性.结果:11例MHD患者中仅表达1～10个TCRVβ的亚家族,其中2例只表达Vβ3一个亚家族,分别为寡克隆及双克隆性.最常见的TCR Vβ亚家族是Vβ3,其次Vβ8、Vβ19、Vβ22,再次为Vβ10、Vβ23.11例患者的透析时间与TCR Vβ表达呈显著负相关(r=-0.646,ρ=0.044);用协方差分析MGN、MPGN、IgAN三个病种的TCR Vβ表达差别:不同透析时间的TCR Vβ表达的数量不同(F=10.193,P=0.019),而MGN、MPGN、IgAN三个病种之间的表达量没有显著的差异(F=1.772,P=0.249).结论:MHD患者外周血存在着TCR Vβ亚家族T细胞倾斜分布的现象,并有克隆性增殖的特征,提示大部分MHD患者存在某些细胞免疫功能低下和有相同的免疫刺激原.透析时间愈长,TCR Vβ表达的数量愈少,提示长期血液透析可能是MHD患者的细胞免疫功能低下的一个原因;而 MGN、MPGN、IgAN三个病种之间TCRVβ的表达量没有显著差异.     

强直性脊柱炎患者外周血T细胞受体β链可变区基因谱系多态性的初步研究

目的 探讨强直性脊柱炎(AS)患者外周血T细胞受体β链可变区互补决定区3(TCRBV CDR3)谱系多态性,为AS免疫发病机制研究提供实验依据.方法 采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增AS患者外周血单个核细胞(PBMC)中T细胞TCR BV的26个亚家族CDR3,经免疫扫描谱型技术分析TCR BV CDR,3的谱系多态性情况.结果 20例活动期AS患者TCR BV CDR3扫描谱型均出现非正态的异常峰型,包括单峰、寡峰/寡峰趋势、偏峰和不规则异常峰型.其中有18例患者部分亚家族出现寡克隆/寡克隆趋势增生,有1例患者BV16和BV18的2个亚家族出现单克隆增生.5名健康对照PBMC TCR BV CDR3谱型绝大多数呈高斯分布.结论 AS患者外周血TCR BV CDR3谱系具有显著多态性和谱系漂移特点,进一步表明T细胞在AS免疫发病机制中扮演重要角色.单/寡克隆增生的T细胞有可能是AS发病中的自身反应性T细胞.     

白血病病人异基因造血干细胞移植后TCR Vβ—亚家族T细胞的免疫重建

目的：了解白血病病人异基因造血干细胞移植后患者TCR VβT细胞免疫功能重建的情况。方法：彩和RT－PCR扩增5例CML和1例AML－M2a移植后（1－7个月)患者外周血单核的TCR Vβ24个亚家族基因,分析其TCR Vβ亚家族的表达情况。结果不同标本中仅检测到2－8Vβ亚家族的T细胞,不同患者中缺乏的TCRVβ亚家族不尽相同。结论移植后病人外周血TCRVβ亚家族T细胞部分受抑制,此方法可详细了解病人T细胞免疫功能重建的情况。     

基因扫描分析人T细胞受体CDR3谱型检测T细胞克隆技术的建立

目的建立人T细胞受体（TCR）互补决定区3（CDR3）基因谱型的基因扫描分析术，为分析T细胞克隆提供研究方法。方法分别以Jurkat和Raji细胞作为阳性和阴性对照，应用RT-PCR方法扩增5例健康志愿者外周血T细胞的34个TCR Vα亚家族和26个TCR Vβ亚家族的CDR3，并用基因扫描分析扩增产物以确定T细胞的克隆性。结果T细胞株Jurkat细胞仅表达TCR Vα1．1和Vβ8基因，且为单克隆，而B细胞株Raji细胞则不表达所有的TCR Vα和Vβ基因。5例健康人表达所有的TCR Vα和Vβ基因，均为多克隆T细胞。结论基因扫描分析人TCRCDR3基因谱型是检测T细胞克隆性的精确敏感方法。     

自身免疫甲状腺疾病T细胞受体的表现型

应用抗β链可变区(Vβ)的3种单克抗隆体(Vβ_5,Vβ_6,Vβ_(12))和一种抗γ链可变区(Vγ)的单克隆抗体检测Graves病和桥本病患者的外周血液及甲状腺内浸润的T细胞的受体表现型。以正常人的外周血液作为对照,患者的Vβ阳性T细胞分布未见异常。但7例受检者的甲状腺中有5例Vγ阳性的T细胞增加。在未经治疗的Graves病患者的外周血液中Vγ阳性的T细胞未见增加。结果提示:自身免疫甲状腺疾病的T细胞反应可能是多克隆的。表达为Vγ型受体的T细胞可能在桥本甲状腺炎中发挥了一定的作用。     

慢性乙型肝炎患者外周血CD8~+T淋巴细胞亚群T淋巴细胞受体β链互补决定区3谱型研究

目的 研究慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血CD8+T淋巴细胞亚群T淋巴细胞受体(TCR)β链Ⅴ区(BV)中互补决定区3(CDR3)谱型特点.方法 采集8例CHB患者(ALT>2倍正常值上限)的抗凝血,分离外周血单个核细胞,磁珠分选CD8~+T淋巴细胞亚群,提取RNA并应用逆转录-聚合酶链反应扩增TCR BV中CDR3基因的24个家族,采用免疫指纹技术进行TCRBV各家族基因扫描和谱型分析.不同细胞亚群间数据比较采用配对t检验.结果 8例患者外周血淋巴细胞TCR BV家族CDR3谱型发生明显偏移,表现为单克隆性,寡克隆性及偏峰性克隆增生.8例患者CD8~+T淋巴细胞亚群发生TCR BV CDR3谱型偏移家族总个数高于去除CD8~+T淋巴细胞群的外周血单个核细胞[(10.6±4.7)个比(4.1±3.1)个,t=6.619,P<0.01)];比较单、寡克隆增生2种形式偏移的家族,CD8+T淋巴细胞亚群也高于代表CD4+T淋巴细胞的去除CD8~+T淋巴细胞群的外周血单个核细胞[(8.8±4.5)个比(3.9±2.8)个,t=5.706,P<0.01].对其中3例患者磁珠分选前后TCR BV谱型的比较发现,分选后CD8+T淋巴细胞亚群发生TCR BV谱型偏移家族数均高于分选前.结论 通过淋巴细胞亚群分选方式分析TCR BV家族CDR3谱型变化可以减少不同淋巴细胞亚群之间的峰型重叠干扰;应用这一方法分析外周血CD8~+T淋巴细胞亚群克隆增生程度有助于了解CHB患者炎症的发生机制.     

自身免疫性甲状腺疾病巨噬细胞浸润与T细胞活化

用单核/巨噬细胞（Mo/Mφ）特异性单克隆抗体Ki-M8和抗T细胞活化抗原TLiSAl、Tac单抗对37例自身免疫性甲状腺疾病（AITD）作免疫细胞化学研究。结果表明:无论是桥本甲状腺炎还是Graves病或甲亢合并甲状腺炎,甲状腺组织中均有一定数目Mφ浸润和活化T细胞聚集;甲状腺单个核细胞中Mφ所占比例与活化抗原阳性细胞所占比例呈正相关。认为在AITD甲状腺中Mφ浸润能促进其邻近部位T细胞活化和增殖。     

1型糖尿病伴自身免疫性甲状腺疾病的临床与遗传学特征

1型糖尿病(1 型DM)是一种T细胞介导的胰岛β细胞自身免疫破坏为主要发病机制的疾病.而自身免疫性甲状腺疾病(AIED)是一组以甲状腺内淋巴细胞浸润和甲状腺自身抗体产生为共同特征的异质性疾病,主要包括桥本病和Graves病.AITD是1型DM最常合并的自身免疫性疾病,而有关1型DM合并AITD的临床及免疫遗传学特征国内少见报道.     

自身免疫性甲状腺疾病与细胞凋亡

自身免疫性甲状腺疾病(autoimmune thyroid disease．AITD)是人类常见的自身免疫性疾病，主要包括Graves’病(GD)和桥本氏甲状腺炎(Hashimoto’s thyroiditis,HT)。AITD的病变部位主要发生在甲状腺，属于器官特异性自身免疫性疾病。多数学者研究认为，AITD发病是自身抗体的免疫应答或特异性T细胞介导的细胞免疫引起甲状腺组织的免疫损