荧光原位杂交技术在膀胱癌诊断中的临床应用

目的 应用荧光原位杂交技术(FISH)检测膀胱尿路上皮癌患者尿液脱落细胞中染色体异常,探讨FISH在膀胱尿路上皮癌诊断的可行性.方法 2007年10月至2009年4月,随机留取20例正常人群的新鲜尿液及91例疑似尿路移行上皮肿瘤患者的肉眼血尿,其中男性66例,女性25例.同时行FISH检测和尿液脱落细胞学分析,FISH检测使用荧光标记DNA探针混合物与细胞核上3、7、17 号染色体及9p16位点杂交,并与病理检查结果进行比较.结果 91例行FISH检测的患者,通过膀胱镜活检或手术后病理检查明确诊断为膀胱癌患者83例,其敏感度为97.6%,特异度为92.9%.G1、G2 、G3级敏感性分别为93.8%、97.9%、100%,Ta、T1、T2、T3-4各期的敏感度分别为75%、91.7%、100%、100%.尿脱落细胞学总的敏感度为43.4%,特异度为92.9%.结论 FISH的检测为膀胱尿路上皮癌的早期诊断提供了快速、安全、灵敏度高的非侵犯性检测方法.     

尿脱落细胞FISH检测方法与CT扫描及尿细胞学检测在上尿路尿路上皮肿瘤诊断中的应用及对比

目的比较尿脱落细胞荧光原位杂交(FISH)检查、计算机断层扫描(CT)和尿脱落细胞学检查对以血尿为主要症状的上尿路尿路上皮细胞癌诊断的临床有效性。方法分析2010年8月至2011年8月可疑上尿路尿路上皮细胞癌的血尿患者30例,均行FISH检测、CT和尿脱落细胞学检查,共有21例经病理诊断为上尿路尿路上皮细胞癌,其中肾盂癌14例,输尿管癌7例,分期为Ta/T1 6例,T2 12例,T3/T4 3例。另外9例分别为肾盂神经内分泌癌1例,肾结核2例,肾透明细胞癌6例。结果 FISH检测、CT检查及尿细胞学检查对上尿路尿路上皮细胞癌的总敏感性分别为85.7%、66.7%、28.6%,FISH明显高于CT比较(P=0.014)及尿脱落细胞学检查(P=0.05);CT明显高于尿脱落细胞学检查(P=0.013)。FISH对Ta/T1、T2、T3/T4各肿瘤分期检测结果分别为66.7%、91.7%、100%,CT检查结果分别为33.3%、75.0%、100%,尿脱落细胞学检查结果分别为0%、25.0%、100%。FISH、CT及尿脱落细胞学诊断上尿路尿路上皮细胞癌的特异性分别为88.9%、77.8%、100%。三者无统计学差异(P>0.05)。结论FISH检测上尿路尿路上皮细胞癌的敏感性明显高于CT检查,而CT检查的敏感性明显高于尿脱落细胞学检查,并且伴随着疾病分期的减低,这种差异越明显。三者在特异性上无明显差异。FISH技术可以明显改进上尿路尿路上皮细胞癌的诊断。     

荧光原位杂交技术在上尿路上皮细胞癌诊断中的应用

目的探讨荧光原位杂交技术(FISH)在上尿路上皮细胞癌诊断中的可行性。方法随机留取40例正常人群及56例疑似上尿路上皮细胞癌的肉眼血尿患者的新鲜尿液。两组同时行FISH检测和尿液脱落细胞学分析,FISH检测使用荧光标记DNA探针混合物与细胞核上3、7、17号染色体着丝粒及9p16位点杂交,并通过病理检查结果进行比较。结果 56例行FISH检测的患者,通过输尿管镜活检或手术后病理检查明确诊断为上尿路上皮细胞癌患者51例,其敏感性为91.1%,特异性为92.0%。尿脱落细胞学检测为上尿路尿路上皮细胞癌患者19例,其敏感性为33.9%,特异性为94.0%,FISH与其相比,敏感性有差异性(P0.05),特异性无差异性(P0.05)。结论 FISH的检测为上尿路尿路上皮细胞癌的早期诊断提供了一种快速、安全、灵敏度较高的非侵入性检测方法。     

尿survivin检测对膀胱移行细胞癌的诊断价值

采用免疫组化SP法检测78例膀胱移行细胞癌（TCCB）、30例非膀胱癌患者（对照组）的尿生存素（survivin）及脱落细胞。结果显示，TCCB患者尿中脱落细胞和survivin阳性表达率分别为35．9％（28／78）、97，4％（76／78），后者明显高于前者，免疫组化法检测尿中survivin的敏感性和特异性分别为97．4％、100％，而尿脱落细胞学检查的敏感性和特异性分别为35．9％、100．0％。认为尿survivin检测诊断TCCB敏感性和特异性均较高，可作为诊断TCCB的敏感指标。     

荧光原位杂交技术在上尿路肿瘤诊断中的应用

目的 评价荧光原位杂交技术（FISH）在上尿路肿瘤诊断中的应用价值。方法采用FISH技术检测20例正常人的3、7、17号染色体及9号染色体p16位点的变异情况,建立阈值。15例上尿路肿瘤患者及7例对照组患者留取晨尿,分别进行尿脱落细胞学检查和FISH检测。以至少两种探针检测结果超过阈值或一种探针检测结果存在至少两种异常为阳性。结果15例上尿路肿瘤患者中14例FISH检测阳性,而尿脱落细胞学检查仅2例阳性。对照组7例中6例FISH检测阴性,尿脱落细胞学检查均阴性。结论FISH对上尿路肿瘤的诊断效果优于尿脱落细胞学检查。     

尿脱落细胞、NMP22、CK20在膀胱移行上皮癌诊断中的作用

2003年1月～2004年7月,我们对30例膀胱移行上皮癌（BTCC）患者的同一组样本同时进行尿脱落细胞学、细胞角蛋白20（CK20）和核基质蛋白22（NMP22）检测,并比较三者对BTCC筛检诊断的敏感性和特异性,探讨对BTCC更为适宜的筛检方法并指导临床治疗。     

尿液脱落细胞块切片的制备

目的 制作尿液脱落细胞块切片，并观察制备效果。方法 收集36例疑似尿路上皮癌患者的新鲜晨尿样本，离心后取尿液沉渣，裂解沉渣中红细胞后加入固定液固定尿液脱落细胞，将尿液脱落细胞富集后制备尿液脱落细胞团，将尿液脱落细胞团脱水后石蜡包埋，以制备尿液脱落细胞块。将尿液脱落细胞块切片，苏木素—伊红染色（HE）后显微镜下评估切片细胞数量（一个视野中细胞所占面积>40%为制备成功）。将制备成功的尿液脱落细胞块切片分别进行免疫组织化学（IHC）和荧光原位杂交（FISH）检测，IHC染色清晰，定位准确，阳性细胞与背景分辨清晰视为检测成功，FISH检测荧光信号对比清晰，背景干净且75%以上细胞核中有杂交信号视为检测成功。结果HE染色显微镜下评估后36例份尿液脱落细胞块切片中21例份制备成功、15例份因细胞过少无法满足后续诊断要求。21例份尿脱落细胞块切片HE染色后显微镜下可见细胞单层平铺，背景干净，核仁清晰，细胞核和胞质对比清晰。21例份尿脱落细胞块切片IHC染色后荧光显微镜下细胞定位准确，细胞内颗粒清晰，染色强度适宜。21例份尿脱落细胞块切片FISH染色后荧光显微镜下细胞核形态轮廓清晰，荧光红绿信...     

尿Cox-2蛋白、Survivin mRNA和脱落细胞学检查对膀胱移行细胞癌的诊断价值

对60例膀胱移行细胞癌和30例非膀胱肿瘤患者尿液进行尿环氧化酶-2(Cox-2)蛋白、Survivin mRNA和脱落细胞学检测.发现尿Cox-2蛋白检测的敏感性和Youden指数均高于尿Survivin mRNA,而尿Survivin mRNA检测的敏感性和Youden指数明显高于尿脱落细胞学.认为尿Cox-2蛋白和尿Survivin mRNA检测提高了膀胱移行细胞癌的早期诊断率.     

TSC1在膀胱尿路上皮癌中的表达及其临床意义

目的探讨TSC1在膀胱尿路上皮癌组织中的表达及其与膀胱尿路上皮癌早期诊断、临床病理及预后的关系。方法选取膀胱尿路上皮癌组织51例,正常膀胱组织5例。运用免疫组化方法检测TSC1在膀胱尿路上皮癌组织和正常膀胱组织中的表达情况。结果膀胱尿路上皮癌组织中TSC1的阴性表达率为58.8%。术后随访12～36个月,随访45例膀胱癌患者中复发19例,复发组TSC1阴性表达率为73.7%,未复发组为38.5%,差异有统计学意义(P0.05)。TSC1表达在肿瘤大小、性别及年龄方面差异无统计学意义(P0.05),与病理分级、临床分期有关(P0.05)。结论 TSC1表达与膀胱尿路上皮癌的临床分期、病理分级及是否复发密切相关,可用于膀胱尿路上皮癌的早期诊断、临床分期、病理分级及预后评估。     

脱落细胞癌基因检测及其对肺癌诊断的意义

目的 从分子生物学检测角度来寻求敏感的肺癌诊断方法。方法 应用多聚合酶链反应（PCR）及聚合酶链式反应－单链构型多态（PCR－SSCP）银染技术，检测56例肺癌和36例肺部良性疾病患者肺泡灌洗液和（或）胸水细胞的p53,16及K-ras基因的突变情况，检测结果与组织学，脱落细胞学诊断进行对比分析。结果 肺癌肺泡灌液和（或）胸水脱落细胞学敏感性为57％，阴性预计算（NPV）为60％；p53阳性表达的敏感性为68％，NPV为61％；p16阳性表达的敏感性为46％，NPV为52％；p21阳性表达的敏感性为36％，NPV为83％；p53,p16及K－ras阳性表达的敏感性为82％＜NPV为74％；p53,p16及K－ras和脱落细胞学联合检测：敏感性提高至93％（P＜0．05），NPC为87％（P＜0．05）。24例脱落细胞学假阴性标本中经分子生物学检测阳性16例（67％）。在56例肺癌中，其中有22例同时收取泡灌洗液细胞和胸水细胞，结果细胞病理学敏感性由57％提高到68％，细胞病理学阳性和分子生物学检测敏感性由93％提高到95％。结论 脱落细胞肿瘤基因的分子生物不检测可增加脱落细胞学检测的敏感性，补充和提高脱落细胞学的诊断价值。     

Telomerase activity in human bladder tumors and bladder washing specimens

Telomerase appears to be an important factor for the control of cellular proliferation and tumorigenesis. Enzyme activity dramatically increases in almost all human tumors. The purpose of our study was to evaluate the role of telomerase activity as a marker for bladder cancer diagnosis and follow-up. By using the PCR-ELISA based on the TRAP (telomerase repeat amplification protocol) method, telomerase activity of bladder tumors (n = 77), normal-appearing adjacent tissues (n = 21) and bladder washings (n = 37) were analyzed. Telomerase activity was detected in 87% (67/77) of cancer tissues and in 38% (8/21) of normal-appearing adjacent tissues. However, the levels of enzyme activity were significantly higher in cancer tissues than in normal-appearing adjacent tissues (p < 0.05). Telomerase activity in bladder cancer tissues was not correlated to the tumor stage or grade. During a 26 months follow-up period, disease progression occurred in 66.7% of patients with invasive tumors where telomerase activity of the normal-appearing adjacent tissue was detectable, as compared to only 14.3% for patients who showed undetectable telomerase activity in adjacent, normal-appearing tissues (p = 0.094). When telomerase activity of bladder washing fluid was compared with its corresponding tumors, sensitivity of detection was 81% and specificity was 75%. In contrast, urine cytology only yielded a sensitivity of 31% in the detection of cancer. The detection ability between telomerase activity measurement in washing fluid and cytological examination had a trend toward the telomerase measurement identifying more cancer cases than the cytologic examination (p = 0.07). In conclusion, telomerase activity is present in early-stage bladder cancer and is a potential molecular marker for bladder tumors diagnosis. The expression of telomerase activity in normal-appearing mucosa adjacent to bladder tumor is probably an indicator of disease progression. Using the telomerase activity to detect exfoliated cells in bladder washing fluids could be a useful method in adjunct to urine cytology and cystoscopy in establishing the diagnosis and follow-up of bladder cancer.     

应用液基细胞技术在肺癌细胞诊断中的意义

目的探讨对支气管镜毛刷标本进行液基薄层细胞学制片技术(LCT)在肺癌细胞诊断中的应用价值。方法收集252例肺癌患者的支气管镜刷检标本,同时进行LCT和直接涂片法检测,比较两种方法的涂片质量及诊断的阳性率。结果 LCT检测的标本切片质量高,LCT诊断肺癌的敏感度为58.33%。直接涂片法诊断肺癌的敏感度为33.19%。LCT的敏感度高于直接涂片法(P0.05)。结论 LCT液基薄层细胞学制片技术在支气管镜刷检细胞学标本制片质量及诊断准确性明显高于传统涂片方法,支气管镜刷检标本的LCT检测可推广应用于临床。     

膀胱移行细胞癌组织中Nodal的表达变化及意义

目的观察胚胎成形素Nodal在膀胱移行细胞癌（下称膀胱癌）组织中的表达情况,并探讨其临床意义。方法采用Westernblot及RT—PCR方法分别检测17例膀胱癌组织及6例膀胱正常组织中Nodal蛋白及mRNA。17例膀胱癌病理分级：I级5例、Ⅱ级7例、Ⅲ级5例;TNM分期：Ta期7例、T1期6例、T2～T4期4例。结果正常膀胱组织中没有检测到Nodal蛋白、mRNA的表达,17例肿瘤组织均存在Nodal蛋白及mRNA的阳性表达;且Nodal表达与肿瘤病理分级、临床分期有关,其分级、分期越高,Nodal表达亦越强,Ⅲ级〉II级（P〈0．05）〉I级（P〈0．01）,T2-T4期〉T1期〉Ta期（P均〈0．05）。结论膀胱癌组织中Nodal蛋白、mRNA呈高表达,其表达强弱与膀胱癌病理分级及临床分期有关。Nodal有望成为膀胱癌早期检测及治疗的重要靶点。     

Endosonographically controlled fine needle aspiration cytology--indications and results in routine diagnosis]

The usefulness and clinical utility of routine EUS-guided fine needle aspiration cytology (FNA) in the diagnosis of lesions adjacent to the upper gastrointestinal tract was prospectively studied. METHODS: EUS/FNA was performed in 122 patients for 125 lesions: Mediastinal lymph nodes (n = 56), pancreatic lesions (n = 45), paragastric masses (n = 12), submucosal tumors (n = 4) and small hepatic lesions (n = 2) were successfully punctured for cytological diagnosis. RESULTS: Adequate material was gained in 119 out of 125 punctures (95%). Overall sensitivity, specifity, positive and negative predictive value were 90%, 98%, 98% and 89%. Results of EUS/FNA in mediastinal lymph nodes were superior (95%, 100%, 100%, 90%) to those in pancreatic lesions (80%, 100%, 100%, 80%). In paragastric masses sensitivity was 100% whereas specifity was only 67%--due to one false-positive result. Out of four submucosal tumors diagnosis was revealed in three. Two liver metastasis were successfully punctured. 35 out of 56 mediastinal nodes showed malignancy. 27 metastases of lung-, three of gastric-, two of renal cancer and three Non-Hodgkins's lymphoma were diagnosed. The cytological results of 45 pancreatic lesions showed cancer in 19 and chronic inflammation in 21, two abscesses and three benign cysts. There were no complications. 37 patients were treated on outpatient's basis. CONCLUSIONS: EUS-guided FNA is an accurate and safe technique to sample cytology from lesions adjacent to the wall of the upper gastrointestinal tract. New indications may be established for the diagnosis of lung cancer or metastases of other spreading out into the mediastinum or the celiac axis.     

多种肿瘤标志物在胰腺癌临床分期中的应用

目的探讨多种肿瘤标志物检测对胰腺癌的临床分期及术前评估的应用。方法45例胰腺癌,其中Ⅰ-Ⅱ期16例、Ⅲ期11例、Ⅳ期18例,检测其术前CA199、CA125、CEA等肿瘤指标,分析多种肿瘤标志物在胰腺癌临床分期及术前评估中的意义。结果不同分期胰腺癌之间CA199水平差异无显著性（P=0．381）,CA125、CEA的水平随着分期的递增而升高,但统计分析显示只有CA125组间差异有统计学意义（P〈0．05）。按照是否可切除分为两组,CA199水平在两组间差异无统计学意义（Z=1．045,P=0．296）,而CA125、CEA水平在两组间存在显著性差异（P=0．000、0．045）。多因素分析结果显示,胰腺癌的不同分期与有无黄疸、胆道疾病史、性别、体重减轻等之间存在显著统计学差异（P〈0．05）,而与术前胆红素水平、血糖、糖尿病史、年龄等之间无统计学差异。结论CA125和CEA可辅助用于胰腺癌患者临床分期及术前评估,具有无创性、病人依从性好等优点,具有较好的临床潜在应用价值。     

腹部CT和EUS检查慢性胰腺炎患者表现特点及其诊断价值分析*

目的 探讨腹部CT和超声内镜（EUS）检查对不同临床分期的慢性胰腺炎（CP）患者的诊断价值。方法 2012年5月~2017年3月我院收治的78例CP患者,均行EUS、腹部CT和胰腺组织病理学检查。应用受试者工作特征（ROC）曲线分析腹部CT和EUS检查对CP临床分期的诊断价值。结果 经组织病理学检查,本组诊断1期CP患者28例,2期24例,3期26例;EUS对1期CP诊断的AUC为0.85（95%CI：0.75~0.92）,其敏感度为85.7%,特异性为84.0%,准确性为84.6%,而腹部CT诊断1期CP的AUC为0.72（95%CI：0.61~0.82）,其敏感度为60.7%,特异性为88.0%,准确性为78.2%;EUS诊断2期CP的AUC为0.81（95%CI：0.70~0.89）,其敏感度为79.2%,特异性为81.5%,准确度为80.8%,而CT诊断2期CP的AUC为0.73（95%CI：0.62~0.82）,其敏感度为62.5%,特异性为85.2%,准确度为78.2%;EUS诊断3期CP的AUC为0.75（95%CI：0.64~0.84）,其敏感度为84.6%,特异性为85.2%,准确度为85.0%,而CT诊断3期CP的AUC为0.69（95%CI：0.57~0.79）,其敏感度为69.2%,特异性为88.9%,准确度为82.5%。结论 EUS和腹部CT检查诊断CP患者具有较高的价值,但在1期CP患者,EUS的诊断效能可能优于腹部CT检查。     

膀胱移行细胞癌组织中NF-κB p65、uPA、Bcl-2的表达变化及其意义

目的观察膀胱移行细胞癌（下称膀胱癌）组织中NF—κBp65和尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）及Bcl-2的表达变化,并探讨其相关性。方法采用免疫组化SP法对40例膀胱癌组织和10例正常膀胱组织中NF—κBp65、uPA、Bcl-2进行测定,分析三者与膀胱癌分级、分期、侵袭转移及复发的关系及NF-κBp65表达与uPA、Bcl-2的相关性。结果NF-κBp65、uPA、Bcl-2在膀胱癌组织中的表达均明显高于正常膀胱组织（P〈0．05）;NF—κBp65和uPA与膀胱癌病理分级、分期、淋巴结转移有关（P均〈0．05）,Bcl-2与膀胱癌病理分级、分期有关（P〈0．05）,与淋巴结转移无关（P〉0．05）;膀胱癌组织中,NF—κBp65表达与uPA、Bcl-2表达呈正相关（r分别为0．388、0．462,P均〈0．05）。结论在膀胱癌组织中NF-κBp65、uPA、Bcl-2均呈高表达,并与膀胱癌的临床病理学特征有关;NF—κBp65可能通过调控uPA、Bcl-2的表达促进膀胱癌的进展;NF—κBp65、uPA、Bcl-2可以作为判断膀胱癌侵袭性、转移及预后的生物学标志物。     

膀胱尿路上皮癌组织中CDC25B、14-3-3σ蛋白的表达变化及意义

目的观察膀胱尿路上皮癌（下称膀胱癌）组织中CDC25B、14-3-3σ蛋白的表达变化,并探讨其意义。方法采用Western blot法检测90例膀胱癌（观察组）及20例正常膀胱黏膜（对照组）中的CDC25B、14-3-3σ蛋白。结果观察组CDC25B蛋白阳性率为54.4%、14-3-3σ蛋白阳性率为72.2%,对照组分别为30.0%、100.0%,两组比较,P均〈0.05。CDC25B、14-3-3σ蛋白表达与膀胱癌临床分期、病理分级有关（P均〈0.05）,CDC25B与14-3-3σ蛋白表达呈明显负相关（rs=-0.627,P〈0.05）。结论膀胱癌组织中CDC25B蛋白高表达、14-3-3σ蛋白低表达,二者在膀胱癌的发生发展中起重要作用。