牙胚组织中成釉蛋白表达免疫组织化学和原位杂交的特点

目的：观察人牙胚组织中成釉蛋白的表达特点。 方法：实验于2002—02／04在解放军第四军医大学口腔内科实验室完成。取孕5个月流产男性胎儿（产妇知情同意），截取上、下颌骨，常规方法制备人牙胚组织石蜡切片。用兔抗人AMBN多克隆抗体，对人牙胚组织石蜡切片和正常狗牙周组织石蜡切片进行免疫组织化学染色。标记人成釉蛋白cDNA探针，对人牙胚组织石蜡切片进行原位杂交。 结果：①免疫组织化学染色发现成釉蛋白由内釉上皮细胞在分化为成熟成釉细胞前开始表达，分泌期成釉细胞高度表达并持续整个釉质形成期，新形成的牙釉质染色阳性；成牙本质细胞在分泌牙本质基质之前开始表达成釉蛋白。在牙本质形成过程中成牙本质细胞持续表达成釉噩白，呈弱阳性，前期牙本质中呈弱阳性染色；上皮根鞘细胞染色阳性。狗牙周组织染色发现牙骨质表层细胞呈强阳性染色，新形成的牙骨质中可见阳性染色颗粒，呈网状分布。②对人牙胚组织石蜡切片的原位杂交显示，成釉蛋白在成釉细胞、成牙本质细胞、上皮根鞘细胞中有表达，表达部位与免疫组织化学结果一致。 结论：内釉上皮首先表达成釉蛋白，之后前成牙本质细胞达成釉蛋白。成釉细胞、成牙本质细胞、上皮根鞘细胞表达成釉蛋白。     

大鼠牙胚发育早期核心结合因子1表达的时空特异性

目的:探讨采用成骨细胞特异性转录因子核心结合因子1cDNA探针对大鼠不同时期牙胚进行原位杂交实验,以及其在牙胚发育过程中的表达。方法:实验于2003-05/08在北京军事医学科学院组织工程研究中心实验室完成。取SD孕期大鼠12只,利用核心结合因子1cDNA克隆产物,自行制备核心结合因子1cDNA探针,并对同笼后11d(蕾状期)、14d(帽状期)、17d(钟状早期)及出生后1d和9d(钟状晚期)4个时期的大鼠牙胚进行原位杂交实验,观察核心结合因子1在大鼠牙胚不同时期中的表达。结果:①大鼠牙胚蕾状期原位杂交可见明显阳性表达结果,其表达部位主要集中于牙胚及牙蕾顶部邻近的外胚间充质。②帽状期及钟状早期牙乳头、成牙本质细胞及成釉细胞均呈阳性表达。③钟状晚期表现于成牙本质细胞的表达明显下调,而成釉细胞呈阳性表达。结论:核心结合因子1在牙胚不同时期的表达有时空特异性,在大鼠牙胚发育早期即蕾状期的强阳性表达,表明核心结合因子1参与了牙胚的早期发育。     

大鼠牙胚发育早期核心结合因子1表达的时空特异性

目的：探讨采用成骨细胞特异性转录因子核心结合因子1 cDNA探针对大鼠不同时期牙胚进行原位杂交实验，以及其在牙胚发育过程中的表达。方法：实验于2003-05／08在北京军事医学科学院组织工程研究中心实验室完成。取SD孕期大鼠12只，利用核心结合因子1 cDNA克隆产物，自行制备核心结合因子1 cDNA探针，并对同笼后11d（蕾状期）、14d（帽状期）、17d（钟状早期）及出生后1d和9d（钟状晚期）4个时期的大鼠牙胚进行原位杂交实验，观察核心结合因子1在大鼠牙胚不同时期中的表达。结果：①大鼠牙胚蕾状期原位杂交可见明显阳性表达结果，其表达部位主要集中于牙胚及牙蕾顶部邻近的外胚间充质。②帽状期及钟状早期牙乳头、成牙本质细胞及成釉细胞均呈阳性表达。③钟状晚期表现于成牙本质细胞的表达明显下调，而成釉细胞呈阳性表达。结论：核心结合因子1在牙胚不同时期的表达有时空特异性，在大鼠牙胚发育早期即蕾状期的强阳性表达，表明核心结合因子1参与了牙胚的早期发育。     

猪牙乳头细胞与β-磷酸三钙支架构建牙髓牙本质复合体样结构

目的:牙乳头细胞是牙髓细胞、牙本质细胞的前体细胞,应用组织工程方法探讨以猪牙乳头细胞为种子细胞构建牙髓牙本质复合体的可行性. 方法:实验于2004-03/2005-11在上海市口腔医学重点实验室完成.以第1代猪牙乳头细胞为种子细胞与β-磷酸三钙为支架材料复合后接种在裸鼠皮下.移植在裸鼠皮下的β-磷酸三钙支架与牙乳头细胞复合物为实验组,同期移植牙胚作为阳性对照组,同期植入的空白β-磷酸三钙支架材料作阴性对照组.每组3个样本,在同一裸鼠皮下植入.8周后取材进行组织学(苏木精-伊红染色及Goldner'三色法染色)、牙本质涎蛋白免疫组织化学及透射电镜检测.结果:①移植物组织学切片显示在支架材料孔隙内形成了牙髓牙本质复合体样结构,由牙本质基质样物质、前期牙本质样物质及牙髓样组织组成.在牙本质样物质内部可见少量牙本质小管,牙髓样组织外层细胞较为密集且单层排列,表现出成牙本质细胞样细胞的特征.②免疫组织化学染色显示,在邻近成牙本质细胞样细胞周围的前期牙本质内牙本质涎蛋白呈阳性表达.③透射电镜结果显示,实验组局部可见牙本质小管样结构.结论:以猪牙乳头细胞为种子细胞、β-磷酸三钙为支架材料,成功构建出牙髓牙本质复合体样结构.     

基质金属蛋白酶-8(MMP-8)在人牙本质龋中的表达

目的观察基质金属蛋白酶-8(MMP-8在牙本质龋损中的表达,探讨MMP-8与龋病发展的关系,希望能为龋病的预防和治疗开辟新的思路。方法标本选自因龋未经治疗的第三磨牙,按临床及X线诊断分为牙本质浅龋、牙本质深龋各10颗,无龋坏第三磨牙10颗为对照组。采用免疫组织化学方法观察MMP-8在不同牙本质龋损中表达。结果正常组MMP-8在成牙本质细胞层略有着色;牙本质浅龋组成牙本质细胞增生活跃,前期牙本质增厚,染色阳性,牙髓细胞染色加深;牙本质深龋组成牙本质细胞呈阳性表达,牙本质基质中呈散在条索性表达,牙髓组织中成纤维细胞、血管内皮细胞强阳性表达,在修复性牙本质中MMP-8表达强阳性。结论 MMP-8参与龋病的进展过程。     

牙胚细胞体外培养过程中成牙基因的表达

背景：多项实验表明牙胚组织在不同的时间点有不同的基因发挥作用,共同促进牙胚发育。 目的：观察牙本质基质蛋白1、成釉蛋白、Ⅰ型胶原蛋白和同源异型盒基因1在大鼠牙胚细胞体外培养的不同时间的表达。 方法：对体外培养后第1,3,6天的牙胚细胞提取RNA,反转录后采用实时定量PCR的方法检测牙本质基质蛋白1、成釉蛋白、Ⅰ型胶原蛋白和同源异型盒基因1mRNA相对表达水平的变化。 结果与结论：牙胚细胞中牙本质基质蛋白1、成釉蛋白和Ⅰ型胶原蛋白mRNA的表达随培养时间的延长而增加,在培养3 d时达到峰值（P 〈 0.05）,而同源异型盒基因1 mRNA的表达随培养时间的延长而下降（P 〈 0.05）。     

猪牙乳头细胞与β-磷酸三钙支架构建牙髓牙本质复合体样结构

目的：牙乳头细胞是牙髓细胞、牙本质细胞的前体细胞，应用组织工程方法探讨以猪牙乳头细胞为种子细胞构建牙髓牙本质复合体的可行性。方法：实验于2004-03／2005-11在上海市口腔医学重点实验室完成。以第1代猪牙乳头细胞为种子细胞与β-磷酸三钙为支架材料复合后接种在裸鼠皮下。移植在裸鼠皮下的β-磷酸三钙支架与牙乳头细胞复合物为实验组，同期移植牙胚作为阳性对照组，同期植入的空白β-磷酸三钙支架材料作阴性对照组。每组3个样本，在同一裸鼠皮下植入。8周后取材进行组织学（苏木精-伊红染色及Goldner＇色法染色）、牙本质涎蛋白免疫组织化学及透射电镜检测。结果：①移植物组织学切片显示在支架材料孔隙内形成了牙髓牙本质复合体样结构，由牙本质基质样物质、前期牙本质样物质及牙髓样组织组成。在牙本质样物质内部可见少量牙本质小管，牙髓样组织外层细胞较为密集且单层排列，表现出成牙本质细胞样细胞的特征。②免疫组织化学染色显示，在邻近成牙本质细胞样细胞周围的前期牙本质内牙本质涎蛋白呈阳性表达。③透射电镜结果显示，实验组局部可见牙本质小管样结构。结论：以猪牙乳头细胞为种子细胞、β-磷酸三钙为支架材料，成功构建出牙髓牙本质复合体样结构。     

人成釉蛋白抗体的制备及组织表达特异性

目的:制备抗人成釉蛋白抗体,观察成釉蛋白在各组织中的表达。方法:实验于2002-03在解放军第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室完成。以重组、纯化的成釉蛋白C端肽为抗原,混入完全/不完全弗氏佐剂,免疫新西兰大白兔,经5次免疫后,颈动脉取血,分离血清并用饱和硫酸铵纯化,制备兔抗人成釉蛋白多克隆抗体,用双向免疫扩散试验和ELISA检测抗体的效价。用WesternBlot检测人成釉蛋白的组织表达特异性。结果:①ELISA检测结果:表明兔抗人成釉蛋白多克隆抗体效价达到1∶10000。②WesternBlot显示:成釉蛋白在人牙胚组织总蛋白中有特异性表达,相对分子质量约为65000,在脑、心、肝、脾、肺、肾、胰腺、胸腺、骨骼肌等组织中未见表达条带。结论:制备了抗人成釉蛋白抗体,为研究成釉蛋白在人牙胚中的组织表达以及利用抗体纯化蛋白提供了基础,从蛋白水平证实成釉蛋白为牙胚组织特异性蛋白,并证实人牙胚组织中的成釉蛋白相对分子质量约为65000。     

鞘脂激活蛋白原在mdx小鼠发病早期心肌的表达

目的 检测鞘脂激活蛋白原(prosaposin)mRNA和蛋白在mdx小鼠发病早期心肌内的表达情况.方法 取3～4周mdx鼠和C57BL/6J对照鼠心肌组织,4%多聚甲醛固定,石蜡切片,HE染色检测形态学改变,免疫组织化学染色检测prosaposin蛋白表达.新鲜取材做冰冻切片,原位杂交检测prosaposin mRNA表达情况并进行统计学分析.结果 mdx鼠心肌细胞在形态上无明显改变,原位杂交结果显示prosaposin mRNA在C57BL/6J对照鼠心肌主要以Ps+0形式存在,且在mdx鼠心肌组织表达明显减少(P<0.01),免疫组织化学结果亦提示prosaposin在mdx鼠心肌组织表达量减少.结论 在mdx小鼠发病早期,pmsaposin mRNA和蛋白在心肌表达量减少.     

Smoothened蛋白及mRNA在子宫颈鳞状细胞癌组织中的表达及意义

目的探讨Smoothened(Smo)蛋白及mRNA在子宫颈鳞状细胞癌组织中的表达及意义。方法应用免疫组织化学方法及原位杂交法检测70例子宫颈鳞状细胞癌组织、48例子宫颈上皮内瘤变(CIN)组织及65例正常子宫颈黏膜组织中Smo蛋白及mRNA的表达水平,分析Smo基因与子宫颈鳞状细胞癌病理特征的联系。结果 Smo蛋白及mRNA在正常宫颈黏膜组织中呈阴性或弱阳性表达,在CIN和子宫颈鳞状细胞癌组织中呈强阳性,其表达率显著高于正常宫颈黏膜组织(P<0. 05); Smo蛋白的阳性表达率与子宫颈鳞状细胞癌浸润深度、病理学分级、有无淋巴结转移呈正相关(P<0. 05)。结论子宫颈鳞状细胞癌的发生、发展及浸润转移或与Smo蛋白阳性表达率升高有关,有望成为宫颈癌生物治疗的新靶点。     

2006年湖南省霍乱监测结果分析

目的 监测人群中霍乱病例和被霍乱弧菌污染的水体及食物,以便尽早采取预防控制措施,防止疫情扩散.方法 全省范围开展腹泻患者及外环境、食品监测,选择重点地区开展甲鱼霍乱弧菌污染状况专项监测.结果 2006年湖南省共登记腹泻患者111 526例,检测霍乱弧菌89 661例,检测率为80.39%,检出阳性4例,均为0139群霍乱弧菌感染;检测环境和食品样44 533份,其中水体35 113份,全部为阴性,水产品5377份,阳性16份,阳性率为0.30%,阳性标本为甲鱼和牛蛙,其他食品4043份,均为阴性;甲鱼专项监测2323份,检出阳性33份,阳性率为1.42%;霍乱毒素基因检测34株菌,20株为产毒株,占58.80%;药敏试验28株菌,均对诺氟沙星、环丙沙星、丁胺卡那霉素100%敏感,对强力霉素、复方新诺明的敏感率为92.86%.结论 甲鱼、牛蛙等水产品是湖南省发生霍乱的主要因素,应加强水产品的监测和卫生管理.     

新生儿抚触技术在产科中的应用体会

目的探讨新生儿抚触促进新生儿生长发育、融洽护患关系、提高产妇满意度的临床价值。方法选择2008年1月至2008年8月在我科住院正常分娩和剖宫产的健康儿200例,随机分为对照组100例,抚触组100例,观察新生几吃奶量、睡眠时间、排便时间和产妇满意度。结果抚触组新生儿吃奶量、睡眠时间、排便时间及产妇满意度均优于对照组。结论新生儿抚触既能促进新生儿生长发育,又能融洽护患关系,提高产妇满意度。是一种值得推广的简单易行效果好的新型护理技术。     

流程管理在见习期护士护理培训管理中的应用研究

目的 探讨流程管理应用于护士见习期护理培训管理与现代护理继续教育管理的适应关系.方法 采用自行制定的各项护理培训管理流程及考核量化表对2006年及2007年的各50名见习期护士分别从护理部考核、科护士长考核、护士长考核、责任带教护师评价、患者评价、转正率角度按照职业道德、操作能力、服务质量、绩效考核、适应能力等5项指标进行2次测评.结果 评价者对见习期护士的2次测评评分比较,差异明显.结论 流程管理在见习期护士护理培训管理中的实施有利于临床护理管理规范化、程序化、科学化,是适应新医疗环境下对见习期护士较好的护理培训管理方式.     

流程管理在见习期护士护理培训管理中的应用研究

目的 探讨流程管理应用于护士见习期护理培训管理与现代护理继续教育管理的适应关系.方法 采用自行制定的各项护理培训管理流程及考核量化表对2006年及2007年的各50名见习期护士分别从护理部考核、科护士长考核、护士长考核、责任带教护师评价、患者评价、转正率角度按照职业道德、操作能力、服务质量、绩效考核、适应能力等5项指标进行2次测评.结果 评价者对见习期护士的2次测评评分比较,差异明显.结论 流程管理在见习期护士护理培训管理中的实施有利于临床护理管理规范化、程序化、科学化,是适应新医疗环境下对见习期护士较好的护理培训管理方式.     

流程管理在见习期护士护理培训管理中的应用研究

目的 探讨流程管理应用于护士见习期护理培训管理与现代护理继续教育管理的适应关系.方法 采用自行制定的各项护理培训管理流程及考核量化表对2006年及2007年的各50名见习期护士分别从护理部考核、科护士长考核、护士长考核、责任带教护师评价、患者评价、转正率角度按照职业道德、操作能力、服务质量、绩效考核、适应能力等5项指标进行2次测评.结果 评价者对见习期护士的2次测评评分比较,差异明显.结论 流程管理在见习期护士护理培训管理中的实施有利于临床护理管理规范化、程序化、科学化,是适应新医疗环境下对见习期护士较好的护理培训管理方式.     

流程管理在见习期护士护理培训管理中的应用研究

目的 探讨流程管理应用于护士见习期护理培训管理与现代护理继续教育管理的适应关系.方法 采用自行制定的各项护理培训管理流程及考核量化表对2006年及2007年的各50名见习期护士分别从护理部考核、科护士长考核、护士长考核、责任带教护师评价、患者评价、转正率角度按照职业道德、操作能力、服务质量、绩效考核、适应能力等5项指标进行2次测评.结果 评价者对见习期护士的2次测评评分比较,差异明显.结论 流程管理在见习期护士护理培训管理中的实施有利于临床护理管理规范化、程序化、科学化,是适应新医疗环境下对见习期护士较好的护理培训管理方式.     

流程管理在见习期护士护理培训管理中的应用研究

目的 探讨流程管理应用于护士见习期护理培训管理与现代护理继续教育管理的适应关系.方法 采用自行制定的各项护理培训管理流程及考核量化表对2006年及2007年的各50名见习期护士分别从护理部考核、科护士长考核、护士长考核、责任带教护师评价、患者评价、转正率角度按照职业道德、操作能力、服务质量、绩效考核、适应能力等5项指标进行2次测评.结果 评价者对见习期护士的2次测评评分比较,差异明显.结论 流程管理在见习期护士护理培训管理中的实施有利于临床护理管理规范化、程序化、科学化,是适应新医疗环境下对见习期护士较好的护理培训管理方式.     

流程管理在见习期护士护理培训管理中的应用研究

目的 探讨流程管理应用于护士见习期护理培训管理与现代护理继续教育管理的适应关系.方法 采用自行制定的各项护理培训管理流程及考核量化表对2006年及2007年的各50名见习期护士分别从护理部考核、科护士长考核、护士长考核、责任带教护师评价、患者评价、转正率角度按照职业道德、操作能力、服务质量、绩效考核、适应能力等5项指标进行2次测评.结果 评价者对见习期护士的2次测评评分比较,差异明显.结论 流程管理在见习期护士护理培训管理中的实施有利于临床护理管理规范化、程序化、科学化,是适应新医疗环境下对见习期护士较好的护理培训管理方式.     

流程管理在见习期护士护理培训管理中的应用研究

目的 探讨流程管理应用于护士见习期护理培训管理与现代护理继续教育管理的适应关系.方法 采用自行制定的各项护理培训管理流程及考核量化表对2006年及2007年的各50名见习期护士分别从护理部考核、科护士长考核、护士长考核、责任带教护师评价、患者评价、转正率角度按照职业道德、操作能力、服务质量、绩效考核、适应能力等5项指标进行2次测评.结果 评价者对见习期护士的2次测评评分比较,差异明显.结论 流程管理在见习期护士护理培训管理中的实施有利于临床护理管理规范化、程序化、科学化,是适应新医疗环境下对见习期护士较好的护理培训管理方式.