miR-497与肾癌预后的关系及其对肾癌786-0细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的:探讨微小RNA-497(miR-497)与肾癌预后的关系及其对肾癌786-0细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法:收集2011年~2015年80例肾细胞癌患者手术切除的癌组织和癌旁组织并回顾性分析患者随访资料。采用实时定量PCR法检测癌组织及配对的癌旁组织中miR-497的表达。在肾癌细胞系786-0中转染miR-497模拟物,应用MTT法、台盼兰拒染法活细胞计数、流式细胞术和Transwell小室实验检测miR-497对786-0细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响。通过生物信息学预测miR-497在786-0细胞中作用的靶基因。Western blotting法检测miR-497对靶基因蛋白表达影响。结果:肾癌组织中miR-497的表达量明显低于癌旁组织(P0.05)。786-0中miR-497表达量明显低于正常肾上皮细胞中miR-497表达量(P0.05)。随访时间2~48个月,中位随访时间29个月,失访6例,随访率92.5%。76例患者3年无复发生存率(recurrence-free survival,RFS)为55.2%。高miR-497表达组和低miR-497表达组肾癌患者的RFS分别为71.2%和40.1%,差异有统计学显著性(P0.05)。过表达miR-497可显著抑制786-0细胞的增殖和侵袭能力,显著促进细胞凋亡(P0.05)。过表达miR-497可显著抑制786-0细胞中cyclin D1蛋白的表达(P0.05)。结论:miR-497与肾癌预后相关,miR-497能明显抑制肾癌786-0细胞的增殖和凋亡,其机制可能与其靶向抑制cyclin D1有关。     

miR-125a-5p通过GSK-3β/Snail信号通路抑制乳腺癌细胞的上皮-间充质转化

目的:探讨微小RNA-125a-5p(miR-125a-5p)通过GSK-3β/Snail信号通路对乳腺癌细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法:RT-qPCR检测人正常乳腺上皮细胞与乳腺癌细胞中miR-125a-5p的表达量,同时检测miR-125a-5p质粒在人乳腺癌MDA-MB-231细胞中的转染效率;趋化运动实验与Transwell侵袭实验检测趋化运动能力和侵袭能力;Western blot检测EMT相关标志物的变化,同时检测磷酸化糖原合成酶激酶3β(p-GSK-3β)的蛋白水平及Snail的转核情况。结果:乳腺癌细胞中miR-125a-5p的表达量明显低于人正常乳腺上皮细胞(P0.05);miR-125a-5p在转染miR-125a-5p质粒的MDA-MB-231细胞中表达水平明显增高;MDA-MB-231细胞的趋化运动能力在表皮生长因子(EGF)浓度为10μg/L时最强;在EGF刺激下,与MDA-MB-231/NC细胞组相比,MDAMB-231/miR-125a-5p细胞组的侵袭能力明显降低,上皮钙黏着蛋白(E-cadherin)表达量升高,波形蛋白(vimentin)和p-GSK-3β的蛋白水平明显降低,同时Snail转核受到明显抑制;与MDA-MB-231/miR-125a-5p+Con细胞组相比,MDA-MB-231/miR-125a-5p+GAB2细胞组的侵袭能力明显增强,E-cadherin表达量降低,vimentin和p-GSK-3β的蛋白水平明显升高,同时促进Snail转核。结论:miR-125a-5p可通过GSK-3β/Snail信号通路抑制乳腺癌细胞的EMT,进而抑制乳腺癌细胞的侵袭能力。     

荷瘤小鼠卵巢癌细胞miRNA和髓源性抑制细胞的检测及相关性分析

目的检测卵巢癌荷瘤小鼠癌组织miR-21-5p、miR-155-5p、miR-218-5p、miR-222-3p、miR-494-3p的水平和外周血和脾脏中髓源性抑制细胞(MDSC)的数量,并分析它们的相关性。方法 12例卵巢癌荷瘤小鼠的癌组织和癌旁组织,实时荧光定量PCR检测癌组织和癌旁组织中miR-21a-5p、miR-155a-5p、miR-218-5p、miR-222-3p、miR-494-3p的水平,流式细胞术检测上述荷瘤小鼠中外周血和脾脏中MDSC的表达。采用Spearman法分析MDSC和microRNA的相关性。结果与正常小鼠相比,荷瘤小鼠外周血和脾脏中的MDSC明显增加。miR-21a-5p、miR-218-5p和miR-222-3p在癌组织中含量高于癌旁组织,相反miR-155a-5p和miR-494-3p在癌组织中的表达低于癌旁组织。miR-222-3p与MDSC的数量无相关性,miR-494-3p的水平与MDSC的数量负相关,miR-21a-5p、miR-155a-5p、miR-218-5p在癌组织与癌旁组织的表达差值与MDSC的数量呈正相关。结论卵巢癌荷瘤小鼠癌组织中miR-21a-5p、miR-155a-5p、miR-218-5p、miR-494-3p水平和外周血及脾脏中MDSC的数量有一定的相关性。     

miR-125a-5p靶向LIMK1逆转非小细胞肺癌A549/DDP细胞对顺铂的耐药性

目的:探讨微小RNA-125a-5p(miR-125a-5p)对非小细胞肺癌A549/DDP细胞对顺铂耐药性的影响及其作用机制。方法:RT-qPCR检测非小细胞肺癌组织及其细胞株A549和A549/DDP中miR-125a-5p和LIM激酶1(LIMK1)的表达;在A549/DDP细胞中上调或下调miR-125a-5p或LIMK1表达,分别采用MTT法、流式细胞术和Western blot检测细胞活力、凋亡率及耐药相关蛋白表达;TargetScan在线预测、萤光素酶报告基因实验验证miR-125a-5p和LIMK1的靶向关系;共表达miR-125a-5p和LIMK1,检测细胞活力、凋亡率及耐药相关蛋白表达。结果:在非小细胞肺癌组织及其细胞株中,miR-125a-5p表达下调,LIMK1表达上调(P0.05);萤光素酶报告基因实验表明miR-125a-5p可负向调控LIMK1表达。过表达miR-125a-5p或敲减LIMK1表达使A549/DDP细胞的活力下降,细胞凋亡率增加,顺铂的IC_(50)减小,耐药相关蛋白表达下调(P0.05)。过表达LIMK1则使miR-125a-5p对A549/DDP细胞活力和耐药相关蛋白表达的抑制作用减弱。结论:miR-125a-5p能通过抑制LIMK1基因表达,下调耐药相关蛋白表达,从而逆转A549/DDP细胞对顺铂的耐药性。     

miR-7-5p、ABCC1在子宫内膜癌组织中的表达及对Ishikawa细胞增殖、EMT的影响

目的 探讨微小RNA-7-5p(miR-7-5p)、ATP结合盒亚家族C成员1(ABCC1)在子宫内膜癌（EC）组织表达及其对EC细胞（Ishikawa）增殖及上皮间质转化（EMT）的影响。方法 选取2018年6月至2021年12月期间在保定市妇幼保健院进行手术治疗的120例EC患者作为观察对象，手术取癌组织及癌旁组织，检测EC组织与癌旁组织miR-7-5p、ABCC1 mRNA及蛋白表达水平，分析miR-7-5p、ABCC1与EC临床病理特征的关系。将Ishikawa细胞随机分为Control组、miR-NC组、miR-7-5p mimics组、si-NC组，si-ABCC1组、miR-7-5p mimics+pcDNA组、miR-7-5p mimics+ABCC1组，RT-qPCR检测各组细胞miR-7-5p、ABCC1mRNA表达水平，MTT法与流式细胞仪分别检测细胞增殖与凋亡，Western blot检测ABCC1、E-cadherin、α-catenin、Vimentin蛋白表达，双荧光素酶报告实验验证miR-7-5p与ABCC1的靶向关系。结果 与癌旁组织比较，EC组织中m...     

miR-30a-5p启动子区DNA甲基化在同型半胱氨酸致肝损伤中的作用

目的:探讨微小RNA-30a-5p(miR-30a-5p)启动子区DNA甲基化在肝损伤中的作用。方法:随机选取4周龄胱硫醚β-合成酶(CBS)基因正常(CBS+/+)小鼠(n=12)及单基因敲除(CBS+/-)小鼠(n=12),均给予高蛋氨酸饮食8周。HL-7702细胞体外常规培养,分为对照(control)组、同型半胱氨酸(Hcy)组和Hcy+5-氮杂胞苷(AZC)组。全自动生化分析仪检测小鼠血清Hcy、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;微板法测定肝细胞ALT和AST水平;小鼠肝脏石蜡切片行HE染色观察肝脏损伤情况;细胞活力染色检测肝细胞活力;RT-qPCR法检测小鼠肝脏组织和肝细胞中miR-30a-5p的表达;Pearson相关性分析肝脏miR-30a-5p表达与血清ALT和AST水平的相关性;巢式降落式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)检测小鼠肝脏组织以及肝细胞中miR-30a-5p启动子区DNA甲基化水平的变化。结果:与CBS+/+对照组相比,CBS+/-组小鼠血清的Hcy、ALT和AST水平显著升高(P<0.05);HE染色显示肝细胞肿胀,可见核碎裂、溶解;肝脏miR-30a-5p表达明显降低(P<0.01);小鼠肝脏组织中miR-30a-5p的表达与血清ALT和AST的水平呈负相关(r2=0.4557,P=0.0003;r2=0.4626,P=0.0003);miR-30a-5p启动子区DNA的甲基化水平升高(P<0.01)。在细胞水平,与control组相比,Hcy组的ALT和AST水平升高(P<0.05,P<0.01),细胞活力显著降低,肝细胞miR-30a-5p启动子区DNA的甲基化水平升高(P<0.01),而使用AZC后miR-30a-5p启动子区DNA的甲基化水平降低(P<0.05),miR-30a-5p的表达上调(P<0.05)。结论:miR-30a-5p启动子区DNA高甲基化可能在肝损伤中发挥重要作用。     

miR-27a-3p靶向HOXA5基因通过Wnt/β-catenin信号通路调控糖尿病患者创面愈合

目的:研究微小RNA-27a-3p(miR-27a-3p)对糖尿病患者创面愈合的影响及作用机制。方法:采用qPCR和Western blot检测糖尿病患者创面愈合组织中miR-27a-3p、同源异型盒基因A5(HOXA5)mRNA和HOXA5蛋白的表达。使用高糖处理人微血管内皮细胞(HMECs),模拟糖尿病HMECs的损伤。在HMECs中转染miR-27a-3p mimic或HOXA5 siRNA,并进行高糖处理,MTT法测定细胞活力,Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot法测定HOXA5、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)和β-连环蛋白(β-catenin)蛋白的表达。StarBase预测结合双萤光素酶活性检测分析miR-27a-3p和HOXA5的靶向关系。在HMECs中共转染miR-27a-3p mimic和pcDNA-HOXA5,并使用高糖处理,观察其对细胞活力、迁移和侵袭能力的影响。结果:糖尿病患者创面愈合组织中miR-27a-3p的表达量明显减少,HOXA5的mRNA和蛋白表达量显著增加(P<0.05)。高糖诱导的HMECs中miR-27a-3p的表达量、细胞活力、细胞迁移和侵袭数量及cyclin D1、MMP2和MMP9的蛋白水平均显著降低(P<0.05)。高表达miR-27a-3p或低表达HOXA5明显增加高糖处理HMECs的细胞活力、迁移和侵袭能力及cyclin D1、MMP2和MMP9的蛋白表达量(P<0.05)。miR-27a-3p靶向调控HOXA5表达。高表达HOXA5可以部分消除miR-27a-3p mimic对高糖处理的HMECs活力、迁移和侵袭能力以及cyclin D1、MMP2、MMP9和β-catenin蛋白表达的影响。结论:miR-27a-3p靶向HOXA5基因,并通过Wnt/β-catenin信号通路促进高糖诱导的微血管内皮细胞生长、迁移和侵袭,从而促进糖尿病患者的创面愈合。     

用双萤光素酶报告基因技术验证小鼠lncRNA-H19与miR-199a-5p的靶向关系

目的:构建长链非编码RNA-H19(lncRNA-H19)萤光素酶报告质粒,利用双萤光素酶报告基因技术验证小鼠lncRNA-H19与微小RNA-199a-5p(miR-199a-5p)的靶向关系。方法:通过生物信息学网站RegRNA2.0预测获取小鼠lncRNA-H19与miR-199a-5p潜在的互补结合位点。将H19及其突变体克隆到萤光素酶载体psi CHECK-2中,构建H19野生型和突变型质粒,并采用酶切和测序方法鉴定psi CHECK-2-H19载体是否构建成功。将H19野生型和突变型质粒分别与miR-199a-5p模拟物、miR-199a-5p抑制剂、miR-199a-5p模拟物阴性对照或miR-199a-5p抑制剂阴性对照在293T细胞中共转染。收集细胞后通过双萤光素酶报告系统检测不同组别的萤光素酶活性,从而对lncRNA-H19与miR-199a-5p的靶向调节关系进行验证。结果:构建的重组萤光素酶报告质粒经酶切及测序鉴定正确,双萤光素酶报告基因检测显示,与miR-199a-5p模拟物阴性对照组相比,miR-199a-5p模拟物组H19野生型报告基因的萤光素酶活性显著降低,下降约49%左右(P0.01),而miR-199a-5p抑制剂组H19野生型报告基因的萤光素酶活性较miR-199a-5p模拟物组明显增高(P0.01)。miR-199a-5p模拟物、miR-199a-5p抑制剂、miR-199a-5p模拟物阴性对照以及miR-199a-5p抑制剂阴性对照对H19突变型的萤光素酶活性均无明显影响。结论:lncRNA-H19能够靶向结合miR-199a-5p,并在转录后水平对其有直接抑制作用。     

miR-216a-5p通过JAK2靶向抑制肝癌细胞的增殖和侵袭

目的明确miR-216a-5p在调控肝细胞癌(HCC)中的生物学作用及其可能机制。方法通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)方法检测92例HCC患者的肿瘤组织及对应癌旁组织中miR-216a-5p的表达情况。并采用CCK8和Transwell试验检测miR-216a-5p对HCC细胞增殖和侵袭能力的影响。采用荧光素酶、蛋白质印迹和qRT-PCR检测肝细胞癌中miR-216a-5p的表达与JAK2表达的相关性。结果发现miR-216a-5p在HCC中的表达显著降低,并与多种临床病理特征(肿瘤多样性、组织学分化、巴塞罗那分期)相关。低表达miR-216a-5p的HCC患者预后不良。双荧光素报告系统分析证实JAK2是miR-216a-5p的直接下游靶基因。并且过表达JAK2抵消了miR-216a-5p对HCC细胞增殖、迁移和侵袭的抑制能力。结论 miR-216a-5p可能是一种新的潜在的肝癌治疗靶点。     

miR-26a-5p调控MCL-1在孕产妇子痫前期中表达的临床意义

目的:探讨microRNA-26a-5p(miR-26a-5p)调控髓细胞白血病因子1(myeloid cell leukemia-1,MCL-1)表达在孕产妇子痫前期发生发展中的临床意义。方法:收集正常妊娠21例、妊娠期高血压孕产妇13例、轻度子痫前期15例和重度子痫前期26例共4组孕产妇血浆及胎盘组织,用real-time PCR分析其血浆及胎盘组织中miR-26a-5p及胎盘组织中MCL-1 mRNA的表达,Western blotting分析胎盘组织中MCL-1蛋白的表达,并分析其表达的临床意义。结果:随着病情进展,miR-26a-5p在孕产妇血浆和胎盘中表达逐步增高(P0.01),而其胎盘组织中MCL-1 mRNA的表达明显降低(P0.01),二者呈明显负相关(P0.01);胎盘组织中miR-26a-5p与MCL-1蛋白表达呈明显负相关(P0.01)。孕产妇血浆及胎盘组织中miR-26a-5p表达上调与孕龄、孕妇血浆白蛋白水平及胎儿体重呈明显负相关,而与孕产妇血压和尿蛋白水平呈明显正相关(P0.01),胎盘组织中MCL-1表达下调与此相反。结论:miR-26a-5p高表达通过下调MCL-1的表达参与子痫前期的发生与发展。     

MiR-515-5p通过调控硫酸软骨素蛋白聚糖4表达对卵巢癌A2780细胞增殖和转移的影响及其机制

目的 探讨miR-515-5p对硫酸软骨素蛋白聚糖4(CSPG4)的靶向调控作用,以及对卵巢癌细胞系A2780细胞增殖和转移的影响.方法 通过生物信息学工具预测miR-515-5p的靶基因.Real-time PCR和Western blotting法检测65例卵巢癌组织和与其对应的癌旁组织中miR-515-5p和CS...     

miR-301a-3p对大鼠星形胶质细胞Cx43转录后的靶向调控作用

目的:研究大鼠星形胶质细胞中微小RNA-301a-3p(miR-301a-3p)对缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的靶向调控作用及其作用位点。方法:合成miR-301a-3p agomir和miR-301a-3p antagomir,转染至星形胶质细胞,Western blot检测各组细胞中Cx43蛋白的表达情况;构建重组载体wt-pEZX-MT05-Cx43和mut-pEZX-MT05-Cx43,采用双萤光素酶报告基因实验验证miR-301a-3p的靶基因;构建表达载体pcDNA3.1-Cx43,通过回复实验分析miR-301a-3p对细胞凋亡的影响。结果:将miR-301a-3p agomir转染到星形胶质细胞后,Western blot检测显示,与对照组相比,Cx43蛋白表达显著降低(P<0.05)。双萤光素酶报告基因实验结果表明,miR-301a-3p能够与Cx43的3′-UTR结合,对其表达产生负调控;将不含Cx43 3′-UTR的重组载体pcDNA3.1-Cx43转染星形胶质细胞后,能够回复miR-301a-3p对Cx43蛋白表达的负调控作用,引起细胞凋亡。结论:Cx43是miR-301a-3p的一个靶基因,miR-301a-3p通过作用于Cx43 mRNA的3′-UTR而抑制其在大鼠星形胶质细胞中的表达。     

Serum miR-125a-5p,miR-145 and miR-146a as diagnostic biomarkers in non-small cell lung cancer

Background: Lung cancer is becoming the leading cause of cancer-related deaths with high mortality worldwide and in China as well. Non-small-cell lung cancer (NSCLC) is the most common type of lung cancer accounting for approximately 85% of all cases. Over 70% of cases are at loco-regionally advanced stages or have distant metastasis at the time of presentation with subsequently poor prognosis. MiRNAs are stable molecules in blood and used as biomarkers for the early diagnosis of various malignancy. The purpose of this study was to evaluate whether circulating miR-125a-5p, miR-145 and miR-146a could be used as biomarkers for the diagnosis of NSCLC through measuring their expression and assess their relationship with clinical pathological factors. Methods: Expression levels of serum miR-125a-5p, miR-145 and miR-146a were detected in 70 pairs of NSCLC patients and healthy controls using quantitative real-time PCR analysis. Results: Serum miR-125a-5p, miR-145 and miR-146a were overexpressed in NSCLC patients compared with healthy controls. Their values of the area under the receiver –operating characteristic curve (AUC-ROC) were 0.71, 0.84 and 0.78. Optimal sensitivity and specificity were 73.53% and 55.71%, 92.75% and 61.43%, 84.06% and 58.57%, respectively in differentiating NSCLC patients from healthy controls. Conclusions: These preliminary data suggest that serum miR-125a-5p, miR-145 and miR-146a may be useful noninvasive biomarkers for the clinical diagnosis of NSCLC.     

miR-144、miR-451在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的探究胃癌患者组织中miR-144、miR-451的表达与临床病理参数及预后的关系。方法2013年6月至2014年6月,收集115例胃癌患者的癌组织及癌旁正常组织,采用实时定量PCR检测组织中miR-144、miR-451的表达水平;分析胃癌组织中miR-144、miR-451的表达与患者临床病理参数的关系,采用Kaplan-Meier生存曲线评估miR-144、miR-451的表达与患者预后的关系,并采用Cox回归模型分析胃癌患者预后的影响因素。结果胃癌组织中miR-144相对表达量为0.214±0.069,低于癌旁正常组织的1.124±0.157,miR-451相对表达量为0.354±0.087,低于癌旁正常组织的1.084±0.108,差异均有统计学意义(均P<0.05);miR-144、miR-451的表达均与肿瘤大小、淋巴结转移、远处转移及TNM分期有关(均P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果表明,与miR-144高表达组、miR-451高表达组相比,miR-144低表达组、miR-451低表达组患者术后5年总生存率较低,术后中位生存时间较短(均P<0.05)。Cox回归模型发现,远处转移、较高TNM分期、miR-144低表达、miR-451低表达是影响胃癌患者预后的危险因素(均P<0.05)。结论胃癌组织中miR-144、miR-451呈低表达,其与患者病情进展和预后有关,检测胃癌组织中miR-144、miR-451的表达可能有利于患者的病情和预后判断。