hTR反义寡核苷酸诱导鼻咽癌细胞凋亡的研究

目的：探讨人端粒酶反义寡核苷酸对鼻咽癌细胞凋亡的作用。方法：脂质体介导反义寡核苷酸转染鼻咽癌ＨＮＥ１细胞株,采用吖啶橙荧光染色计数,透射电镜观察ＨＮＥ１细胞凋亡改变。结果：反义寡核苷酸转染ＨＮＥ１细胞４８小时后,ＨＮＥ１细胞形态出现改变,细胞娄减少。吖啶橙荧光染色计数及透射电镜分别发现,反义寡核苷酸组较对照组有更多的调亡细胞及更高的调亡指数。结论：针对端粒酶ＲＮＡ的反义寡核苷酸能有效地通过抑制端粒     

Nd-YAG激光汽化结合光动力学治疗对鼻咽癌患者SIL-2R、IL-2水平及NK活性的影响

应用双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法、３Ｈ－ＴｄＲ掺入法和１２５Ｉ－ＵｄＲ释放法对２４例鼻咽癌（ＮＰＣ）患者ＹＡＧ激光汽化结合光动力学治疗前后外周血可溶性ＩＬ－２受体（ＳＩＬ－２Ｒ）、白细胞介素２（ＩＬ－２）水平和自然杀伤细胞（ＮＫ）活性分别进行测定。结果表明鼻咽癌患者在接受激光光动力学治疗后ＳＩＬ－２Ｒ水平呈明显下降（Ｐ＜０．０００５），而ＩＬ－２水平和ＮＫ活性显著上升（Ｐ＜０．０００５）。结果提示激光光动力学治疗对恢复鼻咽癌患者免疫功能起促进作用。     

γ射线诱导人鼻咽癌细胞凋亡的实验研究

目的：观察γ射线诱导鼻咽癌细胞亡情况。方法：显微荧光染色法和原位未端标记法治 观察放射线对人鼻咽癌细胞株（ＨＮＥ１）凋亡情况进行研究。结果：γ射线０、３、６、９、１２、２５Ｇｙ照射后ＨＮＥ１细胞凋亡率荧光法分别为５．５％、９．５％、１２％、２５．５％、３５．５％、６５．５％；未端标记法分别为１．５％、１１％、１５．５％、２１．５％、２６．５％及５０．５％。结论：放射诱导凋在ＨＮＥ１放射效应中起重要     

一氧化氮对鼻咽癌 ＣＮＥ-２细胞株化疗增敏效应的研究

目的　探讨外源性一氧化氮（ＮＯ）在顺铂（ＤＤＰ）作用于 ＣＮＥ-２细胞的过程中是否存在增敏效应，为提高鼻咽癌化疗疗效提供实验和理论依据。方法　分别使用不同浓度 ＮＯ供体药物硝普钠（ＳＮＰ）、ＤＤＰ及二者联合干预ＣＮＥ-２细胞，采用硝酸还原酶法检测 ＮＯ的浓度，镜下观察细胞形态学变化，ＣＣＫ-８法检测细胞增殖抑制率以及流式细胞仪检测细胞凋亡。结果　① ＳＮＰ呈浓度依赖方式抑制 ＣＮＥ-２细胞的增殖、促进凋亡；② 上清液中 ＮＯ浓度与 ＳＮＰ浓度呈正相关，有统计学意义（ｒ＝０．９６８，Ｐ＜０．００１）；③ ＤＤＰ＋ＳＮＰ联合组与 ＳＮＰ组和 ＤＤＰ组相比，ＣＮＥ-２细胞形态学差异显著，漂浮细胞显著增多，贴壁数量逐渐减少并失去原有形态；④ 当 ＳＮＰ６００μｍｏｌ／Ｌ时对细胞增殖无明显影响，然而联合 ＤＤＰ后较单用 ＤＤＰ组细胞抑制率显著提高（ｔ＝９．０４９，Ｐ＜０．００１）；⑤ ＳＮＰ组与ＤＤＰ联用时 ＣＮＥ ２细胞凋亡率上升，较单用 ＳＮＰ、ＤＤＰ组显著增强（ｔ＝－１９．８１６，Ｐ＜０．００１；ｔ＝－５．２４２，Ｐ＝０．０３５）。结论　外源性 ＮＯ能抑制 ＣＮＥ-２的增殖，其抑制效应与 ＮＯ浓度呈正相关；合适浓度的外源性 ＮＯ可在对细胞本身不产生明显毒性的情况下显著增强 ＤＤＰ对 ＣＮＥ-２细胞株的化疗敏感性。     

介入化疗对鼻咽癌细胞凋亡和增殖的影响

目的：观察介入化疗对鼻咽癌细胞凋亡（ＡＰＯ）和细胞增殖的影响，并评价其疗效。方法：对１０例鼻咽癌患者经颞浅动脉逆行颈外动脉插管，选择肿瘤供血血管灌注化疗药物５－氟嘧啶、顺铂、平阳霉素及烟酰胺。分别；于化疗前、化疗后７ｄ取肿瘤组织，检测调亡细胞和增殖细胞抗原（ＰＣＮＡ）结果：介入化疗后临床缓解率为６３％。化疗后７ｄ细胞凋亡指数（ＡＩ）１．２４％，高于治疗前的０．５２％。细胞增殖指数化疗前为４２．４％     

用聚合酶链反应检测鼻咽癌脱落细胞中EB病毒DNA

应用聚合酶连反应技术检测３５例鼻咽癌患者（２４例刚进行＾６０Ｃｏ放疗或未治疗，１１例放疗接近结束或刚结束）的鼻咽部脱落细胞中的ＥＢ病毒ＤＮＡ，１２例急、慢性扁桃体炎或咽炎患者为正常对照组，另有４例鼻咽癌的活检组织。结果：２４例鼻咽癌未治疗或刚治疗组中脱落细胞ＥＢ病毒ＤＮＡ阳性２０例（８３．３％），阴性４例（１６．７％）；１１例鼻咽癌放疗将近结束或刚结束组ＥＢ病毒阳性１例（９．１％），阴性１０例（９     

改良SD疗法治疗Bell麻痹

目的：探讨改良后的静脉大剂量氢化考的松与低分子石旋糖酐（ＳＤ疗法）治疗Ｂｅｌｌ麻痹（ＢＰ）的疗效,避免ＳＤ疗法中出现的并发症,方法：以改良ＳＤ疗法治疗ＢＰ患者７１例（改良组）,以口服类固醇激素治疗３２例ＢＰ患者作对照（对照组）,比较改良ＳＤ疗法与文献中ＳＤ疗法的疗效及出现的并发症的比率,比较改良组与对照组的疗效。结果：ＢＰ患者Ｈｏｕｓｅ－ＢｒａｃｋｍａｎｎＩ－ＩＩ级恢复率,２４～４８ｈ为４３．８％,２～３ｄ为２６．７％,３～５ｄ为１８．８％,第１个时段者与其后３个时段者比较,差异均有显著性意义（Ｐ〈０．０５）,且无肝肾功能损害及消化道溃疡发生。结论：于发病后２４ｈ内进行发言发ＳＤ疗法,能提高ＢＰ患者Ｉ～ＩＩ级恢复率,缩短恢复时间,能避免原疗法中出现的肝肾功能损害及消化道溃疡等严重并发症。     

用聚合酶链反应检测鼻咽癌脱落细胞中EB病毒DNA

应用聚合酶连反应（ＰＣＲ）技术检测３５例鼻咽癌患者（２４例刚进行￣（６０）Ｃｏ放疗或未治疗，１１例放疗接近结束或刚结束）的鼻咽部脱落细胞中的ＥＢ病毒ＤＮＡ，１２例急、慢性扁桃体炎或咽炎患者为正常对照组，另有４例鼻咽癌的活检组织。结果：２４例鼻咽癌未治疗或刚治疗组中脱落细胞ＥＢ病毒ＤＮＡ阳性２０例（８３．３％），阴性４例（１６．７％）；１１例鼻咽癌放疗将近结束或刚结束组ＥＢ病毒阳性１例（９．１％），阴性１０例（９０．９％）；１２例对照组ＥＢ病毒ＤＮＡ阳性１例（８．３％），阴性１１例（９１．７％）。４例鼻咽部活检组织ＥＢ病毒ＤＮＡ均阳性。说明应用鼻咽部刮片脱落细胞进行ＰＣＲ反应检测ＥＢ病毒ＤＮＡ是一种方法简单、痛苦少，特异性强、灵敏度高的检测手段，可用于鼻咽癌的诊断、普查、流行病学调查等。     

鼻咽癌细胞端粒酶的检测

目的：端粒酶是一种逆转录ＲＮＡ酶，与肿瘤的发生、发展和预后有关，本文探讨端粒酶与鼻咽癌的关系。方法：利用ＴＲＡＰ法对端粒酶的检测方法作了探讨，并检测了鼻咽癌细胞株ＨＮＥ１、鼻咽癌活检组织和正常鼻咽粘膜组织端粒酶的活性。结果：鼻咽癌细胞株ＨＮＥ１和鼻咽癌活检组织端粒酶为阳性，正常鼻咽粘膜组织为阴性。结论：端粒酶在鼻咽癌细胞株和活检组织中酶活性高，端粒酶的检测可为鼻咽癌的诊断、治疗、预后提供参考。     

爆震时冲击波对豚鼠前庭功能影响的实验观察

应用ＢＳＴ－Ⅱ型生物激波管作为爆震源，对１７只健康成年豚鼠进行了冲击波实验。眼震电图（ＥＮＧ）观察记录其爆震前和爆震后即刻以及爆震后４８ｈ的前庭功能变化。观察指标为慢相角速度（ＳＶ）、频率（Ｆ）、幅度（Ａ）和持续时间（Ｄ）。实验结果发现：爆震产和爆震后即刻以及爆震后４８ｈ左右耳ＥＮＧ的ＳＶ、Ａ、Ｄ的变化差异有高度显著性（Ｐ〈０．０１），Ｆ的变化也有显著性差异（Ｐ〈０．０５），结果显示爆震时冲击波具     

益气解毒颗粒影响鼻咽癌细胞HNE1增殖活力的实验研究

目的：探讨不同中医疗法对HNE1细胞增殖的影响。方法：采用MTT法观察含益气解毒颗粒原方及其拆方药物血清对体外培养的人鼻咽癌细胞株HNE1增殖的影响。结果：原方组和解毒组分组药物血清作用48h时,细胞增殖活性最低;而益气组分组、养阴组分组和其他组分组药物血清作用72h时细胞增殖活性最低。15％原方组药物血清对HNE1细胞增殖活性的抑制率达到67．68％。结论：原方及其拆方组药物血清对HNE1细胞具有增殖抑制作用,以原方效应最为明显,且具有时间和浓度依赖性。     

降低Twist1表达可以增加鼻咽癌细胞系HNE1对紫杉醇的敏感性

目的 研究降低Twist1表达可否改变鼻咽癌细胞系HNE1对紫杉醇的敏感性.方法 用包含Twist1小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)序列的表达质粒转染HNE1细胞,以新霉素(400 μg/ml)筛选阳性克隆,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹法鉴定Twist1蛋白的低表达.通过Annexin V-异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)-碘化丙啶(propidium iodide,PI)双标法和观察DNA降解的方法分析si-Twist1 HNE1细胞对紫杉醇的敏感性,采用实时PCR技术分析凋亡相关基因的表达,流式细胞周期分析和叫甲基偶氮唑蓝(MTT)方法分析降低Twist1表达是否影响HNE1细胞增殖.结果 Annexin V-FITC-PI双标法检测结果显示,10 ng/ml紫杉醇处理后,si-Twist1 HNE1细胞的凋亡率为40.2%,显著高于对照siRNA组的24.3%,差异有统计学意义(t=56.999,P=0.000);恢复Twist1蛋白的表达,紫杉醇引起的凋亡率在低Twist蛋白表达组为44.80%±4.80%(x±s,下同),在高表达组为27.00%±2.91%,差异有统计学意义(t=4.374,P=0.049).实时PCR实验结果显示,紫杉醇处理的HNEI细胞中si-Twist组凋亡相关蛋白B淋巴细胞(bcl)-2的相对表达量为0.28±0.05,显著低于对照siRNA组的0.57±0.08,差异有统计学意义(t=6.710,P=0.021);而bax和bcl-XL基因的转录水平没有明显改变(t值分别为2.000和1.502,P值均>0.05).MTT实验和流式细胞术检测显示Twist表达降低没有影响HNE1细胞增殖(P值均>0.05).结论 降低Twist1表达可能是通过诱导凋亡提高了细胞对化疗药物敏感性,提示Twist蛋白可望成为一项新的鼻咽癌治疗靶标.     

Mechanisms of programmed cell death signaling in hair cells and support cells post-electrode insertion trauma

Conclusion: Programmed cell death (PCD) initially starts in the support cells (SCs) after electrode insertion trauma (EIT), followed by PCD in hair cells (HCs). Activation of caspase-3 was observed only in SCs. Protecting both SCs and HCs with selective otoprotective drugs at an early stage post implantation may help to preserve residual hearing. Objectives: Cochlear implant EIT can initiate sensory cell losses via necrosis and PCD within the organ of Corti, which can lead to a loss of residual hearing. PCD appears to be a major factor in HC loss post-EIT. The current study aimed to: (1) determine the onset of PCD in both SCs and HCs within the traumatized organ of Corti; and (2) identify the molecular mechanisms active within the HCs and SCs that are undergoing PCD. Methods: Adult guinea pigs were assigned to one of two groups: (1) EIT and (2) unoperated contralateral ears as controls. Immunostaining of dissected organ of Corti surface preparations for phosphorylated-Jun, cleaved caspase-3, and 4-hydroxy-2,3-nonenal (HNE) were performed at 6, 12, and 24 h post-EIT and for contralateral control ears. Results: At 6 h post-EIT the SCs immunolabeled for the presence of phosphorylated-Jun and activated caspase-3. Phosphorylated p-Jun labeling was observed at 12 h in both the HCs and SCs of middle and basal cochlear turns. Cleaved caspase-3 was not observed in HCs of any cochlear turn at up to 24 h post-EIT. Lipid peroxidation (HNE immunostaining) was first observed at 12 h post-EIT in both the HCs and SCs of the basal turn, and reached the apical turn by 24 h post-EIT.     

Effect of transduction bax gene on experimental nasopharyngeal carcinoma]

OBJECTIVE: To evaluate the effect of transduction bax gene on nasopharyngeal carcinoma (NPC). METHODS: The transduced bax gene was mediated by Dosper lipidsome to the HNE-1 cell lines, and confirmed by immunofluorescent stain. The apoptosis of the cell lines was studied by MTT stain and flow cytometry and the growth of implanted tumor in naked mouse after local injection of bax geneobserved. RESULTS: Instantaneous expression of bax gene in HNE1 cell lines was testified by immunofluorescent stain after transduction for 48 hours, the apoptotic index were 10.7% and 69.4% for pre- and post-transduction, respectively. MTT stain showed the values of A in 490 nm after transduction to be 2.004(36 h) and 1.902(48 h). The diameter of implanted tumor mass was (1.8 +/- 0.64) cm and (3.0 +/- 0.44) cm in experimental and control groups, respectively. CONCLUSION: The transduction bax gene can enhance the apoptosis of HNE1 cell lines and prevent growth of implanted tumor.     

人鼻黏膜上皮细胞2种原代体外培养方案的比较研究

目的:比较人鼻黏膜上皮细胞(HNE)2种常用的体外培养方法的效果,探索适宜的HNE体外培养方案。方法:比较组织块培养方案和分离细胞培养方案的HNE体外培养成功率和生长曲线,进行HNE的形态学观察和细胞来源鉴定,以初步了解其生物学特性。结果:分离细胞培养方案的体外培养成功率(87.50%)优于组织块培养方案(83.33%),但差异无统计学意义(P>0.05)。分离细胞培养方案的HNE生长曲线较高于组织块培养方案。2种体外培养方案的HNE经细胞形态学观察和细胞角蛋白染色均证实为上皮细胞来源。结论:分离细胞培养方案细胞混杂少,增殖迅速,HNE获取稳定、可靠,较适宜原代培养研究。     

鼻咽癌中EBV LMP1激活NF—κB的实验研究

目的：探讨在鼻咽癌细胞系中ＥＢ病毒潜伏膜蛋白ＬＭＰ１能否激活重要的核转录因子ＮＦ－κＢ,及ＮＦ－κＢ的活化对鼻咽癌细胞猕 表型的影响。方法：我们选用两种鼻咽癌细胞系即有ＬＭＰ１表达的ＣＮＥ－ＬＭＰ１和无ＬＭＰ１表达的ＨＮＥ１,用包含ＮＦ－κＢ结合位点萤虫素酶报道基因共转染的方法及软琼脂集落形成观察两株细胞中的ＮＦ－κＢ的活性。结果：建立稳定表达包含ＮＦ－κＢ结合位点萤虫素酶报道基因的两种细胞株。     

耐顺铂人鼻咽癌细胞系HNE1/CDDP的建立及其生物学特性的研究

目的:建立耐顺铂(CDDP)的鼻咽癌耐药细胞系HNEl/CDDP,并研究其生物学特性.方法:采用逐步递增培养基中CDDP的方法,体外连续培养建成一株耐CDDP的人鼻咽癌耐药细胞系HNEl/CDDP.用MTT法测定该耐药细胞系对多种抗癌药的敏感性,观察亲本细胞系和耐药细胞系的形态学差异,用生长曲线分别计算亲本细胞系和耐药细胞系的倍增时间,以流式细胞技术检测亲本细胞系和耐药细胞系的周期分布,观测亲本和耐药细胞系黏附、运动和侵袭能力的差别.结果:历时10个月建成人鼻咽癌CDDP耐药细胞系HNEl/CD-DP,能在含CDDP 1 mg/L的培养基中稳定生长并传代,其对CDDP的耐药指数为5.83,并与卡铂、奥沙利铂、足叶乙甙等多种抗癌药存在不同程度的交叉耐药性;体外群体倍增时间较亲代细胞延长;细胞周期分析发现其S期与G2/M期细胞减少、G0/G1期细胞增多;HNEl和HNEl/CDDP细胞株的黏附、运动、侵袭能力无明显差别.结论:HNEl/CDDP细胞具有耐药表型,且耐药性稳定,能作为体外研究耐药的模型.     

反义细胞角蛋白13基因对人鼻咽癌HNE1细胞移植瘤放疗敏感性的影响

目的　观察反义细胞角蛋白13（cytokeratin 13,CK13）基因对鼻咽癌人嗜中性细胞弹性蛋白酶1（human neutrophil elastase,HNE1）细胞移植瘤放疗敏感性的影响。方法　将HNE1细胞株分为A组（未经处理）、B组（转染慢病毒空载体）,C组（转染慢病毒反义CK13a）和D组（转染慢病毒反义CK13b）共4组建立相应动物模型,放疗后采用流式细胞仪、免疫组化、PCR、Tunel法及Westernblotting检测。结果　细胞周期检测发现转染慢病毒质粒的C组和D组在放疗后与对照组比较G2/M期阻滞时间显著延长;免疫组化结果显示C组和D组移植瘤中CK13表达下降;Tunel法检测细胞凋亡坏死率发现C组和D组细胞凋亡率明显降低;Western blotting检测发现caspase-3凋亡标志物下降。PCR检测发现CDC25mRNA水平明显降低。结论　反义CK13基因通过调控细胞周期和凋亡可降低鼻咽癌HNE1移植瘤的放疗敏感性,并与caspase-3凋亡途径和CDC25信号通路相关。