壳聚糖-明胶-透明质酸薄膜的制备及其性能的研究

本实验采用表面修饰法和共混法两种不同的方法将透明质酸引入壳聚糖-明胶体系，制备了壳聚糖-明胶-透明质酸复合薄膜，考察了薄膜的表面形貌、亲水性和力学性能等理化性能以及生物相容性。实验结果表明，壳聚糖-明胶-透明质酸薄膜具有良好的亲水性，而共混法和表面修饰法制备的薄膜在力学性能上各有所长。体外细胞培养结果表明，成纤维细胞在共混法制备的薄膜上的黏附和生长情况要明显好于表面修饰法制备的薄膜。     

壳聚糖-透明质酸共混膜对兔角膜基质细胞生长的影响

观察各种壳聚糖-透明质酸共混膜对角膜基质细胞生长的影响作用,研究透明质酸混入比例对共混膜与细胞相容性的影响.以共混膜为载体培养兔角膜基质细胞,通过光学和电子显微镜,观察细胞在膜上的生长情况;通过MTT法,检测细胞在共混膜上的贴附率和生长活性;通过检测培养基中乳酸脱氢酶的活性,预示壳聚糖-透明质酸共混膜与角膜基质细胞的相容性.以低于1:0.1的比例混入透明质酸.可以提高细胞在共混膜上的贴附率、生长速度,细胞在共混膜上的生长状态好于在壳聚糖膜上的生长状态.结果提示,以低于1:0.1的比例混入透明质酸,可以提高壳聚糖膜与角膜基质细胞的相容性,促进细胞生长;而以高于1:0.1的比例混入透明质酸,则不利于细胞在共混膜上的生长,降低了壳聚糖膜与角膜基质细胞的相容性.     

碱性成纤维细胞生长因子联合透明质酸钠对角膜保存液中内皮细胞的作用

背景：作者前期将透明质酸钠和碱性成纤维细胞生长因子分别加入基础培养基,制成改良角膜保存液并证实其对角膜内皮细胞活性的保存作用。 目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子及透明质酸钠在角膜中期保存液中的作用及其有效浓度,评价该两种物质联合对角膜内皮细胞的保护作用。 方法：在以基础培养基 MEM、M-199为主要成分,添加 6%葡聚糖、HEPES缓冲系、抗生素等制成角膜保存液的基础上,加入不同浓度的透明质酸钠和碱性成纤维细胞生长因子,并设立未加透明质酸钠及碱性成纤维细胞生长因子的对照组。各组于4 ℃下保存新西兰大白兔角膜片,于3,5,7,10,14 d,行裂隙灯检查、锥虫蓝-茜素红染色、角膜组织病理切片及扫描电镜观察检测角膜内皮细胞活性,评价保存质量。  结果与结论：加入碱性成纤维细胞生长因子及透明质酸钠的中期角膜保存液保存的角膜片其透明度、内皮细胞活性、显微结构、超微结构均明显优于未加组,各实验组同期比较,浓度较高组效果优于浓度较低组。碱性成纤维细胞生长因子及透明质酸钠同时加入基础保存液中能够对角膜内皮细胞进行有效的保护,其效果与浓度有关。     

可塑形脱矿骨基质/透明质酸骨泥的制备与细胞相容性

背景：应用预制成形的材料修复不规则骨缺损时,常出现材料与骨缺损形状不匹配的问题,制备可任意塑形骨泥对促进不规则骨缺损的愈合具有重要意义。 目的：构建可塑形脱钙骨基质/透明质酸骨泥,筛选最佳复合比例并评价其细胞相容性。 方法：选取合格供体皮质骨制备脱钙骨基质。分别配置浓度为0.75%,1.5%,3%,4.5%的透明质酸溶液并检测其黏度,以450 mg脱钙骨基质与上述各浓度透明质酸溶液1 mL混合,制备不同比例的脱钙骨基质/透明质酸骨泥。37 ℃条件下将骨泥浸泡在PBS平衡液中,观察其离散时间,筛选最佳复合比例的脱钙骨基质/透明质酸骨泥。应用脱钙骨基质/透明质酸骨泥浸提液培养L-929小鼠成纤维细胞,1,4,7 d采用CCK-8法检测骨泥的细胞毒性。 结果与结论：随透明质酸浓度的增加其溶液黏度增大,脱钙骨基质/透明质酸骨泥的离散时间延长,3%浓度的透明质酸与450 mg脱钙骨基质复合制备的骨泥具有良好可塑形能力,离散时间为8 h,为最佳复合比例。脱钙骨基质/透明质酸骨泥浸提液培养L-929小鼠成纤维细胞1,4,7 d的细胞增殖率分别为93.72%,101.65%,97.68%,细胞毒性级别为0或1级。表明脱钙骨基质/透明质酸复合质量比为15∶1制备的骨泥具有良好的可塑形能力及抗离散能力,细胞毒性轻微。     

可注射明胶透明质酸钠水凝胶药物载体的制备

目的制备可注射明胶透明质酸钠水凝胶药物载体,为临床应用提供依据。方法利用现有临床材料医用透明质酸钠水凝胶和医用可吸收明胶海绵加以物理混合制备成可注射水凝胶,用荧光染料罗丹明B作为模拟药物并应用Franz扩散池评价该水凝胶的体外药物释放率,通过CCK-8法检测成纤维细胞(L929)的活性,通过小动物活体成像评价药物在豚鼠听泡内的分布与扩散。结果明胶透明质酸水凝胶呈凝胶状,具有可注射性、对L929细胞具有良好的相容性,对罗丹明B的体外缓释效果良好,72h的累积释放率可达42.3%。注入豚鼠听泡后可滞留72h以上,并贴附于圆窗膜上。结论成功制备了可注射明胶透明质酸钠水凝胶药物缓释载体,具有潜在的临床应用价值。     

3D生物打印兔肺成纤维细胞水凝胶结构体片段

目的通过三维(3D)生物打印兔肺成纤维细胞-海藻酸钠-明胶共混物,探讨3D生物打印技术构建肺成纤维细胞水凝胶结构体片段的可行性。方法用轻度Ⅳ型胶原酶消化结合组织块培养法分离纯化新生兔肺成纤维细胞,并对分离纯化的肺成纤维细胞进行原代和传代培养;制备海藻酸钠-明胶水溶胶,与兔肺成纤维细胞共混;用圆柱状微丝逐层交错堆积技术,进行兔肺成纤维细胞-海藻酸钠-明胶共混物的3D生物打印,获得三维结构体。用钙黄绿素-AM和碘化丙啶溶液对该结构体进行活/死细胞双荧光染色,评价打印后及培养后兔肺成纤维细胞的活性,计算细胞存活率。结果通过按照设计的参数,打印出含有兔肺成纤维细胞的网格状水凝胶结构体。该结构体的大小约为9 mm×9 mm×1.2 mm,微丝间的孔隙相互通连,孔隙大小约600μm×600μm。打印后的兔肺成纤维细胞在三维结构体中仍可增殖,活/死细胞荧光染色结果表明结构体中兔肺成纤维细胞的存活率约为84%±3%,兔肺成纤维细胞在结构体中分布均匀。结论本实验实现了兔肺成纤维细胞共混物结构体的3D生物打印,为构建类肺组织工程结构体片段提供新思路。     

透明质酸溶液的流变性能初步研究

透明质酸是一种酸性粘多糖,其特有的粘弹性使其广泛应用于眼科手术等医药领域.使用高级流变扩展系统研究浓度对于透明质酸溶液流变性能的影响.结果表明,透明质酸溶液的粘度随剪切速率的增加而减小.在任何剪切速率作用下,粘度总是与浓度呈正相关.而随着浓度的增加,溶液粘性与弹性频率交叉点降低.     

几丁聚糖和透明质酸钠对血管内皮细胞增殖的影响

目的:比较几丁聚糖和透明质酸钠对血管内皮细胞增殖的影响.方法:用含不同浓度的几丁聚糖和透明质酸钠的培养液对血管内皮细胞(EV304)进行培养,以四唑盐比色法测细胞增殖,并用流式细胞仪测定细胞周期.结果:几丁聚糖在≥0.1 mg/ml时促进血管内皮细胞的增殖,透明质酸钠对血管内皮细胞的增殖有抑制作用,几丁聚糖可使细胞周期中G1期比例下降,而透明质酸钠使细胞周期中G1期比例上升.结论:几丁聚糖促进血管内皮细胞的增殖,而透明质酸钠对血管内皮细胞的增殖有抑制作用.     

透明质酸影响人膝骨关节炎滑膜成纤维样细胞骨桥蛋白和CD44的表达

背景：在骨关节炎病程中,透明质酸水平的改变可以使一系列细胞因子和酶表达水平改变,但是滑膜组织中骨桥蛋白、CD44的高表达是否与透明质酸水平改变相关目前尚不清楚。 目的：通过透明质酸干预体外培养的人膝骨关节炎滑膜成纤维样细胞,观察透明质酸对骨关节炎滑膜成纤维样细胞骨桥蛋白和CD44表达的影响。 方法：选取接受膝关节镜手术和膝关节置换的原发性膝关节骨关节炎患者滑膜标本10例,进行体外培养获取纯化的滑膜成纤维细胞,取第4~6代滑膜成纤维细胞,分为3组：空白对照组不进行任何干预;透明质酸组用100 mg/L透明质酸干预24 h;透明质酸酶组用300 mg/L透明质酸酶干预24 h。 结果与结论：与空白对照组相比,透明质酸组滑膜成纤维细胞骨桥蛋白mRNA表达水平上升(P < 0.05),透明质酸酶组滑膜成纤维细胞骨桥蛋白mRNA表达水平下降(P < 0.05)。透明质酸组和透明质酸酶组之间膜成纤维细胞骨桥蛋白mRNA表达水平差异有显著性意义(P < 0.05)。空白对照组、透明质酸组和透明质酸酶组滑膜成纤维细胞CD44 mRNA表达水平差异均无显著性意义(P > 0.05)。提示透明质酸可以使骨关节炎滑膜成纤维细胞骨桥蛋白mRNA表达增高,对CD44 mRNA表达没有影响。     

透明质酸与京尼平的交联研究

对透明质酸与京尼平的交联反应进行初步的探索。透明质酸溶液中加入京尼平进行反应,采用UV 法和粘度法测定交联程度。考察反应时间、京尼平的量、透明质酸的浓度等因素对交联反应的影响。透明质酸与京尼平反应在48 h 时吸光度达到最大值,粘度变化不大。反应时间、京尼平的量及透明质酸的浓度是影响交联的因素,其中反应时间是主要影响因素,为进一步研究透明质酸的交联提供依据。     

Acetylation of P-Aminohippuric Acid in the Kidney. Renal Clearance of P-Aminohippuric Acid in the Kidney. Renal Clearance of P-Aminohippuric Acid and N4-Acetylated P-Aminohippuric Acid in Pigs

20 pigs weighing 21–124 kg were used to determine the clearance of PAH, N⁴-acetylated PAH and PAH_total, and for determination of acetylation of PAH and de-acetylation of N⁴-acetylated PAH in the kidney. By examining blood samples taken from a. renalis and v. renalis and urine collected simultaneously, the acetylation and de-acetylation of PAH and N⁴-acetylated PAH in the kidney were determined on 9 pigs. 6 of these acetylated PAH (1.5–10 per cent), while 3 de-acetylated N⁴-acetylated PAH (2–21 per cent). The extraction percentage for PAH and N⁴-acetylated PAH were 91 ± 1.4 (S.E.M.) and 84 ± 2.1 respectively. The ratio between clearance of N⁴-acetylated PAH and PAH was found to be 1.08 ± 0.07 and between clearance for PAH_total and PAH 1.01 ± 0.02.     

Inhibition of the Neutrophil Nrdph Oxidase by Folic Acid and Antagonists of the Folic Acid Metabolism

The influence of folic acid and several antagonists of the folic acid metabolism on neutrophil superoxide generation was investigated with the cytochrome c reduction assay. The compounds were found to be partial competitive inhibitors of the NADPH oxidase, their activity apparently increasing with larger substituents at the 10 position. There is evidence that compounds with a 4-oxo substituent are taken up more slowly by neutrophils than those with a 4-amino functionality. Scavenging properties could be excluded from control measurements with the xanthine/xanthine oxidase assay.     

Bioconversions of Ferulic Acid,an Hydroxycinnamic Acid

Ferulic acid is the most abundant hydroxycinnamic acid in the plant world and is ester linked to arabinose, in various plant polysaccharides such as arabinoxylans and pectins. It is a precursor to vanillin, one of the most important aromatic flavor compound used in foods, beverages, pharmaceuticals, and perfumes. This article presents an overview of the various biocatalytic routes, focusing on the relevant biotransformations of ferulic acid using plant sources, microorganisms, and enzymes.     

Acid stress in the pathology of asthma

Although alteration of airway pH may serve an innate host defense capacity, it also is implicated in the pathophysiology of obstructive airway diseases. Acid-induced asthma appears in association with gastroesophageal reflux after accidental inhalation of acid (fog, pollution, and workplace exposure) and in the presence of altered airway pH homeostasis. Endogenous and exogenous exposures to acids evoke cough, bronchoconstriction, airway hyperreactivity, microvascular leakage, and heightened production of mucous, fluid, and nitric oxide. Abnormal acidity of the airways is reflected in exhaled breath assays. The intimate mechanisms of acid-induced airway obstruction are dependent on activation of capsaicin-sensitive sensory nerves. Protons activate these nerves with the subsequent release of tachykinins (major mediators of this pathway) that, in conjunction with kinins, nitric oxide, oxygen radicals, and proteases, modulate diverse aspects of airway dysfunction and inflammation. The recognition that acid stress might initiate or exacerbate airway obstructive symptomatology has prompted the consideration of new therapies targeting pH homeostasis.     

不饱和脂肪酸对花生四烯酸代谢产物的影响

本文用不饱和脂肪酸治疗脓毒症大鼠，观察治疗前、后大鼠血浆ＴＸＢ２、６－酮－ＰＧＦ１α、ＰＧＥ２及肝脏枯否氏细胞膜、红细胞膜花生四烯酸（ＡＡ）水平的变化，并探讨其机理。结果表明脓毒症大鼠血浆三种ＡＡ代谢产物水平明显高于正常组（Ｐ＜０．０１）；枯否氏细胞膜和红细胞膜的ＡＡ含量明显降低（Ｐ分别＜０．０１和＜０．０５）。经富含不饱和脂肪酸的鱼油治疗后，血浆ＴＸＢ２、ＰＧＥ２明显降低，两种细胞膜ＡＡ含量明显升高（Ｐ＜０．０１）。但血浆６－酮－ＰＧＦ１α仍处于高水平状态。提示在炎性反应时细胞膜ＡＡ发生明显变化，而肠道给予不饱和脂肪酸，可以改变膜ＡＡ含量，减少炎症介质的产生。