大鼠中枢神经系统连续切片制作的实验研究

大鼠中枢神经系统 (central nervous system,CNS)显示神经核团和 /或神经纤维束的全程连续切片标本是神经生物学教学的重要的实习标本 ,也是神经生物学研究工作中的重要参考 ;但这类标本比较缺乏 ,尤其是同时显示神经核团和神经束的标本更不易制作 ,而且这方面的实验研究也较少。现有的一些连续切片制作方法 ,大多局限于火棉胶包埋切片 ,其过程相当繁琐 ,制作周期长 ,已有的染色方法多为显示单一结构的方法。为了教学和科研工作的需要 ,我们进行了 CNS全程连续切片和染色方面的实验研究。材料和方法 :健康成年Wistar大鼠 ,重 2 5 0 - 30 …     

三种改良的阮森吡啶-硝酸银法显示大鼠脊髓组织的比较

目的 对3种改良的阮森吡啶-硝酸银法(Ranson)在显示大鼠脊髓组织中的应用进行比较. 方法 对照组采用传统的阮森吡啶-硝酸银法,即取大鼠的新鲜脊髓组织,在酒精中加纯氨水固定,经纯吡啶、硝酸银、还原液染色,常规石蜡切片并观察.实验组采用改良的阮森吡啶-硝酸银法,即分别采用NaOH溶液、Na2CO3溶液和95%酒精替换在对照组中使用的纯氨水,其他染色步骤同对照组. 结果 实验组的脊髓组织切片分别经3种改良的阮森吡啶-硝酸银法染色,神经元的胞体和突起均呈黄棕色,神经纤维呈棕褐色,切片染色结果与对照组比较无明显差异,尤以酒精替换组的染色效果为最佳. 结论 以改良的阮森吡啶-硝酸银法显示大鼠脊髓组织中神经元及神经纤维染色效果良好,方法更加简便易行,且避免了氨水的刺激气味,有利于改善教学和科研的局部工作环境.     

Lillie-Mayer苏木精在冷冻切片快速进行性染色中应用

恒温冷冻切片是用于术中快速病理诊断的主要制片技术,除了要求技术人员有熟练的操作技能外,更重要的是要求在制作程序及苏木精染液的配制和使用方法上做出有效的选择,才能达到最佳的染色效果.Lillie-Mayer苏木精染液是一种从英国引进的改良配方,应用于冷冻切片的快速进行性染色,全程染色约90 s完成,该方法简化了盐酸乙醇分化的程序,节省了分化和返蓝中所消耗的时间,避免了盐酸乙醇酸化后引起的部分组织脱落掉片的现象.现将我科多年来在冷冻切片的快速染色方法及Lillie-Mayer苏木精染液的配制方法介绍如下.     

不同染色方法对人脑垂体细胞显示效果的比较

目的改进人脑垂体的染色方法,更清晰地显示腺垂体内各种细胞的形态特点,提高实验课教学质量。方法应用苏木精-伊红染色法和改良染色液染色法显示脑垂体的组织结构。结果用传统的苏木精-伊红染色法不易区分各种细胞,而采用改良染色液显示脑垂体组织结构效果好,既能观察脑垂体的结构,又能区分嗜酸性细胞、嗜碱性细胞和嫌色细胞。结论改良染色液染色法能够很好地显示脑垂体组织结构,使3种细胞的形态特点清晰可辨,可为实验教学提供优质的切片标本。     

改良镀银染色在大鼠脑缺血选择性神经元及轴突溃变中的应用

常规染色难以直接证实所有坏死或溃变的神经元 ,但镀银染色可显示溃变的神经元及轴突和轴突终末。本文介绍一种研究海马缺血性神经元死亡及其轴突溃变程度和时间过程的改良镀银染色方法。1　材料与方法1.1　动物模型　大鼠急性前脑缺血 2 0 min再灌流 2 d或 4d,1%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉下 ,4%多聚四醛经左心室升主动脉灌注固定 ,取脑在同样的固定液中后固定 4～ 5 d,包括背侧海马的 2 0 μm冰冻切片 ,做改良的 Gallyas et al镀银方法染色 ,相邻切片作 HE常规染色。1.2　银染工作液的配制1.2 .1　预处理液　 9% Na OH和 1.2 % NH4NO3等…     

六种固定液对冰冻切片苏木精-伊红染色效果的比较

<正>让冰冻切片的苏木精-伊红(HE)染色效果等同于石蜡切片,固定液的选择是最关键。目前很多相关文献报道说法不一。我们选用组织学常用和易配制的6种固定液进行苏木精-伊红(HE)染色效果的比较观察。     

大鼠膝关节软骨不同染色方法的差异

背景:国内外学者对关节软骨对软骨进行了大量研究,需要用不同的染色方法对研究结果进行分析,但将多种染色方法同时应用于软骨研究及探讨染色机制的较少。目的:探讨不同染色方法对大鼠膝关节软骨染色的优缺点。方法:取正常大鼠膝关节软骨,行苏木精-伊红、番红O、阿尔辛蓝、甲苯胺蓝、番红-阿尔辛蓝、番红-固绿染色,观察软骨结构。结果与结论:苏木精-伊红、番红O、甲苯胺蓝染色均可观察到潮线,分别为蓝色、红色和蓝色,番红O和甲苯胺蓝染色强度朝潮线方向增强,番红O染色对潮线的观察优于其他染色方法。苏木精-伊红染色关节软骨4层结构清晰,软骨细胞呈柱状排列,基质呈均匀呈嗜碱性染色。番红O染色显示4层结构层次清楚,基质深层染色最红。阿尔辛蓝染色显示,pH1.0时软骨细胞周边部分被阿尔辛蓝强烈染色,pH2.5时阿尔辛蓝染色较深。甲苯胺蓝染色显示组织结构层欠清,胞核染色清晰,胞浆几乎不着色,基质呈淡蓝紫色。番红-阿尔辛蓝染色显示软骨表面及基质呈不均一的红色,深层颜色较深,软骨细胞周围蓝染;番红-固绿染色显示软骨基质呈均匀的红色,软骨下骨呈绿色,软骨组织与骨组织分对比鲜明。提示上述各种方法均可观察到软骨的四层结构,但以番红O染色显示软骨各层和潮线结构最佳;苏木精-伊红染色观察软骨细胞形态变化较其他方法清楚。     

同时显示肾微血管和细胞构筑的实验研究

目的：在媒染微血管的同时显示肾内细胞构筑，以了解肾微血管与肾小管之间的相互关系。方法：用单宁酸一氯化铁法(TA—be)媒染肾微血管，再以苏木精、H—E法复染来观察肾小管细胞结构。结果：经复染的2组切片各级血管和细胞均染色良好，血管壁平滑肌纤维、内皮细胞界限清晰，细胞核蓝染，H—E染色的细胞质呈深浅不同的红色。因切片较厚，保证了微血管的立体感，细胞的染色效果却不及薄切片的鲜艳。结论：TA—Fe法配合苏木精或HE复染，可同时显示肾微血管和细胞构筑。     

成年大鼠基底前脑存在一个Nestin免疫阳性神经元簇

目的　观察Nestin免疫活性在成年大鼠基底前脑中的表达和分布 ,并探讨其与胆碱能神经元之间的关系。方法　采用免疫组化方法对成年大鼠基底前脑的切片进行nestin免疫组化染色及其与ChAT ,NADPH d双标染色。结果　在成年大鼠基底前脑的隔斜角带复合体有一个连续的nestin免疫阳性细胞带 ,胞体较大 ,梭形或多极形 ,有 2～ 4个突起。双标染色显示 ,Nestin阳性神经元与ChAT ,NADPH d阳性神经元间杂分布 ,大多数不呈交叉反应 ,只有少数 ,约 10 %呈双标染色。结论　成年大鼠基底前脑存在一个有别于胆碱能神经元的nestin免疫阳性神经元簇 ,其化学属性和生物学意义有待进一步研究。     

电镜半薄切片应用于光镜研究的探讨

电镜半薄切片通常用于电镜超薄切片前的定位观察 ,我们在定位观察时发现 ,由于切片薄 ,结构显示清晰 ,可用于光镜研究 ,其观察结果优于石蜡切片。多年来 ,我们已将电镜半薄切片应用于实验研究和研究生课题实验。方法 :取材后将组织修为 1立方毫米左右 ,常规电镜样品处理 ,环氧树脂 6 18包埋 ,修块 ,L KBV型超薄切片机切片 ,切片厚度 1微米 ,脱树脂后 ,苏木精染色 ,H· E或甲苯胺兰染色 ,37℃温箱烤干 ,封片 ,观察。结果 :苏木精染色显示 ,细胞核呈紫兰色 ,胞浆淡兰色 ;H·E染色显示 ,细胞核为紫兰色 ,细胞质淡粉红色 ,但伊红染色较石蜡…     

大鼠中枢神经元内免疫神经内分泌物质的共存

研究白细胞介素－２,代谢型谷氨酸体１亚型和雌激素受体在中枢神经系统神经细胞的表达,证实它们共存的可能性。方法使用种属性异性１抗的免疫细胞化学三重标记技术,在相邻的两张连续切片上证实大鼠大脑皮质,延髓和脊髓内上述３物质的共存。     

Immunoreactive β-endorphin and acth in the same neurons of the hypothalamic arcuate nucleus in the rat

Immunoreactive ACTH and β-endorphin (β-End) were localized in the brain and pituitaries of normal and colchicine-treated rats, using the immunoperoxidase method at the light microscopic level. On adjacent serial 5-μm paraffin sections of anterior pituitaries, both ACTH and β-End could be found in the same cells. On adjacent 5-μm paraffin sections of brains of colchicine-treated rats, both ACTH and β-End could be found in the same perikarya of hypothalamic arcuate nucleus neurons. It appeared that all perikarya containing β-End contained ACTH as well, suggesting that neurons producing β-End also produce ACTH. Pathways of ACTH fibers corresponded to pathways of β-End fibers. These findings suggest that the synthesis, and transport, of ACTH and β-End are linked in the brain as well as in the pituitary, possibly through a common precursor.     

大鼠垂体前叶内SP-免疫阳性神经纤维的分布

用大鼠垂体冠状和矢状方向的连续切片，结合免疫组织化学方法详细描述了ＳＰ－免疫阳性神经纤维在大鼠垂体前叶的分布特征。结果显示，簇状的ＳＰ－免疫阳性神经纤维在垂体前叶尾１／３段主要分布在背侧近垂体裂处；而在中１／３段则主要分布于前叶的两翼中部靠腹侧处。     

肾上腺皮质激素对大鼠CGRP免疫反应神经元的影响

将雄性成年大鼠40只随机分为：①正常对照组，②双侧肾上腺切除组，③双侧肾上腺切除后给予糖皮质激素受体拮抗剂组和④侧脑室注射地塞米松组等4组。应用免疫组织化学方法，观察了肾上腺皮质激素对大鼠脑的脑桥以上部分CGRP免疫反应性的影响、结果显示：第1组大鼠可在终纹床核，隔外侧核，基底核，弓状核，缰脚间束，臂旁内、外侧核，脑干躯体运动核，吻侧橄榄核，前庭神经核、蜗神经核以及小脑等处观察到CGRP阳性神经元及纤维。与第1组相比，第2组无明显变化；第3组免疫反应增强；第4组免疫反应减弱。本文从形态学上证明，大鼠中枢神经系内CGRP免疫反应阳性神经元可随肾上腺皮质激素水平的变化而改变，并讨论了糖皮质激素对CGRP的调节机制。     

Biogenic monoamines in the central nervous system of molluskTritonia sp.

The localization of biogenic monoamines in the CNS of the Pacific nudibranch molluskTritonia sp. was investigated by the method of Falck and Hillarp. Neurons with specific yellow luminescence, evidently due to serotonin, were found in the cerebral, pedal and gastro-esophageal ganglia. Yellow luminescence is seen in the neuron bodies, and also in the intermediate segment and axons and their terminals. Yellow and green luminescence is observed in the neuropil plexuses of nerve fibers and their terminals. The number of nerve fibers with green luminescence is much greater than the number of neurons with the same luminescence. Nerve fibers with green and yellow luminescence are present in most nerves, connectives and commissures of the triton central nervous system (CNS).     

异种神经移植后再生神经纤维的HRP逆行运输

成年青紫蓝兔一侧胫神经于Ｇｕｏ窝上部切除５ｍｍ，移植入８ｍｍ长，经反复冰冻，融解５次的成年狗胫神经，将兔胫神经的近，远断端与植入的狗神经缝合。术后２、３、４、５、６周，将ＨＲＰ注入距远端吻合部１５ｍｍ处的远段胫神经，动物存活４天。于神经移植术后４、５、６周，在兔的Ｌ７，Ｓ１．２脊髓前角观察到ＨＲＰ记细胞。     

老年大鼠海马神经元细胞核体积和直径的体视学观察

目的 确定老年大鼠海马神经元的细胞核是否萎缩。 方法 从1、2和3年龄的正常雄性SD大鼠（每个年龄组5只）的一侧（随机选择）大脑半球,完整剥离海马结构,甲基丙烯酸树脂包埋后作连续切片,厚 40 μm, 等距随机抽选3~4张切片,过碘酸、席夫试剂和苏木精染色。用体视学方法估计海马神经元细胞核的大小：先用光学体视框均匀随机抽选细胞核,然后在其最大轮廓的聚焦平面（光学切片）测其费雷特（Feret）直径作为细胞核直径,然后在其核仁的最清晰聚焦平面用核距测量法测其体积。 结果 整个海马内,3个年龄组的神经元细胞核平均直径为8.7~9.2 μm,平均体积为392~457 μm3,两者组间差异皆无显著性。海马各区——CA区（海马本部）、齿状回或下托的细胞核平均直径或体积组间差异也无显著性。 结论 从中年到老年,大鼠整个海马内神经元细胞核的大小未发现明显的年龄相关变化。     

人胎小肠氮能神经元发育的研究

本研究用 NADPH-d组织化学法对人胎小肠氮能神经元的发育进行了观察。结果显示 :5个月胎龄时 ,肌间神经节处的圆形细胞中部分细胞分化成氮能神经细胞 ,细胞核不染色 ,胞质极少 ,呈浅蓝色 ,有的神经细胞有短小的突起。 6个月胎龄时 ,氮能神经元胞体明显增大 ,核大 ,胞质少 ,染色增深 ,在外纵肌层与内环肌层之间形成肌间神经节。由神经元胞体发出的神经纤维在肌间形成网状神经丛。同时 ,在内环肌层肌纤维之间出现氮能神经纤维分布。有的神经纤维穿过粘膜下层分布到粘膜肠腺基部。7个月胎龄时 ,肌间神经节细胞数目增多 ,胞质由少到多 ,染色强度增加 ,肌层神经纤维分布密度增加 ,在粘膜下层有时可见有 1～ 2个氮能神经元细胞体或小的神经节分布。8～ 10个月胎龄时 ,肌间神经节细胞和粘膜下层氮能神经元胞体及神经纤维呈深蓝色 ,内环肌层神经纤维分布密度增加。以上结果提示 :人胎小肠氮能神经元是由胚胎早期肌间神经节处的圆形细胞 ,通过细胞分化、增殖、生长发育而形成的     

神经元核抗原在大鼠中枢神经系统神经元的不同表达

目的观察正常大鼠中枢神经系统(CNS)内神经元核抗原(NeuN)的表达。方法正常成年SD大鼠5只,常规固定,恒冷箱切片,免疫组织化学、免疫荧光染色、尼氏染色。结果NeuN在成年大鼠CNS神经元有4种表达:大部分神经元(大脑皮质、基底核、脊髓背角等)有明显表达;部分神经元为中等表达(三叉神经脊束核、下丘脑室旁核等);部分神经元为弱表达(孤束核、蓝斑等);而有些核团神经元缺乏NeuN的表达(视上核、弓状核、迷走神经背核等)。结论中枢神经系统不同区域或核团的神经元NeuN的表达程度不同,有的区域或核团神经元缺乏NeuN表达。