造血干细胞移植中CD34^＋细胞最佳分选的应用效果评价

目的：探讨联合化疗加细胞因子动员自体外周血CD34^+细胞的采集及临床级磁性分选仪(CliniMACS)分选的最佳方法，评价分选后CD34^+细胞在造血干细胞移植中的应用效果。方法：2001-03／2002-01在南京市鼓楼医院血液科病房收治自身免疫性疾病患者9例。符合纳入标准患者9例，男3例，女6例。采用环磷酰胺[2～4g／(m^2&;#183;d)]+粒细胞集落刺激因子(G-CSF)[5～10μg／(kg&;#183;d)]作为动员剂，CS-3000Plus血细胞分离机采集外周血单个核样细胞，CliniMACS作CD34^+细胞分选，观察分选前后的细胞计数、纯度、细胞活力，流式细胞术进行细胞表型检测及粒巨细胞集落形成单位(CFU-GM)培养。计算CD34^+细胞的采集得率和分选回收率。观察CD34^+细胞移植后造血功能恢复的情况。结果：经环磷酰胺加G-CSF动员后，采集时机多以一次采集能够获得足够数量的CD34^+细胞(CliniMACS分选和冷冻保存的耗损计算在内)为原则，外周血白细胞总数&;gt;6&;#215;10^9+L^-1或CD34^+细胞&;gt;0．4％时开始采集，其中8例采集1次，1例采集2次。每例患者可获单个核样细胞(MNC)总数(0．924—5．360)&;#215;10^10，MNC(2．6～19．5)&;#215;10^8／k，CD34^+细胞(2．4～37．2)&;#215;10^6／kg，经CliniMACS系统分选后，CD34^+细胞回收率为51％～93％，平均回收率为87%，CUF-GM回收率为35%～62％。CD34^+细胞纯度为94．3％～98．4％，平均96．71％。CD3^+，CD19^+，CD56^+，CD14^+细胞去除2—4个对数级。经冰冻保存后的CD34^+细胞的回收率为78％～99％，CFU-GM回收率为82％～99％，实际回输CD34^+细胞为(2．0～8．3)&;#215;10^6／kg，移植后均获造血重建。结论：掌握最佳动员、采集及分选方法，CD34^+细胞可获较高产率，移植后造血功能恢复较快。     

CD34抗原阴性的造血干细胞

即往研究表明造血干细胞(HSC)存在于CD34~ 的细胞组群中,但最近研究发现在鼠和人体内存在有CD34~-的HSC。本文对CD34~-HSC的认识现况作了一简要的概述。     

CD34+细胞分选及临床应用

CD34+是造血干细胞的免疫表型。采用某种方法选择CD34+细胞,选择后CD34+细胞浓集,其百分率有较大增高,并可以有效去除T细胞及某些恶性肿瘤细胞。选择CD34+细胞移植可以减少异基因移植后急性、重度移植物抗宿主病(GVHD),并可能减少自体移植后原发病复发。本文介绍了造血干细胞的免疫表型,生物学特性及CD34+细胞分选方法、临床应用等方面的研究进展。     

外周血CD34+细胞计数预测造血干细胞收获量

目的了解外周血CD34+细胞计数与造血干细胞收获量的关系.方法用流式细胞仪Pro-COUNT方法检测了16例造血干细胞移植患者单采前外周血和采集物中CD34+细胞百分率、绝对数,用血细胞计数仪计数白细胞数.分析各项检测指标与CD34+细胞收获量(×106/kg体重)的相关性.结果外周血白细胞计数、CD34+百分率、CD34+细胞计数与CD34+细胞收获量的相关系数分别为-0.307,0.738,0.665.经相关系数t检验,单采前外周血白细胞计数与CD34+收获量无相关性(P＞0.05),而外周血CD34+百分率和绝对计数与CD34+收获量密切相关(P＜0.01).结论外周血CD34+计数可准确预测采集效果,确定干细胞采集时机.     

关于CD34-造血干细胞的新观点

最近的研究表明CD34-造血干细胞的存在,改变了传统的造血干细胞必须表达CD34抗原的观点.近来大量资料对其功能、与CD34+细胞的关系、表面标志以及基因表达等作了报道,现对此做一综述.     

CD34~-造血干细胞的研究进展

造血干细胞(HSCs)的表型一直是研究的重要课题。一般认为:CD34~ 是骨髓HSCs的标志之一。但近年研究发现:存在一CD34~- HSCs群,它能长期重建造血并可分化为CD34~ 细胞,可能是CD34~ 细胞的前身细胞。本文对CD34~- HSCs从发现、含量、表面分子表达、体外体内生物学特性及体外培养扩增条件方面的研究进展等作一综述。     

CD34-细胞是否为更原始的造血干细胞

造血干细胞（ＨＳＣ）凭借其强大的自我更新和多系分化的能力而维持机体造血处于一相对恒定的状态,并持续一生。因此,ＨＳＣ被认为是进行造血组织移植后重建长期造血和免疫功能的关键成分,而且在某些疾病的基因治疗中是最理想的靶细胞。因而,如何有效地分离纯化造血干细胞始终是血液学研究领域的热点问题,这使得造血干细胞表型的研究显得尤为重要。目前,普遍认为人ＨＳＣ的表型为ＣＤ３４＋ＣＤ３８－Ｌｉｎ－ＨＬＡＤＲ－Ｔｈｙ１＋ｃｋｉｔ＋ＬＦＡ１－ＣＤ４５ＲＡ－ＣＤ７１－Ｒｈｏｄｕｌｌ。其中ＣＤ３４是早期造血细胞…     

关于CD34^-造血干细胞的新观点

最近的研究表明CD34^-造血干细胞的存在，改变了传统的造血干细胞必须表达CD34抗原的观点。近来大量资料对其功能、与CD34^ 细胞的关系、表面标志以及基因表达等作了报道，现对此做一综述。     

Clini MACS纯化自体外周血CD34+造血干细胞移植治疗多发性骨髓瘤1例

多发性骨髓瘤（ＭＭ）在自体造血于细胞移植（ＡＳＣＴ）后复发的主要原因,除骨髓清除治疗后患者体内存有残留的肿瘤细胞外,还与干细胞采集物中的肿瘤细胞污染有关［１］。移植动员治疗及细胞因子应用后,伴随ＣＤ３４＋造血干细胞的增加循环中肿瘤细胞也增加。分选外周血干细胞（ＰＢＳＣ）,即可富集ＣＤ３４＋造血干细胞,又可清除骨髓瘤细胞的污染［２］。我们利用此技术,对多发性骨髓瘤病人的自体外周血干细胞移植物进行了体外净化。１ 资料与方法１．１病人情况 中年男性,有左肩胛骨及胸骨上段隆起约３ｃｍ,质硬有压病;骨扫描示…     

CD133+ cell selection is an alternative to CD34+ cell selection for ex vivo expansion of hematopoietic stem cells

CD133 is a new stem cell antigen that may provide an alternative to CD34 for the selection and expansion of hematopoietic cells for transplantation. This study compared the expansion capacities of CD133(+) and CD34(+) cells isolated from the same cord blood (CB) samples. After 14 days culture in stroma-free, serum-free medium in the presence of stem cell factor (SCF), Flt3-1, megakaryocyte growth and development factor (MGDF), and granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF), the CD133(+) and CD34(+) fractions displayed comparable expansion of the myeloid compartment (CFC, LTC-IC, and E-LTC-IC). The expansion of CD133(+) CB cells was up to 1262-fold for total cells, 99-fold for CD34(+) cells, 109-fold for CD34(+) CD133(+) cells, 133-fold for CFU-GM, 14.5-fold for LTC-IC, and 7.5-fold for E-LTC-IC. Moreover, the expanded population was able to generate lymphoid B (CD19(+)), NK (CD56(+)), and T (CD4(+) CD8(+)) cells in liquid or fetal thymic organ cultures, while expression of the homing antigen CXCR4 was similar on expanded and nonexpanded CD133(+) or CD34(+) cells. Thus, the CD133(+) subset could be expanded in the same manner as the CD34(+) subset and conserved its multilineage capacity, which would support the relevance of CD133 for clinical hematopoietic selection.     

Crude collection efficiency of CD34+ hematopoietic stem cell apheresis

Understanding the apheresis principles for harvesting hematopoietic stem cells (HSCs) is critical for performing efficient procedures. However, despite significant advances in estimating the collection efficiency (CE) of aphereses, many confounding factors still need to be addressed in the classical calculations. The CE values are unrestricted, and many procedures exhibit CEs of a given cell population greater than 100%. This report introduces a simple equation that estimates the “crude” CE, which ranges from 0% to 100% and intrinsically considers the contribution of donor-related variables such as the pre-procedure mobilization and intra-apheresis recruitment of CD34⁺ cells (as a convenient marker for HSCs), as well as the performance of the apheresis system itself.     

The removal of human breast cancer cells from hematopoietic CD34+ stem cells by dielectrophoretic field-flow-fractionation

Dielectrophoretic field-flow-fractionation (DEP-FFF) was used to purge human breast cancer MDA-435 cells from hematopoietic CD34+ stem cells. An array of interdigitated microelectrodes lining the bottom surface of a thin chamber was used to generate dielectrophoretic forces that levitated the cell mixture in a fluid flow profile. CD34+ stem cells were levitated higher, were carried faster by the fluid flow, and exited the separation chamber earlier than the cancer cells. Using on-line flow cytometry, efficient separation of the cell mixture was observed in less than 12 min, and CD34+ stem cell fractions with a purity >99.2% were obtained. The method of DEP-FFF is potentially applicable to many biomedical cell separation problems, including microfluidic-scale diagnosis and preparative-scale purification of cell subpopulations.     

腺相关病毒载体介导的人凝血因子Ⅸ基因在CD34+造血干/祖细胞中的表达

目的 研究2型重组腺相关病毒（rAAV-2）介导的人凝血因子Ⅸ（hFⅨ）基因在脐血CD34^＋细胞及其子代细胞巾的表达。方法 采用rAAV-2／hFⅨ转导经预刺激的人脐血CD34^＋细胞，分别向粒单系、巨核系和红系分化培养21d，从转录水平、蛋白质水平和其功能活性检测hFⅨ的表达，同时检测子代细胞的活力、增殖倍数、各系标志分化抗原的表达及集落产率来评估rAAV-2对其增殖分化能力的影响。结果 经测序证实转导组子代细胞的RNA可扩增出hFⅨ cDNA片段，上清液中可检测到hFⅨ抗原的表达，每24h分泌量达14.10ng／10^6细胞．转导组和未转导组细胞培养21d后其活力、增殖倍数、标志性分化抗原的阳性率及集落产率差异均无统计学意义（P值均〉0．05）。结论 rAAV-2／hFⅨ能有效地转导人脐血CD34^＋细胞并在其子代细胞中表达具有凝血活性的hFⅨ，且对其体外培养21d的细胞增殖分化能力无明显影响.     

CD34+造血干细胞在"心肌样"微环境中转化为心肌样细胞的可能性

目的一般认为CD34+细胞只能向血细胞分化,观察CD34+造血干细胞在"心肌样"微环境中转化为心肌样细胞的可能性.方法实验于2004-01/12在大连医科大学附属第二医院实验中心完成.①选用成年健康SD大鼠30只及出生1～3 d SD大鼠乳鼠.在体外分离、培养CD34+造血干细胞,并将CD34+造血干细胞与分离出的新生乳鼠心肌细胞共培养.②将新生乳鼠心肌细胞的培养环境模拟为在体心肌细胞的生活环境即心肌样微环境.③在细胞培养瓶内加入5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记CD34+细胞.在倒置显微镜下观察CD34+造血干细胞形态学变化,用免疫细胞化学法检测心肌特异性肌钙蛋白T.结果①CD34+造血干细胞与心肌细胞共培养3 d,CD34+细胞变成长杆状,即呈现较为一致的极性排列,靠近心肌细胞的CD34+细胞形态学改变更早、更明显.②共培养的细胞经免疫细胞化学染色,发现部分5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记的CD34+细胞核在荧光显微镜下呈现红色,同时其细胞浆心肌特异性肌钙蛋白T表现阳性,说明确实有部分CD34+造血干细胞转化成幼稚心肌细胞.结论将CD34+造血干细胞与心肌细胞共培养,CD34+造血干细胞可以分化为心肌样细胞,从而验证了体外"心肌样"微环境可以促使CD34+造血干细胞向心肌样细胞转化的潜能.     

异基因造血干细胞移植中CD4+CD25+调节性T细胞与急性移植物抗宿主病的相关性

背景:CD4+CD25+调节性T细胞是调节性T细胞的一个重要亚群,在诱导移植耐受方面起着重要作用.目的:综述CD4+CD25+调节性T细胞的特性、免疫调节作用机制及其与急性移植物抗宿主病的相关性.方法:应用计算机检索PubMed、Medline数据库1990-01/2010-02,维普数据库2000-01/2010-02以及运用Google网络数据库有关CD4+CD25+调节性T细胞及其他与急性移植物抗宿主病相关性研究的文献.结果与结论:CD4+CD25+调节性T细胞在异基因造血干细胞移植后产生的急性移植物抗宿主病中起着重要作用,不仅能有效预防和治疗急性移植物抗宿主病,同时还能保留移植物抗白血病效应作用.随着研究的深入,发现CD4+CD25+调节性T细胞很有希望成为急性移植物抗宿主病早期风险预测的一项重要实验诊断指标,并且有可能通过调控移植后患者体内CD4+CD25+调节性T细胞水平来预防和控制急性移植物抗宿主病的发生.但是,要将CD4+CD25+调节性T细胞应用于临床尚有问题有待解决,例如CD4+CD25+调节性T细胞细胞表面特异性标志物是什么,如何提高CD4+CD25+调节性T细胞在人体内的活性以及怎样充分发挥其免疫抑制功能等.